大麻素组合物和用法
1.本技术案主张2019年4月30日申请的美国临时申请案第62/840,972号的优先权权益，所述美国临时申请案的内容以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
2.免疫系统是细胞、效应蛋白和化合物的复杂网络，其保护身体免受入侵物影响。通常免疫系统对如细菌、真菌以及病毒的外来抗原作出反应，或对由挫伤或擦伤引起的组织损伤作出反应。由于其诱导或开启免疫系统，所以这些反应典型地称作炎症。不利的是，免疫系统还可对由身体产生的抗原作出反应，其结果是发生自身免疫疾病。自身免疫疾病的发病率随着所有被认为是自身免疫疾病的爱迪生氏病(addison's disease)、自身免疫性肝炎、乳糜泻、克罗恩病(crohn's disease)、格雷夫斯病(grave's disease)、特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣病、类风湿性关节炎、硬皮病、休格连氏症候群(sjogren's syndrome)、系统性红斑狼疮、i型糖尿病以及溃疡性结肠炎。


背景技术：

3.用于治疗炎症病状或自身免疫疾病的治疗剂包含非类固醇抗炎药(nonsteroidal anti
‑
inflammatory drugs；nsaid)，如乙酰水杨酸、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)以及塞内昔布(celecoxib)；常规合成改善病情抗风湿药(disease
‑
modifying antirheumatic drugs；dmard)，如甲氨蝶呤(methotrexate)、羟化氯喹(hydroxychloroquine)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、来氟米特(leflunomide)以及金盐；皮质类固醇，如可的松(cortisone)、地塞米松(dexamethasone)、氢化可的松(hydrocortisone)以及强的松(prednisone)；非抗体肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha；tnfα或tnf)抑制剂，如黄嘌呤衍生物己酮可可碱(pentoxifylline)和安非他酮(bupropion)；以及单克隆抗体tnf抑制剂，如阿达木单抗(adalimumab)、依那西普(etanercept)以及英利昔单抗(infliximab)。
4.典型地，在进行常规合成dmard之前首先尝试nsaid缓解炎症病状或自身免疫疾病的症状，接着皮质类固醇，且最终tnf抑制剂。
5.不利的是，对于患有恶化炎症病状或晚期自身免疫疾病的人，最强效治疗剂tnf抑制剂通常并不起作用且可导致需要中止使用的危及生命的反应(杰恩(jain)和辛格(singh)，2013；哈旦(hadam)等人，2014)。因此，需要缓解炎症病状或自身免疫疾病的症状的额外治疗剂。
6.由于内源性大麻素化合物与g蛋白偶合内源性大麻素受体的相互作用而起作用且是大脑和中枢神经系统的关键调节器的内源性大麻素系统也参与免疫系统的调节中(潘迪(pandey)等人，2009；巴里(barrie)和马诺利奥斯(manolios)，2017)。δ9‑
四氢大麻素(δ9‑
tetrahydrocannibinol)(δ9‑
thc或thc)是可通过由大麻变种产生的天然植物植物源性大麻素thca的脱羧作用衍生的大麻素。其模拟内源性大麻素花生四烯乙醇胺(anandamide)且与cb1和cb2内源性大麻素受体相互作用且其作为缓解疼痛和焦虑的精神药剂在文献中有
充分记载(法恩(fine)和罗森费尔德(rosenfeld)，2013)。非精神药物大麻二酚(cannabidiol；cbd)是可通过天然植物植物源性大麻素大麻二醇酸(cannabidiolic acid；cbda)的脱羧作用衍生的大麻素。其由大麻变种产生，且已作为潜在消炎剂或免疫抑制剂疗法引起注意(纳加尔卡蒂(nagarkatti)等人，2009；罗茲(lodzki)等人，2003；科斯塔(costa)等人，2004；拉詹(rajan)等人，2016；彼得罗西诺(petrosino)等人，2018)。虽然不清楚cbd如何影响内源性大麻素系统，但数项研究已假设这种情况可因其发生的潜在机制(迪马佐(di marzo)和皮斯西特拉(piscitelli)，2015；麦克帕特兰(mcpartland)等人，2015)。
7.大麻变种产生八种主要大麻素。通过其合成这些大麻素的代谢路径示出于图1中。次大麻酚酸(cannabigerovarinic acid；cbgva)通过香叶基(geranyl)转移酶在添加次二酚酸(divarinic acid)的情况下由香叶基焦磷酸酯产生，而大麻萜酚酸(cannabigerolic acid；cbga)通过香叶基转移酶在添加橄榄醇酸(olivetolic acid)的情况下由香叶基焦磷酸酯产生。次大麻色酚酸(cannabichromevarinic acid；cbcva)、δ9‑
四氢次大麻酚酸(δ9‑
tetrahydrocannabivarinic acid；δ9‑
thcva或thcva)以及次大麻二酚酸(cannabidivarinic acid；cbdva)分别通过大麻环萜酚酸(cannabichromenic acid；cbca)合成酶、δ9‑
四氢大麻酚酸a(δ9‑
tetrahydrocannabinolic acid a；δ9‑
thca或thca)合成酶以及大麻二醇酸(cannabidiolic acid；cbda)合成酶由cbgva产生。cbca、δ9‑
thca以及cbda分别通过cbca合成酶、a9
‑
thca合成酶以及cbda合成酶由cbga产生。经由大麻素代谢路径产生的天然cbgva、cbga、cbcva、δ9‑
thcva、cbdva、cbca、δ9‑
thca以及cbda大麻素可通过加热来脱羧，分别得到次大麻酚(cannabigerivarin；cbgv)、大麻萜酚(cannabigerol；cbg)、次大麻色烯(cannabichromevarin；cbcv)、四氢次大麻酚(tetrahydrocannabivarin；δ9‑
thcv或thcv)、次大麻二酚(cannabidivarin；cbdv)、大麻环萜酚(cannabichromene；cbc)、δ9‑
四氢大麻酚(δ9‑
tetrahydrocannabinol；δ9‑
thc或thc)以及大麻二酚(cbd)。数种天然大麻素和其脱羧衍生物可转化为其它大麻素。举例而言，cbca和cbc可通过uv光照射来转化为大麻环酚酸(cannabicyclolic acid；cbla)和大麻环酚(cannabicyclol；cbl)，而δ9
‑
thca和δ9
‑
thc可通过氧化降解来转化为大麻酚酸(cannabinolic acid；cbna)和大麻酚(cannabinol；cbn)。
8.当前最丰富可用的非精神药物大麻素是cbda且许多大麻植物已被证明产生含有按质量计超过25％cbda的芽。虽然cbda因为在纯化期间发生的脱羧作用而比cbd更难以分离，但已开发可产生含有超过80％cbda的cbda提取物的数种方法。
9.虽然已记录cbd充当抗炎剂或免疫抑制剂的潜力，但没有研究调查其前体、cbda或其它主要非精神药物大麻素以及其脱羧衍生物充当抗炎剂或免疫抑制剂的能力。因此，任然需要具有增强生物活性，如抗炎和/或免疫抑制活性的改良大麻素组合物。


技术实现要素：

10.本公开描述包含大麻素的组合物和使用这些组合物的方法，所述大麻素包含例如植物源性大麻素(即，由植物衍生或产生的大麻素)。在一些实施例中，组合物可适用于治疗炎症病状和/或自身免疫疾病。在一些实施例中，组合物可能可作为抗癌疗法。
11.在一个方面中，本公开描述包括大麻素的医药组合物。大麻素可选自：i)cbc、
cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。其组合可包含例如两种大麻素、三种大麻素、四种大麻素、五种大麻素或大于五种大麻素。示范性组合包含cbc和cbca；cbg和cbga；cbl和cbla；cbd和cbda；cbc和cbdv；cbg、cbga以及cbda；cbd、cbdv以及cbga；等。
12.在另一方面中，本公开描述包括cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物的组合物。在一些实施例中，包括cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物的组合物更包括额外大麻素，所述额外大麻素包括cbc、cbca、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv或thcva或其组合。在其它实施例中，包括cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物的组合物不含或大体上不含其它大麻素。
13.在一些实施例中，医药组合物被调配成用作消炎剂或免疫抑制剂。
14.在另一方面，本公开描述用于治疗或预防受试者的炎症或自身免疫的方法。方法包含向受试者施用包含有效量的大麻素的组合物。在一些实施例中，大麻素选自：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。在一些实施例中，大麻素选自i)cbl、cbla、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
15.如本文中所使用，“大致”定义为在10％内，优选地在5％内，更优选地在1％内，且最优选地在0.5％内。
16.词语“优选的”和“优选地”指代本发明的在某些情况下可提供某些益处的实施例。然而，其它实施例在相同或其它情形下也可以是优选的。此外，一或多个优选实施例的引述并不暗示其它实施例是不适用的，且并不打算从本发明的范围中排除其它实施例。
17.术语“基本上由
…
组成”指示包含在短语之后列出的元素，且可包含除这些列出的元素以外的其它元素，其限制条件是这些元素并不实质上影响要求保护的发明的基本和新颖特性"。
18.术语“不含”或“大体上不含”指示不包含在短语之后列出的任何元素，或如果包含所述元素，那么这些元素大体上并不干扰或有助于本公开中针对组合物中的其它元素指定的活性或作用。本领域的技术人员将易于理解，在术语“不含”或“大体上不含”之后列出的元素可在一些情况下由于来自如从大麻提取大麻素的工艺的杂质而存在。在一些实施例中，当组合物大体上不含其它大麻素时，组合物含有10％或小于10％、5％或小于5％、4％或小于4％、3％或小于3％、2％或小于2％、1％或小于1％、0.5％或小于0.5％或0.1％或小于0.1％的其它大麻素。
19.除非另外规定，否则“一(a/an)”、“所述”和“至少一个(种)”可互换地使用且意味着一个(种)或大于一个(种)。
20.另外，在本文中，通过端点对数值范围进行的叙述包含所述范围内所包含的所有数字(例如，1到5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。
21.对于本文中所公开的包含离散步骤的任何方法，可以任何可行的次序进行所述步骤。并且，视需要，可同时进行两个或大于两个步骤的任何组合。
22.本发明的以上发明内容不旨在描述本发明的每个公开的实施例或每一个实施方式。以下描述更具体地示范说明性实施例。在整个申请案的多处，通过列出实例提供指导，这些实例可以各种组合使用。在每种情况下，所叙述的列表仅充当代表性群组且不应解释
为排它性列表。
23.所有标题是为了方便读者，且除非另有说明，否则不应用于限制标题后面的文字的含义。
24.贯穿本说明书，对“一个实施例”、“实施例”、“某些实施例”或“一些实施例”等的引用意指结合所述实施例描述的特定特征、配置、组合物或特性被包含在本公开的至少一个实施例中。因此，此类短语在贯穿本说明书的各个地方的出现不一定是指本公开的同一实施例。此外，在一或多个实施例中，可以任何适合的方式组合特定特征、配置、组合物或特性。
