本发明是在国立卫生研究院(NIH)提供的NIH拨款号AI085596和AI117410的政府支持下进行的。政府对本发明具有一定的权利。

相关申请的引用

本发明申请在35 U.S.C.§119(e)下主张2019年4月24日提交的美国临时专利申请序列号No.62/837,853和2019年4月24日提交的美国临时专利申请序列号62/837,833的优先权，以上专利申请的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。

背景技术

补体系统是在宿主防御中起关键作用的先天免疫的一部分。通常，谨慎控制补体的激活，从而它不会对宿主组织造成自体同源损伤。然而，在其中调控机制有缺陷(例如，补体调控因子基因中的突变)或不足(例如，当存在胜过调控因子的能力的大量自身抗体引起的或者感染引起的补体激活时)的某些情况下，可以发生通过不受约束的补体系统造成的严重且危急生命的自体同源组织损伤。目前已知多种自体免疫和炎性疾病是通过不正确的补体激活介导的，并且在该领域存在大量工作来理解多种补体介导的疾病的发病机理和开发特异性抗补体抑制剂来作为治疗这些病症的药物。激活的补体还具有导致明显组织损伤和破坏的潜能，并且已发现失调的补体活性与一些罕见和常见疾病，如阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型性溶血性尿毒综合征(aHUS)、类风湿性关节炎、年龄相关性黄斑变性等有关。因此，抗补体疗法是治疗这些人类病症的有希望的方法。

补体C5是补体激活的末端通路中的关键蛋白并且是用于产生有效促炎介体C5a以及溶胞膜攻击复合物(MAC)的前体蛋白。C3激活也导致C5-切割酶复合物的产生并起始末端补体激活通路，从而以有效促炎介体C5a以及可以引起细胞胞溶和死亡的膜攻击复合物C5b-9的产生告终。

通过C5a和/或MAC介导了一些人炎症性和自体免疫性疾病，并且阻断C5激活应防止C5a和MAC的产生并且具有治疗价值。人源化小鼠抗人类C5 mAb依库珠单抗已用于治疗两种补体介导的疾病：PNH和aHUS。然而，并非所有的PNH患者对依库珠单抗治疗起反应，并且无反应的原因之一为人类C5的遗传多态性，其丧失了与依库珠单抗结合的表位。另外，由于C5的高血浆浓度和抗体的靶向介导的快速除去，依库珠单抗必须以高剂量和频率施用于患者。

开发靶向补体蛋白的药物的困难之一在于它们的高血浆浓度和/或快速周转(turnover)。例如，人类C3和C5的血浆浓度分别为约1mg/mL和80μg/mL。这表示需要以高剂量和/或频率施用这些蛋白的抑制剂。的确，在PNH和aHUS患者中需要每两周分别以900mg和1200mg的维持剂量通过静脉注射施用抗C5 mAb药物依库珠单抗。尽管已开发了更持久的第二代抗C5 mAb雷夫利珠单抗以将注射频率减轻至每8周，但是雷夫利珠单抗的维持剂量增加至每次注射3300mg。此外，依库珠单抗和雷夫利珠单抗均不能使约50％受治疗的PNH患者中的LDH和血红蛋白水平正常化。在接受标准依库珠单抗疗法的PNH患者中，经常观察到突破溶胞(breakthrough lysis)并且20-30％的患者仍是输血依赖的。PNH患者中这些未满足的医学需要与以下事实有关：受影响的血细胞上的DAF和CD59的缺陷使它们对于C3激活以及MAC介导的损伤敏感。尽管抗C5 mAb，如依库珠单抗和雷夫利珠单抗可以抑制C5介导的溶血，但是它们不防止受影响的RBC上的C3激活，并因此RBC的C3b的调理作用仍发生并且这导致了很好识别的血管外溶血(EVH)现象，它是由网状内皮系统中C3b-调理的RBC的吞噬所造成的过程。另外，研究已表明在C5步骤阻断RBC上的补体激活在效力方面具有它的限制，因为如果过多C5转化酶在细胞表面上组装，则它变得不可能通过具有有限亲合力的mAb完全阻断C5切割。这可以解释用依库珠单抗治疗的PNH患者中的突破溶胞现象以及为何抗C5 mAb不能在离体测定中防止兔和PNH RBC细胞的完全溶血，因为PNH和兔RBC两者对通过AP的C3补体激活非常敏感，并且可以容易地在表面上组装大量C5转化酶。尽管仍努力在补体依赖性疾病中靶向C3激活，例如，通过使用C3抑制性环肽或因子H(FH)的重组短变体，但是这些分子具有非常差的药物动力学并且需要大量且频繁(例如，每天)的剂量施用。

因此，在本领域中需要可以抑制C3和C5活性两者并借此在治疗末端补体介导的病变中实现更高效力并且提供不太频繁的剂量施用的便捷性的持久且双功能的补体抑制剂。本发明解决并满足了这些及其他需要。

技术实现要素：

在一个实施方式中，本发明包括包含特异性结合至人类C5的抗体和融合蛋白伴侣的融合蛋白。在一个实施方式中，C5为人类C5。在一个实施方式中，所述抗体为单克隆抗体。在一个实施方式中，所述抗体为人源化抗体。在一个实施方式中，抗体为嵌合抗体。在一些实施方式中，抗体为全长抗体。在一些实施方式中，抗体为抗体片段，其包括但不限于：Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2和scFv。在一些实施方式中，抗体是构建体的一部分，例如，包含抗体和靶向部分或效应子部分的融合构建体。在一些实施方式中，抗体是缀合构建体，如抗体药物缀合构建体的一部分。

在本发明的一个方面，抗体融合蛋白显示出对C5的pH依赖性结合。在一些实施方式中，pH依赖性抗体融合蛋白在更中性pH(例如，约pH 7.4；如血液中存在的pH)下对C5的结合比它在更酸性pH(例如，约pH 5.8；如内涵体中存在的pH)下的结合更强烈。在一些实施方式中，pH依赖性抗体融合蛋白在更酸性pH(例如，约pH 5.8；如内涵体中存在的pH)下从C5的解离比它在中性pH(例如，约pH 7.4；如血液中存在的pH)下的解离更快速。

在一些实施方式中，抗C5抗体显示出对C5的pH依赖性结合。在一些实施方式中，pH依赖性抗C5抗体在更中性pH(例如，约pH 7.4；如血液中存在的pH)下对C5的结合比它在更酸性pH(例如，约pH 5.8；如内涵体中存在的pH)下的结合更强烈。在一些实施方式中，pH依赖性抗C5抗体在更酸性pH(例如，约pH 5.8；如内涵体中存在的pH)下从C5的解离比它在中性pH(例如，约pH 7.4；如血液中存在的pH)下的解离更快速。

在一个实施方式中，融合蛋白包括补体控制蛋白或补体控制蛋白的片段。在一个实施方式中，补体控制蛋白或补体控制蛋白的片段是C3转化酶的抑制剂。在一个实施方式中，C3转化酶是替代通路C3转化酶C3bBb。在一个实施方式中，C3转化酶是经典通路C3转化酶C4b2a。在一个实施方式中，补体控制蛋白或补体控制蛋白的片段是除C3或C5激活以外的补体激活步骤的抑制剂。在多个实施方式中，融合蛋白伴侣包括补体受体1(CR1)或其片段、膜辅因子蛋白(MCP)或其因子、C4b结合蛋白(C4BP)或其片段、衰减加速因子(DAF)或其片段、脱脂蛋白E(ApoE)或其片段、FH蛋白或其片段、人IgG4或其片段、接头或它们的任何组合。在一个实施方式中，FH的片段包括FH蛋白的短共有重复序列(SCR)结构域1-5。在一个实施方式中，DAF的片段是DAF的胞外域。在一个实施方式中，CR1的片段是CR1的胞外域的所选的SCR。

在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含通过至少一个接头结合至抗体的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含不使用接头结合至抗体的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的C末端的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的N末端的融合蛋白伴侣。

在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗C5 mAb的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含通过至少一个接头结合至抗C5 mAb的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含不使用接头结合至抗C5 mAb的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗C5 mAb的C末端的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗C5 mAb的N末端的融合蛋白伴侣。

在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的VH序列的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含使用至少一个接头结合至抗体的VH序列的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含不使用接头结合至抗体的VH序列的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的VH序列的C末端的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的VH序列的N末端的融合蛋白伴侣。

在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的VL序列的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含使用至少一个接头结合至抗体的VL序列的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含不使用接头结合至抗体的VL序列的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的VL序列的C末端的融合蛋白伴侣。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的VL序列的N末端的融合蛋白伴侣。

在一个实施方式中，抗体包含选自由以下各项组成的组中的互补决定区(CDR)中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:11，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:11，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:14；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:14；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:17；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:17；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:20；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:20；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:26；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:29，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:26；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:29，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:34；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:34；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:38；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:38；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:48；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:48；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:57；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:57；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:62；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:62；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:65；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:65；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包括选自以下各项组成的组的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:68；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体包括以下CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:68；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，或其一种或多种变体。

在一个实施方式中，抗体是选自由以下各项组成的组中的至少一种：mAb L3-1、L1-2、H1-4、H1-8/L1-9和H2-6/L3-5。在一个实施方式中，抗体是mAb H1-8/L1-9变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的位置#4处的脯氨酸残基(即P4)的替换。在多个实施方式中，P4处的替换为P4→F4(即P4F)、P4→L4(即P4L)、P4→M4(即P4M)、P4→W4(即P4W)或P4→I4(即P4I)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的位置#9处的苏氨酸残基(即T9)的替换。在多个实施方式中，T9处的替换为T9→H9(即T9H)、T9→F9(即T9F)、T9→L9(即T9L)、T9→M9(即T9M)、T9→W9(即T9W)或T9→I9(即T9I)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的位置#4处的脯氨酸残基(即P4)的替换和相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的位置#9(即T9)处的苏氨酸残基的替换。在多个实施方式中，P4处的替换为P4→F4(即P4F)、P4→L4(即P4L)、P4→M4(即P4M)、P4→W4(即P4W)或P4→I4(即P4I)；并且T9处的替换为T9→H9(即T9H)、T9→F9(即T9F)、T9→L9(即T9L)、T9→M9(即T9M)、T9→W9(即T9W)或T9→I9(即T9I)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:5，在VH CDR3中的位置#16处的缬氨酸残基(即V16)的替换。在多个实施方式中，V16处的替换为V16→F16(即V16F)、V16→E16(即V16E)或V16→W16(即V16W)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:20，在VH CDR1中的位置#9处的亮氨酸残基(即L9)的替换。在多个实施方式中，L9处的替换为L9→W9(即L9W)、L9→I9(即L9I)、L9→V9(即L9V)、L9→Y9(即L9Y)或L9→F9(即L9F)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的脯氨酸4(即P4)、相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的苏氨酸9(即T9)、相对于SEQ ID NO:5，在VH CDR3中的缬氨酸16(即V16)和相对于SEQ ID NO:20，在VH CDR1中的亮氨酸9(即L9)中的两处或更多处的替换。在多个实施方式中，在相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的脯氨酸4(即P4)、相对于SEQ ID NO:5，在VH CDR3中的缬氨酸16(即V16)和相对于SEQ ID NO:20，在VH CDR1中的亮氨酸9(即L9)中的两处或更多处包含替换的抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的两种或更多种替换：L9I/P4M、L9I/P4W、L9I/P4F、L9F/P4M、L9F/P4W、L9F/P4F、L9I/P4M/V16W、L9I/P4W/V16W、L9I/P4F/V16W、L9F/P4M/V16W、L9F/P4W/V16W、L9F/P4F/V16W、L9I/P4M/V16E、L9I/P4W/V16E、L9I/P4F/V16E、L9F/P4M/V16E、L9F/P4W/V16E、L9F/P4F/V16E、L9I/P4M/T9H/V16W、L9I/P4W/T9H/V16W、L9I/P4F/T9H/V16W、L9F/P4M/T9H/V16W、L9F/P4W/T9H/V16W、L9F/P4F/T9H/V16W、L9I/P4M/T9H/V16E、L9I/P4W/T9H/V16E、L9I/P4F/T9H/V16E、L9F/P4M/T9H/V16E、L9F/P4W/T9H/V16E和L9F/P4F/T9H/V16E。

在一个实施方式中，本发明涉及治疗个体中补体通路介导的疾病或病症的方法，其包括向所述个体施用抗C5抗体或融合蛋白的步骤。在一个实施方式中，所述疾病或病症至少选自：黄斑变性(MD)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、缺血性再灌注损伤、关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、变应性哮喘、狼疮、溃疡性结肠炎、中风、术后全身性炎症综合征、慢性阻塞性肺病(COPD)、PNH综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎(NMO)、多发性硬化、移植功能延迟、抗体介导的排斥反应、aHUS、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、视网膜中央动脉阻塞(CRAO)、大疱性表皮松解、败血病、器官移植、炎症(包括但不限于：与心肺分流术和肾透析有关的炎症)、C3肾小球病、膜性肾病、IgA肾病、血管球性肾炎(包括但不限于：抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)介导的血管球性肾炎、狼疮肾炎以及它们的组合)、ANCA介导的血管炎、志贺毒素诱导的HUS和抗磷脂抗体诱导的妊娠丢失或它们的任何组合。在一些实施方式中，AP介导的疾病为C3肾小球病。在一些实施方式中，AP介导的疾病为黄斑变性，如年龄相关性黄斑变性。在一个实施方式中，抗C5抗体或融合蛋白的施用抑制C3a或C3b蛋白的产生。在一个实施方式中，融合蛋白的施用抑制C5a或C5b蛋白的产生。在一个实施方式中，抗C5抗体或融合蛋白的施用抑制C3a或C3b蛋白的产生，抑制C5a或C5b蛋白的产生或它们的任何组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:11，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:14；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:17；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:20；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:26；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:29，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:38；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:48；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用融合蛋白，并且其中融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:57；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，融合蛋白包括抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用抗体，或者融合蛋白或其片段，并且其中抗体包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:62；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用抗体，或者融合蛋白或其片段，并且其中抗体包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:65；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及降低个体补体系统活性的方法，其中所述方法包括通过选自：肠内施用、肠胃外施用以及它们的组合的施用途径向所述个体施用抗体，或者融合蛋白或其片段，并且其中抗体包括具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:68；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明是包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有重链可变(VH)区，所述重链可变(VH)区具有与SEQ ID NO:2具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明是包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有轻链可变(VL)区，所述轻链可变(VL)区具有与SEQ ID NO:7具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:2具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:7具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明是包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VL区，所述VL区具有与SEQ ID NO:13具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:2具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:13具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VL区，所述VL区具有与SEQ ID NO:16具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:2具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:16具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:19具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VL区，所述VL区具有与SEQ ID NO:7具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:19具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:7具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:22具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VL区，所述VL区具有与SEQ ID NO:25具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:22具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:25具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:28具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VL区，所述VL区具有与SEQ ID NO:31具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:28具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:31具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:41具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:41具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:25具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:46具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:46具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:25具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:51具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:51具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:25具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:56具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:56具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:25具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:59具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白，其中抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:59具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:25具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明是包含抗人类C5抗体的融合蛋白、对人类C3具有抑制活性的抗体融合蛋白或其组合，其中抗体或抗体融合蛋白具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:72具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明是包含抗人类C5抗体的融合蛋白、对人类C3具有抑制活性的抗体融合蛋白或其组合，其中抗体或抗体融合蛋白具有VL区，所述VL区具有与SEQ ID NO:74具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白、对人类C3具有抑制活性的抗体融合蛋白或其组合，其中抗体或抗体融合蛋白具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:72具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:74具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明是包含抗人类C5抗体的融合蛋白、对人类C3具有抑制活性的抗体融合蛋白或其组合，其中抗体或抗体融合蛋白具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:76具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白、对人类C3具有抑制活性的抗体融合蛋白或其组合，其中抗体或抗体融合蛋白具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:76具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:74具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明是包含抗人类C5抗体的融合蛋白、对人类C3具有抑制活性的抗体融合蛋白或其组合，其中抗体或抗体融合蛋白具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:78具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白、对人类C3具有抑制活性的抗体融合蛋白或其组合，其中抗体或抗体融合蛋白具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:78具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:74具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明是包含抗人类C5抗体的融合蛋白、对人类C3具有抑制活性的抗体融合蛋白或其组合，其中抗体或抗体融合蛋白具有VH区，所述VH区具有与SEQ ID NO:80具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一些实施方式中，本发明涉及包含抗人类C5抗体的融合蛋白、对人类C3具有抑制活性的抗体融合蛋白或其组合，其中抗体或抗体融合蛋白具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与SEQ ID NO:80具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与SEQ ID NO:74具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv以及它们的组合。

在一个实施方式中，本发明涉及包含本文其他处所述的融合蛋白中的至少一种的细胞。在一些实施方式中，细胞产生本文其他处所述的融合蛋白中的至少一种。在一个实施方式中，细胞为杂交瘤。

在一个实施方式中，本发明是包含本文其他处所述的融合蛋白中的至少一种的细胞系。在一些实施方式中，细胞系产生本文其他处所述的融合蛋白中的至少一种。在一些实施方式中，细胞系为杂交瘤细胞系。

在一个实施方式中，本发明涉及基因修饰的非人动物。在一个实施方式中，基因修饰的非人动物表达人类C5。在一个实施方式中，基因修饰的非人动物是啮齿类动物。在一个实施方式中，基因修饰的非人动物是小鼠。在一个实施方式中，基因修饰的非人动物是NOD/SCID小鼠。在一个实施方式中，基因修饰的非人动物是FcRn/SCID小鼠。

