定量PCR扩增引物对及其应用

专利主权项内容

1.一种定量PCR扩增方法，其特征在于，包括利用定量PCR引物对进行扩增，所述定量PCR引物对包括：第一引物和第二引物，其中，所述第一引物包含第一特异性序列和第一随机序列，所述第一特异性序列位于所述第一引物的3’端，所述第一随机序列位于所述第一引物的5’端，所述第二引物包含第二特异性序列和第二随机序列，所述第二特异性序列位于所述第二引物的3’端，所述第二随机序列位于所述第二引物的5’端，并且，所述第一特异性序列和所述第二特异性序列分别为针对靶序列的上游引物和下游引物，所述第一随机序列和所述第二随机序列反向互补，所述第一随机序列和所述第二随机序列为随机序列，所述第一引物的5’末端碱基和所述第二引物的5’末端碱基均连接有荧光基团，且距离所述第一引物的5’末端碱基和所述第二引物的5’末端碱基10-30bp的碱基均连接有淬灭基团；所述第一特异性序列和所述第二特异性序列的TM值为55-65摄氏度，所述第一引物和所述第二引物的TM值为65-75摄氏度；所述第一随机序列和所述第二随机序列的长度为16-30bp，所述第一特异性序列和所述第二特异性序列的长度为16-30bp；所述方法包括如下的两轮扩增：于55-65摄氏度的退火温度下，使定量PCR扩增引物对和模板进行第一轮线性扩增；以及于65-72摄氏度的退火温度下，对第一轮线性扩增的产物进行第二轮环状扩增；所述第一轮线性扩增和所述第二轮环状扩增的退火温度不同，使得完成两轮扩增。