25.除非另外指明，否则本说明书和权利要求中所用的表示组分的量、分子量等等的所有数字应理解为在所有情况下均由术语“约”修饰。因此，除非指明为相反的，否则本说明书和权利要求中所阐述的数值参数是可能视试图通过本发明获得的所需属性而变化的近似值。至少，且不是试图将等同原则限制到权利要求的范围，每个数值参数至少应该根据所报告的有效数字的数量并通过应用普通的舍入技术来解释。
26.尽管阐述本发明的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但在具体实例中阐述的数值尽可能精确地报告。然而，所有数值固有地含有由它们的相应测试测量中存在的标准差必然产生的一范围。
附图说明
27.图1a
‑
图1b示出用于合成主要大麻素的示范性大麻代谢路径。示出由香叶基焦磷酸酯(geranyl pyrophosphate；gpp)合成cbca、cbda、cbcva、cbdva、cbga、cbgva、δ9
‑
thca以及δ9
‑
thcva，以及参与的关键酶。图1a示出由gpp合成cbga和cbgva。图1b示出由cbgva合成cbcva、cbdva以及thcva和由cbga合成cbca、cbda以及thca。
28.图2a
‑
图2f示出实例1中使用的大麻素的结构。图2a示出大麻环萜酚(cbc)和大麻环萜酚酸(cbca)的结构。图2b示出大麻二酚(cbd)和大麻二醇酸(cbda)的结构。图2c示出次大麻二酚(cbdv)和次大麻二酚酸(cbdva)的结构。图2d示出大麻萜酚(cbg)和大麻萜酚酸(cbga)的结构。图2e示出大麻环酚(cbl)和大麻环酚酸(cbla)的结构。图2f示出大麻酚(cbn)和大麻酚酸(cbna)的结构。图2g示出四氢次大麻酚(thcv)和四氢次大麻酚酸(thcva)的结构。
具体实施方式
29.本公开描述包含大麻素的组合物和使用这些组合物的方法，包含例如作为免疫抑制剂和/或作为抗癌疗法来治疗或预防炎症。
30.大麻素组合物
31.在一个方面中，本公开描述包含大麻素的医药组合物。在示范性实施例中，大麻素选自：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。下文在表1中列出这些大麻素中的每一种的iupac名称，且其结构示出于图2中。
32.表1：示范性大麻素的列表
[0033][0034]
在一些实施例中，大麻素选自：i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。在其它实施例中，大麻素选自大麻素选自cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合。在其它实施例中，大麻素选自选自：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。在又其它实施例中，大麻素选自：i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。在其它实施例中，大麻素选自cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合。在其它实施例中，大麻素选自cbdv、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合。
[0035]
在其它实施例中，大麻素选自大麻素选自i)cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv以及thcva，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。在其它实施例中，大麻素选自i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbl、cbla、cbn、cbna以及thcva，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0036]
在一些实施例中，组合物包含cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。当组合物包含cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物时，组合物可大体上不含其它大麻素。在一些实施例中，大麻素基本上由cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物组成。在其它实施例中，大麻素基本上由cbd:cbda的1:1等摩尔混合物组成。在其它实施例中，当大麻素包含cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物时，组合物可更包含选自以下的额外大麻素：cbc、cbca、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合。
[0037]
在一些实施例中，大麻素选自i)cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg以及thcv，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0038]
在其它实施例中，大麻素选自选自：i)cbl、cbla以及thcva，以及其任何混合物；以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0039]
在一些实施例中，组合物可包含包含例如从大麻花或芽提取的大麻素。从含有高浓度大麻素的大麻花或芽提取可易于通过各种方法来制备，所述方法包含但不限于使用二氧化碳、丁烷或水或乙醇溶剂提取进行超临界流体提取。
[0040]
如实例中进一步描述，个别大麻素cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、
cbl、cbla、cbn、cbna、thcv以及thcva以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物各自显示作为抗氧化剂、消炎剂和/或免疫抑制剂的潜力。在一些实施例中，大麻素可在已用lps治疗的分化thp
‑
1细胞中在降低升高的细胞因子水平方面至少有地塞米松的一半效用，从而指示抗炎和/或免疫抑制剂活性。举例来说，个别大麻素cbca、cbd、cbda、cbdva、cbdv、cbg、cbga、cbla、cbl、cbna、cbn、thcva、thcv以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物在已用lps治疗的分化thp
‑
1细胞中在降低升高的细胞因子水平(cytokine level)方面极有效。
[0041]
在一些实施例中，与未治疗的对照比较，大麻素诱导至少两倍的自由基清除活性。举例来说，个别大麻素cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、thcv以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物在dpph分析中具有显著抗氧化活性。
[0042]
个别大麻素cbl、cbla、thcva以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物被证明在诱导分化u937细胞中的自噬方面特别有效。
[0043]
免疫系统经由炎症(促炎性)与抗炎细胞因子之间的配衡来严格地进行调节。炎症细胞因子诱导免疫系统，同时抗炎细胞因子压制免疫系统。通常这种配衡使免疫系统保持准备好在必要时起作用。当炎症反应由于炎症或自身免疫疾病而发生时，炎症细胞因子的水平大幅度增加。存在数种广泛论述，其描述通过炎症和消炎细胞因子调节免疫系统(普利布(pripp)和斯坦尼西奇m(stanis'ic m)，2014；王(wang)等人，2015；穆索利诺(musolino)等人，2017；纳尔班特(nalbant)和比尔里克(birlik)，2017)。术语“细胞因子风暴”通常用于描述在患有炎症病状或自身免疫疾病的人中出现的炎症细胞因子水平增加。参与细胞因子风暴的炎症细胞因子和作为治疗方案如何通过药剂对其进行抑制已广泛地被论述(蒂森斯克(tisoncik)等人2012；格拉克(gerlach)，2016；比赫伦斯(behrens)和克瑞斯奇(koretzky)，2017)。
[0044]
存在关于哪些细胞因子是炎症或消炎的非统一共识，然而，ifnγ、il
‑
1β、il
‑
2、il
‑
6、il
‑
12、il
‑
15、il
‑
16、il
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17、il
‑
18、il
‑
23以及tnfα广泛地被认为是炎症细胞因子，同时il
‑
1ra、il
‑
4、il
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10、il
‑
11、il
‑
13以及tgfβ广泛地被认为是抗炎细胞因子(普利布和斯坦尼西奇m，2014；王等人，2015；穆索利诺等人，2017；纳尔班特和比尔里克，2017)。迄今为止已鉴别超过100种细胞因子且许多尚未被充分地表征。
[0045]
虽然不受理论束缚，但咸信本发明组合物在一些实施例中能够在炎症或自身免疫事件的过程中抑制或预防促炎性细胞因子的释放，由此减少或预防细胞因子风暴。
[0046]
在一些实施例中，包含特定大麻素的组合物可基本上由大麻素组成。举例来说，在一示范性实施例中，包含cbc的组合物可基本上由cbc组成。在另一示范性实施例中，包含cbd:cbda的1:1等摩尔混合物的组合物可基本上由cbd和cbda组成。本领域的技术人员将认识到，然而，包括大麻素(包含例如大麻素提取物)的组合物也可能可含有较小量的其它大麻素。(参见实例2。)虽然不受理论束缚，但本发明实例展现cbd:cbda的1:1等摩尔混合物的意外协同活性。在一些实施例中，当一或多个额外大麻素存在于具有cbd:cbda的1:1等摩尔混合物的组合物中时，这种协同活性仍存在。
[0047]
在一些实施例中，包含特定大麻素的组合物可优选地不含其它大麻素。举例来说，在一示范性实施例中，包含cbc的组合物可不含cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv以及thcva。在另一示范性实施例中，包括cbl、cbla、cbd以及cbda的组合物可不含其它大麻素。在另一示范性实施例中，包括cbd:cbda的1:1等摩尔混合物的
组合物可不含cbc、cbca、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv以及thcva。
[0048]
在一些实施例中，包含例如，当组合物被调配成用作抗炎剂或免疫抑制剂时，大麻素包括i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv或thcva，或其组合，或ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0049]
在一些实施例中，包含例如当组合物被配制成降低升高的细胞因子水平时，大麻素包括cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv或thcva，或其组合。在一些实施例中，包含例如，当组合物被配制成降低升高的细胞因子水平时，大麻素包括cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg以及thcv，或其任何组合。在一些实施例中，当大麻素包括cbd和cbda时，组合物包括cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0050]
在一些实施例中，包含例如，当组合物被配制成具有抗氧化活性时，大麻素包括cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg或thcv，或其任何组合。在一些实施例中，当大麻素包括cbd和cbda时，组合物包含cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0051]