在一个实施方式中，本发明涉及包含抗C5抗体部分和FH或其功能性片段的融合蛋白。在一些实施方式中，抗C5部分包含至少一种组氨酸替换。在一个实施方式中，抗C5部分包含IgG4链。在一个实施方式中，IgG4链包含PLA突变。在一个实施方式中，FH或其功能性片段包含FH蛋白的结构域1-5。

附图说明

当结合附图阅读时，将会更好地理解本发明以上的发明简述和以下的示例性实施方案的详细说明。然而，应理解本发明不局限于附图中所示的实施方式的确切方案和工具。在附图中：

图1显示了mAb 2G1的人源化可变重链(VH)(人源化2G1 VH-11801)和mAb 2G1的人源化可变轻链(VL)(人源化2G1 VL-1901)的核苷酸和氨基酸序列。通过从鼠科mAb 2G1 VH向种系编码的人VH框架(11801)的CDR移植和从鼠科mAb 2G1 VL向种系编码的人VL框架(1901)的CDR移植实现人源化。对信号肽的氨基酸序列加下划线，并且对CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列加粗和加阴影。

图2显示了mAb L3-1、人源化VH-11801和在VL-CDR3中具有Q→H替换的人源化VL-1901的核苷酸和氨基酸序列。

图3显示了mAb L1-2、人源化VH-11801和在VL-CDR1中具有T→H替换的人源化VL-1901的核苷酸和氨基酸序列。

图4显示了mAb H1-4、人源化VH-11801和在VH-CDR1中具有I→H替换的人源化VL-1901的核苷酸和氨基酸序列。

图5显示了mAb H1-8/L1-9、人源化VH-11801和在VH-CDR1中具有N→H替换且在VL-CDR1中具有Y→H替换的人源化VL-1901的核苷酸和氨基酸序列。

图6显示了mAb H2-6/L3-5、人源化VH-11801和在VH-CDR2中具有Y→H替换且在VL-CDR3中具有E→H替换的人源化VL-1901的核苷酸和氨基酸序列。

图7显示了亲代人源化mAb 11801(VH-11801(SEQ ID NO:2)和VL-1901(SEQ ID NO:7))在pH 5.8和pH 7.4的C5结合和解离的Octet迹线。

图8显示了mAb L3-1在pH 5.8和pH 7.4的C5结合和解离的Octet迹线。

图9显示了mAb L1-2在pH 5.8和pH 7.4的C5结合和解离的Octet迹线。

图10显示了mAb H1-4在pH 5.8和pH 7.4的C5结合和解离的Octet迹线。

图11显示了mAb H2-6/L3-5在pH 5.8和pH 7.4的C5结合和解离的Octet迹线。

图12显示了mAb H1-8/L1-9在pH 5.8和pH 7.4的C5结合和解离的Octet迹线。

图13显示了评价亲代人源化mAb 11801(VH-11801(SEQ ID NO:2)和VL-1901(SEQ ID NO:7))及其变体mAb L1-2、mAb L3-1和mAb H2-6/L3-5的C5抑制作用的经典通路补体介导的绵羊红细胞溶胞测定结果。

图14显示了评价亲代人源化mAb 11801(VH-11801(SEQ ID NO:2)和VL-1901(SEQ ID NO:7))及变体mAb H1-8/L1-9的C5抑制作用的经典通路补体介导的绵羊红细胞溶胞测定结果。

图15显示了评价亲代人源化mAb 11801(VH-11801(SEQ ID NO:2)和VL-1901(SEQ ID NO:7))及变体mAb H1-4和mAb L3-1的C5抑制作用的经典通路补体介导的绵羊红细胞溶胞测定结果。

图16显示了评价基因修饰以表达人类C5的NOD/SCID小鼠的血浆中的人类C5水平的ELISA测定结果。M1、M3、M4和M5表示4种代表性小鼠。

图17显示了在用重组嵌合人IgG4 mAb H1-4、H1-8/L1-9、H2-6/L3-5、L3-1或L1-2注射后，基因修饰以表达人类C5的NOD/SCID小鼠的血浆中的人IgG4的水平的测定结果。

图18显示了在基因修饰以表达人类C5的两种NOD/SCID小鼠(Mo-03和Mo-05)中评价亲代人源化mAb 2G1(VH-11801(SEQ ID NO:2)和VL-1901(SEQ ID NO:7))的药效学的经典通路补体介导的鸡红细胞测定结果。

图19显示了在基因修饰以表达人类C5的NOD/SCID小鼠中评价重组嵌合人IgG4 mAb L3-1、L1-2、H1-4、H1-8/L1-9和H2-6/L3-5的药效学的经典通路补体介导的鸡红细胞测定结果。

图20显示了证实在pH 7.4，在下列位置具有至少一个替换的mAb H1-8/L1-9 ScFV变体与C5的结合改善的ELISA测定结果：相对于SEQ ID NO:20，在VH CDR1中的亮氨酸9(即L9)、相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的脯氨酸4(即P4)和/或相对于SEQ ID NO:5，在VH CDR3中的缬氨酸16(即V16)(即L9→W9(即L9W)、L9→I9(即L9I)、L9→V9(即L9V)、L9→Y9(即L9Y)、L9→F9(即L9F)、P4→F4(即P4F)、P4→L4(即P4L)、P4→M4(即P4M)、P4→W4(即P4W)、P4→I4(即P4I)、V16→F16(即V16F)、V16→E16(即V16E)和V16→W16(即V16W))。第3列(OD450)和第4列(OD450确认)中显示了mAb H1-8/L1-9ScFV变体的结合，并且第8列(WT/OD450)显示了亲代mAb H1-8/L1-9ScFV的结合。

图21显示了评价在Expi-CHO细胞中作为人IgG4表达的mAb H1-8/L1-9变体的相对C5结合亲和力的Octet测定结果。如所指明的，用H1-8 VH变体转染Expi-CHO细胞，并且在转染后2天评价细胞培养上清液。对于给定细胞培养上清液，计算C5结合反应与抗体结合反应的比值并用作C5结合亲和力的量度。图中显示了根据使用在以下位置具有至少一个替换的mAb H1-8/L1-9 IgG4变体的转染实验的两种不同的Octet测定计算的比值：相对于SEQ ID NO:20，在VH CDR1中的亮氨酸9(即L9)、相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的脯氨酸4(即P4)和/或相对于SEQ ID NO:5，在VH CDR3中的缬氨酸16(即V16)(即L9→W9(即L9W)、L9→I9(即L9I)、L9→V9(即L9V)、L9→Y9(即L9Y)、L9→F9(即L9F)、P4→F4(即P4F)、P4→L4(即P4L)、P4→M4(即P4M)、P4→W4(即P4W)、P4→I4(即P4I)、V16→F16(即V16F)、V16→E16(即V16E)和V16→W16(即V16W))。

图22显示了评价C5和mAb H1-8/L1-9变体分别在pH 7.4和pH 5.8的解离速率的Octet测定结果。在从结合阶段切换至解离阶段后，计算了每个mAb在pH 7.4和pH 5.8距峰值C5结合反应的降低％。图中显示了根据使用在以下位置具有至少一个替换的mAb H1-8/L1-9 IgG4变体的转染实验的两种不同的Octet测定计算的降低％：相对于SEQ ID NO:20，在VH CDR1中的亮氨酸9(即L9)、相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的脯氨酸4(即P4)和/或相对于SEQ ID NO:5，在VH CDR3中的缬氨酸16(即V16)(即L9→W9(即L9W)、L9→I9(即L9I)、L9→V9(即L9V)、L9→Y9(即L9Y)、L9→F9(即L9F)、P4→F4(即P4F)、P4→L4(即P4L)、P4→M4(即P4M)、P4→W4(即P4W)、P4→I4(即P4I)、V16→F16(即V16F)、V16→E16(即V16E)和V16→W16(即V16W))。

图23列出了18种组合替换变体(即L9I/P4M、L9I/P4W、L9I/P4F、L9F/P4M、L9F/P4W、L9F/P4F、L9I/P4M/V16W、L9I/P4W/V16W、L9I/P4F/V16W、L9F/P4M/V16W、L9F/P4W/V16W、L9F/P4F/V16W、L9I/P4M/V16E、L9I/P4W/V16E、L9I/P4F/V16E、L9F/P4M/V16E、L9F/P4W/V16E和L9F/P4F/V16E)。这些组合变体来源于mAb H1-8/L1-9IgG4的7种单一变体(即L9I、L9F、P4M、P4W、P4F、V16E、V16W)，其显示出相对于亲代H1-8/L1-9 mAb的改善的C5结合亲和力，并且同时维持了pH 7.4和pH 5.8的差异解离速率(图21和图22)。

图24显示了评价在Expi-CHO细胞中作为人IgG4表达的mAb H1-8/L1-9组合替换变体的相对C5结合亲和力的Octet测定结果。用H1-8VH组合替换变体转染Expi-CHO细胞，并且在转染后2天评价细胞培养上清液。对于给定细胞培养上清液，计算C5结合反应与抗体结合反应的比值并用作C5结合亲和力的量度。图中显示了根据使用以下mAb H1-8/L1-9组合替换变体的转染实验计算的比值：L9I/P4M、L9I/P4W、L9I/P4F、L9F/P4M、L9F/P4W、L9F/P4F、L9I/P4M/V16W、L9I/P4W/V16W、L9I/P4F/V16W、L9F/P4M/V16W、L9F/P4W/V16W、L9F/P4F/V16W、L9I/P4M/V16E、L9I/P4W/V16E、L9I/P4F/V16E、L9F/P4M/V16E、L9F/P4W/V16E和L9F/P4F/V16E。

图25显示了评价C5和mAb H1-8/L1-9组合替换变体分别在pH 7.4和pH 5.8的解离速率的Octet测定结果。在从结合阶段切换至解离阶段后，计算了每个mAb在pH 7.4和pH 5.8距峰值C5结合反应的降低％。图中显示了在使用以下mAb H1-8/L1-9 IgG4组合替换变体的转染实验中计算的降低％：L9I/P4M、L9I/P4W、L9I/P4F、L9F/P4M、L9F/P4W、L9F/P4F、L9I/P4M/V16W、L9I/P4W/V16W、L9I/P4F/V16W、L9F/P4M/V16W、L9F/P4W/V16W、L9F/P4F/V16W、L9I/P4M/V16E、L9I/P4W/V16E、L9I/P4F/V16E、L9F/P4M/V16E、L9F/P4W/V16E和L9F/P4F/V16E。

图26显示了从mAb 1819亲合力成熟实验评价其他scFv突变体，包括对应于VH CDR2的位置9中的T至H突变的克隆14C6，在pH 7.4的C5-结合的亲和力的实验结果。

图27显示了从mAb 1819亲合力成熟实验评价其他scFv突变体，包括对应于VH CDR2的位置9中的T至H突变的克隆14C6，在pH 7.4和pH 5.8的C5-结合的差异亲和力的实验结果。

图28显示了根据pH 7.4和pH 5.8的差异结合，从mAb 1819亲合力成熟实验对其他scFv突变体排序的实验结果，其显示在该组突变体中，克隆14C6是排名第一的突变体。克隆14C6对应于VH CDR2位置9处的T至H的突变。

图29显示了mAb H1-8/L1-9变体IWW-VH(顶部)，具有VH-CDR1中的N→H和L→I替换、VH-CDR2中的P→W替换和VH-CDR3中的V→W替换的人源化VH-11801的核苷酸和氨基酸序列；以及mAb H1-8/L1-9变体IFW-VH(底部)，具有VH-CDR1中的N→H和L→I替换、VH-CDR2中的P→F替换和VH-CDR3中的V→W替换的人源化VH-11801的核苷酸和氨基酸序列。

图30显示了mAb H1-8/L1-9变体FME-VH(顶部)，具有VH-CDR1中的N→H和L→F替换、VH-CDR2中的P→M替换和VH-CDR3中的V→E替换的人源化VH-11801的核苷酸和氨基酸序列；以及mAb H1-8/L1-9变体FMW-VH(底部)，具有VH-CDR1中的N→H和L→F替换、VH-CDR2中的P→M替换和VH-CDR3中的V→W替换的人源化VH-11801的核苷酸和氨基酸序列。

图31显示了mAb H1-8/L1-9变体FMEH-VH，具有VH-CDR1中的N→H和L→F替换、VH-CDR2中的P→M和T→H替换以及VH-CDR3中的V→E替换的人源化VH-11801的核苷酸和氨基酸序列。

图32显示了重组嵌合人IgG4 mAb H1-8/L1-9、FMW、IFW、FME和IWW在pH 5.8和pH 7.4的C5结合和解离的Octet迹线。

图33显示了重组嵌合人IgG4 mAb 11801(VH-11801(SEQ ID NO:2))和VL-1901(SEQ ID NO:7)、H1-8/L1-9、FMW、IFW、FME和IWW在pH 7.4和pH 5.8距峰值解离的C5结合的％。

图34显示了评价亲代人源化重组嵌合人IgG4 mAb H1-8/L1-9(VH-11801(SEQ ID NO:22)和VL-1901(SEQ ID NO:25))及其变体IFW PLA(VH-11801(SEQ ID NO:46)和VL-1901(SEQ ID NO:25)、FME、PLA(SEQ ID NO:51)和VL-1901(SEQ ID NO:25))、IWW PLA(SEQ ID NO:41)和VL-1901(SEQ ID NO:25))和FMW PLA(SEQ ID NO:56)和VL-1901(SEQ ID NO:25))的C5抑制作用的经典通路补体介导的绵羊红细胞溶胞测定结果。

图35显示了重组嵌合人IgG4 mAb H1-8/L1-9、FME、FMEH、FMW和IFW在pH 5.8和pH 7.4的C5结合和解离的Octet迹线。

图36显示了纯化的重组嵌合人IgG4 PLA(SEQ ID NO:61)、mAb H1-8/L1-9、FME、FMEH、FMW和IFW在pH 5.8和pH 7.4距峰值解离的C5结合的％。

图37显示了评价重组嵌合人IgG4 mAb FME PLA(SEQ ID NO:51)和VL-1901(SEQ ID NO:25))、FMEH PLA(SEQ ID NO:59)和VL-1901(SEQ ID NO:25))、FMW PLA(SEQ ID NO:56)和VL-1901(SEQ ID NO:25))以及IFW PLA(VH-11801(SEQ ID NO:46)和VL-1901(SEQ ID NO:25))的C5抑制作用的经典通路补体介导的绵羊红细胞溶胞测定结果。

图38显示了用于C5人源化FcRn/SCID小鼠中的PK/PD测试的重组嵌合人IgG4 PLA mAb中的人IgG4-Fc结构域突变的核苷酸和氨基酸序列。

图39显示了通过流体动力学注射人类C5 cDNA所产生的C5人源化小鼠中的血浆C5水平。

图40显示了在用重组嵌合人IgG4 PLA(SEQ ID NO:61)mAb IFW-PLA、FMW-PLA或者FMEH-PLA注射后，在基因修饰以表达人类C5的FcRn/SCID小鼠的血浆中，评价总人类C5水平的测定结果。

图41显示了在用重组嵌合人IgG4 PLA(SEQ ID NO:61)mAb IFW-PLA、FMW-PLA或者FMEH-PLA注射后，在基因修饰以表达人类C5的FcRn/SCID小鼠的血浆中，评价总IgG4水平的测定结果。

图42显示了评价基因修饰以表达人类C5的FcRn/SCID小鼠中重组嵌合人IgG4 PLA(SEQ ID NO:61)mAb IFW-PLA、FMW-PLA或者FMEH-PLA的药效学的经典通路补体介导的鸡红细胞测定结果。

图43显示了可以导致包括靶标识别和蛋白水解切割级联的补体激活的3种不同通路。所有通路在C3激活步骤汇合。

图44显示了由20个SCR结构域组成的人FH的结构和人IgG4抗C5mAb/FH SCR1-5融合蛋白的结构。

图45显示了mAb H1-8/L1-9变体FMEH-IgG4PLA-FH1-5，具有VH-CDR1中的N→H和L→F替换、VH-CDR2中的P→M和T→H替换以及VH-CDR3中的V→E替换的人源化VH-11801的VH序列的核苷酸和氨基酸序列。

图46显示了mAb H1-8/L1-9变体FMEH-IgG4PLA-FH1-5，在VL-CDR1中具有Y→H替换的人源化VL-1901的VL序列的核苷酸和氨基酸序列。

图47显示了抗C5 mAb FMEH-IgG4PLA(泳道1)和抗C5 mAb/FH SCR1-5融合蛋白(FMEH-IgG4PLA-FH1-5)(泳道2)的VH和VL链的SDS凝胶。

图48显示了抗C5 mAb FMEH-IgG4PLA和抗C5 mAb/FH SCR1-5融合蛋白FMEH-IgG4PLA-FH1-5在pH 5.8和pH 7.4的C5结合和解离的Octet基线。

图49显示了距抗C5 mAb FMEH-IgG4和抗C5 mAb/FH SCR1-5融合蛋白、FMEH-IgG4PLA-FH1-5在pH 7.4和pH 5.8的峰值C5结合的解离％。

图50显示了评价对抗C5 mAb FMEH-IgG4PLA、抗C5 mAb/FH SCR1-5融合蛋白、FMEH-IgG4PLA-FH1-5以及基准抗C5 mAb依库珠单抗和雷夫利珠单抗的溶血活性的抑制作用的替代通路补体介导的兔红细胞溶胞测定的结果。

图51显示了在用FMEH-IgG4PLA、FMEH-IgG4PLA-FH1-5、依库珠单抗和雷夫利珠单抗处理的未溶胞的兔RBC上的C3片段沉积水平。

图52显示了评价在用FMEH-IgG4PLA、FMEH-IgG4PLA-FH1-5、依库珠单抗和雷夫利珠单抗注射后的多个时间点，C5人源化FcRn/SCID小鼠血浆中的人IgG4水平的测定结果。

