PCR引物对及其应用
摘要文本
提供了PCR引物对及其应用。其中，该PCR引物对包括：第一引物和第二引物，其中，所述第一引物包含第一特异性序列和第一随机序列，所述第一特异性序列位于所述第一引物的3’端，所述第一随机序列位于所述第一引物的5’端，所述第二引物包含第二特异性序列和第二随机序列，所述第二特异性序列位于所述第二引物的3’端，所述第二随机序列位于所述第二引物的5’端，并且，所述第一特异性序列和所述第二特异性序列分别为针对靶序列的上游引物和下游引物，所述第一随机序列和所述第二随机序列反向互补，所述第一特异性序列和所述第一随机序列之间连接有预定酶切位点，所述第二特异性序列和所述第二随机序列之间连接有预定酶切位点。
申请人信息
- 申请人:深圳华大智造科技股份有限公司
- 申请人地址:518083 广东省深圳市盐田区北山工业区综合楼及11栋2楼
- 发明人: 深圳华大智造科技股份有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | PCR引物对及其应用 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN201780090470.3 |
| 申请日 | 2017年6月20日 |
| 公告号 | CN110603334B |
| 公开日 | 2024年1月16日 |
| IPC主分类号 | C12Q1/686 |
| 权利人 | 深圳华大智造科技股份有限公司 |
| 发明人 | 杨林; 黄国栋; 高雅; 张艳艳; 张海萍; 陈芳; 蒋浩君; 张韶红; 王雨倩; 谢一帆; 蒋慧 |
| 地址 | 广东省深圳市盐田区北山工业区综合楼及11栋2楼 |
专利主权项内容
1.一种制备DNA文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将待测DNA样品利用PCR引物对进行第一PCR扩增，所述PCR引物对包括：第一引物和第二引物，其中，所述第一引物包含第一特异性序列和第一随机序列，所述第一特异性序列位于所述第一引物的3’端，所述第一随机序列位于所述第一引物的5’端，所述第二引物包含第二特异性序列和第二随机序列，所述第二特异性序列位于所述第二引物的3’端，所述第二随机序列位于所述第二引物的5’端，并且，所述第一特异性序列和所述第二特异性序列分别为针对靶序列的上游引物和下游引物，所述第一随机序列和所述第二随机序列反向互补，所述第一特异性序列和所述第一随机序列之间连接有预定酶切位点，所述第二特异性序列和所述第二随机序列之间连接有预定酶切位点，且所述PCR引物对的靶序列不包含所述预定酶切位点；所述第一特异性序列和所述第二特异性序列的TM值为55-65摄氏度，所述第一引物和所述第二引物的TM值为65-75摄氏度；所述第一特异性序列和所述第二特异性序列的TM值与所述第一引物和所述第二引物的TM值不同；第一PCR扩增为两轮扩增：于55-65摄氏度的退火温度下，使所述PCR引物对和模板进行第一轮线状扩增；以及于65-72摄氏度的退火温度下，对第一轮线状扩增的产物进行第二轮环状扩增；所述第一轮线状扩增和所述第二轮环状扩增的退火温度不同，使得完成两轮扩增，获得包含类环状物的第一PCR扩增产物，所述类环状物的5’端和3’端未连接，采用的PCR引物对的第一引物和第二引物的5’末端和3’末端的第1-5个碱基经过硫代修饰；以及(2)利用所述预定酶切位点对应的酶，将所述第一PCR扩增产物进行酶切，并基于酶切产物进行文库制备，以便获得目的DNA文库，所述预定酶切位点为USER酶的酶切位点碱基U。