在一些实施例中，包含例如，当组合物被配制成诱导自噬时，大麻素包括cbl、cbla、thcva或其任何组合，包括cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0052]
在一些实施例中，大麻素组合物包括cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。在一些实施例中，大麻素组合物包括cbd:cbda的1:1等摩尔混合物。如实例1中进一步描述，意外地发现cbd:cbda的1:1等摩尔混合物在用lps治疗的thp
‑
1细胞中在降低升高的细胞因子水平方面比单独cbd或cbda更有效，在dpph分析中展现显著抗氧化活性，且诱导分化u937细胞的自噬
‑
各自指示其作为抗炎剂或免疫抑制剂的潜力。cbd:cbda的1:1等摩尔混合物展现本发明实例中的所有三个这些活性的显著效果。
[0053]
此外，cbd和cbda两者充当强效抗炎剂也令人惊讶且有些违反直觉。对thca和其脱羧衍生物thc的许多研究已非常清楚地表明，虽然thc是强效精神活性化合物，但thca并不是。基于这一事实，对其它植物源性大麻素的大部分研究已假定所述脱羧衍生物而非前体具生物活性。因此，意外发现前体cbda实际上比cbd作为消炎剂更强效。
[0054]
医药组合物
[0055]
在另一方面中，本公开提供包括大麻素和医药学上可接受的载剂的医药组合物。在一示范性实施例中，大麻素选自i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0056]
活性剂可被调配于呈适于施用的所选途径的调配物的待向受试者施用的医药组合物中。调配物可包含适合于口服、经直肠、经阴道、局部、经鼻、经眼或非经肠(包含皮下、肌肉内、腹膜内以及静脉内)施用的组合物。
[0057]
医药学上可接受的载剂可包含例如赋形剂、稀释剂、溶剂、配合剂、稳定剂、蛋白载剂或生物化合物。溶剂的非限制性实例包含丙二醇(propanediol)、丙二醇(propylene glycol)以及聚山梨醇酯80。在一些实施例中，油可用作溶剂。油的非限制性实例包含植物油，如玉米油、花生油或椰子油。蛋白载剂的非限制性实例包含匙孔螺血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin；klh)牛血清白蛋白(bovine serum albumin；bsa)、卵白蛋白或类似物。可充当载剂的生物化合物的非限制性实例包含糖胺聚糖、蛋白聚糖以及白蛋白。载剂可以是合成化合物，如二甲亚砜；或合成聚合物，如聚亚烷基二醇。卵白蛋白、人血清白蛋白、其它蛋白质、聚乙二醇或类似物可用作载剂。在一些实施例中，医药学上可接受的载剂包含
并非天然存在或天然产物的至少一种化合物。在一些实施例中，包含医药学上可接受的载剂的组合物是并非天然存在或天然产物的组合物。
[0058]
在一些实施例中，大麻素与一或多种额外(例如，“第二”)活性剂组合调配。举例来说，大麻素可与以下组合调配：非类固醇抗炎药(nsaid)，如乙酰水杨酸、布洛芬、萘普生或塞内昔布；常规合成改善病情抗风湿药(dmard)，如甲氨蝶呤、羟化氯喹、柳氮磺吡啶、来氟米特或金盐；皮质类固醇，如可的松、地塞米松、氢化可的松或强的松；非抗体肿瘤坏死因子α(tnfα或tnf)抑制剂，如黄嘌呤衍生物(己酮可可碱或安非他酮)；或单克隆抗体tnf抑制剂，如阿达木单抗、依那西普或英利昔单抗；或其组合。
[0059]
在一些实施例中，此类组合疗法包含并非天然存在或天然产物的至少一种化合物。在一些实施例中，医药组合物包含至少一种非天然存在的治疗剂或预防剂。
[0060]
组合物可方便地以单位剂型呈现且可通过制药业领域中熟知的方法中的任一种来制备。所有方法包含使活性剂与医药载剂关联的步骤。在一些实施例中，可通过均一和紧密地进行以下操作来制备组合物：将化合物与液体载剂、细碎的固体载剂或两者结合，且接着视需要将产物成型为所要调配物。
[0061]
适合于经口施用的组合物可作为离散单元呈现，如锭剂、糖衣锭(troch)、胶囊、口含剂、薄片剂(wafer)或扁胶剂(cachet)，其各自含有呈粉末或颗粒形式、呈脂质体形式或呈于水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液形式的预定量的活性剂，所述水性液体或非水性液体如糖浆、酏剂、乳液或顿服剂(draught)。锭剂、糖衣锭、丸剂、胶囊以及类似物还可含有以下中的一或多种：粘合剂，如黄芪胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸二钙；崩解剂，如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸以及类似物；润滑剂，如硬脂酸镁；甜味剂，如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜；以及天然或人工调味剂。当单位剂型是胶囊时，其可更含有液体载剂，如植物油或聚乙二醇。各种其它材料可作为包衣存在或以其它方式改变固体单位剂型的物理形式。举例来说，锭剂、丸剂或胶囊可用明胶、蜡、虫胶、糖以及类似物包覆。糖浆或酏剂可含有以下中的一或多种：甜味剂；防腐剂，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；用以延迟糖的结晶的药剂；用以提高任何其它成分的溶解度的药剂，如多元醇，例如甘油或山梨醇；染料；以及调味剂。在制备任何单位剂型时使用的材料通常在所采用的量内是大体上无毒的。活性剂可以可或可不设计成持续释放或受控释放的调配物形式并入制剂和装置中。
[0062]
适合于非经肠施用的调配物可包含活性剂的无菌水性制剂或活性剂的无菌粉末的分散液，其优选地与受试者的血液等渗。大麻素的非经肠施用(例如，通过iv滴注)是施用的一个形式。等渗剂可包含于液体制剂中，所述液体制剂包含例如糖；缓冲液；和/或包含例如氯化钠的盐。活性剂的溶液可在水中制备，任选地与无毒表面活性剂混合。活性剂的分散液可在水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇以及类似物)、植物油或甘油酯或其混合物中制备。最终剂型可以是无菌流体且在制造和存储条件下稳定。必要流动性可例如通过使用脂质体、在分散液的情况下通过采用适当粒度或通过使用表面活性剂来实现。液体制剂的灭菌可通过保持活性剂的生物活性的任何方便的方法，优选地通过过滤灭菌来实现。用于制备粉末的方法包含无菌可注射溶液的真空干燥和冷冻干燥。可使用各种抗菌剂来防止后续微生物污染，所述抗菌剂例如抗细菌、抗病毒以及抗真菌药剂，包含对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞以及类似物。可通过包含用于延迟的例如单硬脂酸铝和
明胶的药剂来实现活性剂在长时间段内的吸收。
[0063]
经鼻喷雾调配物包含具有防腐剂和/或等渗剂的具有活性剂的纯化水溶液。此类调配物可调整为与鼻粘膜相容的ph和等渗状态。用于经直肠或经阴道施用的调配物可呈现为具有适合载剂，如可可脂或氢化脂或氢化脂肪羧酸的栓剂。除了ph和等渗因素优选地调整为与眼睛匹配之外，通过与经鼻喷雾类似的方法制备经眼调配物。局部调配物包含溶解或悬浮于一或多个媒介中的活性剂，所述媒介如矿物油、石油、多羟基醇或用于局部医药调配物的其它基质。局部调配物可以绷带的形式提供，其中调配物并入到纱布或其它结构中且与皮肤接触。
[0064]
施用
[0065]
在另一方面中，本公开描述向受试者施用作为活性剂的大麻素(包含例如选自以下的大麻素：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物)。活性剂可单独或以包含活性剂和医药学上可接受的载剂的医药组合物形式施用。术语“施用”涵盖向受试者施用防治性和/或治疗有效剂量或量的活性剂。可向受试者施用有效量的活性剂以产生所要效果。
[0066]
在一些疗法实施例中，“有效量”的药剂是引起至少一个病理性参数减小的量。因此，例如，在本公开的一些方面中，有效量是与未用药剂治疗的个体的参数的预期减小比较有效地实现至少约10％、至少约15％、至少约20％、或至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％的减小的量。
[0067]
通过“治疗有效量”意谓用以在适用于获得所要治疗反应的合理效益/风险比下治疗受试者的足够量的化合物。然而，应理解，化合物和组合物的总每日用量将由主治医师在合理医学判断范围内决定。任何特定患者的具体治疗有效剂量水平将取决于各种因素，包含例如正治疗的病症和病症的严重度、所采用的具体化合物的活性、所采用的具体组合物、年龄、体重、一般健康状况、患者的性别和饮食、施用时间、施用途径以及所采用的具体化合物的排泄率、治疗持续时间、以组合方式或与所采用的具体化合物重合地使用的药物以及医学领域中熟知的相似因素。
[0068]
大麻素作为活性剂可全身性地或局部地引入受试者中。举例来说，在一些实施例中，可在炎症的位点或肿瘤的位点处引入大麻素。可向受试者施用可有效地产生所要效果的量的活性剂。大麻素可以各种路线施用，包含经口、非经肠、腹膜内、静脉内、动脉内、经皮、舌下、肌肉内、经直肠、经颊、经鼻内、经脂质体、经由吸入、经阴道、眼内、经由由导管或支架局部传递、皮下、脂肪内、关节内、鞘内或以缓慢释放剂型。举例来说，局部(local)施用可包含局部(topical)施用、通过注入施用或器官或组织的灌注或沐浴。
[0069]
调配物可以单剂量或多剂量施用。在一些实施例中，调配物可每日一次或超过每日一次施用，包含例如每日两次、每日三次或每日四次。活性剂的有用剂量可通过比较其体外活性和在动物模型中的体内活性来确定。用于将小鼠和其它动物中的有效剂量外推到人的方法在本领域中已知。
[0070]
在一些实施例中，可形成用于确定大麻素的剂量和给药方案的基础的抗炎疗法的实例可在线上见于cbdoilreview.org/cbd
‑
cannabidiol/cbd
‑
dosage/；medium.com/cbd
‑
origin/whats
‑
the
‑
best
‑
cbd
‑
dosage
‑
81ec4f95503b；www.projectcbd.org/how
‑
to/cbd
‑
dosage；或www.marijuanabreak.com/cbd
‑
oil
‑
dosage处。
[0071]
医药组合物中的活性剂的剂量水平可改变以获得有效地实现特定受试者、组合物以及施用模式的所要治疗反应而不对受试者有毒性的活性剂的量。所选剂量水准将取决于各种因素，包含所采用的特定化合物的活性、施用途径、施用时间、正采用的特定化合物的排泄率、治疗的持续时间、其它药物、与大麻素组合使用的化合物和/或材料、正治疗的受试者的年龄、性别、体重、病状、一般健康状况以及先前病史以及医学领域中熟知的相似因素。
[0072]
在一示范性实施例中，可向受试者施用至少5毫克、至少10毫克、至少20毫克、至少30毫克、至少40毫克、至少50毫克或至少5克的量的大麻素。在示范性实施例中，可向受试者施用高达40毫克、高达50毫克、高达60毫克、高达70毫克、高达80毫克、高达90毫克、高达100毫克、高达1000毫克、高达5克或高达10克的量的大麻素。在一示范性实施例中，可至少每日一次经口施用大麻素，包含例如作为药物、营养补充剂或食品添加剂。在另一示范性实施例中，可向受试者静脉内或肌肉内施用大麻素。
[0073]
在另一示范性实施例中，可向受试者施用有效地提供至少0.01毫克/千克体重、至少0.03毫克/千克体重、至少0.1毫克/千克体重、至少0.3毫克/千克体重或至少1毫克/千克体重的日剂量的量的大麻素。在另一示范性实施例中，可向受试者施用有效地提供高达1毫克/千克体重、高达5毫克/千克体重、高达10毫克/千克体重或高达20毫克/千克体重的日剂量的量的大麻素。
[0074]
本领域中具有普通技术的医师或兽医可确定并开处所需的有效量的医药组合物。举例来说，医师可在比所需的更低的水平下开始所采用的大麻素的剂量以便实现所要治疗效果且逐步地增加剂量直到实现所要效果。
[0075]
使用大麻素作为抗炎剂或免疫抑制剂的方法
[0076]
在另一方面中，本公开描述包含使用大麻素治疗或预防炎症和/或作为免疫抑制剂的方法。
[0077]