图53显示了通过使用对所述分子的人IgG4部分特异的检测mAb，评价在注射后的多个时间点，C5人源化FcRn/SCID小鼠血浆中的FMEH-IgG4PLA-FH1-5水平的测定结果。

图54显示了通过使用对所述分子的FH SCR1-5部分特异的检测mAb，评价在注射后的多个时间点，C5人源化FcRn/SCID小鼠血浆中的FMEH-IgG4PLA-FH1-5水平的测定结果。

图55显示了评价在用FMEH-IgG4PLA、FMEH-IgG4PLA-FH1-5、依库珠单抗和雷夫利珠单抗注射后的多个时间点，C5人源化FcRn/SCID小鼠血浆中的人类C5水平的ELISA测定结果。

图56显示了在用FMEH-IgG4PLA、FMEH-IgG4PLA-FH1-5、依库珠单抗、雷夫利珠单抗和除去C5的人血清注射后的多个时间点，使用从C5人源化FcRn/SCID小鼠收集的血清，在杂交测定中通过替代补体通路的兔RBC溶胞％。

图57显示了体外PNH患者RBC溶血的代表性体结果(患者#2)。在存在不同的量的FMEH-IgG4PLA-FH1-5、依库珠单抗或雷夫利珠单抗的情况下，将AP缓冲液中的2E7个PNH患者RBC与35％HCl-酸化的正常人血清混合。将混合物在37℃培育40min，并且在OD405对溶血读数。使用公式(OD405(特异性ab浓度)-OD405(40mM EDTA))/((OD405(ab浓度＝0)-OD405(40mM EDTA))*100％，计算溶胞％。FMEH-IgG4PLA-FH1-5比依库珠单抗和雷夫利珠单抗更有效地体外阻断了PNH患者RBC溶胞。图57显示了FMEH-IgG4PLA-FH1-5、依库珠单抗、雷夫利珠单抗和对照IgG4对人PNH红细胞酸化的正常人血清(35％AB血型)的替代通路补体介导的溶胞的比较抑制活性和IC50(mg/mL)。

图58显示了在抗C5 mAb体外处理后，PNH患者RBC上的C3b涂层的代表性FACS分析结果。在溶血测定后(参见图57，体外PNH患者RBC溶血)，收集未溶胞的RBC并通过DPBS清洗。将2E6个细胞与抗C3b抗体在冰上培育30min，然后FACS分析。对C3b+/CD59-细胞群体设门并分析。结果来自PNH患者#2。ND表示未检出。FMEH-IgG4PLA-FH1-5有效阻断了PNH患者RBC上的C3b沉积，而依库珠单抗和雷夫利珠单抗不能阻断。在用依库珠单抗或雷夫利珠单抗而不是用FMEH-IgG4PLA-FH1-5处理的样品中检测了C3b-调理的PNH红细胞(Q4)。

图59显示了体外PNH患者RBC溶血的代表性结果(患者#3)。在存在如所指明的不同的量的FMEH-IgG4PLA-FH1-5、依库珠单抗或雷夫利珠单抗的情况下，将AP缓冲液中的5E6个PNH RBC与50％HCl-酸化的正常人血清混合。在37℃发生了90min的溶血，并且使用光谱仪在OD405对溶血读数。使用公式(OD405(特异性ab浓度)-OD405(40mM EDTA))/((OD405(ab浓度＝0)-OD405(40mM EDTA))*100％，计算溶胞％。FMEH-IgG4PLA-FH1-5比依库珠单抗和雷夫利珠单抗更有效地体外阻断了PNH患者RBC溶胞。

图60显示了在抗C5 mAb体外处理后，PNH患者#3RBC上的C3b涂层的代表性FACS分析结果。在其中将5E6个PNH患者#3RBC与50％HCl-酸化的正常人血清和多种浓度的所指明的抗体混合并培育的溶血测定后，收集未溶胞的RBC并通过DPBS清洗。将2E6个未溶胞的细胞与抗C3b抗体在冰上培育30min，然后FACS分析。对C3b+细胞群体设门并分析。ND表示未检出。FMEH-IgG4PLA-FH1-5以剂量依赖性方式阻断了PNH患者RBC上的C3b沉积，而依库珠单抗和雷夫利珠单抗不能阻断。

图61显示了FMEH-IgG4PLA和FMEH-IgG4PLA-FH1-5融合蛋白对食蟹猴替代通路补体介导的溶胞的影响。在存在多种浓度的FMEH-IgG4PLA或FMEH-IgG4PLA-FH1-5融合蛋白的情况下，使用50％食蟹猴血清进行兔红细胞的溶血测定。将对猴C5无反应性的两个基准抗人类C5 mAb(依库珠单抗和雷夫利珠单抗)用作阴性对照。

图62，包括图62A和图62B，显示了在pH 6.0，FMEH-IgG4PLA对人FcRn的亲和力的代表性Biacore测量。使用胺偶联法，将纯化的人FcRn偶联至CM5芯片上(280RU)。在Biacore-3000仪上进行Biacore分析。在每次结合之间，使用7.4pH缓冲液使芯片再生。将FMHE-IgG4PLA的kD确定为6.47 E-9M。图62A显示了证实FMEH结合至人FcRn的代表性结果。图62B显示了在pH 6.0，FMEH-IgG4PLA对人FcRn的亲和力的代表性Biacore测量和相应分析。

图63，包括图63A和图63B，显示了在pH 6.0，FMEH-IgG4PLA-FH1-5对人FcRn的亲和力的代表性Biacore测量。使用胺偶联法，将纯化的人FcRn偶联至CM5芯片上(280RU)。在Biacore-3000仪上进行Biacore分析。在每次结合之间，使用7.4pH缓冲液使芯片再生。将FMEH-IgG4PLA-FH1-5的kD确定为8.88E-9M。图63A显示了证实FMEH-FH1-5结合至人FcRn的代表性结果。图63B显示了在pH 6.0，FMEH-IgG4PLA-FH1-5对人FcRn的亲和力的代表性Biacore测量和相应分析。

图64，包括图64A和图64B，显示了在pH 6.0，FMEH-IgG4PLA对犬FcRn的亲和力的代表性Biacore测量。使用胺偶联法，将纯化的犬FcRn偶联至CM5芯片上(280RU)。在Biacore-3000仪上进行Biacore分析。在每次结合之间，使用7.4pH缓冲液使芯片再生。将FMHE-IgG4PLA的kD确定为1.4E-8M。图64A显示了证实FMEH结合至犬FcRn的代表性结果。图64B显示了在pH 6.0，FMEH-IgG4PLA对犬FcRn的亲和力的代表性Biacore测量和相应分析。

图65，包括图65A和图65B，显示了在pH 6.0，FMEH-IgG4PLA-FH1-5对犬FcRn的亲和力的代表性Biacore测量。使用胺偶联法，将纯化的犬FcRn偶联至CM5芯片上(280RU)。在Biacore-3000仪上进行Biacore分析。在每次结合之间，使用7.4pH缓冲液使芯片再生。将FMEH-IgG4PLA-FH1-5的kD确定为3.91E-8M。图65A显示了证实FMEH-FH1-5结合至犬FcRn的代表性结果。图65B显示了在pH 6.0，FMEH-IgG4PLA-FH1-5对犬FcRn的亲和力的代表性Biacore测量和相应结果。

图66显示了通过使用抗人IgG4 Fc或FH融合蛋白的检测抗体所测量的C5人源化FcRn/Scid小鼠(n＝2)中的FMEH-IgG4PLA-FH1-5的代表性药物动力学。在两种测定中，通过抗人κ轻链抗体捕获小鼠血浆中的FMEH-IgG4PLA-FH1-5，但是将不同的检测抗体用于所述分子的人IgG4部分(左图)或者所述分子的人FH1-5部分(右图)。在如所指明的FMEH-IgG4PLA-FH1-5的注射后的多个时间点收集小鼠血浆样品。两种测定证实了类似的药物动力学，从而表明抗C5 mAb和FH1-5融合蛋白维持了其完整性。

图67，包括图67A至图67C，显示了通过SDS-PAGE和SEC-HPLC对FMEH-FH1-5的表征的代表性结果。通过SDS-PAGE和SEC-HPLC对FMEH-IgG4PLA-FH1-5的表征。使用蛋白A亲合色谱法纯化从HEK293细胞转染培养基表达的FMEH-IgG4PLA-FH1-5。图67A显示了还原性SDS-PAGE的代表性结果。在还原性SDS-PAGE中，～85KDa和～25kDa的条带分别是预期的重链-FH1-5融合蛋白和轻链。图67B显示了非还原SDS-PAGE的代表性结果。在非还原SDS-PAGE中，大于200kDa标志物的条带是预期完整的FMEH-IgG4PLA-FH1-5分子。图67C显示了SEC-HPLC的代表性结果。在SEC-HPLC中，在6.54min洗脱FMEH-IgG4PLA-FH1-5，并且它是大于95％纯的。

图68显示了FMEH-IgG4PLA-FH1-5的质谱分析的代表性结果。对通过蛋白A从HEK293转染细胞培养基纯化的FMEH-IgG4PLA-FH1-5进行质谱分析以确定分子量。确定了FMEH-IgG4PLA-FH1-5的完整、还原的重链、还原的轻链、脱糖基化的完整、还原和脱糖基化的重链以及还原和脱糖基化的轻链的分子量。对于所有样品，实验分子量和理论分子量完全匹配。结果表明在FMEH-IgG4PLA-FH1-5上存在两个糖基化修饰。考虑到Fc的CH2中的典型N-糖基化位点，FH结构域1-5不出现糖基化。

图69，包括图69A和图69B，显示了FMEH-IgG4PLA-FH1-5对人和犬C5蛋白在pH 7.4和pH 5.8的代表性结合亲和力。对从HEK293转染细胞培养基纯化的FMEH-IgG4PLA-FH1-5进行使用生物膜干涉技术Gator(Probe Life Inc.,China)的结合亲和力确定。在pH 7.4或pH 5.8缓冲条件下进行实验以确定pH对结合动力学的影响。使用1:1结合模型，通过Gator评价软件(Probe Life Inc.,China)分析数据。FMEH-IgG4PLA-FH1-5在pH 5.8从C5结合复合物的解离比pH 7.4时快约10倍。图69A显示了FMEH-IgG4PLA-FH1-5对人和犬C5蛋白在pH 7.4和pH 5.8的结合亲和力的图示。图69B显示了FMEH-IgG4PLA-FH1-5对人和犬C5蛋白在pH 7.4和pH 5.8的结合亲和力的表格图示。

具体实施方式

本发明涉及使用抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合抑制补体信号转导。本发明部分地涉及可以抑制C3和C5活性两者并借此在治疗末端补体介导的病变中实现更高效力并且提供不太频繁的剂量施用的便捷性的双功能补体抑制剂。在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合显示出对C5的pH依赖性结合。在一些实施方式中，pH依赖性抗C5抗体或融合蛋白在更中性pH(例如，约pH 7.4；如血液中存在的pH)下对C5的结合比它在更酸性pH(例如，约pH 5.8；如内涵体中存在的pH)下的结合更强烈。在多个实施方式中，本发明涉及通过使个体与抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合接触用于治疗所述个体中补体介导的疾病或补体介导的病症的组合物和方法。可以用本发明所述的组合物和方法治疗的补体介导的病变和病况包括但不限于：MD、AMD、缺血性再灌注损伤、关节炎、类风湿性关节炎、狼疮、溃疡性结肠炎、中风、术后全身性炎症综合征、哮喘、变应性哮喘、COPD、PNH综合征、重症肌无力、NMO、多发性硬化、移植功能延迟、抗体介导的排斥反应、aHUS、CRVO、CRAO、大疱性表皮松解、败血病、器官移植、炎症(包括但不限于：与心肺分流术和肾透析有关的炎症)、C3肾小球病、膜性肾病、IgA肾病、血管球性肾炎(包括但不限于：ANCA介导的血管球性肾炎、狼疮肾炎以及它们的组合)、ANCA介导的血管炎、志贺毒素诱导的HUS和抗磷脂抗体诱导的妊娠丢失或它们的任何组合。

定义

除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管可以在本发明的实践或测试中使用与本文所述的那些类似或等价的任何方法和材料，但是描述了示例性方法和材料。

如本文所使用的，以下术语中的每一个具有在该部分中与之有关的含义。

冠词“一个”在本文中用于表示一个或大于一个(即至少一个)所述冠词的语法对象。举例来说，“一个元素”表示一个元素或大于一个元素。

如本文所使用的术语“抑制”表示相对于对照值，将活性或功能减低、抑制、减弱或阻断至少约10％。在一些实施方式中，与对照值相比，将活性抑制或阻断至少约50％。在一些实施方式中，将活性抑制或阻断至少约75％。在一些实施方式中，将活性抑制或阻断至少约95％。

术语“有效量”和“药物有效量”表示对于提供所期望的生物学结果，足够的试剂的量。该结果可以是疾病或病症的病征、症状或病因的减少和/或减轻，或者生物系统的任何其他所期望的变化。本领域的技术人员可以使用常规实验确定任何个体病例中的适当的有效量。

术语“患者”、“受试者”、“个体”等在本文中是可互换使用的并且表示具有补体系统的任何动物，在一些实施方式中，哺乳动物，并且在一些实施方式中，人，其包括需要用于病况或其后遗症的疗法或对病况或其后遗症易感的人。所述个体可以包括(例如)狗、猫、猪、牛、绵羊、山羊、马、大鼠、猴和小鼠以及人。

当在生物、组织、细胞或其组分的背景中使用时，术语“异常的”是指至少一个可观察或可检测的特征(例如，年龄、治疗、时间等)不同于显示出“正常”(预期的/自我平衡的)各个特征的那些生物、组织、细胞或其组分的那些生物、组织、细胞或其组分。对于一种细胞、组织类型或受试者正常或预期的特征可以对于不同的细胞或组织类型是异常的。

“疾病”是受试者的健康状态，其中所述受试者不可以维持体内平衡，并且其中如果所述疾病未得到改善，则所述受试者的健康继续变差。

相反，受试者中的“病症”是其中所述受试者能够维持体内平衡，但是其中所述受试者的健康状态不如不存在所述病症的情况下的状态良好的健康状态。如果保持不治疗，则病症不必需导致所述受试者的健康状态进一步降低。

如果疾病或病症的病征或症状的严重程度，患者经历这种病征或症状的频率，或两者降低，则所述疾病或病症“减轻”。

化合物的“有效量”或“治疗有效量”是足以为施用所述化合物的受试者提供有益作用的化合物的量。

如本文所使用的，“说明材料”包括可以用于传递所述试剂盒中的本发明的化合物、组合物、载体或递送系统对于产生减轻本文所列举的多种疾病或病症的作用的有用性的出版物、记录、图表或任何其他表达媒介。任选地或者替代地，所述说明材料可以描述一种或多种减轻哺乳动物细胞或组织中的疾病或病症的方法。本发明所述的试剂盒的说明材料可以(例如)粘贴在包含本发明所识别的化合物、组合物、载体或递送系统的容器上，或者可以与包含所识别的化合物、组合物、载体或递送系统的容器一起运输。作为另外一种选择，所述说明材料可以与所述容器分开运输，其目的在于通过接受者协作使用所述说明材料和所述化合物。

如本文所使用的“可操作地连接的”或者“操作性连接的”可以表示基因的表达受其空间上所连接的启动子的控制。启动子可以位于受其控制的基因的5'(上游)或3'(下游)端。所述启动子和基因之间的距离可以与所述启动子所来源的基因中该启动子和它所控制的基因之间的距离大致相同。如本领域中已知的，该距离的变化是可以接受的而不会损失启动子功能。

“治疗性治疗”是出于减轻或消除那些病征的目的，施用于显示出疾病或病症的病征的受试者的治疗。

如本文所使用的，“治疗疾病或病症”表示降低患者所经历的疾病或病症的病征和/或症状的频率和/或严重程度。

如本文所使用的短语“生物样品”、“样品”或“样本”旨在包括包含其中可以检测到核酸的表达或多肽的细胞、组织或体液的任何样品。所述生物样品可以含有适合于检测所期望的生物标志物的任何生物材料，并且可以包括得自所述个体的细胞和/或非细胞材料。这些生物样品的实例包括但不限于：血液、淋巴、骨髓、活组织检查和涂片。本质上为液体的样品在本文中称为“体液”。可以通过多种技术，包括(例如)通过刮研或擦拭区域或者通过使用针获得体液，从患者获得生物样品。用于收集多种身体样品的方法在本领域中是熟知的。

如本文所使用的术语“抗体”是指能够特异性结合至抗原的特异性表位的免疫球蛋白分子。抗体可以是来源于天然来源或来源于重组来源的完整免疫球蛋白，并且可以是完整免疫球蛋白的免疫活性部分。本发明中所述的抗体可以以多种形式存在，其包括(例如)多克隆抗体、单克隆抗体、胞内抗体(“胞内抗体”)、Fv、Fab、Fab'、F(ab)2和F(ab')2，以及单链抗体(scFv)、重链抗体，如骆驼科动物抗体和人源化抗体(Harlow et al.,1999,Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY；Harlow et al.,1989,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,New York；Houston et al.,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；Bird et al.,1988,Science 242:423-426)。

如本文所使用的术语“合成抗体”表示使用DNA重组技术所产生的抗体，如(例如)通过噬菌体所表达的抗体。还应将该术语视为表示已通过编码抗体的DNA分子的合成产生并且所述DNA分子表达指明抗体的抗体蛋白质或氨基酸序列的抗体，其中已使用在本领域中可用的并且熟知的合成DNA或氨基酸序列技术获得了所述DNA或氨基酸序列。

