一种织物中透明质酸含量的定量检测方法
摘要文本
本发明公开了一种织物中透明质酸含量的定量检测方法，该方法先使用CD44蛋白与织物上的透明质酸结合，对其余游离未结合的CD44蛋白采用酶联免疫法的双抗夹心原理进行定量，最后将得到的复合物在过氧化氢的共同作用下催化底物TMB显色，根据显色溶液在450nm处的吸光度值得到辣根过氧化物酶的量，从而得出织物上透明质酸的量。本发明检测方法基于竞争结合原理以及双抗夹心法原理，可用于复杂基质中，尤其是织物中难以洗脱的透明质酸定量检测，有效提高了透明质酸定量检测的准确性。 （来自 专利查询网）
申请人信息
- 申请人:中国计量科学研究院
- 申请人地址:100029 北京市朝阳区北三环东路18号
- 发明人: 中国计量科学研究院
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种织物中透明质酸含量的定量检测方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311597467.4 |
| 申请日 | 2023/11/28 |
| 公告号 | CN117664885A |
| 公开日 | 2024/3/8 |
| IPC主分类号 | G01N21/31 |
| 权利人 | 中国计量科学研究院 |
| 发明人 | 张炜飞; 徐丹凤; 李红梅 |
| 地址 | 北京市朝阳区北三环东路18号 |
专利主权项内容
1.一种织物中透明质酸含量的定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)前处理将透明质酸织物样品剪碎后加水溶液进行超声，得到工作溶液1；工作溶液1中含有从织物样品上洗脱下来的透明质酸溶液1和未被完全洗脱的透明质酸织物样品2；(2)包被将工作试剂1用酶联免疫法专用碳酸钠缓冲液(CBS)稀释后加入96孔板，加膜孵育过夜，板底包被稀释后的工作试剂1；过夜后去除孔板中的工作试剂1，用洗涤液洗涤3遍后加入封闭液封闭1小时；所述工作试剂1为CD44蛋白捕获抗体；所述封闭液为含有2％BSA和0.05％Tween20的20mM Tris、150mM NaCl，pH 7.4的缓冲溶液；所述洗涤液为含有0.05％Tween20的20mMTris、150mM NaCl，pH 7.4的缓冲溶液；(3)结合将工作试剂2与工作溶液1进行混合孵育1小时，得到工作溶液2；其中，所述工作试剂2为含有CD44蛋白的溶液；所述工作溶液2为透明质酸和CD44蛋白结合物与游离过量CD44蛋白的混合溶液；(4)捕获将工作溶液2加入已包被有工作试剂1的96孔板中孵育2小时；(5)标记将工作溶液2从孔板中去除并用洗涤液洗涤3遍，将工作试剂3加入96孔板中，使工作溶液2与工作试剂3混合孵育1小时，得到工作溶液3；其中，所述工作试剂3为带有辣根过氧化物酶标记的抗CD44抗体，所述工作溶液3包含游离辣根过氧化物酶标记的CD44二抗；(6)显色将工作溶液3从96孔板中去除，用洗涤液洗涤3遍，将工作试剂4加入96孔板中，所述工作溶液3中含有的HRP在过氧化氢的作用下使3, 3’, 5, 5’-四甲基联苯胺显蓝色，加入反应终止液后得到工作溶液4，溶液显黄色；其中，所述工作试剂4为含有3, 3’, 5, 5’-四甲基联苯胺底物及过氧化氢的溶液；所述工作溶液4为工作溶液3经过工作试剂4催化后的溶液；所述反应终止液为2N硫酸；(7)检测将所述装有工作溶液4的96孔板置于酶标仪中检测吸光度，计算吸光度与织物中所含透明质酸含量的关系。