如实例中进一步描述和上文所论述，个别大麻素cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv以及thcva以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物各自显示作为抗炎剂、免疫抑制剂和/或抗氧化剂的潜力(参见表4和表6)。因此，本公开在一些实施例中提供使用本文中所描述的大麻素组合物治疗或预防有需要的受试者的炎症和/或自身免疫的方法。
[0078]
在另一实施例中，本公开提供用于诱导有需要的受试者的自噬的方法，包括施用有效量的医药组合物，所述医药组合物包括选自以下的大麻素：i)cbl、cbla、thcva，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0079]
鉴于与现有抗炎症疗法相关联的副作用，例如，tnf抑制剂导致可致命的数种副作用，且许多患者对其无反应(杰恩和辛格，2013；哈旦等人，2014)，所以本文中鉴别的作为抗炎剂或免疫抑制剂的一或多种大麻素可用作当前使用的更具毒性抗炎药物中的一或多种的替代。另外或替代地，如本文进一步描述，大麻素可与另一抗炎症药物或药物混合物组合使用。
[0080]
在一个实施例中，按能够有效地治疗或预防炎症的量施用大麻素。可在受试者产生炎症和/或显现炎症症状之前、期间或之后执行大麻素(包含例如包含大麻素的组合物)的施用。在产生炎症之后发起治疗性治疗。在产生炎症之后或在显现炎症症状之后发起的
治疗可引起症状的严重度降低或完全去除症状。举例来说，可在受试者产生自身免疫疾病的症状之前、期间或之后施用大麻素。自身免疫疾病或炎症的示范性症状包含疲劳、关节疼痛和/或肿胀、皮肤问题、腹痛和/或消化问题、反复发热、腺体肿胀等。
[0081]
在另一实施例中，可按能够有效地预防或延迟受试者的炎症发生的量防治性地施用大麻素。例如可在受试者产生炎症或显现炎症症状之前发起预防性的治疗。处于产生炎症的特定风险下的受试者的实例是患有包含例如以下的自身免疫疾病的人：类风湿性关节炎克罗恩病、红斑狼疮(sle)、休格连症候群、免疫性血小板减少性紫癜(itp)、重症肌无力、结节病、爱迪生氏病、自身免疫性肝炎、乳糜泻、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣病、硬皮病、系统性狼疮等。
[0082]
大麻素的施用可在包含例如额外活性剂的其它疗法之前、期间和/或之后发生。在一示范性实施例中，此类组合疗法可涉及在使用用于治疗炎症病状或自身免疫疾病的包含例如以下的其它治疗剂之前、期间和/或之后施用大麻素：非类固醇抗炎药(nsaid)、常规合成改善病情抗风湿药(dmard)、皮质类固醇、非抗体肿瘤坏死因子α(tnfα或tnf)抑制剂以及单克隆抗体tnf抑制剂。
[0083]
大麻素的施用可在时间上与另一活性剂的施用隔开数小时、数天或甚至数周；替代地，其它活性剂可在同一组合物中或在单独组合物中一起并行地施用。另外或替代地，大麻素的施用可与另一活性剂或例如非药物疗法的模式组合，所述非药物疗法如但不限于放射疗法、热疗法、超低温疗法、电疗法、按摩以及针灸。
[0084]
鉴于自噬在调节免疫系统中起重要作用(库巴拉(kuballa)等人，2012)的增加证据，实例4中描述的结果(cbl、cbla以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物在诱导自噬方面有效)值得注意，且建议这些化合物可充当用于治疗炎症病状和自身免疫疾病的治疗剂。自噬已展现出在数种自身免疫疾病中被下调(王和穆勒(muller)，2015；王等人，2017)，且可诱导自噬的药剂已被提出作为用于治疗炎症病状和自身免疫疾病的潜在新治疗剂(阮(nguyen)等人，2013)。
[0085]
在实例2和实例3的体外细胞研究中观测到cbd:cbda的1:1等摩尔混合物的优良免疫抑制剂活性。这些结果进一步指示这一组合物作为用于治疗炎症病状或自身免疫疾病的潜在治疗剂的潜力。虽然小鼠动物研究对于预测治疗剂治疗人的炎症和自身免疫疾病的适合性不理想，但其具有指示性(梅斯塔斯(mestas)和休斯(hughes)，2004；詹姆森(jameson)和玛索普斯特(masopust)，2018)，且实例1的小鼠lps细胞因子研究的结果进一步展现cbd:cbda的1:1等摩尔混合物作为用于治疗炎症和自身免疫疾病的治疗剂的潜力。
[0086]
使用组合物作为抗癌治疗剂的方法
[0087]
在另一方面，本公开描述包含使用大麻素作为抗癌治疗剂的方法。
[0088]
cbd已用作用以治疗癌症的营养补充剂且最近科学报告已证实其作为抗癌剂的潜力(凯尼恩(kenyon)等人，2018；苏莱
‑
苏索(sule
‑
suso)等人，2019)。实例4中描述的结果(cbl、cbla、thcva以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物在诱导自噬方面有效)可解释cbd作为抗癌剂的潜力。此外，实例4的结果首次指示cbl、cbla、thcva以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物可以是有用抗癌剂。自噬的缺陷导致癌症(埃丁格(edinger)和汤普森(thompson)，2003；蔡(choi)，2012)，且诱导自噬的药剂已被提出作为用于治疗癌症的潜在新治疗剂(穆赫塔尔(mukhtar)等人，2012；比云(byun)等人，2017；江(jiang)等人，2019)。另外，抗炎剂
已尽可能被吹捧为用于治疗癌症的药剂(雷伯恩(rayburn)等人，2009；托多里克(todoric)等人，2016)。因为大麻素显示作为抗炎剂的极大前景，所以其可用于治疗癌症。
[0089]
在一些实施例中，癌症包含肺癌。(参见苏莱
‑
苏索等人，2019)。在一些实施例中，癌症包含乳腺癌(凯尼恩等人，2018)。在一些实施例中，癌症包含神经胶质瘤(凯尼恩等人，2018)。在一些实施例中，癌症包含宫颈癌(卢克希尔(lukhele)等人，bmc补充替代医疗(bmc complement altern med.)2016；16:335)。在一些实施例中，癌症包含结肠癌(艾维罗(aviello)等人，分子医学杂志(j mol med)(berl).2012；90:925
‑
934)。
[0090]
另外或替代地，待治疗的癌症包含但不限于黑素瘤、基底细胞癌、结肠直肠癌、胰脏癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌(包含小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、白血病、淋巴瘤、肉瘤、卵巢癌、卡波西肉瘤(kaposi's sarcoma)、霍奇金氏淋巴瘤(hodgkin's lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多、原发性巨球蛋白血症、小细胞肺肿瘤、原发性脑肿瘤、胃癌、头颈癌、恶性胰腺胰岛瘤、恶性类癌、膀胱癌、癌变前皮损、睾丸癌、淋巴瘤、甲状腺癌、神经母细胞瘤、食道癌、泌尿生殖道癌症、恶性高钙血症、宫颈癌、肾癌、子宫内膜癌、神经胶母细胞瘤、间皮瘤、口腔白斑、巴瑞特氏食道癌(barrett's esophageal cancer)以及肾上腺皮质癌。在一些方面，癌症是原发性癌症。在一些方面，癌症是转移性的，包含但不限于转移性黑素瘤、转移性乳癌或转移性结肠直肠癌。
[0091]
在一个实施例中，按能够有效地治疗或预防癌症的量施用大麻素。可在受试者产生癌症和/或显现癌症症状之前、期间或之后执行大麻素(包含例如包含大麻素的组合物)的施用。在产生癌症之后发起治疗性治疗。在产生癌症之后或在显现癌症症状之后发起的治疗可引起症状的严重度降低或完全去除症状。举例来说，可在受试者产生癌症的症状之前、期间或之后施用大麻素。癌症的治疗可包含例如杀死肿瘤细胞、减缓肿瘤细胞的生长、减小肿瘤大小、诱导肿瘤细胞的凋亡和/或诱导肿瘤细胞合胞形成。
[0092]
用于治疗癌症的此类方法的功效可由本领域中熟知的各种参数中的任一个评估。此类方法包含但不限于确定肿瘤大小的减小，确定对肿瘤的生长、扩散、侵袭、血管形成、血管生成和/或转移的抑制，确定对任何转移性病变的生长、扩散、侵袭和/或血管形成的抑制，确定免疫系统细胞的肿瘤浸润，和/或确定对肿瘤抗原的增加迟发型超敏反应。治疗的功效亦可通过确定受试者的复发的延迟或肿瘤进展的延迟或通过确定受试者的生存率(例如在一年或五年治疗后的提高生存率)来评估。如本文中所使用，复发是肿瘤或赘生物在其明显停止之后的再现。
[0093]
在另一实施例中，可按能够有效地预防或延迟受试者的癌症发生的量防治性地施用大麻素。例如可在受试者产生癌症或显现癌症症状之前发起预防性的治疗。处于发生癌症的特定风险下的受试者的实例是已暴露于致癌物或已检测对具有癌症风险的遗传标记(例如，brca1或brca2)呈阳性的人。
[0094]
大麻素的施用可在包含例如额外活性剂或治疗剂的其它疗法之前、期间和/或之后发生。在一示范性实施例中，此类组合疗法可涉及在使用用于治疗癌症的其它治疗剂之前、期间和/或之后施用大麻素。
[0095]
大麻素的施用可在时间上与另一活性剂或治疗剂的施用隔开数小时、数天或甚至数周；替代地，其它活性剂或治疗剂可在同一组合物中或在单独组合物中一起并行地施用。
另外或替代地，大麻素的施用可与另一活性剂或例如非药物疗法的模式组合，所述非药物疗法如但不限于放射疗法、热疗法、超低温疗法、电疗法、按摩以及针灸。
[0096]
在一些实施例中，当与单独施用其它治疗模式相比较时，大麻素的施用可实现更低剂量的其它治疗模式的有效性，从而提供对通过施用更高剂量的其它模式观测到的毒性的缓解。
[0097]
如本文中所使用，额外活性剂或治疗剂可以是用于治疗本领域的技术人员已知的癌症的药剂。此类疗法包含但不限于手术切除、辐射疗法、激素疗法、疫苗、基于抗体的疗法、全身照射、骨髓移植、外周血液干细胞移植、化学治疗剂的施用、细胞因子、抗病毒剂、免疫增强剂、酪氨酸激酶抑制剂、蛋白激酶c(protein kinase c；pkc)调节剂(例如pkc活化剂巨大戟醇(ingenol 3
‑
angelate)(pep005)或pkc抑制剂双吲哚基顺丁烯二酰亚胺(恩扎妥林(enzastaurin))、信号转导抑制剂、抗生素、抗菌剂、tlr促效剂(例如，细菌脂多糖(lipopolysaccharides；lps)或cpg寡核苷酸(oligonucleotide；odn))、例如1
‑
mt的ido抑制剂以及佐剂。
[0098]
化学治疗剂可以是例如细胞毒性化学治疗剂，例如表叶毒素(epidophyllotoxin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)的铂协调络合物、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、喃氟啶(tegafur)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxol)、长春新碱(vincristine)、长春花碱(vinblastine)、甲氨蝶呤、环磷酰胺(cyclophosphamide)、吉西他滨(gemcitabine)、雌莫司汀(estramustine)、卡莫司汀(carmustine)、亚德里亚霉素(adriamycin)(阿霉素(doxorubicin))、依托泊苷(etoposide)、三氧化二砷、伊立替康(irinotecan)、埃博霉素(epothilone)衍生物、诺维本(navelbene)、cpt
‑
11、阿那曲唑(anastrazole)、来曲唑(letrazole)、卡培他滨(capecitabine)、雷洛昔芬(reloxafine)、异环磷酰胺(ifosamide)以及着洛萨芬(droloxafine)。
[0099]