如本文所使用的，术语“重链抗体”包含通过用肽免疫和后续血清分离，或者通过编码这些抗体的核酸序列的克隆和表达，来源于骆驼科动物的免疫球蛋白分子。术语“重链抗体”还涵盖了分离自患有重链病的受试者或者通过来自受试者的VH(可变重链免疫球蛋白)基因的克隆和表达制备的免疫球蛋白分子。

“嵌合抗体”是指一类工程抗体，其包含来源于供体抗体的天然存在的可变区(轻链和重链)以及来源于受体抗体的轻链和重链恒定区。

“人源化抗体”是指一类工程抗体，其具有来源于非人供体免疫球蛋白的CDR，所述分子剩余的免疫球蛋白-来源部分来源于一种(或以上)的人免疫球蛋白。另外，可以改变框架支持残基以保持结合亲合力(参见，例如，1989,Queen et al.,Proc.Natl.Acad Sci USA,86:10029-10032；1991,Hodgson et al.,Bio/Technology,9:421)。适合的人受体抗体可以是通过与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性选自常规数据库，例如，KABAT数据库、Los Alamos数据库和Swiss蛋白数据库的抗体。其特征为与供体抗体的框架区的同源性(基于氨基酸)的人抗体可以适合于提供用于供体CDR插入的重链恒定区和/或重链可变框架区。可以以类似的方式选择能够提供轻链恒定或可变框架区的适合的受体抗体。应注意所述受体抗体重链和轻链不需要来源于相同受体抗体。现有技术描述了产生这些人源化抗体的几种方法(参见，例如，EP-A-0239400和EP-A-054951)。

术语“供体抗体”是指为第一免疫球蛋白伴侣(first immunoglobulin partner)提供其可变区、CDR或其其他功能性片段或类似物的氨基酸序列的抗体(单克隆和/或重组)，从而提供了改变的免疫球蛋白编码区和具有供体抗体的抗原专一性和中和活性特征的所得的表达的改变的抗体。

术语“受体抗体”是指与供体抗体异源的抗体(单克隆和/或重组)，其为第一免疫球蛋白伴侣贡献了编码其重链和/或轻链框架区和/或其重链和/或轻链恒定区的氨基酸序列的全部(或者任意部分，但是在一些实施方式中，全部)。在某些实施方式中，人抗体是受体抗体。

术语“融合蛋白”是指通过来源于单独的蛋白的两种或更多种多肽的连接所产生的蛋白。在一些实施方式中，使用DNA重组技术(例如，通过连接编码融合蛋白的每个部分的核酸)产生融合蛋白，并且融合蛋白通常在生物学研究或治疗剂中使用。在一些实施方式中，通过在融合蛋白的多肽部分之间使用或不使用接头的化学缀合(例如，共价缀合)产生融合蛋白。

如本文所使用的，术语“连接”或“连接的”是指通过键、连接、作用力或束缚的连接或联合以将两种或更多种组分保持在一起，其涵盖了直接或间接连接，从而(例如)在将第一多肽直接结合至第二多肽或材料的情况下，并且(例如)在将一种或多种中间体化合物(例如，氨基酸、肽、多肽等)置于第一多肽和第二多肽或材料之间的情况下。

“CDR”的定义为抗体的互补决定区氨基酸序列，它是免疫球蛋白重链和轻链的高变区。参见，例如，Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第4版,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)。在免疫球蛋白的可变部分中存在三个重链和三个轻链CDR(或者CDR区)。因此，如本文所使用的“CDR”是指所有三个重链CDR，或者所有三个轻链CDR(或者如果有的话，所有重链和所有轻链CDR两者)。抗体的结构和蛋白折叠可以表示将其他残基考虑为抗原结合区的一部分并且技术人员也将这样理解。参见，例如，Chothia et al.,(1989)Conformations of immunoglobulin hypervariable regions；Nature 342,第877-883页。

如本文所使用的，“免疫测定”是指使用能够特异性结合至靶标分子以检测和定量所述靶标分子的抗体的任何结合测定。

对于抗体来说，如本文所使用的术语“特异性结合”表示识别并结合至特异性靶标分子，但是基本不识别和结合样品中的其他分子的抗体。在一些情况下，术语“特异性结合”用于表示识别和结合取决于靶标分子上的特定结构(例如，抗原决定簇或表位)的存在。如果(例如)抗体特异性结合至表位“A”，则在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A的未标记的分子(或者游离的未标记的A)的存在将降低结合至抗体的标记的A的量。

基因的“编码区”包括所述基因的编码链的核苷酸残基以及所述基因的非编码链的核苷酸，其分别与通过所述基因的转录所产生的mRNA分子的编码区同源或互补。

mRNA分子的“编码区”还包括所述mRNA分子的核苷酸残基，其与所述mRNA分子翻译期间的转运RNA分子的反密码子区相匹配或者其编码了终止密码子。因此，所述编码区可以包括包含在所述mRNA分子所编码的成熟蛋白中不存在的氨基酸残基(例如，蛋白输出信号序列中的氨基酸残基)的密码子的核苷酸残基。

“差异降低的表达”或“下调”是指与对照相比，生物标志物产物水平低至少10％或以上，例如，20％、30％、40％、或50％、60％、70％、80％、90％或更小，和/或低2.0倍、1.8倍、1.6倍、1.4倍、1.2倍、1.1倍或更小，和低它们之间的任何和所有的全部或部分的增量。

“差异提高的表达”或“上调”是指与对照相比，生物标志物产物水平高至少10％或以上，例如，20％、30％、40％、或50％、60％、70％、80％、90％或更高，和/或高1.1倍、1.2倍、1.4倍、1.6倍、1.8倍、2.0倍或更高，和高它们之间的任何和所有的全部或部分的增量。

如本文用于表示核酸的“互补的”是指两条核酸链的区域之间或者相同核酸链的两个区域之间的序列互补性的广泛概念。已知第一核酸区的腺嘌呤残基能够与反向平行于所述第一区的第二核酸区的残基(如果所述残基为胸腺嘧啶或尿嘧啶)形成特异性氢键(“碱基配对”)。类似地，已知第一核酸链的胞嘧啶残基能够用反向平行于所述第一链的第二核酸链的残基(如果所述残基是鸟嘌呤)碱基配对。如果当以反向平行的方式布置所述两个区，且所述第一区的至少一个核苷酸残基能够与所述第二区的残基碱基配对，则核酸的第一区与具有相同或不同核酸的第二区互补。在一些实施方式中，所述第一区包含第一部分，所述第二区包含第二部分，其中当以反向平行方式布置所述第一和第二部分时，所述第一部分的核苷酸残基的至少约50％，和/或至少约75％，或至少约90％，或至少约95％能够与所述第二部分中的核苷酸残基碱基配对。在一些实施方式中，所述第一部分的所有核苷酸残基能够与所述第二部分中的核苷酸残基碱基配对。

如本文所使用的术语“DNA”的定义为脱氧核糖核酸。

“编码”是指多核苷酸中的特定核苷酸序列，如基因、cDNA或mRNA用作生物过程中用于具有限定的核苷酸序列(即，rRNA、tRNA和mRNA)或者具有限定的氨基酸序列和从中所获得的生物学性质的其他聚合物和大分子的合成的模板的固有性质。因此，如果对应于所述基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生了蛋白，则所述基因编码所述蛋白。其核苷酸序列与mRNA序列相同并且通常在序列表中提供的编码链以及用作基因或cDNA转录的模板的非编码链两者可以称为编码该基因或cDNA的蛋白或其他产物。

除非另作说明，否则“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括作为彼此的简并形式并且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。短语编码蛋白或RNA的核苷酸序列还可以包括内含子，从而在一些形式中，编码所述蛋白的核苷酸序列可以含有内含子。

“分离的”表示相对于天然状态改变或从天然状态中除去。例如，在其正常背景中天然存在于活体受试者中的核酸或肽不是“分离的”，但是与其天然背景中共存的材料部分或完全分离的相同的核酸或肽是“分离的”。分离的核酸或蛋白可以处于基本纯化的形式，或者可以存在于非天然环境中，如(例如)宿主细胞。

如本文所使用的术语“杂交瘤”是指由B淋巴细胞和融合伴侣，如骨髓瘤细胞的融合所产生的细胞。杂交瘤可以克隆并在细胞培养中无限期维持，并且能够产生单克隆抗体。杂交瘤还可以被认为是杂交细胞。

“分离的核酸”是指已与在天然存在的状态中对其侧接的序列分离的核酸段或片段，即已从通常邻近于所述片段的序列(即在其天然存在的基因组中邻近于所述片段的序列)中除去的DNA片段。所述术语还适用于已基本从天然伴随所述核酸的其他组分(即，在细胞中天然伴随所述核酸的RNA或DNA或蛋白)中纯化的核酸。因此，所述术语包括(例如)引入到载体中，引入到自主复制质粒或病毒中，或者引入到原核生物或真核生物的基因组DNA中，或者作为独立于其他序列的单独的分子(即，作为通过PCR或限制性内切酶消化所产的cDNA或者基因组或cDNA片段)存在的重组DNA。它还包括作为编码其他多肽序列的杂交基因的一部分的重组DNA。

在本发明的背景中，使用了以下常见核酸碱基的缩写。“A”是指腺苷酸，“C”是指胞嘧啶，“G”是指鸟嘌呤核苷，“T”是指胸腺嘧啶核苷，并且“U”是指尿嘧啶核苷。

如本文所使用的术语“多核苷酸”的定义为核苷酸链。此外，核酸是核苷酸的聚合物。因此，如本文所使用的核酸和多核苷酸是可互换的。本领域技术人员具有以下常识：核酸是多核苷酸，其可以水解为单体“核苷酸”。所述单体核苷酸可以水解为核苷。如本文所使用的多核苷酸包括但不限于：通过本领域中可用的任何方式获得的所有核酸序列，所述方式无限制地包括重组方式，即使用常规克隆技术和PCR等从重组文库或细胞基因组中对核酸序列的克隆，和通过合成方式。

如本文所使用的，术语“肽”、“多肽”和“蛋白”是可互换使用的，并且表示由通过肽键共价连接的氨基酸残基组成的化合物。蛋白或肽必须含有至少两个氨基酸，并且不限制蛋白或肽序列可以包含的最大氨基酸数目。多肽包括包含通过肽键彼此连接在一起的两个或更多个氨基酸的任何的肽或蛋白。如本文所使用的，该术语是指短链和长链两者，所述短链在本领域中通常称为(例如)肽、寡肽和寡聚物，并且长链在本领域中通常称为蛋白，其存在多种类型。“多肽”包括(例如)生物学活性片段、基本同源的多肽、寡肽、同型二聚体、杂二聚物、多肽的变体、修饰的多肽、衍生物、类拟物、融合蛋白或变体或其片段等。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽或它们的组合。

如本文所使用的术语“子代”是指后代或子代，并且包括哺乳动物的子代，并且还包括来源于母细胞的分化或未分化的后代细胞。在一种用法中，术语子代是指与亲代遗传相同的后代细胞。在另一种使用中，术语子代是指与亲代遗传和表型相同的后代细胞。在另一种使用中，术语子代是指从亲代细胞分化的后代细胞。

如本文所使用的术语“RNA”的定义为核糖核酸。

如本文所使用的术语“重组DNA”的定义为通过连接来自不同来源的DNA碎片所产生的DNA。

如本文所使用的术语“重组多肽”的定义为通过使用重组DNA方法所产生的多肽。

如本文所使用的，“缀合的”是指一个分子与第二分子的共价连接。

作为在本文中使用的术语，“变体”是分别与参考核酸序列或肽序列在序列方面不同的核酸序列或肽序列，但是它们保留了参考分子的基本生物性质。核酸变体的序列变化可以不改变通过参考核酸所编码的肽的氨基酸序列，或者可以导致氨基酸替换、添加、缺失、融合和截短。肽变体的序列变化通常是有限的或保守的，从而所述参考肽和所述变体的序列在整体上是非常类似的，并且在多个区域是相同的。变体和参考肽可以在氨基酸序列方面以任何组合相差一个或多个替换、添加、缺失。核酸或肽的变体可以是天然存在的，如等位变体，或者可以是已知不是天然存在的变体。可以通过突变技术或者通过直接合成制备核酸和肽的非天然存在的变体。在多个实施方式中，所述变体序列与所述参考序列具有至少99％，至少98％，至少97％，至少96％，至少95％，至少94％，至少93％，至少92％，至少91％，至少90％，至少89％，至少88％，至少87％，至少86％，至少85％的同一性。

如本文所使用的术语“调控”可以表示任何改变底物水平或活性的方法。对于蛋白来说，调控的非限制性实例包括影响表达(包括转录和/或翻译)，影响折叠，影响降解或蛋白质周转和影响蛋白定位。对于酶来说，调控的非限制性实例还包括影响酶活力。“调控因子”是指其活性包括影响底物的水平或活性的分子。调控因子可以是直接的或间接的。调控因子可以起作用以激活或抑制或另外调节其底物。

如本文所使用的“扫描窗”是指其中可以独立于任何侧接序列来评价序列的一些邻接位置的片段。扫描窗通常沿要评价的序列长度逐渐改变，其中每个新片段是独立评价的。增量改变可以是1或大于1个位置。

如本文所使用的“载体”可以表示含有复制起点的核酸序列。载体可以是质粒、噬菌体、细菌人工染色体或酵母人工染色体。载体可以是DNA或RNA载体。载体可以是自复制染色体外载体或者整合到宿主基因组中的载体。

范围：在整个发明公开中，本发明的多个方面可以以范围格式存在。应理解以范围格式的描述仅是为了方便和简洁，并且不应将其视为对本发明范围的刻板限制。因此，对范围的描述应认为具有具体公开的所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，对范围，如1至6的描述应认为具有具体公开的子范围，如1至3，1至4，1至5，2至4，2至6，3至6等，以及该范围内的各个数值，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。这是适用的，而无需考虑范围的宽度。

描述

本发明涉及使用抗C5抗体或其融合蛋白抑制补体信号转导。在一些实施方式中，本发明涉及使用可以抑制C3和C5活性两者的双功能补体抑制剂抑制补体信号转导。在多个实施方式中，本发明部分涉及通过用其抗C5抗体融合蛋白接触个体来治疗所述个体中的补体介导的疾病或补体介导的病症的方法。

补体抑制剂和双功能抗体

本发明涉及使用抗人类C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段(例如，抗C5抗体或变体或其片段、抗C5融合蛋白抗体或变体或其片段等)，对补体信号转导和补体相关病症的抑制。在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合在抑制C5和C3激活方面显示出双功能活性。在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合显示出对C5的pH依赖性结合。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合显示出对C5的pH依赖性结合。在一些实施方式中，pH依赖性抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合在更中性pH(例如，约pH 7.4；如血液中存在的pH)下对C5的结合比它在更酸性pH(例如，约pH 5.8；如内涵体中存在的pH)下的结合更强烈。这种pH依赖性结合提供了所施用的抗体或抗体融合蛋白分子更长的持久性，因为通过细胞吸收的免疫复合物(即结合至C5的抗C5 mAb和/或结合至C5的抗C5 mAb-FH融合蛋白)将在内涵体的酸性环境中解离，并且使得游离的抗体或抗体-FH融合蛋白能够通过新生儿Fc受体(FcRn)再循环离开细胞，在此它对于与新的C5分子的结合是可用的。

在一个实施方式中，本发明涉及通过特异性靶向补体组分C3蛋白或者蛋白C3a或C3b的片段对补体信号转导级联的抑制。在一个实施方式中，本发明涉及通过特异性靶向补体组分C5蛋白或者蛋白C5a或C5b的片段对补体信号转导级联的抑制。在一个实施方式中，本发明涉及通过特异性靶向补体组分C3蛋白、蛋白C3a或C3b的片段、C5蛋白、蛋白C5a或C5b的片段或它们的任何组合对补体信号转导级联的抑制。在一个实施方式中，本发明涉及治疗和预防通过不希望的、不受控制的、过度的补体激活所介导的炎症和自体免疫疾病的方法。在一个实施方式中，本发明涉及通过使个体与抗C5抗体接触对所述个体中补体介导的疾病或补体介导的病症的治疗。在一个实施方式中，本发明涉及通过使个体与抗C5融合蛋白抗体接触对所述个体中补体介导的疾病或补体介导的病症的治疗。在一个实施方式中，本发明涉及通过使个体与抗C5抗体或抗C5融合蛋白抗体接触对所述个体中补体介导的疾病或补体介导的病症的治疗。

在一个实施方式中，本发明是治疗个体中补体介导的疾病或病症的方法，其包括向所述个体施用抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合的步骤，借此抑制C3a或C3b蛋白的产生和MAC的形成。在一个实施方式中，本发明是治疗个体中补体介导的疾病或病症的方法，其包括向所述个体施用抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合的步骤，借此抑制C5a或C5b蛋白的产生和MAC的形成。在一个实施方式中，本发明是治疗个体中补体介导的疾病或病症的方法，其包括向所述个体施用抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合的步骤，借此抑制C3a或C3b蛋白的产生，抑制C5a或C5b蛋白的产生和MAC的形成。可以使用本发明所述的方法治疗的补体介导的病变的实例包括但不限于：MD、AMD、缺血性再灌注损伤、关节炎、类风湿性关节炎、狼疮、溃疡性结肠炎、中风、术后全身性炎症综合征、哮喘、变应性哮喘、COPD、PNH综合征、重症肌无力、NMO、多发性硬化、移植功能延迟、抗体介导的排斥反应、aHUS、CRVO、CRAO、大疱性表皮松解、败血病、器官移植、炎症(包括但不限于：与心肺分流术和肾透析有关的炎症)、C3肾小球病、膜性肾病、IgA肾病、血管球性肾炎(包括但不限于：ANCA介导的血管球性肾炎、狼疮肾炎以及它们的组合)、ANCA介导的血管炎、志贺毒素诱导的HUS和抗磷脂抗体诱导的妊娠丢失或它们的任何组合。在一些实施方式中，本发明所述的组合物和方法对于治疗对使用依库珠单抗或雷夫利珠单抗的治疗不充分起反应的受试者，包括患有PNH的受试者是有用的。通过非限制性实例，一些受试者可以在C5的α链中具有可以使他们对依库珠单抗或雷夫利珠单抗治疗耐受的突变(参见Genetic variants in C5 and poor response to eculizumab.Nishimura J,et al.,N Engl J Med.2014 Feb 13；370(7):632-9)。

