专利名称：光学纯左旋三尖杉碱和分离提纯方法
技术领域：
本发明涉及三尖杉碱的分离，特别是涉及一种光学纯左旋三尖杉碱的分离提纯方法。
背景技术：
三尖杉碱(Cephalotaxine)广泛存在于三尖杉属植物(C印/za/otoa^)的根、茎、叶、 干和果实中，占三尖杉属植物所含生物总碱的40%—80% (《三尖杉生物学》，胡玉熹， 科学出版社，1999， ppl06)。光学活性的三尖杉碱是半合成抗白血病药物三尖杉酯碱(三 尖杉酯碱、高三尖山酯碱、脱氧三尖杉酯碱和异三尖杉酯碱及其类似物)的关键前体化合 物(j/fca/o/c/sv C7ze附/cfl/ cmd历o/og/ca/尸e^pe"/ves 1987, 5, 639; 7Tze 1998, 57,
199;兰州大学学报(自然科学版)，1974, 7, 148;中国科学1979, 22, 1333; J Og. CAew., 1978, 43, 4762;科学通报，1975, 20, 437;药学学报，1980, ", 46;科学通报，1980, 25, 576; 7fe加/^raw丄饥1982, 23, 3431;科学通报，1982, 27, 1048;药学学报1982, 77, 866; 药学学报1992, ￥7, 1087; J Og. 1979, 44, 63; 7^ra/ ^/raw丄e戊1999, W, 2931; CiV
UW2^y， 1999)，化学合成光学纯的左旋三尖杉碱的文献报道很少(中国药物化学杂志， 1994， 4, 84; / Org. O e附.1995, 60, 115; 7^ra/ edra". Jiywwe/ry 1997, & 191; /爿附.
1999， 7", 10246; C/ze附.户/ am. Sw〃. 1999, 47, 983; / Og. C/ze附.2004, 69, 3087; r"raW謂2006, d2, 7266; /颠C&附.2006,风10370; / Og. C/ 亂2007， 72, 7352)，这些文献报道的合成线路冗长，不能用于规模化制备光学纯的左旋三尖杉碱；而 从三尖杉属植物中分离提纯左旋三尖杉碱的方法报道也很少见(J Og. C/ e肌1963， 2& 2194; ra^70727;『0卯4朋何)，且这些方法需用柱分离或高效液相制备色谱分离，以及 三氯甲烷、苯等试剂才能实现，不适用于大量制备。

发明内容
本发明的目的在于提供一种获得光学纯的左旋三尖杉碱的分离提纯方法，该方法可以 克服已有技术和方法的不足。本发明适用于以三尖杉属植物中提取的三尖杉生物总碱浸膏 或者从三尖杉属植物中提取三尖杉酯碱后残余浸膏为原料提取分离光学纯的左旋三尖杉 碱，并且操作简单、安全、可靠、效率高、回收率高、成本低，易于形成规模化制备光学 纯的左旋三尖杉碱。
本发明提供的一种光学纯的左旋三尖杉碱，结构式为(I) (C18H21N04)，无色透明 针状结晶，其光学纯度大于99%，比旋光度[a]D二 -194 ° [c 1.02, CHC13, 20 °C]，熔点为
3143-144 。C，它是以三尖杉属植物中提取的三尖杉生物总碱浸膏或者从三尖杉属植物中提 取三尖杉酯碱后残余浸膏为原料，用水和二氯甲烷混合溶剂溶解，首先在酸性条件下用二
氯甲垸萃取；分离后的水相在碱性条件下依次用乙醚和酸性条件下用二氯甲烷萃取；最后， 水相在碱性条件下用乙醚萃取，浓縮乙醚相，结晶得到目标产物。
本发明提供的一种光学纯的左旋三尖杉碱的分离提纯方法经过下述的步骤
1 )三尖杉生物总碱浸膏或提取三尖杉酯碱后残余浸膏溶解于水和有机溶剂的混合溶
剂中，搅拌，用酸调节至pH:3-4，分液分离，再用有机溶剂萃取水层1 2次，合并有机 相。优选混合溶剂为二氯甲烷和水。浸膏与混合溶剂比例为1:10， 二氯甲垸和水体积比 1:2。
