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构建测序文库
摘要文本
本发明提供了制备测序文库的方法和成分。该方法和成分能够使用多重PCR，制备二代测序文库，并减少引物二聚体的形成。
申请人信息
- 申请人:赛雷纳(中国)医疗科技有限公司
- 申请人地址:610000 四川省成都市高新区科园南路88号B1-902
- 发明人: 赛雷纳(中国)医疗科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 构建测序文库 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN201780090660.5 |
| 申请日 | 2017年3月20日 |
| 公告号 | CN110914449B |
| 公开日 | 2024年1月26日 |
| IPC主分类号 | C12Q1/6869 |
| 权利人 | 赛雷纳(中国)医疗科技有限公司 |
| 发明人 | 杨亮; 冯骏; 张海川 |
| 地址 | 四川省成都市高新区科园南路88号B1-902 |
专利主权项内容
1.一种用于构建测序文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：a)提供包含核酸的样本，其中，所述样本中的一些所述核酸具有靶核酸序列；b)富集步骤a)所述的靶核酸序列；c)针对靶核酸序列进行第一次多重PCR以获得扩增子；d)对步骤c)所得样品进行富集以获得目标扩增子；e)对所述目标扩增子、测序接头和barcode进行第二次多重PCR以获得带有barcode的目标扩增子；其中，在所述步骤b)中，所述富集操作所采用的方法包括：使用磁珠，所述磁珠在样品中结合靶核酸序列后，自剩余样品中分离；或者，使用磁珠在核酸和靶核酸中结合所述核酸而使所述核酸与所述靶核酸分离；或者，采用过滤器处理含有靶核酸、引物二聚体、dNTP和/或引物的样品，所述过滤器仅截留靶核酸；在所述步骤d)中，所述富集操作所采用的方法包括采用过滤器处理含有扩增子、引物二聚体和/或未消化引物的样品，收集过滤后的PCR产物，并采用磁珠结合过滤的扩增子后自剩余物中分离；所述过滤器截留扩增子而允许未消化引物和引物二聚体通过；在少于15次循环中进行所述第一次或第二次多重PCR；所述第一次多重PCR或第二次多重PCR中使用了磷酸钾。