化学治疗剂可以是例如烷基化剂，例如伊洛福芬(irofulven)、氮芥(nitrogen mustard)(如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、环磷酰胺、异环磷酰胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、美法仑(melphalan)以及尿嘧啶氮芥(uracil mustard))、氮丙啶(aziridines)(如噻替派(thiotepa))、甲烷磺酸酯(如白消安(busulfan))、亚硝脲(nitroso ureas)(如卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)以及链脲菌素(streptozocin))、铂络合物(如顺铂和卡铂)以及生物还原性烷基化剂(如丝裂霉素(mitomycin)、甲基苄肼(procarbazine)、达卡巴嗪(dacarbazine)以及六甲蜜胺(altretamine))、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸酯、三氮烯、哌泊溴烷(pipobroman)、替莫唑胺(temozolomide)、三乙烯
‑
蜜胺(triethylene
‑
melamine)以及三亚乙基硫代磷胺。
[0100]
化学治疗剂可以是抗代谢物，例如叶酸拮抗剂(如甲氨蝶呤和三甲曲沙(trimetrexate))、嘧啶拮抗剂(如氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟脱氧尿苷(fluorodeoxyuridine)、cb3717、阿扎胞苷(azacitidine)、阿糖胞苷(cytarabine)、吉西他滨以及氟尿苷(floxuridine))、嘌呤拮抗剂(如巯嘌呤(mercaptopurine)、6
‑
硫鸟嘌呤(6
‑
thioguanine)、氟达拉滨(fludarabine)以及喷司他汀(pentostatin))、核糖核苷酸还原酶抑制剂(如羟基脲)以及腺苷脱氨酶抑制剂。
[0101]
化学治疗剂可以是dna链断裂剂(例如博莱霉素(bleomycin))、拓扑异构酶ii抑制
剂(例如安吖啶(amsacrine)、放线菌素(dactinomycin)、道诺霉素(daunorubicin)、艾达霉素(idarubicin)、米托蒽醌、阿霉素、依托泊苷以及替尼泊甙(teniposide))、dna小沟结合剂(例如普利卡霉素(plicamydin))、微管蛋白互相作用剂(例如长春新碱、长春花碱以及紫杉醇)、激素剂(例如雌激素、结合雌激素(conjugated estrogens)、乙炔雌二醇、乙烯雌酚(diethylstilbesterol)、氯烯雌醚(chlortrianisen)、己二烯雌酚(idenestrol)、孕激素(如己酸羟孕酮、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)以及甲地孕酮(megestrol))以及雄激素(如睾酮(testosterone)、丙酸睾酮、氟羟甲睾酮(fluoxymesterone)以及甲睾酮(methyltestosterone))、肾上腺皮质类固醇(例如强的松、地塞米松、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)以及泼尼松龙(prednisolone))、黄体化激素(leutinizing hormone)释放剂或促性腺激素释放激素拮抗剂(例如乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)和乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate))、抗激素剂(例如他莫昔芬(tamoxifen))、抗雄激素剂(如氟他胺(flutamide))、抗肾上腺剂(antiadrenal agent)(如米托坦(mitotane)和胺鲁米特(aminoglutethimide))以及天然产物或其衍生物(例如长春花生物碱(vinca alkaloids)、抗生素、酶以及表鬼臼毒素(epipodophyllotoxins)，包含例如长春花碱、长春新碱、长春地辛(vindesine)、博莱霉素、放线菌素、道诺霉素、阿霉素、表柔比星(epirubicin)、艾达霉素、阿糖胞苷(ara
‑
c)、紫杉醇、光神霉素(mithramycin)、脱氧助间型霉素(deoxyco
‑
formycin)、丝裂霉素
‑
c、l
‑
天冬酰胺酶以及替尼泊甙。
[0102]
在一些实施例中，至少一种额外治疗剂包含辐射疗法。在一些方面，辐射疗法包含传递到肿瘤的局部辐射疗法。在一些方面，辐射疗法包含全身照射。
[0103]
细胞因子包含但不限于il
‑
1α、il
‑
1β、il
‑
2、il
‑
3、il
‑
4、il
‑
6、il
‑
8、il
‑
9、il
‑
10、il
‑
12、il
‑
13、il
‑
15、il
‑
18、il
‑
19、il
‑
20、ifn
‑
α、ifn
‑
β、ifn
‑
γ、肿瘤坏死因子(tnf)、转化生长因子
‑
β(transforming growth factor
‑
β；tgf
‑
β)、粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor；g
‑
csf)、巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor；m
‑
csf)、粒细胞
‑
巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte
‑
macrophage colony stimulating factor；gm
‑
csf)和或flt
‑
3配位体。抗体治疗剂包含例如曲妥珠单抗(trastuzumab)(赫赛汀(herceptin))和如il
‑
10和tgf
‑
β的细胞因子的抗体。
[0104]
在一些实施例中，在施用大麻素和额外活性剂或治疗剂两者之后观测到的对治疗的反应的测量值被改良为优于在施用单独大麻素或单独其它药剂之后观测到的对治疗的反应的相同测量值。在一些实施例中，如本文中所描述的大麻素和至少一种额外治疗剂的施用展现治疗协同性。如本文中所使用，如果组合在治疗上优于在其最优剂量下使用的成分中的一种或另一种，那么其可展现治疗协同性(科贝特(corbett)等人，1982，癌症治疗报告(cancer treatment reports)；66:1187。在一些实施例中，如果组合的功效表征为超过每一成分的加成作用，那么组合表明治疗协同性。
[0105]
试剂盒
[0106]
本公开进一步描述含有至少一种大麻素或本文中所描述的组合物的试剂盒，以及使用说明。在一些实施例中，使用说明提供治疗或预防炎症和/或自身免疫的使用说明。任选地，试剂盒包含医药学上可接受的载剂。载剂可单独被提供，或其可存在于包含化合物的组合物中。任选地，试剂盒可更包含可与大麻素共同施用的一或多种额外活性剂。一或多种活性剂可具有累积或互补活性，如本文中别处更详细地描述。
[0107]
示范性实施例
[0108]
1.一种医药组合物，包括选自以下的大麻素：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物；其中医药组合物被调配成用作消炎剂和/或免疫抑制剂。
[0109]
2.根据实施例1所述的医药组合物，其中大麻素选自：i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0110]
3.根据实施例1所述的医药组合物，其中大麻素选自cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合。
[0111]
4.根据实施例1所述的医药组合物，其中大麻素选自：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0112]
5.根据实施例1所述的医药组合物，其中大麻素选自：i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0113]
6.根据实施例5所述的医药组合物，其中大麻素选自cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合。
[0114]
7.根据实施例6所述的医药组合物，其中大麻素选自cbdv、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合。
[0115]
8.根据实施例1所述的医药组合物，其中大麻素选自i)cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv以及thcva，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0116]
9.根据实施例1所述的医药组合物，其中大麻素选自i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbl、cbla、cbn、cbna以及thcva，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0117]
10.根据实施例1、2、4、5、8或9中任一项所述的医药组合物，其中大麻素是cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0118]
11.根据实施例10所述的医药组合物，其中医药组合物大体上不含其它大麻素。
[0119]
12.根据实施例10或11所述的医药组合物，其中大麻素基本上由cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物组成。
[0120]
13.根据实施例10到12中任一项所述的医药组合物，其中大麻素基本上由cbd:cbda的1:1等摩尔混合物组成。
[0121]
14.根据前述实施例中任一项所述的医药组合物，其中医药组合物在体内或体外降低细胞因子水平。
[0122]
15.一种医药组合物，包括选自以下的大麻素：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物；其中医药组合物被配制成具有抗氧化活性。
[0123]
16.根据实施例15所述的医药组合物，其中大麻素选自cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合。
[0124]
17.根据实施例15所述的医药组合物，其中大麻素选自：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1
等摩尔混合物。
[0125]
18.根据实施例15所述的医药组合物，其中大麻素选自cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv以及thcva。
[0126]
19.根据实施例15所述的医药组合物，其中大麻素选自cbdv、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合。
[0127]
20.根据实施例15所述的医药组合物，其中大麻素选自i)cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg以及thcv，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0128]
21.根据实施例15、17或20中任一项所述的医药组合物，其中大麻素是cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0129]
22.根据实施例21所述的医药组合物，其中医药组合物大体上不含其它大麻素。
[0130]
23.根据实施例21或22所述的医药组合物，其中大麻素基本上由cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物组成。
[0131]
24.根据实施例21到23中任一项所述的医药组合物，其中大麻素基本上由cbd:cbda的1:1等摩尔混合物组成。
[0132]
25.一种医药组合物，包括选自以下的大麻素：i)cbl、cbla以及thcva，以及其任何混合物；以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物，其中医药组合物被配制成在体内或体外诱导自噬。
[0133]