2) 步骤l)中的水相加乙醚，用碱调节至pH:12 13，常温下搅拌过夜；用酸调节至 pH = 3~4，分液分离，再用有机溶剂萃取水层2 3次，合并有机相；水相中加有机溶剂， 用碳酸钠调节至pH:7，分液分离，再用有机溶剂萃取水层2~3次。有机溶剂为二氯甲烷， 碱为氢氧化钠，酸为2M的盐酸。
3) 步骤2)中水相加乙醚，用碳酸钠调节至pH:9 10，用乙醚萃取，合并乙醚相，用 干燥剂干燥有机相，浓縮，结晶，得到的固体再用无水乙醚重结晶得到目标产物。所述的 干燥剂为无水硫酸钠。
所述的有机溶剂为醇类、醚类、酯类或卤代烃类，优选为二氯甲烷； 所述的生物总碱浸膏或提取三尖杉酯碱后残余浸膏中三尖杉碱的含量大于40%(不计 浸膏中溶剂含量)。
所述的酸是盐酸、硫酸、酒石酸、乙酸。所述的碱是氢氧化钠、氢氧化钾或氨水。 本发明不仅适用于三尖杉属植物有机溶剂溶解提取的三尖杉生物总碱浸膏或者从三
尖杉属植物中提取三尖杉酯碱后残余浸膏为原料提取分离光学纯的左旋三尖杉碱，而且适
用于其它植物来源的这类生物碱的提纯纯化。
本发明的目的在于提供一种光学纯的左旋三尖杉碱的分离提纯方法，该方法可以克服
已有技术和方法的不足。本发明适用于以从植物中提取的三尖杉生物总碱浸膏或者从植物
(左旋三尖杉碱)中提取三尖杉酯碱后残余浸膏为原料提取分离光学纯的左旋三尖杉碱，并且操作简单、安 全、可靠、效率高、回收率高、成本低，易于形成规模化制备光学纯的左旋三尖杉碱。
具体实施例方式
以下再通过实施例对本发明作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题 的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。 实施例l从三尖杉生物总碱浸膏中提取纯化左旋三尖杉碱
取48.4克浸膏(按文献J Og. C/zew. 1963, 2& 2194的方法制备，固含量57%，含三 尖杉碱、三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱等生物碱)，加入300mL水和150mL二氯甲垸，搅 拌，滴加2M的盐酸溶液38mL，调节水相至pH:3，分液，再用二氯甲烷萃取水层1~2 次，合并有机相，回收有机相，得到微量非碱类有机化合物和色素。
水层在搅拌下，加入2 M的氢氧化钠水溶液42 mL，调节至pH = 13，加入150 mL 乙醚，常温下搅拌过夜。搅拌下滴加2M的盐酸溶液50mL，调节水相至pH-3，分液分 离，再用二氯甲烷萃取水层2 3次，合并有机相，回收有机相，得到2.1克非碱类有机物 和色素。
水层中加二氯甲垸200mL，搅拌下分批加入固体碳酸钠5.3克，调节水相至pH二7， 分液，再用二氯甲烷萃取水层2 3次，无水硫酸钠干燥，浓縮，回收二氯甲垸，得到混合 生物碱6.3克。
水层中加乙醚150mL，搅拌下分批加入固体碳酸钠4.3克，调节水相至pH:lO。用 乙醚萃取水层，合并乙醚相。用无水硫酸钠干燥乙醚相，浓縮，回收乙醚。得到的固体用 无水乙醚重结晶得到5.1克无色透明左旋三尖杉碱结晶，其光学纯度大于99% ( HPLC， OD-H,正己烷/异丙醇/三乙胺=75/25/0.1, 7.4 min)，比旋光度
