用于定量PCR扩增的组合物及其应用

专利主权项内容

1.一种定量PCR扩增方法，其特征在于，利用用于定量PCR扩增的组合物进行定量PCR扩增；所述组合物包括：一对PCR引物对和一条特异性探针，所述PCR引物对包括第一引物和第二引物，其中，所述第一引物包含第一特异性序列和第一随机序列，所述第一特异性序列位于所述第一引物的3’端，所述第一随机序列位于所述第一引物的5’端，所述第二引物包含第二特异性序列和第二随机序列，所述第二特异性序列位于所述第二引物的3’端，所述第二随机序列位于所述第二引物的5’端，并且，所述第一特异性序列和所述第二特异性序列分别为针对靶序列的上游引物和下游引物，所述第一随机序列和所述第二随机序列反向互补，所述特异性探针的5’末端连接有荧光基团，3’末端连接有淬灭基团，且所述特异性探针的序列与所述靶序列的上游引物和下游引物之间的序列互补配对；所述第一特异性序列和所述第二特异性序列的TM值为55-65摄氏度，所述第一引物和所述第二引物的TM值为65-75摄氏度；所述第一引物和所述第二引物的5’末端和3’末端的第1-5个碱基经过硫代修饰；所述第一引物和所述第二引物的至少之一的5’端经过磷酸化修饰；所述特异性探针的序列长度为18-30bp，TM值为70-80摄氏度；所述方法包括如下的两轮扩增：于55-65摄氏度的退火温度下，在特异性探针存在时，使PCR引物对和模板进行第一轮线状扩增；以及于65-72摄氏度的退火温度下，对第一轮线状扩增的产物进行第二轮环状扩增。