26.根据实施例25所述的医药组合物，其中大麻素选自：i)cbl、cbla以及其混合物；以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0134]
27.根据实施例26所述的医药组合物，其中大麻素选自cbl、cbla以及其混合物。
[0135]
28.根据实施例25或26所述的医药组合物，其中大麻素选自cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0136]
29.根据实施例28所述的医药组合物，其中医药组合物大体上不含其它大麻素。
[0137]
30.根据实施例28或29所述的医药组合物，其中大麻素基本上由cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物组成。
[0138]
31.根据实施例28到30中任一项所述的医药组合物，其中大麻素基本上由cbd:cbda的1:1等摩尔混合物组成。
[0139]
32.一种医药组合物，包括cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0140]
33.根据实施例32所述的医药组合物，其中医药组合物大体上不含其它大麻素。
[0141]
34.根据实施例32或33所述的医药组合物，其中大麻素基本上由cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物组成。
[0142]
35.根据实施例32到34中任一项所述的医药组合物，其中大麻素基本上由cbd:cbda的1:1等摩尔混合物组成。
[0143]
36.根据实施例32所述的医药组合物，其中医药组合物包括选自cbc、cbca、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合的额外大麻素。
[0144]
37.根据实施例1到36中任一项所述的医药组合物，其中组合物更包括医药载剂。
[0145]
38.根据实施例1到37中任一项所述的医药组合物，其中组合物更包括非类固醇抗炎药物(nsaid)、常规合成改善病情抗风湿药(dmard)、皮质类固醇、非抗体肿瘤坏死因子α抑制剂或单克隆抗体tnf抑制剂或其组合。
[0146]
39.根据实施例1到38中任一项所述的医药组合物，其中组合物被调配成用作抗癌剂。
[0147]
40.一种使用根据实施例1到39中任一项所述的组合物的方法，方法包括向有需要的受试者施用有效量的组合物。
[0148]
41.一种用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，方法包括向受试者施用组合物，所述组合物包括有效量的选自以下的大麻素：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合；以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0149]
42.根据实施例41所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中有需要的受试者具有自身免疫疾病。
[0150]
43.根据实施例42所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中自身免疫疾病包括类风湿性关节炎克罗恩病、红斑狼疮(sle)、休格连症候群、免疫性血小板减少性紫癜(itp)、重症肌无力、结节病、爱迪生氏病、自身免疫性肝炎、乳糜泻、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣病、硬皮病或系统性狼疮。
[0151]
44.根据实施例41到43中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中治疗或预防炎症包括治疗或预防炎症症状。
[0152]
45.根据实施例41到44中任一项所述的方法，其中大麻素选自：i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0153]
46.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素选自cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合。
[0154]
47.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素选自：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0155]
48.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素选自：i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0156]
49.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素选自cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合。
[0157]
50.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素选自cbdv、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合。
[0158]
51.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素选自i)cbca、cbda、cbd、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv以及thcva，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0159]
52.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素选自i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbl、cbla、cbn、cbna以及thcva，以
及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0160]
53.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素是cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0161]
54.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中医药组合物大体上不含其它大麻素。
[0162]
55.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素基本上由cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物组成。
[0163]
56.根据实施例41到44中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中大麻素基本上由cbd:cbda的1:1等摩尔混合物组成。
[0164]
57.根据实施例41到56中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，其中方法降低患者的升高细胞因子水平。
[0165]
58.根据实施例41到57中任一项所述的用于治疗或预防受试者的炎症和/或自身免疫的方法，方法更包括向受试者施用有效量的额外活性剂。
[0166]
59.根据实施例63所述的方法，其中额外活性剂选自非类固醇抗炎药(nsaid)、常规合成改善病情抗风湿药(dmard)、皮质类固醇、非抗体肿瘤坏死因子α抑制剂或单克隆抗体tnf抑制剂以及其任何组合。
[0167]
60.一种用于诱导有需要患者的自噬的方法，包括向患者施用有效量的医药组合物，所述医药组合物包括选自以下的大麻素：i)cbl、cbla以及thcva，以及其任何混合物；以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0168]
61.根据实施例60所述的用于诱导有需要患者的自噬的方法，其中大麻素选自：i)cbl、cbla以及其混合物；以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0169]
62.根据实施例60或61中任一项所述的用于诱导有需要患者的自噬的方法，其中大麻素选自cbl、cbla以及其混合物。
[0170]
63.根据实施例60到62中任一项所述的用于诱导有需要患者的自噬的方法，其中方法治疗或预防患者的癌症。
[0171]
64.一种治疗或预防有需要患者的癌症的方法，包括，方法包括向受试者施用组合物，所述组合物包括选自以下的有效量的大麻素：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合；以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0172]
65.根据实施例64所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素选自：i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcva以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0173]
66.根据实施例64或65所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素选自cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva以及其任何组合。
[0174]
67.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素选自：i)cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0175]
68.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其
中大麻素选自：i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0176]
69.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素选自cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合。
[0177]
70.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素选自cbdv、cbl、cbla、cbn、cbna以及其任何组合。
[0178]
71.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素选自i)cbca、cbda、cbd、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv以及thcva，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0179]
72.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素选自i)cbca、cbda、cbdv、cbdva、cbl、cbla、cbn、cbna以及thcva，以及ii)cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0180]
73.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素是cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物。