0= —193.8 ° [c 0.5, CHC13, 20 0C]，熔点为143-144 。C。丄H-NMR (600 MHz, CDC13) S 6.67 (s, 1H, Ar//), 6.64 (s, 1H, Ar巧，5.90 (s， 1H, OC场O), 5.90 (s， 1H, OC顯),4.92 (s， 1H, vinyl 4.76 (dd, 1H, J = 9.6 Hz, 3.6 Hz)， 3.73 (s, 3H， OCi/3)， 3.68 (d， 1H， /= 9.6 Hz), 3.35 (td, 1H, /= 12.9 Hz, 7.8 Hz, C坊)，3.07 (td, 1H, J= 8.4 Hz, 4.8 Hz, C//2), 2.92 (td, 1H, /= 11.4 Hz, 7.2 Hz, C玩)，2.60 (td, 1H, /= 11.4 Hz， 8.4 Hz, 2.59 (m, 1H, C玩)，2.35 (dd， 1H, /= 15.0 Hz, 7.2 Hz, C7/2), 2.01 (dt, 1H, /= 12.0 Hz, 10.2 Hz, C//2), 1.87 (ddd, 1H， J= 12.0, 7.8, 3.6 Hz, C//2), 1.74 (m, 2H, C//2), 1.61 (d, 1H, J= 3.6 Hz, O母13C NMR (150 MHz, CDC13) 5 160.4, 146.7, 145.9, 134.2, 128.0, 112.5, 110.2, 100.7， 97.5, 73.1, 70.4, 57.9, 57.0, 53.7, 48.4, 43.5, 31.6, 20.20;文献值( /
5Og. Cte附.1963,2& 2194):熔点，131~132 °C， [a]D= —204 °, [ c 1.8, CHC13,25 。C]; !H-NMR (CDC13) 5 6.63 (s, 1H, Ar取6.60 (s, 1H， A,, 5.90 (s, 2H, OC坊O)， 4.85 (s, 1H, vinyl印, 4.71 (d， 1H， 《/= 9.0 Hz)， 3.67 (s， 3H, OC私)，3.62 (d, 1H, /= 9.0 Hz)。母液中残余的三尖杉碱 经过多次重结晶还可获得4克光学纯度大于99%的左旋三尖杉碱(两次总收率为33%)， 以及光学纯度为73%的三尖杉碱10.1克。
多次纯化后得到的光学纯度为70~80%的三尖杉碱可以合并后再进行结晶纯化，其纯
度用高效液相色谱(HPLC)跟踪监测；多次分离后得到的混合生物碱可以合并后，再重 复上述操作进行纯化。
实施例2从提取三尖杉酯碱后残余浸膏中分离纯化左旋三尖杉碱
取100克的提取三尖杉酯碱后残余浸膏(固含量约43%，主要为三尖杉碱，含量约 80%，不计浸膏中溶剂含量；文献P/^toc/zem/欲少，1972, W, 1467)放入烧杯中，加入蒸 馏水500 mL和250 mL 二氯甲垸，搅拌，滴加2 M的盐酸溶液70 mL，调节水相至pH = 3， 分液，再用二氯甲垸萃取水层1 2次，合并有机相，回收有机相，得到微量非碱类有机物 和色素。
水层中加乙醚200mL，用2M氢氧化钠溶液75 mL，调节水相制pH:13，常温下搅 拌过夜。搅拌下滴加2M的盐酸溶液82mL，调节水相至pH:3，分液分离，再用二氯甲 烷萃取水层2 3次，合并有机相，回收有机相，得到3.2克非碱类有机物和色素。
水层中加300mL二氯甲垸，搅拌下分批加入9克固体碳酸钠，调节水相至pH二7， 分液，再用二氯甲垸萃取水层2 3次，无水硫酸钠干燥，浓縮二氯甲垸相，回收二氯甲烷， 得到混合生物碱12.8克。
水层中加乙醚300mL，搅拌下加入7.5克固体碳酸钠，调节水相至pH:lO。用乙醚 萃取水层，合并乙醚相。用无水硫酸钠干燥乙醚相，浓縮，回收乙醚。得到的固体用无水 乙醚重结晶得到11.2克无色透明左旋三尖杉碱结晶，其光学纯度大于99%( HPLC， OD-H, 正己烷/异丙醇/三乙胺=75/25/0.1, 7.4 min)，比旋光度[a]r^ -194.2 ° [c 1.02, CHC13, 20 。C]，熔点为143-144 。C。 ^-NMR和"CNMR数据与实施例1 一致。母液中含三尖杉碱 15.2克，重结晶可以得到6.3克光学纯度大于99%的左旋三尖杉碱，两次总收率为40%。