免疫系统区分“自体”和“非自体”抗原的能力对于免疫系统作为抵御侵袭性微生物的特异性防御起作用是至关重要的。“非自体”抗原是进入或存在于身体中的物质上的那些抗原，其可检测地不同于受试者的自身成分，或者对于受试者的自身成分是外源的，然而“自体”抗原是在健康受试者中与其自身成分无可检测的不同或不是外源的那些。在所述方法的多个实施方式中，受抑制的补体激活是通过微生物抗原、非生物外源表面、改变的自体组织或其组合中的至少一种所引发的补体激活。非生物外源表面的一个实例是血管(blood tubing)，如在心-肺搭桥手术或肾透析中使用的血管。改变的自体组织的实例包括凋亡、坏死和缺血-应激的组织和细胞、缺少功能性补体调节蛋白的组织和细胞或其组合。

在一些实施方式中，本发明的抗C5抗体(例如，抗C5抗体、抗C5融合蛋白抗体、抗体片段、抗体变体等)抑制替代补体通路(AP)、经典通路(CP)或者凝集素通路(LP)的下游激活作用。通常，通过抗原抗体复合物起始CP，通过凝集素与微生物表面上的糖分子的结合激活LP，而AP在低水平是组成型活性的，但是可以由于缺乏调节蛋白，在细菌、病毒和寄生虫细胞表面上快速放大。通常通过调节蛋白保护宿主细胞抵抗AP补体激活。但是，在一些情况下，如当所述调节蛋白有缺陷或缺失时，还可以在宿主细胞上不可控地激活AP，从而导致产生补体介导的疾病或病症。CP由组分C1、C2、C4组成并且在C3激活步骤与AP汇合。LP由结合甘露糖的凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)组成，并且与CP共有组分C4和C2。AP由组分C3和几种因子，如因子B、因子D、备解素、C5和流体相调控因子FH组成。补体激活包括三个阶段：(a)识别，(b)酶促激活，和(c)膜攻击，从而导致细胞死亡。CP补体激活的第一阶段起始于C1。C1由三种不同的蛋白组成：识别亚基C1q，和丝氨酸蛋白酶亚组分C1r和C1s，其在钙依赖性四聚体复合物C1r2 s2中结合在一起。完整的C1复合物是产生C1的生理学激活所必需的。当完整的C1复合物结合至与抗原复合的免疫球蛋白时，发生激活。这种结合激活了C1s，其然后切割C4和C2蛋白两者以产生C4a和C4b，和C2a和C2b。C4b和C2a片段合并以形成C3转化酶C4b2a，其反过来切割C3以形成C3a和C3b。通过MBL结合至靶标表面上的某些糖起始了LP的激活，并且这引发了MASP的激活，其然后以类似于CP的C1的活性的方式切割C4和C2，从而导致C3转化酶C4b2a的产生。因此，通过不同机制激活CP和LP，但是它们共有相同的组分C4和C2，并且两条通路均导致相同的C3转化酶C4b2a的产生。出于两种原因，通过C4b2a将C3切割成C3b和C3a是补体通路的中央事件。它起始了AP放大环路(amplification loop)，因为表面沉积的C3b是AP的中央中间产物。C3a和C3b两者是生物学上重要的。C3a是促炎性的并且与C5a一起被称为过敏毒素。C3b及其进一步的切割产物还结合至嗜中性白细胞、嗜曙红细胞、单核细胞和巨噬细胞上存在的补体受体，借此有利于C3b-调理的颗粒的吞噬和清除。最终，C3b可以与C4b2a结合以形成CP和LP的C5转化酶以激活末端补体序列，从而导致有效促炎介体C5a的产生以及溶胞MAC C5-C9的组装。

在一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体通路的活性是通过选自脂多糖(LPS)、脂寡糖(LOS)、病原体相关分子模式(PAMP)和危险相关分子模式(DAMP)中的至少一种所引起的补体通路激活。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体信号转导活性是C5a蛋白的产生。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体信号转导活性是C5b蛋白的产生。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体信号转导活性是C3a蛋白的产生。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体信号转导活性是C3b蛋白的产生。在多个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体信号转导活性是C5a蛋白、C5b蛋白、C3a蛋白、C3b蛋白的产生或它们的任何组合。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体信号转导活性是MAC的形成。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体通路的活性是C5依赖性的。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体通路的活性是C3依赖性的。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体通路的活性是C3依赖性的、C5依赖性的或两者。

在一个实施方式中，本发明是抑制个体中末端补体激活起始的方法，其包括向所述个体施用抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合的步骤，借此抑制了个体中由于CP、LP或AP激活所引起的末端补体激活的起始。这些实施方式的实例为经受补体介导的溶血的PNH患者和经受补体介导的aHUS、哮喘、缺血性/再灌注损伤、类风湿性关节炎和ANCA介导的肾病的个体。在本发明的多个实施方式中，可以使用本发明的组合物和方法治疗的疾病和病症包括但不限于：补体介导的溶血、补体介导的aHUS、C3肾小球病、视神经脊髓炎、重症肌无力、哮喘、缺血性/再灌注损伤、类风湿性关节炎和ANCA介导的肾疾病或病症。

在多个其他实施方式中，本文提供了识别对末端补体激活具有抑制作用的潜在的抗C5抗体、融合蛋白或它们的组合的方法。一种这种方法是如以下所描述的绵羊红细胞溶胞测定。简要地，在37℃，将绵羊RBC(在PBS中制备的1×10⁷个细胞/测定样品，Complement Technology Inc)与明胶佛罗那缓冲液(GVB2+，Sigma；总测定体积：100μL)中的50％的正常人血清(NHS，来自Complement Technology Inc)培育20min。在添加至绵羊RBC之前，将NHS与抗C5 mAb在4℃预培育1小时。通过添加冰冷的40mM EDTA的PBS溶液终止溶胞反应。将培育混合物以1500rpm离心5min，并且收集上清液并测量OD405nm。将未添加NHS或者添加EDTA的样品用作阴性溶胞对照，并且将用蒸馏水完全溶胞的绵羊RBC样品用作阳性对照(100％溶胞)，将其他样品中的溶胞％对它们进行归一化。可以在抗人类C5阻断mAb的确认筛选中使用的单独的方法包括以下步骤：a)用LPS涂板；b)清洗所述板以除去未结合的LPS；c)添加牛血清白蛋白(BSA)在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的溶液；d)清洗所述板以除去未结合的BSA；e)添加已与血清预培育并且混合至正常人血清中的候选抗C5抗体化合物的混合物；f)清洗所述板；g)添加HRP缀合的抗人类C5b-9或者抗人C6抗体(抗人TCC抗体，克隆aE11或生物素标记的抗人C6抗体，两者均来自Quidel)；h)清洗所述板以除去未结合的抗体；i)添加HRP底物试剂；j)添加硫酸以终止反应；k)测量450nm下的光密度；l)将含有所述候选抗C5抗体化合物的板的光密度与阳性对比物对照和阴性对比物对照的光密度相比较；其中当与阳性对比物对照相比，光密度减小时，识别出抗C5抗体。

抗C5抗体和抗C5融合蛋白抗体

在一些实施方式中，本发明包括包含特异性抑制通过C3转化酶的C3激活的抗体或融合蛋白的组合物。在一些实施方式中，本发明包括包含特异性结合至并抑制C5激活的抗体或融合蛋白的组合物。在一些实施方式中，本发明包括包含特异性抑制C3、C5或两者的激活的抗体或融合蛋白的组合物。在一些实施方式中，抗C5抗体或融合蛋白是多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体或人源化抗体。

在一些实施方式中，抗体或融合蛋白是抗体片段。在一些实施方式中，所述C3为人类C3。在一些实施方式中，C5为人类C5。在一些实施方式中，抗C5抗体融合蛋白为连接至FH的抗C5 mAb。在一些实施方式中，抗C5抗体融合蛋白是连接至FH片段的抗C5 mAb。在一些实施方式中，FH为人FH。在一些实施方式中，抗C5抗体或融合蛋白显示出对C5的pH依赖性结合。在一些实施方式中，pH依赖性抗C5抗体或融合蛋白在更中性pH(例如，约pH 7.4；如血液中存在的pH)下对C5的结合比它在更酸性pH(例如，约pH 5.8；如内涵体中存在的pH)下的结合更强烈。

在一些实施方式中，抗体、融合蛋白或抗体片段对人类C5的结合与完整生物中的补体激活通路中的C3a或C3b的产生以及MAC的形成的减少有关。在一些实施方式中，抗体、融合蛋白或抗体片段对人类C5的结合与完整生物中的补体激活通路中的C5a或C5b的产生以及MAC的形成的减少有关。

在一些实施方式中，本发明是能够抑制人类C3的激活的蛋白或多肽。在一些实施方式中，本发明是能够结合至并抑制人类C5的激活的蛋白或多肽。在一些实施方式中，本发明是能够结合至和/或抑制人类C3、人类C5或两者的激活的蛋白或多肽。在一些实施方式中，抗体、融合蛋白或抗体片段；所述蛋白或多肽结合至人类C3转化酶的相关部分(portion)或部分(fraction)或表位；并且抗体、融合蛋白或其抗体片段或者所述蛋白或多肽与人类C3转化酶的相关部分的相互作用与完整生物中C3a或C3b的产生和MAC的形成的减少有关。在一些实施方式中，抗体、融合蛋白或抗体片段；所述蛋白或所述多肽结合至人类C5的相关部分(portion)或部分(fraction)或表位；并且抗体、融合蛋白或其抗体片段或者所述蛋白或多肽与人类C5的相关部分的结合与完整生物中C5a或C5b的产生和MAC的形成的减少有关。

在一些实施方式中，对人类C3转化酶具有抑制活性的抗体、融合蛋白或其片段还缀合至蛋白、肽或另一种化合物。在一些实施方式中，所述人类C3转化酶抑制性抗体、融合蛋白或其抗体片段缀合至蛋白、肽或其他化合物。在一些实施方式中，人类C3转化酶抑制性抗体、融合蛋白或其抗体片段所缀合的蛋白、肽或其他化合物是靶向部分(即，所述靶向部分特异性结合至人类C3以外的分子)。在一些实施方式中，人类C3转化酶抑制性抗体、融合蛋白或其抗体片段所缀合的蛋白、肽或其他化合物是效应分子(例如，细胞毒分子)。

在一些实施方式中，人类C5结合抗体、融合蛋白或其C5结合抗体片段还缀合至蛋白、肽或另一种化合物。在一些实施方式中，所述人类C5结合抗体、融合蛋白或其抗体片段缀合至蛋白、肽或其他化合物。在一些实施方式中，人类C5结合抗体、融合蛋白或其抗体片段所缀合的蛋白、肽或其他化合物是靶向部分(即，所述靶向部分特异性结合至人类C5以外的分子)。在一些实施方式中，人类C5结合抗体、融合蛋白或其抗体片段所缀合的蛋白、肽或其他化合物是效应分子(例如，细胞毒分子)。

在一些实施方式中，人类C3转化酶抑制抗体和人类C5结合抗体、融合蛋白或其C3转化酶抑制抗体和C5结合抗体片段还缀合至蛋白、肽或另一种化合物。在一些实施方式中，所述人类C3转化酶抑制抗体和人类C5结合抗体、融合蛋白或其抗体片段缀合至蛋白、肽或其他化合物。在一些实施方式中，人类C3转化酶抑制抗体和人类C5结合抗体、融合蛋白或其抗体片段所缀合的蛋白、肽或其他化合物是靶向部分(即所述靶向部分特异性结合至人类C3和人类C5以外的分子)。在一些实施方式中，人类C3转化酶抑制抗体和人类C5结合抗体、融合蛋白或其抗体片段所缀合的蛋白、肽或其他化合物是效应分子(例如，细胞毒分子)。

在多个实施方式中，抗体是融合蛋白。在一个实施方式中，融合蛋白包含补体控制蛋白。在一个实施方式中，融合蛋白包含CR1或其片段。在一个实施方式中，融合蛋白包含MCP或其片段。在一个实施方式中，融合蛋白包含C4BP或其片段。在一个实施方式中，融合蛋白包含DAF或其片段。在一个实施方式中，融合蛋白包含ApoE或其片段。在一个实施方式中，融合蛋白包含FH蛋白或其片段。在一个实施方式中，融合蛋白包含人IgG4或其片段。在一个实施方式中，融合蛋白包含接头。在多个实施方式中，融合蛋白包含CR1或其片段、MCP或其片段、C4BP或其片段、DAF或其片段、ApoE或其片段、FH蛋白或其片段、人IgG4或其片段、接头或它们的任何组合。

在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少1个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少2个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少3个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少4个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少5个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少6个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少7个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少8个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少9个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少10个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少11个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少12个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少13个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少14个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少15个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少16个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少17个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少18个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少19个SCR结构域。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的至少20个SCR结构域。

在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的SCR结构域1-20。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的SCR结构域1-5。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的SCR结构域2-5。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的SCR结构域3-5。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的SCR结构域4和5。在一个实施方式中，FH的片段包含FH蛋白的SCR结构域5。

在一个实施方式中，融合蛋白包含抗体和融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一些实施方式中，融合蛋白包含直接或通过接头与抗体融合(例如，结合)的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含通过至少一个接头结合至抗体的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，接头不是可切割接头。在一个实施方式中，接头是可切割接头。例如，在一些实施方式中，可切割接头是化学可切割接头、酶可切割接头、基于肽的接头或它们的任何组合。

在一些实施方式中，化学可切割接头是酸-可切割接头或可还原接头。在一个实施方式中，特异性设计所述酸-可切割接头以在血液循环的中性pH保持稳定，但是在细胞区室的酸性环境中经历水解并释放细胞毒性药物。在一个实施方式中，设计所述可还原接头以在血流中的富氧环境中保持稳定，并且在细胞的还原环境中选择性切割。在另一个实施方式中，设计所述基于肽的接头以在体循环中保持完整，并且通过特异性胞内蛋白酶，如组织蛋白酶B切割。接头的实例包括但不限于：含有溶酶体特异性蛋白酶切割位点的接头、含有混合的二硫键的接头、氨基乙氧基乙氧基乙酸酯(aminoethoxyethoxyacetate，AEEA)、β-葡糖苷酸接头、通过胞内蛋白酶，例如，溶酶体蛋白酶或红细胞浆质蛋白酶可切割的肽接头、二肽接头(例如，缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)或者苯丙氨酸-赖氨酸(phe-lys)接头)、氨基己酸酯、腙、硫代马来酰亚胺和二苯并环辛炔(DBCO)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含在无接头的情况下结合至抗体的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的C末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的N末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗C5 mAb的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含通过至少一个接头结合至抗C5 mAb的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含不使用接头结合至抗C5 mAb的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗C5 mAb的C末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗C5 mAb的N末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的变体的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。例如，在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗C5 mAb的变体的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含通过至少一个接头结合至抗体的变体的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含不使用接头结合至抗体的变体的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的变体的C末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含结合至抗体的变体的N末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含融合(例如，结合)至抗体片段的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含在使用或不使用接头的情况下融合至抗体片段的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。例如，在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗C5 mAb片段的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含通过至少一个接头融合至抗体片段的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含不使用接头融合至抗体片段的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗体片段的C末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗体片段的N末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗体的VH序列的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。例如，在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗C5 mAb的VH序列的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含通过至少一个接头融合至抗体的VH序列的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含不使用接头融合至抗体的VH序列的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗体的VH序列的C末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗体的VH序列的N末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗体的VL序列的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。例如，在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗C5 mAb的VL序列的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含通过至少一个接头融合至抗体的VL序列的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，融合蛋白包含不使用接头融合至抗体的VL序列的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗体的VL序列的C末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。在一个实施方式中，融合蛋白包含融合至抗体的VL序列的N末端的融合蛋白伴侣(例如，FH或其功能性片段)。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:8，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:8。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:11，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:11。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb L3-1，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb L3-1包含含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:14；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:14；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:14，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:14。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb L1-2，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb L1-2包含含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:17；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:17；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:8，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:8。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-4，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-4包含含有SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:20；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:20；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:26；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:29，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:26；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:29，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:29，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:29。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H2-6/L3-5，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H2-6/L3-5包含含有SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:34；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:34；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的VH-CDR2，包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在一些实施方式中,所述单克隆抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:38；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:38；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:48；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:48；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:23。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:57；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:47；VH-CDR2：SEQ ID NO:57；VH-CDR3：SEQ ID NO:49；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:62；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:37；VH-CDR2：SEQ ID NO:62；VH-CDR3：SEQ ID NO:39；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:65；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:65；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列的重链，67和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一个实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:68；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含以下所有CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:68；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:23；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其一种或多种变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最多达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的VL-CDR3。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb H1-8/L1-9，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb H1-8/L1-9包含含有SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的重链，和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的位置#4处的脯氨酸(即P4)的替换。在多个实施方式中，P4处的替换为P4→F4(即P4F)、P4→L4(即P4L)、P4→M4(即P4M)、P4→W4(即P4W)或P4→I4(即P4I)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的位置#9处的苏氨酸(即T9)的替换。在多个实施方式中，T9处的替换为T9→H9(即T9H)、T9是T9→F9(即T9F)、T9→L9(即T9L)、T9→M9(即T9M)、T9→W9(即T9W)或T9→I9(即T9I)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的位置#4处的脯氨酸(即P4)的替换；和相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的位置#9(即T9)处的苏氨酸的替换。在多个实施方式中，P4处的替换为P4→F4(即P4F)、P4→L4(即P4L)、P4→M4(即P4M)、P4→W4(即P4W)或P4→I4(即P4I)；并且T9处的替换是T9→H9(即T9H)、T9是T9→F9(即T9F)、T9→L9(即T9L)、T9→M9(即T9M)、T9→W9(即T9W)或T9→I9(即T9I)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:5，在VH CDR3中的位置#16处的缬氨酸(即V16)的替换。在多个实施方式中，V4处的替换为V16→F16(即V16F)、V16→E16(即V16E)或V16→W16(即V16W)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:3，在VH CDR1中的位置#8处的天门冬酰胺(即N8)的替换。在多个实施方式中，N8处的替换为N8→H8(即N8H)、N8→W8(即N8W)、N8→I8(即N8I)、N8→V8(即N8V)、N8→Y8(即N8Y)或N8→F8(即N8F)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:20，在VH CDR1中的位置#9处的亮氨酸(即L9)的替换。在多个实施方式中，L9处的替换为L9→W9(即L9W)、L9→I9(即L9I)、L9→V9(即L9V)、L9→Y9(即L9Y)或L9→F9(即L9F)。

