一种O型口蹄疫抗体检测试剂盒及其检测方法

专利主权项内容

1.一种O型口蹄疫抗体检测试剂盒，其特征在于，包括O型口蹄疫VP1蛋白偶联或间接偶联磁性微粒的溶液，发光标记物标记的蛋白溶液和发光底物；所述O型口蹄疫VP1蛋白选自O型口蹄疫病毒VP1蛋白全长、天然VP1蛋白片段、重组表达的O型口蹄疫VP1蛋白全长、重组表达的VP1蛋白片段、VP1蛋白多肽、VP1蛋白化学合成物中的一种或多种的组合，所述的磁性微粒为以FeO为核心，表面覆有聚合物涂层，并导入羟基、羧基、磺酰基或氨基活性基团的微粒；34所述O型口蹄疫VP1蛋白的用量为1.0-4nmol/10mg磁性微粒；所述发光标记物选自吖啶酯、碱性磷酸酶、过氧化物酶中的任意一种，所述发光标记物标记的蛋白选自O型口蹄疫抗原、单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体、抗猪IgG抗体、抗猪IgM抗体中的一种或多种的组合；所述磁性微粒的直径为1-3μm，所述磁性微粒直径CV＜3％；所述试剂盒中还包括稀释液，质控品，校准品和清洗液，所述稀释液选自缓冲液、牛血清白蛋白、阻断剂、单克隆抗体、多克隆抗体、O型口蹄疫抗原中的一种或多种的组合；所述质控品为O型口蹄疫抗体低值质控品和高值质控品，所述低值质控品的浓度为10-50U/mL，所述高值质控品的浓度为50-150U/mL；所述清洗液为0.05mol/LpH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液或0.01mol/LpH为7.0的磷酸盐缓冲液，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和所述磷酸盐缓冲液中分别含有0.1％的Tween-20；所述O型口蹄疫VP1蛋白间接偶联磁性微粒的溶液的制备方法包括如下步骤：1)磁性微粒结合亲和素S1，取含磁性微粒的溶液，采用缓冲液清洗磁性微粒，并悬浮于缓冲液中；S2，加入亲和素；S3，加入交联剂或催化剂，振荡反应；S4，磁铁吸附磁性微粒，洗涤，悬浮在含有封闭剂的溶液中，构成磁性微粒-亲和素复合物；2)O型口蹄疫VP1蛋白结合生物素S1，取O型口蹄疫VP1蛋白，透析；S2，加入生物素，反应；S3，加入封闭剂，反应；S4，透析除去未结合的生物素，获得O型口蹄疫VP1蛋白-生物素；3)磁性微粒-亲和素与O型口蹄疫VP1蛋白-生物素复合物混合，通过亲和素与生物素的结合力连接磁性微粒与O型口蹄疫VP1蛋白。