[0181]
74.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中医药组合物大体上不含其它大麻素。
[0182]
75.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素基本上由cbd:cbda的大致1:1等摩尔混合物组成。
[0183]
76.根据实施例64到66中任一项所述的治疗或预防有需要患者的癌症的方法，其中大麻素基本上由cbd:cbda的1:1等摩尔混合物组成。
[0184]
77.根据实施例60到76中任一项所述的方法，更包括施用和额外活性剂，所述额外活性剂选自化学治疗剂、细胞因子、抗病毒剂、免疫增强剂、酪氨酸激酶抑制剂、蛋白激酶c(pkc)调节剂、信号转导抑制剂、抗生素、抗菌剂、tlr促效剂、ido抑制剂、佐剂以及其任何组合。
[0185]
78.根据实施例60到77中任一项所述的方法，更包括向患者施用辐射疗法。
[0186]
79.根据实施例60到62中任一项所述的用于诱导有需要患者的自噬的方法，其中方法进一步治疗或预防和受试者的炎症和/或自身免疫疾病。
[0187]
80.根据实施例41到79中任一项所述的方法，其中组合物更包括医药载剂。
[0188]
81.根据实施例41到80中任一项所述的方法，其中受试者是哺乳动物。
[0189]
82.根据实施例81所述的方法，其中受试者是人类。
[0190]
实例
[0191]
实例描述数种非精神药物大麻素的抗氧化、抗炎以及免疫抑制活性的鉴别，以及自噬的诱导。
[0192]
如本文中进一步描述，使用具有由脂多糖(lps)诱导的受刺激细胞因子表达的分化巨噬细胞样人类thp
‑
1细胞来研究cbda与cbd抑制升高细胞因子水平的能力。在这些实验中，cbda胜过cbd。因为cbda在抑制升高细胞因子水平方面优于cbd，所以也检查1:1cbd:cbda混合物与单独cbd和cbda的效应。相较于单独cbd或cbda，抑制细胞因子表达的1:1cbd:cbda混合物比cbd或cbda更好且明显具有协同效应。由于cbda在这些研究中被证明作为抗炎剂比cbd更有效，所以分析以下的免疫抑制剂潜力：主要非精神药物大麻素大麻环萜酚酸
(cannabichromenic acid；cbca)、大麻二醇酸(cbda)、次大麻二酚酸(cbdva)、大麻萜酚酸(cbga)、四氢次大麻酚酸(tetrahydrfocannabivarinic acid；thcva)以及其脱羧衍生物大麻环萜酚(cbc)、大麻二酚(cbd)、次大麻二酚(cbdv)、大麻萜酚(cbg)以及四氢次大麻酚(thcv)，可由主要大麻素和其脱羧衍生物大麻环酚(cbl)和大麻酚(cbn)衍生的最著名的非精神药物大麻素大麻环酚酸(cbla)和大麻酚酸(cbna)，以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物。也在小鼠lps细胞因子模型中评估cbd、cbda以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物抑制升高细胞因子水平的能力。
[0193]
材料和方法
[0194]
大麻素
[0195]
从切里莱恩公司(cerilliant corporation)(圆石城，tx)获得主要大麻素cbca、cbda、cbdva、cbga以及thcva以及其脱羧衍生物、cbc、cbd、cbdv、cbg以及thcv。cbcva和cbgva以及其脱羧衍生物cbcv和cbgv不可购得且不加以分析。cbla和cbna大麻素以及其脱羧衍生物cbl和cbn是最广泛地研究的大麻素，其可由大麻所产生的天然大麻素衍生，且从切里莱恩公司(圆石城，tx)获得。在二甲亚砜(dimethyl sulfoxide；dmso)中在10mm下制备大麻素的储备溶液以用于体外人类细胞研究且在20毫克/毫升下用于小鼠研究。
[0196]
为注入到小鼠中，通过在磷酸缓冲液(pb)中1:20稀释20毫克/毫升dmso溶液来制备大麻素的乳化溶液。cbd在如小鼠和大鼠以及人类的动物中耐受良好，且在小鼠中高达100毫克和在人类中600毫克的剂量已用于多个毒理学研究中而无不良副作用。(参见贝尔加马斯基(bergamaschi)等人，2011)。然而，cbd对经由组织培养生长的动物或人类细胞具有不可思议的毒性且小于5pm的剂量可导致明显细胞毒性(蔡等人，2008；刘(liu)等人，2010；马托(mato)等人，2010；卢克希尔和莫塔蒂(motadi)，2016)。出于这个原因，必须小心地确定在体外细胞研究中使用的cbd的剂量以确保其并不导致细胞毒性。
[0197]
实例1：dpph抗氧化分析
[0198]
使用2,2
‑
二苯基
‑1‑
苦基肼(dpph)抗氧化分析来评估大麻素充当潜在抗氧化剂的能力。大麻素cbda、cbd、cbdva、cbdv、cbg、thcv以及1:1cbd:cbda混合物分别具有最高抗氧化活性，其中具有38.19％、48.00％、43.81％、44.21％、44.28％、45.71％以及43.74％的自由基清除活性。
[0199]
在乙醇中在0.1mm下制备2,2
‑
二苯基
‑1‑
苦基肼(dpph)自由基(阿法埃莎(alfa aesar))。在100um的最终浓度下测试大麻素。在dmso中待测试的大麻素的2微升7.5mm储备溶液添加到148微升0.1mm dpph以在分析中实现100μm的最终浓度。10毫克/毫升的最终浓度下的抗坏血酸(赛默科技(thermo scientific))用作阳性对照。在室温下在暗处培育反应混合物1小时，使用spectra max 5m微板读数仪(分子仪器公司(molecular devices)，llc，森尼韦尔(sunnyvale)，usa，ca)在517纳米下读取混合物的吸收率且使用下式将吸收率转化为自由基清除活性百分比(％rsa)：％rsa＝[(对照的吸收率
‑
样本的吸收率)/(对照的吸收率)]
×
100。
[0200]
当免疫系统活化时，自由基产生发生，且抗氧化剂表示用于炎症病状和自身免疫疾病的潜在有效疗法。由于几个最近研究已展现cbd充当抗氧化剂的能力(侯赛因扎德(hosseinzadeh)等人，2016；拉詹等人，2016)，所以也研究已评估为免疫抑制剂的所有主要大麻素的抗氧化潜力。dpph抗氧化分析可用于通过测量化合物氢化和减少dpph的能力来测
量化合物清除游离基的能力。在cbca、cbda、cbdva、cbga、cbla、cbna、thcva以及其脱羧衍生物以及1:1cbd:cbda混合物上进行dpph分析。结果显示于表2中。
[0201]
表2：非精神药物大麻素cbca、cbda、cbdva、cbga、cbla、cbna、thcva以及其脱羧衍生物氢化和减少dpph的能力
[0202]
化合物％自由基清除活性(rsa)未治疗的对照17.00抗坏血酸对照94.00cbc31.95cbca19.02cbd48.00cbda38.19cbdv44.21cbdva43.81cbg44.28cbga26.84cbl30.84cbla21.18cbn33.83cbna24.92thcv45.71thcva29.221:1cbd:cbda43.74
[0203]
cbda、cbd、cbdva、cbdv、cbg、thcv以及1:1cbd:cbda混合物分别具有最高抗氧化活性，其中具有38.19％、48.00％、43.81％、44.21％、44.28％、45.71％以及43.74％的自由基清除活性。抗坏血酸(10毫克/毫升)用作阳性对照，且化合物减少dpph的能力被计算为％自由基清除活性(rsa)。
[0204]
实例2：thp
‑
1人类细胞lps细胞因子分析
[0205]
可执行以评估治疗剂的免疫抑制剂潜力的最稳固的体外细胞测试中的一个是确定药剂是否可抑制已使用pma分化成巨噬细胞样细胞的thp
‑
1人类单核细胞中的细胞因子水平且接着用如lps的免疫刺激剂诱导其免疫系统(柯尔伦fr(cochran fr)，芬奇
‑
艾瑞塔(finch
‑
arietta mb)，1989)。
[0206]
thp
‑
1细胞因子抑制分析作为三个独立实验运行，且仅在lps对照与未治疗的样本中其表达被诱导超过两倍的细胞因子被分析以用于抑制地塞米松对照以及cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva大麻素或1:1cbd:cbda大麻素混合物。
[0207]
thp
‑
1细胞在37℃下在补充5％c02的情况下维持于补充有10％热灭活fbs和1％青霉素/链霉素(完全培养基)的rpmi 1640介质中。通过在500
×
克下离心5分钟将细胞浓度调整为5
×
105个细胞/毫升且再悬浮于具有100nm佛波醇12
‑
豆蔻酸酯13
‑
乙酸酯(phorbol12
‑
myristate 13
‑
acetate；pma)的完全培养基中。将细胞接种到24孔培养板或12孔培养板上
且培育48小时到72小时以允许分化。在每一实验之前用无血清rpmi 1640介质洗涤细胞以去除未分化细胞。在2dm的最终浓度下用大麻素或作为对照的皮质类固醇地塞米松治疗分化thp
‑
1细胞1小时且接着用20纳克/毫升的脂多糖(lps)刺激所述细胞4小时。收集上清液以量化人类细胞因子水平以分析细胞因子反应。测试在上清液收集之后剩余的细胞以确保其具有至少90％活力，如阿尔玛蓝(alamar blue)分析所确定。为进行阿尔玛蓝分析，用含有1
×
阿尔玛蓝试剂的培养基替换上清液且培育隔夜。通过在spectramax m2e微板读数仪(分子仪器公司，森尼韦尔，usa，ca)上在激发560纳米和发射590纳米下测量相对萤光单位(relative fluorescent units；rfu)来评估细胞活力。对照包含在与治疗的细胞相同的浓度下使用dmso的未治疗细胞、在与治疗的细胞相同的浓度下使用dmso的lps刺激细胞以及使用各种疗法的lps刺激细胞。最常见人类细胞因子(夏娃技术(eve technologies)，加拿大，卡尔加里(calgary)，表3)中的42种的水平通过多重分析确定。
[0208]
表3：人类细胞因子
[0209]
[0210][0211]
用lps诱导的分化thp
‑
1人类单核细胞的细胞因子水平的诱导和在lps诱导之后通过大麻素对细胞因子水平的抑制取决于细胞因子而极大地变化。出于这个原因，通过所测试的每一大麻素来确定每一细胞因子的细胞因子抑制的水平，且通过将总抑制除以所分析的细胞因子的数目来确定每一大麻素的总平均抑制。这一分析仅考虑在仅lps对照与未治疗对照中其水平通过lps被诱导至少两倍的细胞因子。
[0212]
所有大麻素能够抑制细胞因子表达，如表4中所显示。
[0213]
表4：通过地塞米松、cbc、cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbl、cbla、cbn、cbna、thcv、thcva大麻素或1:1cbd:cbda大麻素混合物抑制thp
‑
1中的细胞因子诱导
[0214]
大麻素％细胞因子抑制地塞米松(对照)51.02cbc22.58cbca34.58cbd33.15cbda37.18cbdv36.72cbdva32.37cbg35.84cbga34.30cbl43.58cbla34.42cbn37.04cbna33.99thcv34.75thcva28.371:1cbd:cbda45.51
[0215]
1:1cbd:cbda混合物呈现最大抑制，接着是cbl。cbc和thcva与其它大麻素相比较在抑制细胞因子表达方面并非那么有效。cbd:cbda的1:1等摩尔混合物引起的抑制比cbd有效37.28％且比cbda有效22.40％。cbd:cbda的1:1等摩尔混合物引起的抑制与单独cbd或cbda引起的抑制相比较明显具协同性。协同性的医药学定义是两种或大于两种药剂的相互作用应产生大于药剂的单独效果的总和的联合效果。在这种情况下，1:1cbd:cbda或1/2cbd和1/2cbda混合物的效果应大于cbd和cbda的个别效果的总和，所述效果的总和是(1/2
×
cbd+1/2
×
cbda)；即，1:1cbd:cbda引起的45.51％抑制大于1/2
×
cbd+1/2
×
cbda预期引起的35.17％表达。
[0216]
接着，thp
‑