在一些实施方式中，抗C5抗体、融合蛋白或其抗原结合片段包含相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的脯氨酸4(即P4)、相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的苏氨酸9(即T9)、相对于SEQ ID NO:5，在VH CDR3中的缬氨酸16(即V16)和相对于SEQ ID NO:20，在VH CDR1中的亮氨酸9(即L9)中的两处或更多处的替换。在多个实施方式中，在相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的脯氨酸4(即P4)、相对于SEQ ID NO:4，在VH CDR2中的苏氨酸9(即T9)、相对于SEQ ID NO:5，在VH CDR3中的缬氨酸16(即V16)和相对于SEQ ID NO:20，在VH CDR1中的亮氨酸9(即L9)中的两处或更多处包含替换的抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的两种或更多种替换：L9I/P4M、L9I/P4W、L9I/P4F、L9F/P4M、L9F/P4W、L9F/P4F、L9I/P4M/V16W、L9I/P4W/V16W、L9I/P4F/V16W、L9F/P4M/V16W、L9F/P4W/V16W、L9F/P4F/V16W、L9I/P4M/V16E、L9I/P4W/V16E、L9I/P4F/V16E、L9F/P4M/V16E、L9F/P4W/V16E、L9F/P4F/V16E、L9I/P4M/T9H/V16W、L9I/P4W/T9H/V16W、L9I/P4F/T9H/V16W、L9F/P4M/T9H/V16W、L9F/P4W/T9H/V16W、L9F/P4F/T9H/V16W、L9I/P4M/T9H/V16E、L9I/P4W/T9H/V16E、L9I/P4F/T9H/V16E、L9F/P4M/T9H/V16E、L9F/P4W/T9H/V16E和L9F/P4F/T9H/V16E。

在一些实施方式中，抗体或融合蛋白为嵌合抗体。在一些实施方式中，所述抗人类C5抗体可以包含人轻链和人重链恒定区以及在以上说明书中所述的可变区CDR序列。本领域技术人员将能够使用所关心的具体抗体的相关域交换的已知技术制备和获得嵌合抗体。通过移植异种抗体域，引入本发明申请中所述的一种或多种CDR序列，容易地制备了这种抗体。使用已知重组技术，有可能获得和制备包含人重链和轻链恒定区的核酸序列所编码的重链和轻链恒定区的重组抗体；并且在本发明公开中说明了包含对应于CDR序列的通过核酸序列所编码的CDR的重链和轻链可变区。本领域技术人员可以制备包含在本发明公开中所述的一个或多个CDR序列的抗人类C5抗体，其中所述轻链部分单独地或所述重链部分单独地被来自属于另一物种，如(例如)人的抗体的区域替代。可以通过本领域中已知的常规方法制备包含具有一种或多种CDR序列的可变区以及位于所述CDR区以外的鼠科或非鼠科抗体结构元件的人抗人类C5抗体，所述CDR序列选自SEQ ID NO:3-5、8-11、14、17、20、23、26、29、34、37-39、42-44、47-49、52-54、57、62、65和68或其变体。在一些实施方式中，使用本领域中已知的技术使抗体或抗体片段进一步人源化。

在多个实施方式中，具有任何本文所描述的可变区的本文所描述的任何本发明的抗体或融合蛋白可以包含人IgG4恒定重链。SEQ ID NO:32是人IgG4恒定重链的实例氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明的抗体或融合蛋白包含具有S228P突变的人IgG4恒定重链。SEQ ID NO:33是具有S228P突变的人IgG4恒定重链的实例氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明的抗体包含具有Fc PLA突变的人IgG4恒定重链。SEQ ID NO:61是具有Fc PLA突变的人IgG4恒定重链的实例氨基酸序列。

在一些实施方式中，抗C5抗体或融合蛋白包含与SEQ ID NO 3-5、8-11、14、17、20、23、26、29、34、37-39、42-44、47-49、52-54、57、62、65和68中所列的本文所描述的CDR序列具有至少约85％(如至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的任一项)的氨基酸同一性的抗体。

在一个实施方式中，本发明公开涵盖了具有与以上所描述的CDR序列具有至少约85％(如至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的任一个)的同一性的CDR序列的抗C5抗体或融合蛋白。在一个实施方式中，所述抗人类C5抗体具有VH区和VL区，其中所述VH区具有与选自SEQ ID NO2、19、22、28、36、41、46、51、56和59中的一条序列具有大于约90％(如大于约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述VL区具有与选自SEQ ID NO 7、13、16、17、25、31和74中的一条序列具有大于约90％(如大于约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。

在一些实施方式中，修饰了抗体或抗体片段。在一些实施方式中，所述修饰包括抗体或其抗原结合片段与另一种蛋白的部分或蛋白片段的融合。在一些实施方式中，修饰本发明的抗体或其抗体片段以提高其体内循环半衰期。例如，所述片段的抗体可以与FcRn分子(也称为新生儿Fc受体)融合以体内稳定抗体。(Nature Reviews Immunology 7:715-725)。在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段缀合(例如，融合)至效应分子和/或另一种靶向部分(如识别不同分子、不同抗原或不同表位的抗体或抗体片段)。

本领域技术人员将能够制备人类C5结合scFv，其包含选自SEQ ID NO:3-5、8-11、14、17、20、23、26、29、34、37-39、42-44、47-49、52-54、57、62、65和68中的至少一个特异性CDR序列或其变体。scFv可以包含SEQ ID NO:3-5、17、20、26、34、37-39、42-44、47-49、52-54、57、62、65和68中所表示的重链可变区序列或其一种或多种变体，和SEQ ID NO 8-11、14、23和29中所表示的轻链可变区，或其一种或多种变体。引入与本发明公开中所描述的CDR序列具有至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列同一性的scFv内的CDR序列涵盖在本发明公开的范围内。

在一些实施方式中，所述分离的抗体结合至人类C5，其中抗体结合至人类C5的表位。在一些实施方式中，本发明的人类C5抗体是结合至人类C5特异性表位的抗体。在一些实施方式中，所述表位包括C5的α-链中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，所述表位包括C5的β-链中的至少一个氨基酸。

在一些实施方式中，本发明提供了包含抗C5抗体部分(如本文所描述的抗C5抗体中的任一种)和FH或其功能性片段的融合蛋白。在一些实施方式中，抗C5抗体部分是全长抗体。在一些实施方式中，将FH融合至所述全长抗体的重链之一或两者(例如，在所述重链的C末端)。在一些实施方式中，所述全长抗体包含IgG4链(如包含PLA突变的IgG4链)。例如，在一个实施方式中，含有PLA突变的IgG4链包含含有Fc PLA突变的人IgG4恒定重链。在一个实施方式中，含有PLA突变的IgG4链包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列。

在一些实施方式中，本发明提供了包含抗C5抗体部分(如本文所描述的抗C5抗体中的任一种)和包含FH的SCR1-5结构域的FH或其功能性片段的融合蛋白。在一些实施方式中，本发明提供了包含含有IgG4链(例如，包含PLA突变的IgG4链)的抗C5抗体部分(如本文所描述的抗C5抗体中的任一种)和包含FH的SCR1-5结构域的FH或其功能性片段的融合蛋白。

在一些实施方式中，本发明提供了包含抗C5抗体部分和FH或其功能性片段的融合蛋白，其中抗C5抗体部分是pH敏感的(如本文所描述的pH敏感的抗C5抗体中的任一种)。例如，在一些实施方式中，pH敏感的抗C5抗体部分是在pH 7.4对C5的结合亲和力高于pH 5.8的抗C5抗体部分。在一些实施方式中，抗C5抗体部分在pH 7.4时对C5(例如，人类C5)的结合亲和力比抗C5抗体部分在pH 5.8时对C5(例如，人类C5)的结合亲和力高至少约3倍(如至少约4、5、6、7、8或10倍中的任一种)。

在一些实施方式中，融合蛋白包含抗C5抗体部分和FH或其功能性片段，其中抗C5抗体部分是pH敏感的(如本文所述的pH敏感的抗C5抗体中的任一种)，例如，在pH 7.4对C5的结合亲和力比pH 5.8时高，其中抗C5部分包含IgG4链(例如，包含PLA突变的IgG4链)。在一些实施方式中，融合蛋白包含抗C5抗体部分和FH或其功能性片段，并且其中抗C5抗体部分是pH敏感的(如本文所描述的pH敏感的抗C5抗体中的任一种)，例如，在pH 7.4对C5的结合亲和力比pH 5.8时高，并且其中FH或其功能性片段包含FH的SCR1-5结构域。在一些实施方式中，融合蛋白包含抗C5抗体部分和FH或其功能性片段，并且其中抗C5抗体部分是pH敏感的(如本文所描述的pH敏感的抗C5抗体中的任一种)，例如，在pH 7.4对C5的结合亲和力比pH 5.8时高，其中抗C5部分包含IgG4链(例如，包含PLA突变的IgG4链)，并且其中FH或其功能性片段包含FH的SCR1-5结构域。

在一些实施方式中，本发明提供了包含抗C5抗体部分(如本文所描述的抗C5抗体中的任一种)和FH或其功能性片段的融合蛋白，其中抗C5部分包含其CDR区中的一个或多个中的组氨酸替换(如本文所描述的含有组氨酸的抗C5抗体中的任一种)。在一些实施方式中，融合蛋白包含抗C5抗体部分和FH或其功能性片段，其中抗C5部分包含其CDR区中的一个或多个中的组氨酸替换(如本文所描述的含有组氨酸的抗C5抗体中的任一种)，并且其中抗C5部分包含IgG4链(例如，包含PLA突变的IgG4链)。在一些实施方式中，融合蛋白包含抗C5抗体部分和FH或其功能性片段，其中抗C5部分包含其CDR区中的一个或多个中的组氨酸替换(如本文所描述的含有组氨酸的抗C5抗体中的任一种)，并且其中FH或其功能性片段包含FH的SCR1-5结构域。在一些实施方式中，融合蛋白包含抗C5抗体部分和FH或其功能性片段，其中抗C5部分包含其CDR区中的一个或多个中的组氨酸替换(如本文所描述的含有组氨酸的抗C5抗体中的任一种)，其中抗C5部分包含IgG4链(例如，包含PLA突变的IgG4链)，并且其中FH或其功能性片段包含FH的SCR1-5结构域。

在多个实施方式中，FH或其功能性片段包含补体FH。补体FH是单多肽链血浆糖蛋白。该蛋白由以像一串20个珠子的连续方式布置的20个重复SCR结构域组成，每个SCR结构域具有约60个氨基酸。在一些实施方式中，FH结合至C3b，加速替代通路C3-转化酶(C3Bb)的衰减，并且用作C3b蛋白水解失活的辅因子。在存在FH的情况下，C3b蛋白水解导致C3b的切割。在一些实施方式中，FH对于C3b具有至少3个不同的结合域，其位于SCR 1-4、SCR 5-8和SCR 19-20内。在一些实施方式中，FH的每个位点结合至C3b蛋白内的不同区域：N末端位点结合至天然C3b；位于FH的中间区域内的第二位点结合至C3c片段并且位于SCR19和20内的位点结合至C3d区。在一些实施方式中，FH还含有肝素结合位点，其位于FH的SCR 7、SCR 5-12和SCR20内并且与C3b结合位点重叠。例如，在一些实施方式中，结构和功能分析显示FH补体抑制活性域位于前4个N末端SCR结构域内。

本文所描述的FH或其功能性片段是指具有一些或全部FH蛋白的补体抑制活性的FH蛋白的任何部分，并且如以下详细描述的，其包括但不限于：全长FH蛋白、FH蛋白的生物学活性片段、包含SCR1-4的FH片段或者天然存在的FH的任何同源物或其片段。

在多个实施方式中，FH是全长人FH蛋白，其包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或者SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列。氨基酸1-18对应于前导肽、氨基酸21-80对应于SCR1、氨基酸85-141对应于SCR2、氨基酸146-205对应于SCR3、氨基酸210-262对应于SCR4、氨基酸267-320对应于SCR5。

在一些实施方式中，FH部分具有以下性质中的一种或多种：(1)与C-反应蛋白(CRP)结合、(2)与C3b结合、(3)与肝素结合、(4)与唾液酸结合、(5)与内皮细胞表面结合、(6)与细胞整合素受体结合、(7)与病原体结合、(8)C3b辅因子活性、(9)C3b衰减加速活性和(10)抑制替代补体通路。

在一些实施方式中，FH部分包含FH的前4个N末端SCR结构域(SCR1-4)。在一些实施方式中，所述构建体包含FH的前5个N末端SCR结构域(SCR 1-5)。在一些实施方式中，所述构建体包含FH的前6个N末端SCR结构域(SCR 1-6)。在一些实施方式中，FH部分包含(并且在一些实施方式中，由其组成或基本由其组成)至少FH的前4个N末端SCR结构域，其包括(例如)至少FH的前5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多个N末端SCR结构域中的任一个。

在一些实施方式中，FH是野生型FH。在一些实施方式中，FH是天然存在的FH的变体或其变体。天然存在的FH蛋白的变体或其片段包括其中至少一个或几个，但不限于一个或几个氨基酸已缺失(例如，蛋白的截短形式，如肽或片段)、插入、反转、替换和/或衍生化(例如，通过糖基化、磷酸化、乙酰化、豆蔻酰化、异戊烯化、棕榈酸化、酰胺化和/或糖基磷脂酰肌醇的添加)的不同于天然存在的FH或其片段的蛋白。例如，FH变体可以具有与天然存在的FH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或者SEQ ID NO:84)具有至少约70％的同一性，例如，与天然存在的FH的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或者SEQ ID NO:84)具有至少约75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一种的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，FH变体或其片段保留了天然存在的FH或其片段的全部补体抑制活性。在一些实施方式中，FH变体或其片段保留了天然存在的FH或其片段的补体抑制活性的至少约50％，例如，至少约60％、70％、80％、90％或95％中的任一种。在一些实施方式中，FH或其片段包含至少人FH的前5个N末端SCR结构域，如具有含有至少人FH(例如，SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或者SEQ ID NO:84)的氨基酸21至320的氨基酸序列的FH部分。在一些实施方式中，FH或其片段包含至少人FH的前5个N末端SCR结构域，所述人FH具有与人FH(例如，SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或者SEQ ID NO:84)的氨基酸21至320具有至少约75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％中的任一个的同一性的氨基酸序列。

筛选测定

本发明在多种筛选测定中具有应用，其包括确定候选抗C5抗体(例如，抗C5抗体、抗C5融合蛋白抗体等)是否可以抑制补体活性。

在一些实施方式中，将存在所述候选抗C5抗体的情况下的补体活性水平与阳性对比物对照中所检测的补体活性相比较。所述阳性对比物对照在不存在所添加的测试化合物的情况下包括补体激活。在一些实施方式中，当在存在所述候选抗C5抗体的情况下，补体活性小于阳性对比物对照中所检测的补体活性的约70％时，将所述候选抗C5抗体识别为补体抑制剂；这对应于在存在所述测试化合物的情况下，大于约30％的补体活性抑制。在其他实施方式中，当在存在所述候选抗C5抗体的情况下，补体活性小于阳性对比物对照中所检测的补体活性的约80％时，将所述候选抗C5抗体识别为补体抑制剂；这对应于在存在所述测试化合物的情况下，大于约20％的补体活性抑制。在其他实施方式中，当在存在所述候选抗C5抗体的情况下，补体活性小于阳性对比物对照中所检测的补体活性的约90％时，将所述候选抗C5抗体识别为补体抑制剂；这对应于在存在所述测试化合物的情况下，大于约10％的补体活性抑制。在一些实施方式中，将通过所述候选抗C5抗体的补体抑制水平与阴性对比物对照中所检测的抑制水平相比较。

多种免疫测定形式，包括竞争性和非竞争性免疫测定形式、抗原捕获测定、双抗体夹心测定和三抗体夹心测定是本发明有用的方法(Self et al.,1996,Curr.Opin.Biotechnol.7:60-65)。本发明不应视为受限于任何一种已知或迄今未知的测定类型，只要所述测定能够检测补体抑制。

