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一种蛋白质微小晶体冷冻样品的制备及结构解析的方法
摘要文本
本发明提供了一种蛋白质微小晶体结构的解析方法。具体地，所述的方法包括步骤：样品处理、制备冷冻样品、晶体筛选、数据收集和结构解析。本发明方法通过了冷冻电镜电子衍射方法解析了蛋白质微小晶体的结构，解析出的结构分辨率更解析出分辨率的蛋白质晶体结构。
申请人信息
- 申请人:中国科学院上海有机化学研究所
- 申请人地址:200032 上海市徐汇区零陵路345号
- 发明人: 中国科学院上海有机化学研究所
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种蛋白质微小晶体冷冻样品的制备及结构解析的方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN201810081566.X |
| 申请日 | 2018年1月29日 |
| 公告号 | CN110095485B |
| 公开日 | 2024年1月30日 |
| IPC主分类号 | G01N23/20 |
| 权利人 | 中国科学院上海有机化学研究所 |
| 发明人 | 刘聪; 罗锋; 李丹; 张胜男 |
| 地址 | 上海市徐汇区零陵路345号 |
专利主权项内容
1.一种蛋白质微小晶体结构的解析方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)对蛋白质微小晶体样品进行处理，得到上样液，所述的上样液为含分散的蛋白质晶体的溶液；(2)冷冻样品的制备：对所述的上样液进行冷冻处理，得到冷冻样品；(3)晶体筛选：通过电镜寻找用于解析结构的晶体，并确定晶体位置以及电镜的解析条件；(4)数据收集：收集晶体不同角度的衍射图像；(5)结构解析：根据不同角度的衍射图像，解析获得蛋白质晶体的结构；步骤(2)中，还包括步骤：(2.1)提供一载网；(2.2)向所述的载网表面加上样液；(2.3)除去液体，使蛋白质晶体沉降于所述的载网上；其中，步骤(2.3)中，还包括(2.3.1)从载网背面吸取液体，使得载网正面留下含蛋白质晶体的粘稠状液体；(2.3.2)用2-10％PEG溶液洗涤所述的载网，并从载网背面吸除所述的PEG溶液；其中，PEG为PEG200；和(2.3.3)用仪器吸除剩余液体，从而在载网正面留下蛋白质晶体；(2.4)对所述的载网及表面的蛋白质晶体进行快速冷冻，得到冷冻样品。