1细胞因子抑制分析作为四个独立实验运行，且针对地塞米松对照以及cbd和cbda大麻素或cbd:cbda大麻素的1:1等摩尔混合物引起的抑制仅分析在四个实验中的至少三个中在lps对照与未治疗样本中其表达被诱导超过两倍的细胞因子。结果概述于表5中。
[0217]
表5：通过地塞米松、cbd、cbda或cbd:cbda的1:1等摩尔混合物抑制thp
‑
1中的细胞因子诱导
[0218][0219]
所分析的42种细胞因子中的20种的表达在lps与未治疗样本中被诱导超过两倍，且地塞米松或cbd、cbda以及cbd:cbda大麻素的1:1等摩尔混合物抑制这些细胞因子的表达。ifnγ、il
‑
1β、il
‑
2、il
‑
6、il
‑
12、il
‑
15、il
‑
16、il
‑
17、il
‑
18、il
‑
23以及tnfα细胞因子被广泛认为是炎症细胞因子，且除il
‑
16和il
‑
23之外其中所有均包含于所分析的细胞因子中。除了il
‑
2和i1
‑
17之外，所有这些细胞因子的表达水平被lps诱导超过两倍。其表达水平被lps诱导超过两倍的炎症细胞因子的7种中的7种或100.00％的表达水平可由大麻素强有力地抑制。il
‑
1ra、il
‑
4、il
‑
10、il
‑
11、il
‑
13以及tgf|3细胞因子被广泛认为是抗炎细胞因子，且除il
‑
11和tgfβ之外，其所有均包含于所分析的细胞因子中。所分析的抗炎细胞因子的4种中的仅1种或25％的表达水平可被lps诱导至少两倍且由大麻素强有力地抑制。因此相较于消炎细胞因子，大麻素优选地靶向炎症细胞因子的抑制。值得注意的是，fgf
‑
2、il
‑
15、il
‑
18的抑制可仅通过大麻素而非地塞米松来实现，且il
‑
15和il
‑
18通常被认为是较重要炎症细胞因子中的两种。
[0220]
cbd:cbda的1:1等摩尔混合物引起的抑制比cbd有效31.70％且比cbda有效22.98％，且cbd:cbda的1:1等摩尔混合物与cbd和cbda引起的抑制的有效性极类似于在比较所有大麻素的实验中实现的结果。cbd:cbda的1:1等摩尔混合物引起的抑制与单独cbd或cbda引起的抑制相比较明显具协同性。1:1cbd:cbda引起的52.18％抑制大于1/2
×
cbd+1/2
×
cbda预期引起的41.03％表达。
[0221]
实例3：小鼠lps细胞因子动物模型
[0222]
进行这一实验以比较cbd、cbda或cbd:cbda的1:1等摩尔混合物抑制其表达水平在小鼠中被lps诱导的细胞因子的诱导的能力。如果所评估的三种大麻素中的两种可抑制已通过lps诱导至少两倍的细胞因子水平，那么所测试的所有三种大麻素包含于分析中。
[0223]
虽然小鼠已常规地用作人类疾病的模型，但小鼠在研究炎症和自身免疫疾病上的用途尤其受到质疑，这是由于小鼠的免疫系统表现和与人类的免疫系统极不同地被调节(梅斯塔斯和休斯，2004；詹姆森和玛索普斯特，2018)。然而，药剂抑制免疫系统的能力可使用lps小鼠模型在体内进行测试，其中小鼠被注入有lps以引起免疫反应(菲尔德(field)等人，1970；盖齐p(ghezzi p)和斯普jd(sipe jd)，1988。类似于体外thp
‑
1lps分析，接着针对化合物抑制免疫反应的能力通过测量细胞因子水平来分析所述化合物。
[0224]
每群组使用四只20克雌性c57bl/6小鼠。实验小鼠首先注入有在具有5％dmso的磷酸缓冲液(pb)中在1毫克/毫升下制备的0.1毫升大麻素，得到5毫克/千克的最终剂量，接着在一小时后注入0.1毫升的于pb中的0.02毫克/毫升lps，得到0.1毫克/千克的最终剂量。注入有具有5％dmso和0.1毫升pbs的0.1毫升pb的小鼠充当非诱导对照，且注入有具有5％dmso和于pb中的0.1毫升0.02毫克/毫升lps的0.1毫升pb的小鼠充当lps未治疗对照。在允许通过lps诱导免疫系统两小时之后，接着将小鼠安乐死，执行心脏穿刺以提取血液，在离心以分离血清之前使所述血液在冰上凝结1小时。最常见小鼠细胞因子(夏娃技术，加拿大，卡尔加里，表6)中的32种的水平通过多重分析确定。
[0225]
表6：小鼠细胞因子
[0226][0227][0228]
用lps诱导的c57bl/6小鼠中的细胞因子水平的诱导和在lps诱导之后通过大麻素引起的细胞因子水平的抑制取决于细胞因子而极大地变化。出于这个原因，通过所测试的每一大麻素来确定每一细胞因子的细胞因子抑制的水平，且通过将总抑制除以所分析的细胞因子的数目来确定每一大麻素的总平均抑制。因为这一实验的目的是比较cbd、cbda或1:1cbd:cbda混合物在抑制细胞因子水平方面的有效性，所以这一分析仅考虑在仅lps对照与未治疗对照中其水平被lps诱导至少两倍且可通过大麻素中的至少两种受到抑制的细胞因子。结果概述于表7中。
[0229]
表7：通过cbd、cbda或cbd:cbda的1:1等摩尔混合物抑制小鼠中的小鼠细胞因子诱导的百分比
[0230][0231]
所测试的三种大麻素cbd、cbda或cbd:cbda的1:1等摩尔混合物中的至少两种抑制在lps与未治疗样本中被诱导超过两倍的23种细胞因子中的16种的表达。ifnγ、il
‑
1β、il
‑
2、il
‑
6、il
‑
12、il
‑
15、il
‑
16、il
‑
17、il
‑
18、il
‑
23以及tnfα细胞因子被广泛认为是炎症细胞因子，且除il
‑
16、il
‑
18以及il
‑
23之外其中所有均包含于所分析的细胞因子中。所分析的炎症细胞因子的8种中的7种或87.50％的表达水平可通过大麻素受到抑制。il
‑
1ra、il
‑
4、il
‑
10、il
‑
11、il
‑
13以及tgfβ细胞因子被广泛认为是抗炎细胞因子，且除il
‑
1ra、il
‑
11和tgfβ之外，其所有均包含于所分析的细胞因子中。所分析的抗炎细胞因子的3种中的仅1种或33.33％的表达水平可被lps诱导至少两倍且由大麻素强有力地抑制。因此相较于消炎细胞因子，大麻素优选地靶向炎症细胞因子的抑制。cbd:cbda的1:1等摩尔混合物引起的抑制与单独cbd或cbda引起的抑制相比较明显具协同性。1:1cbd:cbda引起的20.96％抑制大于1/2
×
cbd+1/2
×
cbda预期引起的13.29％表达。
[0232]
实例4：人类细胞u
‑
937自噬诱导分析
[0233]
使用抗lc3抗体来监测自噬的诱导以检测人类u
‑
937促单核细胞组织细胞淋巴瘤细胞中的自噬体上的lc3(pro
‑
monocytic histiocytic lymphoma cells)(atcc，马纳萨斯(manassas)，usa，va)，其在通过各种刺激诱导后产生巨噬细胞的形态特性。在37℃下在5％c02潮湿氛围中在25平方厘米组织瓶中补充有10％胎牛血清(fetal bovine serum；fbs)和1％青霉素的具有l
‑
谷氨酰胺和碳酸氢钠的rpmi
‑
1640培养基中培养u
‑
937细胞(西格玛
‑
奥德里奇(sigma
‑
aldrich)，mo，圣路易斯(st louis))且每2
‑
3天传代一次。u
‑
937细胞在5
×
105个细胞/毫升下接种于96孔培养板中且用100纳克/毫升pma刺激以诱导分化24小时。接着在1.0μm浓度下用各种大麻素治疗细胞12小时。30μm氯奎用作阳性对照。在治疗之后，在室温下使用于pbs中的3.7％甲醛固定细胞15分钟且用pbs洗涤以去除固定剂。添加透化剂(0.2％曲拉通(triton)x
‑
100于pbs中)(西格玛
‑
奥德里奇)，在室温下培育细胞15分钟且接着用pbs洗涤细胞以去除透化剂。在室温下在0.5微克/毫升的最终浓度下添加lc3b兔多克隆抗体(茵维特罗根(invitrogen))历时1小时且用pbs洗涤细胞去除一级抗体。接着在室温下在2.0微克/毫升的最终浓度下添加二级结合山羊抗兔多克隆抗体(赛默科技)历时1小
时。洗涤细胞，添加赫斯特(hoechst)染料以将细胞核染色且使用arrayscan vti高含量筛选(high
‑
content screening；hcs)读取器(赛默科技)利用适当过滤器对细胞进行成像且使用vhcs扫描软件分析数据。
[0234]
自噬或自噬作用是基于降解和回收蛋白质和细胞组分的过程的复杂溶酶体。已逐渐显而易见，自噬参与调节免疫系统中(库巴拉等人，2012)且自噬在自身免疫疾病中功能失调和下调(王和穆勒，2015；王等人，2017)。自噬已被提出作为用于炎症病状和自身免疫疾病的潜在治疗(阮等人，2013)且作为治疗剂用于治疗癌症(穆赫塔尔等人，2012；比云等人，2017；江等人，2019)。
[0235]
结果显示于表8中。虽然大多数大麻素并不诱导自噬，但cbl、cbla、thcva以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物会。在1.0μm浓度下，与未治疗对照相比较，cbl、cbla、thcva以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物分别增加自噬59.30％、49.78％、37.72％以及40.37％。包含30μm浓度下的氯奎作为阳性对照。将诱导自噬的能力确定为相对于未治疗对照的百分比。
[0236]
表8.自噬的诱导
[0237][0238][0239]
论述
[0240]
实例1到实例4展现主要非精神药物大麻大麻素充当抗炎剂、免疫抑制剂和/或抗氧化剂的能力，如表9中所概述。虽然所有所测试大麻素展现至少一些抑制细胞因子诱导的能力，但cbca、cbda、cbd、cbdva、cbdv、cbga、cbg、cbla、cbl、cbna、cbn、thcva、thcv以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物在这些研究中展现最强细胞因子。个别大麻素cbda、cbd、cbdva、cbdv、cbg、thcv以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物与未治疗对照相比较将自由基清除活性诱导至少两倍。个别大麻素cbca、cbd、cbda、cbdv、cbdva、cbg、cbga、cbla、cbl、cbna、cbn、thcva、thcv以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物在已用lps治疗的分化thp
‑
1细胞中在降低升高的细胞因子水平方面具有地塞米松的一半效用。个别大麻素cbl、cbla、thcva以及cbd:cbda的1:1等摩尔混合物被证明在诱导分化u937细胞中的自噬方面特别有效。
[0241]
表9：结果概述
[0242]
化合物％rsa活性％细胞因子抑制％自噬诱导
cbc31.9522.58
‑
0.85％cbca19.0234.58
‑
11.69％cbd48.0033.15
‑
5.84％cbda38.1937.18
‑
21.99％cbdv44.2136.72
‑
20.85％cbdva43.8132.37
‑
18.57％cbg44.2835.84
‑
22.59％cbga26.8434.30
‑
22.34％cbl30.8443.58+59.30％cbla21.1834.42+49.78％cbn33.8337.04
‑
15.44％cbna24.9233.99
‑
23.54％thcv45.7134.75
‑
12.66％thcva29.2228.37+37.72％1:1cbd:cbda43.7445.51+40.37％
[0243]
实例5
[0244]
通过俄勒冈州波特兰(portland,oregon)的皮浠思实验室(pixis labs)根据俄勒冈州波特兰的特威德尔农场(tweedle farms)出售的大麻花来分析来自收获和干燥的大麻樱桃变种的芽的示范性大麻素概况、具有高cbda含量(表10)和樱桃酒(cherry whine)的典型大麻品种、具有高cbda含量(表11)的典型大麻品种。
[0245]
表10：大麻的樱桃变种的大麻素概况
[0246][0247][0248]
表11：大麻的樱桃酒变种的大麻素概况
[0249]
大麻素％按质量计cbc0.238cbca0.561cbd3.02cbda12.100cbdv0.000cbdva0.052
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