酶联免疫吸附测定(ELISA)在本发明的方法中是有用的。可以将酶，如(但不限于)辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或尿酶连接(例如)至抗C5抗体或用于在本发明的方法中使用的第二抗体。辣根-过氧化物酶检测系统可以与(例如)发色底物四甲基联苯胺(TMB)一起使用，其在存在过氧化氢的情况下产生了在450nm下可检测的可溶性产物。其他方便的酶-联系统包括(例如)碱性磷酸酶检测系统，其可以与发色底物对硝基磷酸苯酯一起使用以产生在405nm下易于可检测的可溶性产物。类似地，β-半乳糖苷酶检测系统可以与发色底物o-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)一起使用以产生在410nm下可检测的可溶性产物。作为另外一种选择，尿酶检测系统可以与底物，如脲-溴甲酚紫(Sigma Immunochemicals,St.Louis,MO)一起使用。有用的酶-联一抗和二抗可以得自多个商品化来源。

化学发光检测对于末端补体通路抑制的检测也是有用的。化学发光二抗可以得自多个商品化来源。

荧光检测对于末端补体抑制的检测也是有用的。有用的荧色物包括但不限于：DAPI、荧光素、Hoechst 33258、R-藻蓝蛋白、B-藻红蛋白、R-藻红蛋白、罗丹明、德克萨斯红和丽丝胺-荧光素或罗丹明标记的抗体。

放射免疫测定(RIA)在本发明的方法中也是有用的。这些测定在本领域中是熟知的，并且在(例如)Brophy et al.(1990,Biochem.Biophys.Res.Comm.167:898-903)和Guechot et al.(1996,Clin.Chem.42:558-563)。例如，使用碘-125标记的一抗或二抗进行放射免疫测定(Harlow et al.，如上，1999)。

分析可检测抗体所发出的信号，例如，使用分光光度计检测来自发色底物的颜色；使用辐射计数器检测辐射，如使用γ粒子计数管用于检测碘-125；或者在存在特定波长的光的情况下，使用荧光计检测荧光。当使用酶-联测定时，使用分光光度计进行定量分析。应理解可以手动实施本发明的测定，或者如果需要，可以自动实施，并且可以在多个可商用系统中同时检测多个样品所发出的信号。

本发明的方法还涵盖了基于毛细管电泳的免疫测定(CEIA)的使用，如果需要，其可以是自动的。免疫测定还可以结合激光诱导荧光使用，如(例如)Schmalzing et al.(1997,Electrophoresis 18:2184-2193)和Bao(1997,J.Chromatogr.B.Biomed.Sci.699:463-480)中所述。还可以根据本发明的方法使用脂质体免疫测定，如流动-注射脂质体免疫测定和脂质体免疫传感器(Rongen et al.,1997,J.Immunol.Methods 204:105-133)。

定量免疫印迹还可以在本发明的方法中用于确定末端补体抑制水平。使用熟知的方法，如扫描显象测密术定量免疫印迹(Parra et al.,1998,J.Vasc.Surg.28:669-675)。

施用方法

本发明的方法包括向识别为患有补体介导的疾病或病症的个体施用治疗有效量的至少一种抗C5抗体(例如，抗C5抗体、抗C5融合蛋白抗体等)或其结合片段(如本文其他处所述的任何抗体或其片段)。在一个实施方式中，所述个体是具有补体系统的哺乳动物。在一个实施方式中，所述个体是人。在多个实施方式中，局部、区域或全身施用所述至少一种抗C5抗体或其结合片段。

在多个实施方式中，所述疾病或病症至少选自：MD、AMD、缺血性再灌注损伤、关节炎、类风湿性关节炎、狼疮、溃疡性结肠炎、中风、术后全身性炎症综合征、哮喘、变应性哮喘、COPD、PNH综合征、重症肌无力、NMO、多发性硬化、移植功能延迟、抗体介导的排斥反应、aHUS、CRVO、CRAO、大疱性表皮松解、败血病、器官移植、炎症(包括但不限于：与心肺分流术和肾透析有关的炎症)、C3肾小球病、膜性肾病、IgA肾病、血管球性肾炎(包括但不限于：ANCA介导的血管球性肾炎、狼疮肾炎以及它们的组合)、ANCA介导的血管炎、志贺毒素诱导的HUS和抗磷脂抗体诱导的妊娠丢失或它们的任何组合。在一些实施方式中，补体介导的疾病为C3肾小球病。在一些实施方式中，补体介导的疾病为黄斑变性，如年龄相关性黄斑变性。在一个实施方式中，抗C5抗体融合蛋白的施用抑制C3a或C3b蛋白的产生。在一个实施方式中，抗C5抗体融合蛋白的施用抑制C5a或C5b蛋白的产生。在一些实施方式中，本发明的组合物和方法对于治疗对使用依库珠单抗的治疗不起反应的受试者，包括患有PNH的受试者是有用的。通过非限制性实例，一些受试者可以在C5的α链中具有可以使他们对依库珠单抗治疗耐受的突变(参见Genetic variants in C5 and poor response to eculizumab(Nishimura J et al.,N Engl J Med.2014 Feb 13；370(7):632-9)。

本发明的方法可以包括至少一种抗C5抗体融合蛋白或其结合片段的施用，但是决不应将本发明视为受限于本文所描述的抗C5抗体融合蛋白，而是应将其视为涵盖了减弱和降低补体激活的任何已知和未知的抗C5抗体融合蛋白。

本发明的方法包括向个体施用治疗有效量的至少一种抗C5抗体融合蛋白或其结合片段，其中本发明的组合物单独或与至少一种其他治疗剂组合包含至少一种抗C5抗体融合蛋白或其结合片段。本发明可以与其他治疗方式，如(例如)抗炎疗法等组合。可以与本发明的方法组合使用的抗炎疗法的实例包括(例如)使用甾族药物的疗法以及使用非甾族药物的疗法。

本发明的方法包括向受试者施用治疗有效量的抗C5抗体融合蛋白或其抗原结合片段。在一些实施方式中，本发明涵盖了通过施用治疗有效量的本发明的抗体融合蛋白或者治疗有效量的其抗体片段，从而减少所述受试者中C3a、C3b、C5a或C5b或者MAC的形成来治疗涉及补体信号调控异常的补体相关疾病的方法。在一些实施方式中，本发明涵盖了通过施用治疗有效量的抗体融合蛋白或抗体片段来治疗涉及补体信号调控异常的补体相关疾病的方法。在一些实施方式中，本发明涵盖了通过向受试者施用有效量的抗体融合蛋白、抗体片段、多肽、肽、缀合肽，从而减少所述受试者中的补体激活通路的激活来治疗涉及补体信号调控异常的补体相关疾病的方法。在一些实施方式中，所述治疗方法涵盖了向受试者施用全身有效剂量的抗体融合蛋白或抗体片段，借此在所述受试者中全身性减少C3a、C3b、C5a或C5b或者MAC的形成。

可以施用对于实践本发明有用的药物组合物以递送至少约1ng/kg、至少约5ng/kg、至少约10ng/kg、至少约25ng/kg、至少约50ng/kg、至少约100ng/kg、至少约500ng/kg、至少约1g/kg、至少约5g/kg、至少约10g/kg、至少约25g/kg、至少约50g/kg、至少约100g/kg、至少约500g/kg、至少约1mg/kg、至少约5mg/kg、至少约10mg/kg、至少约25mg/kg、至少约50mg/kg、至少约100mg/kg、至少约200mg/kg、至少约300mg/kg、至少约400mg/kg和500mg/kg受试者体重。在一个实施方式中，本发明施用了导致在个体中产生以下本发明的抗C5抗体融合蛋白的浓度的剂量：至少约1pM、至少约10pM、至少约100pM、至少约1nM、至少约10nM、至少约100nM、至少约1μM、至少约2μM、至少约3μM、至少约4μM、至少约5μM、至少约6μM、至少约7μM、至少约8μM、至少约9μM和至少约10μM。在另一个实施方式中，本发明设想了导致在个体血浆中产生以下本发明的抗C5抗体融合蛋白的浓度的剂量施用：至少约1pM、至少约10pM、至少约100pM、至少约1nM、至少约10nM、至少约100nM、至少约1μM、至少约2μM、至少约3μM、至少约4μM、至少约5μM、至少约6μM、至少约7μM、至少约8μM、至少约9μM和至少约10μM。

在一些实施方式中，可以施用对于实践本发明有用的药物组合物以递送不大于约1ng/kg、不大于约5ng/kg、不大于约10ng/kg、不大于约25ng/kg、不大于约50ng/kg、不大于约100ng/kg、不大于约500ng/kg、不大于约1g/kg、不大于约5g/kg、不大于约10g/kg、不大于约25g/kg、不大于约50g/kg、不大于约100g/kg、不大于约500g/kg、不大于约1mg/kg、不大于约5mg/kg、不大于约10mg/kg、不大于约25mg/kg、不大于约50mg/kg、不大于约100mg/kg、不大于约200mg/kg、不大于约300mg/kg、不大于约400mg/kg和不大于约500mg/kg受试者体重。在一个实施方式中，本发明施用了导致在个体中产生以下本发明的抗C5抗体融合蛋白的浓度的剂量：不大于约1pM、不大于约10pM、不大于约100pM、不大于约1nM、不大于约10nM、不大于约100nM、不大于约1μM、不大于约2μM、不大于约3μM、不大于约4μM、不大于约5μM、不大于约6μM、不大于约7μM、不大于约8μM、不大于约9μM和不大于约10μM。在另一个实施方式中，本发明设想了导致在个体血浆中产生以下本发明的抗C5抗体融合蛋白的浓度的剂量施用：不大于约1pM、不大于约10pM、不大于约100pM、不大于约1nM、不大于约10nM、不大于约100nM、不大于约1μM、不大于约2μM、不大于约3μM、不大于约4μM、不大于约5μM、不大于约6μM、不大于约7μM、不大于约8μM、不大于约9μM和不大于约10μM。还考虑了任何本文所公开的剂量之间的剂量范围。

通常，在本发明的方法中可以施用于受试者(在一些实施方式中，人)的剂量在0.5μg至约50mg每公斤受试者体重的量的范围内。然而，所施用的准确剂量将基于多种因素而不同，其包括但不限于：受试者的类型和要治疗的疾病状态的类型、受试者的年龄和施用途径。在一些实施方式中，所述化合物的剂量将在约1μg至约10mg每公斤受试者体重之间改变。在其他实施方式中，剂量会在约3μg至约1mg每公斤受试者体重之间改变。

可以将抗体融合蛋白以每天数次的频率施用于受试者，或者可以不太频繁施用，如每天一次、每天两次、每天三次、每周一次、每周两次、每周三次、每两周一次、每两周两次、每两周三次、每月一次、每月两次、每月三次，或者更不频繁，如每几个月一次或甚至每年一次或几次或更少。所述剂量的频率对于技术人员来说将是显而易见的并且将取决于多种因素，如(但不限于)要治疗的疾病的类型和严重程度，受试者的类型和年龄等。可以通过任何药学领域中已知的或此后发展的方法制备所述药物组合物制剂。一般地，这些制备方法包括使活性成分与载体或一种或多种其他辅助成分结合的步骤，然后，如有必要或者如果希望，将所述产物成形或包装成所期望的单剂量或多剂量单元。

尽管对本文所提供的药物组合物的描述主要涉及适合于向人伦理学施用的药物组合物，但是技术人员将理解这些组合物通常适合于向各种各样的受试者施用。对适合于向人施用的药物组合物进行改变以使所述组合物适合于向多种受试者施用是很好理解的，并且常规兽医药理学家可以仅通过常规实验(即使有的话)来设计和实施这些改变。考虑了施用本发明的药物组合物的个体，其包括但不限于：人及其他灵长类、哺乳动物，包括商业上相关的哺乳动物，如非人灵长类、牛、猪、马、羊、牛和狗。

可以以适合于眼、口服、直肠、阴道、肠胃外、局部、肺部、鼻内、口腔、眼内、玻璃体、肌内、皮内和静脉内施用途径的制剂制备、包装或出售在本发明的方法中有用的药物组合物。其他所考虑的制剂包括投射纳米颗粒(projected nanoparticle)、脂质体制剂、包含活性成分的重新包封的红细胞和基于免疫学的制剂。

可以作为整体，作为单一单位剂量或者作为多个单一单位剂量制备、包装或出售本发明的药物组合物。单位剂量是包含预决的量的活性成分的药物组合物的单个的量。活性成分的量通常等于将施用于个体的活性成分的剂量或者这些剂量的便捷的部分(convenient fraction)，如(例如)这些剂量的一半或三分之一。

在本发明的药物组合物中，活性成分、药物可用的载体和任何其他成分的相对量将基于所治疗的个体的身份、体型和状况并且还基于施用所述组合物的途径而改变。举例来说，组合物可以包括0.1％至100％(w/w)之间的活性成分。在多个实施方式中，组合物包括至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约11％、至少约12％、至少约13％、至少约14％、至少约15％、至少约16％、至少约17％、至少约18％、至少约19％、至少约20％、至少约21％、至少约22％、至少约23％、至少约24％、至少约25％、至少约26％、至少约27％、至少约28％、至少约29％、至少约30％、至少约31％、至少约32％、至少约33％、至少约34％、至少约35％、至少约36％、至少约37％、至少约38％、至少约39％、至少约40％、至少约41％、至少约42％、至少约43％、至少约44％、至少约45％、至少约46％、至少约47％、至少约48％、至少约49％、至少约50％、至少约51％、至少约52％、至少约53％、至少约54％、至少约55％、至少约56％、至少约57％、至少约58％、至少约59％、至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约100％(w/w)的活性成分。

除活性成分之外，本发明的药物组合物还可以包括一种或多种其他药物活性剂。

可以使用常规技术制备本发明的药物组合物的控释或缓释制剂。

药物组合物的肠胃外施用包括任何施用途径，其特征在于物理破坏个体组织并通过所述组织中的破口施用所述药物组合物。肠胃外施用可以是局部、区域或全身性的。因此，肠胃外施用包括但不限于：通过组合物的注射，通过手术切口的组合物应用，通过穿透组织的非手术伤口的组合物应用等的药物组合物的施用。具体地，考虑了肠胃外施用，其包括但不限于：静脉内、眼内、玻璃体内、皮下、腹膜内、肌内、皮内、胸骨内注射和肿瘤内施用。

适合于肠胃外施用的药物组合物制剂包括与药物可用的载体，如无菌水或无菌等渗盐水组合的活性成分。可以以适合于丸剂施用或者适合于连续施用的形式制备、包装或出售这些制剂。可以以单位剂量形式，如在安瓿瓶中或在含有防腐剂的多剂量容器中制备、包装或出售注射制剂。用于肠胃外施用的制剂包括但不限于：处于油性或水性媒介物中的混悬液、溶液、乳液、糊剂和可植入缓释或生物可降解制剂。这些制剂还可以包括一种或多种其他成分，其包括但不限于：混悬剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的制剂的一个实施方式中，以在肠胃外施用所复原的组合物之前，用适合的媒介物(例如，无菌无热原的水)复原的干燥(即粉末或颗粒)形式提供活性成分。

以无菌可注射的水性或油性混悬液或溶液的形式制备、包装或出售所述药物组合物。可以根据已知技术配制这种混悬液或溶液，并且除活性成分之外，其可以包括其他成分，如分散剂、润湿剂或助悬剂。可以使用无毒的肠胃外可用的稀释剂或溶剂，如(例如)水或1,3-丁二醇制备这些无菌注射制剂。其他可用的稀释剂和溶剂包括但不限于：林格氏溶液、等渗氯化钠溶液和固定油剂，如合成的单或二甘油酯。其他有用的可胃肠外施用的制剂包括包含处于微晶形式，处于脂质体制剂中或者作为可生物降解的聚合物系统的组分的活性成分的那些。用于缓释或植入的组合物可以包括药物可用的聚合物或疏水性材料，如乳液、离子交换树脂、微溶性聚合物或微溶性盐。

可以以适合于通过颊间隙肺部施用的制剂制备、包装或出售本发明的药物组合物。这种制剂可以包括干燥的颗粒，所述颗粒包括活性成分并且具有约0.5至约7纳米，与在一些实施方式中，约1至约6纳米的范围内的直径。这些组合物方便地处于用于使用装置或者使用自抛射溶剂/粉末-分配容器施用的干粉形式，所述装置包括干粉储罐，可以将抛射剂流导向所述干粉储罐以分散所述粉末，并且所述自抛射溶剂/粉末分配容器如包括溶解或混悬在密封容器中的低沸点抛射剂中的活性成分的装置。在一些实施方式中，这些粉末包括颗粒，其中按重量计至少98％的所述颗粒的直径大于0.5纳米并且按数量计至少95％的所述颗粒的直径小于7纳米。在一些实施方式中，按重量计至少95％的所述颗粒的直径大于1纳米并且按数量计至少90％的所述颗粒的直径小于6纳米。在一些实施方式中，干粉组合物包括固体细粉稀释剂，如糖，并且所述干粉组合物方便地以单位剂量形式提供。

低沸点抛射剂通常包括在大气压力下具有小于65°F的沸点的液体抛射剂。通常，所述抛射剂可以占组合物的50至99.9％(w/w)，并且活性成分可以占组合物的0.1至20％(w/w)。所述抛射剂还可以包括其他成分，如液体非离子或固体阴离子表面活性剂或者固体稀释剂(在一些实施方式中，具有与包含活性成分的颗粒同数量级的颗粒尺寸)。

配制用于经肺递送的本发明的药物组合物还可以提供处于溶液或混悬液液滴形式的活性成分。这些制剂可以作为任选地无菌的，包含活性成分的醇的水溶液或稀释溶液或混悬液制备、包装或出售，并且可以方便地使用任何雾化或喷雾装置施用。这些制剂还可以包括一种或多种其他成分，其包括但不限于：调味剂，如糖精钠、挥发油、缓冲剂、表面活性剂或防腐剂，如羟苯甲酯。在一些实施方式中，通过该施用途径所提供的液滴的平均直径在约0.1至约200纳米的范围内。