多次纯化后得到的母液中光学纯度为70~80%的三尖杉碱可以合并后再进行结晶纯 化，其纯度用高效液相色谱(HPLC)跟踪监测；多次分离后得到的混合生物碱可以合并 后，再重复上述操作进行纯化。
权利要求
1、一种光学纯的左旋三尖杉碱，结构式为(I)(C18H21NO4)，其特征在于它是无色透明针状结晶，其光学纯度大于99％，比旋光度[α]D＝-194°[c 1.02，CHCl3，20℃]，熔点为143～144℃，是以三尖杉属植物中提取的三尖杉生物总碱浸膏或者从三尖杉属植物中提取三尖杉酯碱后残余浸膏为原料，用水和二氯甲烷混合溶剂溶解，首先在酸性条件下用二氯甲烷萃取；分离后的水相在碱性条件下依次用乙醚和酸性条件下用二氯甲烷萃取；最后，水相在碱性条件下用乙醚萃取，浓缩乙醚相，结晶得到目标产物。(左旋三尖杉碱)
2、 一种光学纯的左旋三尖杉碱的分离提纯方法，其特征在于它是经过下述的步骤 三尖杉生物总碱浸膏或提取三尖杉酯碱后残余浸膏溶解于水和有机溶剂的混合溶 剂中，搅拌，用酸调节至pH-3 4，分液分离，再用有机溶剂萃取水层1~2次，合并有机 相； 步骤l)中的水相加乙醚，用碱调节至pH =12-13，常温下搅拌过夜；用酸调节pH =3 4，分液分离，再用有机溶剂萃取水层2~3次，合并有机相；水相中加有机溶剂，用 碳酸钠调节至pH:7，分液分离，再用有机溶剂萃取水层2 3次； 步骤2)中水相加乙醚，用碳酸钠调节至pH-9 10，用乙醚萃取，合并乙醚相，用 干燥剂干燥有机相，浓縮，结晶，得到的固体再用无水乙醚重结晶得到目标产物。
3、 按照权利要求1所述的方法，其特征在于所述的浸膏与混合溶剂比为1:10。
4、 按照权利要求1或3所述的方法，其特征在于所述的混合溶剂为二氯甲垸和水， 二氯甲烷和水体积比1:2 。
5、 按照权利要求1所述的方法，其特征在于所述的有机溶剂为醇类、醚类、酯类或 卤代烃类，优选为二氯甲烷；
6、 按照权利要求1所述的方法，其特征在于所述的生物总碱浸膏或提取三尖杉酯碱 后残余浸膏中三尖杉碱的含量大于40%，不计浸膏中溶剂含量。
7、 按照权利要求1所述的方法，其特征在于所述的酸是盐酸、硫酸、酒石酸、乙酸。
8、 按照权利要求1所述的方法，其特征在于所述的碱是氢氧化钠、氢氧化钾或氨水。
9、 按照权利要求1所述的方法，其特征在于所述的有机溶剂为二氯甲烷、乙醚。 10、按照权利要求1所述的方法，其特征在于所述的干燥剂为无水硫酸钠。
10.(左旋三尖杉碱)
全文摘要
本发明涉及一种光学纯的左旋三尖杉碱的分离提纯方法。该左旋光学纯的三尖杉碱为无色透明针状结晶，其光学纯度大于99％，比旋光度[α]_D＝-194°[c 1.02，CHCl₃，20℃]，熔点为143～144℃，它是以三尖杉属植物中提取的三尖杉生物总碱浸膏或者从三尖杉属植物中提取三尖杉酯碱后残余浸膏为原料，用水和二氯甲烷混合溶剂溶解，首先在酸性条件下用二氯甲烷萃取；分离后的水相在碱性条件下依次用乙醚和酸性条件下用二氯甲烷萃取；水相在碱性条件下用乙醚萃取，浓缩乙醚相，结晶得到目标产物。该方法操作简单、安全、可靠、效率高、回收率高、成本低，易于形成规模化制备光学纯的左旋三尖杉碱。
文档编号C07D491/00GK101492455SQ20091006801
公开日2009年7月29日 申请日期2009年3月3日 优先权日2009年3月3日
发明者李卫东, 莉 陈 申请人:南开大学