本发明公开了水稻受体蛋白RGA5A_S的制备及结晶方法。
蛋白RGA5A_S的制备方法为:利用原核表达系统表达水稻受体蛋白RGA5A_S,经过菌体裂解,裂解上清液依次过亲和层析柱、分子筛层析柱,最终得到纯化的目的蛋白;针对蛋白RGA5A_S包含金属离子结构域的特点,在重组菌诱导摇培时,向培养基中添加100μM Zn2+,提高了蛋白稳定性。
本发明还提供蛋白RGA5A_S的结晶方法。
采用鸟枪法和九宫格法对蛋白结晶条件进行筛选优化,结果蛋白RGA5A_S在0.18‑0.22MNH4NO3和18%‑22%PEG3350条件下,所得晶体大、质量好、分辨率高,该方法重复性好。
刘俊峰 郭力维 刘强
中国农业大学
100193 北京市海淀区圆明园西路2号
本发明公开了水稻受体蛋白RGA5A_S的制备及结晶方法。
蛋白RGA5A_S的制备方法为:利用原核表达系统表达水稻受体蛋白RGA5A_S,经过菌体裂解,裂解上清液依次过亲和层析柱、分子筛层析柱,最终得到纯化的目的蛋白;针对蛋白RGA5A_S包含金属离子结构域的特点,在重组菌诱导摇培时,向培养基中添加100μM Zn2+,提高了蛋白稳定性。
本发明还提供蛋白RGA5A_S的结晶方法。
采用鸟枪法和九宫格法对蛋白结晶条件进行筛选优化,结果蛋白RGA5A_S在0.18‑0.22MNH4NO3和18%‑22%PEG3350条件下,所得晶体大、质量好、分辨率高,该方法重复性好。