本发明提供了测序接头、其制备方法及其在超低频变异检测中的应用。
其中,测序接头包括依次相连的文库扩增引物序列、目的片段扩增引物序列以及错误提示序列,错误提示序列位于靠近目的片段的一侧,文库扩增引物序列位于远离目的片段的一侧,错误提示序列为已知碱基顺序的序列。
通过在靠近目的片段的一侧增设了已知碱基顺序的错误提示序列,错误提示序列能够为每个双链的DNA模板加上特有的外源标记。
便于后续得到目的片段的测序数据后,根据测序序列是否带有相同的错误提示序列筛选或剔除测序本身或者文库扩增步骤中引入的突变,然后将在两条链同一位置都出现变异的位点确定为真实的突变,而将只有一条链有突变的位点认定为扩增或者测序误差,从而提高变异检测精度。
周晔 刘倩 唐宇 徐寒黎 李伟伟 郭现超 李箐
北京科迅生物技术有限公司
100041 北京市石景山区实兴大街30号院16号楼11层1101室
本发明提供了测序接头、其制备方法及其在超低频变异检测中的应用。
其中,测序接头包括依次相连的文库扩增引物序列、目的片段扩增引物序列以及错误提示序列,错误提示序列位于靠近目的片段的一侧,文库扩增引物序列位于远离目的片段的一侧,错误提示序列为已知碱基顺序的序列。
通过在靠近目的片段的一侧增设了已知碱基顺序的错误提示序列,错误提示序列能够为每个双链的DNA模板加上特有的外源标记。
便于后续得到目的片段的测序数据后,根据测序序列是否带有相同的错误提示序列筛选或剔除测序本身或者文库扩增步骤中引入的突变,然后将在两条链同一位置都出现变异的位点确定为真实的突变,而将只有一条链有突变的位点认定为扩增或者测序误差,从而提高变异检测精度。