一种合成乳酰-N-新四糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用
摘要文本
本发明涉及一种高效合成乳酰‑N‑新四糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用，通过筛选高效的β‑1, 3‑乙酰葡萄糖胺转移酶及β‑1, 4‑半乳糖基转移酶并异源引入大肠杆菌BL21(DE3)中，对其进行基因组多位点的基因编辑，外加受体乳糖，构建高效生产乳酰‑N‑新四糖的菌株；进而优化其前体UDP‑乙酰氨基葡萄糖和UDP‑半乳糖的供应，增强乳糖的积累进一步提高乳酰‑N‑新四糖的产量。通过重组大肠杆菌进行培养和发酵，能够高效合成得到乳酰‑N‑新四糖，并且能够进一步提高所得产物的生物安全性，适用于制备食品或药物。
申请人信息
- 申请人:天津合生领航生物科技有限公司
- 申请人地址:300457 天津市滨海新区经济技术开发区洞庭路122号中海产业园C区三层315室
- 发明人: 天津合生领航生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种合成乳酰-N-新四糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202410069807.4 |
| 申请日 | 2024/1/18 |
| 公告号 | CN117586938B |
| 公开日 | 2024/3/29 |
| IPC主分类号 | C12N1/21 |
| 权利人 | 天津合生领航生物科技有限公司 |
| 发明人 | 王磊; 冯露; 黄笛; 刘斌 |
| 地址 | 天津市滨海新区经济技术开发区洞庭路122号中海产业园C区三层315室 |
专利主权项内容
1.一种合成乳酰-N-新四糖的重组大肠杆菌E7，其特征在于，构建步骤如下：以BL21(DE3)为出发菌株，敲除β-半乳糖苷酶基因，并在此位点整合β-1, 3-乙酰葡萄糖胺转移酶基因，获得菌株E0；在菌株E0的基础上，敲除大肠杆菌共同抗原多糖共聚酶基因，并在此位点整合UDP-葡萄糖4-差向异构酶基因及β-1, 4-半乳糖基转移酶基因，得到菌株E1；在菌株E1基础上，敲除甘露糖-6-磷酸异构酶基因，并在此位点过表达葡萄糖胺-1-磷酸乙酰转移酶基因，得到菌株E2；在菌株E2基础上，敲除D-乳酸脱氢酶基因，并在此位点过表达β-1, 3-乙酰葡萄糖胺转移酶基因及β-1, 4-半乳糖基转移酶基因，得到菌株E3；在菌株E3基础上，敲除丙酮酸甲酸裂解酶基因，并在此位点过表达β-1, 4-半乳糖基转移酶基因，得到菌株E4；在菌株E4基础上，敲除吡啶核苷酸转氢酶基因，并在此位点过表达谷氨酰胺合成酶基因，得到菌株E5；在菌株E5基础上，敲除谷氨酰胺酶基因，并在此位点过表达β-1, 3-乙酰葡萄糖胺转移酶基因，得到菌株E6；在菌株E6基础上，敲除谷氨酰胺酶基因，并在此位点过表达β-1, 4-半乳糖基转移酶基因，得到菌株E7；lacZlgtAwzzEgalElgtBmanAglmUldhAlgtAlgtBpflBlgtBsthAglnAglsAlgtAglsBlgtB整合或过表达基因使用23100启动子进行转录；β-半乳糖苷酶基因的ID为8181469，大肠杆菌共同抗原多糖共聚酶基因的ID为8182211，甘露糖-6-磷酸异构酶基因的ID为8181948，D-乳酸脱氢酶基因的ID为8181329，丙酮酸甲酸裂解酶基因的ID为8182293，吡啶核苷酸转氢酶基因的ID为8183552，谷氨酰胺酶基因的ID为8179676，谷氨酰胺酶基因的ID为8181212；葡萄糖胺-1-磷酸乙酰转移酶基因的ID为8183714，UDP-葡萄糖4-差向异构酶基因的ID为945354，谷氨酰胺合成酶基因的ID为8181063；β-1, 3-乙酰葡萄糖胺转移酶基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，β-1, 4-半乳糖基转移酶基因核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。lacZwzzEmanAldhApflBsthAglsAglsBglmUgalEglnAlgtAlgtB 来自马克数据网