本发明公开了一种核酸单链环状文库的构建方法和试剂,该方法包括如下步骤:使用转座酶包埋复合体对核酸进行随机打断,形成两端连接第一接头并形成缺口的片段;在缺口处连接第二接头;进行第一PCR反应,得到两端分别连接第一接头和第二接头序列的产物;酶切产生切口,然后进行双链环化产生环状核酸分子;从切口处进行限制性缺口平移反应;消化未发生限制性缺口平移反应的部分;连接第三接头和寡核苷酸接头序列;进行第二PCR反应,得到两端分别连接第三接头和寡核苷酸接头序列的产物;分离出核酸单链;对核酸单链进行环化,得到单链环状文库。
本发明的方法通过转座酶打断与限制性缺口平移反应结合,实现简单、快速的核酸单链环状文库的构建。
耿春雨 拉多杰·德马纳克 陈若莹 江媛 赵霞 郭荣荣 贺玲瑜 李雅乔 章文蔚 蒋慧
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本发明公开了一种核酸单链环状文库的构建方法和试剂,该方法包括如下步骤:使用转座酶包埋复合体对核酸进行随机打断,形成两端连接第一接头并形成缺口的片段;在缺口处连接第二接头;进行第一PCR反应,得到两端分别连接第一接头和第二接头序列的产物;酶切产生切口,然后进行双链环化产生环状核酸分子;从切口处进行限制性缺口平移反应;消化未发生限制性缺口平移反应的部分;连接第三接头和寡核苷酸接头序列;进行第二PCR反应,得到两端分别连接第三接头和寡核苷酸接头序列的产物;分离出核酸单链;对核酸单链进行环化,得到单链环状文库。
本发明的方法通过转座酶打断与限制性缺口平移反应结合,实现简单、快速的核酸单链环状文库的构建。