制剂对于本发明的药物组合物的鼻内递送也是有用的。

适合于鼻内施用的另一种制剂是包含活性成分并且具有约0.2至500微米的平均颗粒的粗粉末。以其中服用鼻吸药，即，通过从保持接近于鼻孔的所述粉末容器中通过鼻部通道快速吸入的方式施用这种制剂。

适合于鼻部施用的制剂可以(例如)包含约少至0.1％(w/w)至多至100％(w/w)的活性成分，并且还可以包含一种或多种其他成分。

可以以适合于口腔施用的制剂制备、包装或出售本发明的药物组合物。这些制剂可以(例如)处于使用常规方法制备的片剂或糖锭的形式，并且可以(例如)包括0.1至20％(w/w)的活性成分，其余部分包括口服可溶解或可降解组成和任选地，一种或多种其他成分。作为另外一种选择，适合于口腔施用的制剂可以包括包含活性成分的粉末或者喷雾或雾化的溶液或混悬液。在一些实施方式中，当分散时，这些粉末、喷雾或雾化制剂的平均颗粒或微滴尺寸在约0.1至约200纳米的范围内，并且还可以包括一种或多种其他成分。

如本文所使用的，“其他成分”包括但不限于：以下中的一种或多种：赋形剂；表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；造粒剂和崩解剂；粘结剂；润滑剂；甜味剂；调味剂；着色剂；防腐剂；生理学可降解的组成，如明胶；水性媒介物和溶剂；油性媒介物和溶剂；助悬剂；分散剂或润湿剂；乳化剂，镇痛剂；缓冲剂；盐；增稠剂；填料；乳化剂；抗氧化剂；抗生素；抗真菌剂；稳定剂；和药物可用的聚合物或疏水性材料。可以包括在本发明的药物组合物中的其他“另外的成分”在本领域中是已知的并且描述于(例如)Remington's Pharmaceutical Sciences(1985,Genaro主编,Mack Publishing Co.,Easton,PA)，该文献作为参考并入本文。

产生抗体、融合蛋白或其抗原结合片段的细胞

在一些实施方式中，本发明是产生本文所描述的抗C5抗体(例如，抗C5抗体、抗C5融合蛋白抗体等)或抗原结合片段中的至少一种的细胞或细胞系(如宿主细胞)。在一个实施方式中，细胞或细胞系是产生本文所述的抗C5抗体或抗原结合片段中的至少一种的遗传修饰的细胞。在一个实施方式中，细胞或细胞系是产生本文所述的抗C5抗体或抗原结合片段中的至少一种的杂交瘤。

杂交细胞(杂交瘤)通常从鼠科脾细胞(其高度富集了B淋巴细胞)和骨髓瘤“融合伴侣细胞”之间的团块融合产生(Alberts et al.,Molecular Biology of the Cell(Garland Publishing,Inc.1994)；Harlow et al.,Antibodies.A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,1988)。随后，将融合中的细胞分成可以分析具有所期望的特异性的抗体的产生的混合池(pools)。可以将测试为阳性的混合池进一步再分，直至识别出产生具有所期望的特异性的抗体的单细胞克隆。通过这些克隆所产生的抗体被称为单克隆抗体。

还提供了编码本文所公开的任何抗体或抗体片段的核酸以及包含所述核酸的载体。因此，可以通过在细胞或细胞系，如通常用于重组或人源化免疫球蛋白的表达的细胞系中表达所述核酸来产生本发明的抗体和片段。因此，还可以通过将所述核酸克隆至一个或多个表达载体中，并将载体转化到细胞系，如通常用于重组或人源化免疫球蛋白的表达的细胞系中来产生本发明的抗体和片段。

可以根据本领域中已知的方法工程设计编码免疫球蛋白的重链和轻链或其片段的基因，所述方法包括但不限于：聚合酶链反应(PCR)(参见，例如，Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版,Cold Spring Harbor,N.Y.,1989；Berger&Kimmel,Methods in Enzymology,第152卷：Guide to Molecular Cloning Techniques,Academic Press,Inc.,San Diego,Calif.,1987；Co et al.,1992,J.Immunol.148:1149)。例如，可以从抗体分泌细胞的基因组DNA克隆编码重链和轻链或其片段的基因，或者通过细胞RNA的反转录产生cDNA。通过包括与要克隆的基因或基因段侧接或重叠的序列杂交的PCR引物的使用在内的常规方法完成克隆。

可以获得编码本发明的抗体或其重链或轻链或片段的核酸，并根据在多种宿主细胞或者在体外翻译系统中用于产生特异性免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段或变体的重组核酸技术使用所述核酸。例如，可以将编码抗体的核酸或其片段置于适合的原核或真核载体，例如，表达载体中，并通过适当的方法(例如，转化、转染、电穿孔、感染)将其引入适合的宿主细胞，从而所述核酸可操作性地连接至(例如)载体中的一个或多个表达控制元件或者整合至宿主细胞基因组。

在一些实施方式中，可以在可以用于共转染受体细胞的两个不同的表达载体中组装所述重链和轻链或其片段。在一些实施方式中，每个载体可以含有两个或更多个可选择基因，一个用于在细菌系统中选择，一个用于在真核系统中选择。这些载体使得所述基因能够在细菌系统中产生和扩增，并且使得能够进行后续的真核细胞共转染和共转染细胞的选择。所述选择程序可以用于对引入到两个不同的DNA载体上的抗体核酸在真核细胞中的表达进行选择。

作为另外一种选择，可以从一个载体中表达编码所述重链和轻链或其片段的核酸。尽管通过不同的基因编码链和重链，但是可以使用重组方法将它们连接。例如，可以通过合成接头将两个多肽连接，所述合成接头使它们作为单一蛋白链制备，其中VL和VH区配对以形成一价分子(称为scFv；参见，例如，Bird et al.,1988,Science 242:423-426；和Huston et al.,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。

本发明提供了分离的核酸分子，其包含编码重链和/或轻链及其片段的核酸序列。当在细胞中产生时，可以工程设计包含编码轻链和重链两者或其片段的序列的核酸分子以包含用于抗体或片段分泌的合成信号序列。此外，核酸分子可以含有特异性DNA连接，其允许其他抗体序列的插入并且维持了翻译阅读框，从而不会改变通常在抗体序列中存在的氨基酸。

根据本发明，可以将编码抗体的核酸序列插入到适当的表达载体中。在多个实施方式中，所述表达载体包含所插入的编码抗体的核酸的转录和翻译所必需的元件，以产生指导用于抗体或其片段的形成的抗体序列的表达的重组DNA分子。

可以对编码抗体的核酸或其片段进行本领域技术人员已知的多种重组核酸技术，如定点突变。

多种方法可以用于在细胞中表达核酸。可以将核酸克隆到一些载体类型中。然而，不应将本发明视为受限于任何具体的载体。作为替代，应将本发明视为涵盖了易于获得和/或本领域中已知的多种载体。例如，可以将本发明的核酸克隆至载体中，载体包括但不限于：质粒、噬粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。特别关心的载体包括表达载体、复制载体、探针产生载体和测序载体。

在具体的实施方式中，表达载体选自病毒载体、细菌载体和哺乳动物细胞载体。存在包含以上所讨论的组成中的至少一部分或全部的多种表达载体系统。基于原核生物载体和/或真核生物载体的系统可以用于和本发明一起使用以产生多核苷酸或者它们的同源多肽。众多这类系统是可商购的和广泛可用的。

病毒载体技术在本领域中是熟知的并且(例如)在Sambrook et al.(2012)和Ausubel et al.(1999)并且在其他病毒学和分子生物学手册中有描述。作为载体有用的病毒包括但不限于：反转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、疱疹病毒和慢病毒。在一些实施方式中，使用鼠科干细胞病毒(MSCV)载体来表达所期望的核酸。MSCV载体已证明在细胞中有效表达所期望的核酸。然而，本发明不应仅限于使用MSCV载体，而是在本发明中包括了任何反转录病毒表达的方法。病毒载体的其他实例为基于莫洛尼小鼠白血病病毒(MoMuLV)和人类免疫缺陷性病毒(HIV)的那些。在一些实施方式中，适合的载体含有在至少一种生物中起作用的复制起点、启动子序列、方便的限制性核酸内切酶位点和一种或多种可选择标志物。(参见，例如，WO 01/96584；WO 01/29058；和美国专利号6,326,193)。

其他调控元件，例如，增强子可以用于调控转录起始的频率。启动子可以是与基因或核酸序列天然结合的一个启动子，如可以通过分离位于所述编码段和/或外显子上游的5'非编码序列获得。这种启动子可以称为“内源的”。类似地，增强子可以是与核酸序列天然结合的增强子，其位于所述序列的下游或上游。作为另外一种选择，通过将编码核酸段置于重组或异源启动子的控制之下将获得某些优势，所述启动子是指在其自然环境中通常不与所述核酸序列结合的启动子。重组或异源增强子还表示在其自然环境中通常不与所述核酸序列结合的增强子。这些启动子或增强子可以包括其他基因的启动子或增强子，和分离自任何其他原核、病毒或真核细胞的启动子或增强子，和非“天然存在的”启动子或增强子，例如，含有不同转录调控区的不同元件和/或改变表达的突变的启动子或增强子。除通过合成产生启动子和增强子的核酸序列之外，可以结合本文所公开的组成，使用重组克隆和/或核酸扩增技术，包括PCR产生序列(美国专利号4,683,202、美国专利号5,928,906)。此外，考虑还可以使用在非核细胞器，如线粒体、叶绿体等内指导序列的转录和/或表达的控制序列。

天然地，使用在选择用于表达的细胞类型、细胞器和生物中有效指导DNA段的表达的启动子和/或增强子将是重要的。分子生物学领域的技术人员通常已知如何使用启动子、增强子和细胞类型的组合来用于蛋白表达，例如，参见Sambrook et al.(2012)。所使用的启动子可以是组成型的，组织特异的、诱导型的和/或在适当条件下有用的以指导所引入的DNA段的高水平表达，如在重组蛋白及其片段的大规模生产中是有利的。

启动子的实例是立即早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。该启动子序列是能够驱动与之操作性连接的任何多核苷酸序列的高水平表达的强组成型启动子序列。然而，还可以使用其他组成型启动子序列，其包括但不限于：猿猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)、HIV长末端重复(LTR)启动子、Moloney病毒启动子、禽白血病病毒启动子、埃-巴二氏病毒立即早期启动子、劳氏肉瘤病毒启动子以及人基因启动子，如(但不限于)肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌肉肌酸启动子。此外，本发明不应受限于组成型启动子的使用。作为本发明的一部分，还考虑了诱导型启动子。在本发明中诱导型启动子的使用提供了分子开关，当这种表达是所期望的时，其能够打开与其可操作性地连接的多核苷酸序列的表达，或者当表达不是所期望的时，关闭表达。诱导型启动子的实例包括但不限于：金属硫蛋白(metallothionine)启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。此外，本发明包括组织特异性启动子或细胞类型特异性启动子的使用，所述启动子是仅在所期望的组织或细胞中具有活性的启动子。组织特异性启动子在本领域中是熟知的并且包括但不限于：HER-2启动子和PSA相关启动子序列。

为了评价所述核酸的表达，要引入到细胞中的表达载体还可以含有可选择标志物基因或者报告基因或者两者，以有利于从试图通过病毒载体转染或感染的细胞群体中识别和选择出表达细胞。在其他实施方式中，所述可选择标志物可以携带在单独的核酸上并在共转染程序中使用。可选择标志物和报告基因两者均可以侧接适当的调控序列，以使得能够在宿主细胞中表达。有用的可选择标志物在本领域中是已知的并且包括(例如)抗生素抗性基因，如neo等。

将报告基因用于识别潜在转染的细胞并用于评价调控序列的功能性。编码易于可测定的蛋白的报告基因在本领域中是熟知的。一般地，报告基因是在受体生物或组织中不存在或不表达的基因，其编码通过一些容易可检测的性质，如酶活力显示其表达的蛋白。在将DNA引入受体细胞后的合适时间，测定报告基因的表达。

适合的报告基因可以包括编码荧光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌型碱性磷酸酶或者绿色荧光蛋白的基因(参见，例如，Ui-Tei et al.,2000FEBS Lett.479:79-82)。适合的表达系统是熟知的并且可以使用熟知的技术制备或商购获得。一般地，将显示出报告基因最高表达水平的含有最小5'侧接区的构建体识别为启动子。这些启动子区可以连接至报告基因并用于评价试剂调控启动子驱动的转录的能力。

将核酸引入细胞并表达的方法在本领域中是已知的。在表达载体的背景中，可以通过本领域中的任何方法容易地将载体引入宿主细胞，例如，哺乳动物、细菌、酵母或昆虫细胞。例如，可以通过物理、化学或生物方式将表达载体转移至宿主细胞。

将多核苷酸引入宿主细胞的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质转染、粒子轰击、微注射、电穿孔、激光穿孔(laserporation)等。用于产生包含载体和/或外源核酸的细胞的方法在本领域中是熟知的。参见，例如，Sambrook et al.,(2012)和Ausubel et al.(1999)。

将所关心的核酸引入宿主细胞的生物学方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，并且特别是反转录病毒载体已成为将基因插入到哺乳动物，例如，人细胞中的最广泛使用的方法。其他病毒载体可以来源于慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒I、腺病毒和腺病毒相关病毒等。参见，例如，美国专利号5,350,674和5,585,362。

将核酸引入宿主细胞的化学方法包括胶体分散体系，如大分子复合物、纳米胶囊、微球体、珠和脂质基系统，包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。用作体外和体内递送媒介的优选的胶体体系是脂质体(例如，人工膜囊)。这些体系的制备和使用在本领域中是熟知的。

不考虑用于将外源核酸引入到宿主细胞中或者另外将细胞暴露于本发明的核酸的方法，为了确认所述宿主细胞中重组DNA序列的存在，可以实施多种测定。这些测定包括(例如)本领域技术人员熟知的“分子生物学”测定，如DNA印迹法和RNA印迹法、RT-PCR和PCR；“生物化学”测定，如(例如)通过免疫学方式(ELISA和免疫印迹)或者通过本文所述的测定检测特定的肽的存在或不存在，以识别试剂是否在本发明的范围内。

表达人类C5的非人动物

本发明还包括表达人类C5的基因修饰的非人动物。在一些实施方式中，表达人类C5的基因修饰的非人动物还表达非人动物C5。在一些实施方式中，表达人类C5的基因修饰的非人动物不表达非人动物C5。在一个实施方式中，本发明是从非人动物的内源调控元件表达人类C5，但是不表达非人动物C5的基因修饰的非人动物。在一些实施方式中，非人动物是哺乳动物。在一些实施方式中，非人动物是啮齿类动物。在一些实施方式中，非人动物是大鼠或小鼠。在一些实施方式中，小鼠是免疫缺陷型小鼠。在一些实施方式中，小鼠是NOD/SCID小鼠。在一些实施方式中，小鼠是FcRn/SCID小鼠。

为了产生基因修饰的非人动物，可以将编码人类C5蛋白的核酸以适合于人类C5蛋白在宿主细胞中表达的形式引入重组表达载体。术语“以适合于宿主细胞中融合蛋白表达的形式”旨在表示所述重组表达载体包括以允许向非人动物基因组整合，从而导致核酸向mRNA的稳定且永久转录以及所述mRNA向人类C5蛋白的翻译的方式可操作性地连接至编码人类C5蛋白的核酸的一种或多种调控序列。术语“调控序列”是本领域承认的并且旨在包括启动子、增强子及其他表达控制元件(例如，多腺苷酸化信号、PiggyBac和睡美人转座子元件)。这些调控序列是本领域技术人员已知的并且描述于1990,Goeddel,Gene Expression Technology:Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,Calif和Nakanishi H,Higuchi Y,Kawakami S,Yamashita F,Hashida M.Mol Ther.2010 Apr；18(4):707-14.doi:10.1038/mt.2009.302.Epub 2010 Jan 26.；Hudecek M,Ivics Z.Curr Opin Genet Dev.2018 Jun 22；52:100-108.doi:10.1016/j.gde.2018.06.003.[Epub ahead of print]Review。应理解表达载体的设计可以取决于以下因素，如要转染的宿主细胞和动物的选择和/或要表达的人类C5蛋白的量。

可以(例如)通过(例如)经由微注射将编码人类C5蛋白的核酸(通常连接至合适的调控元件，如组成型或组织特异性增强子)引入至卵母细胞并使所述卵母细胞在雌性建立者小鼠中发育来产生基因修饰的非人动物。还可以通过经由尾静脉，通过流体动力学注射将编码人类C5蛋白的核酸(通常，连接至适合的调控元件，如组成型或组织特异性增强子和/或PiggyBac和睡美人转座子元件)引入动物中来产生这些动物，如Suda T,Liu D.Mol Ther.2007 Dec；15(12):2063-9.Epub 2007 Oct 2.Review中所述。内含子序列和多腺苷酸化信号还可以包含在转基因中以提高转基因表达效率。用于产生基因修饰动物，如小鼠的方法已在本领域中变得常规，并且描述于，例如，美国专利号4,736,866和4,870,009以及1986,Hogan et al.,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,N.Y.,Cold Spring Harbor Laboratory。如果将转基因引入卵母细胞，则基因修饰的建立者动物可以用于繁育具有转基因的其他受试者。通过本发明的卵母细胞注射所产生的具有编码C5蛋白的转基因的基因修饰的动物还可以繁殖至具有其他转基因的其他基因修饰的动物或者其他敲除动物，例如，不表达鼠科C5基因的敲除小鼠。可以使用其他基因敲除或转基因小鼠，例如，用于实验使用的FcRn/SCID小鼠容易地产生通过水力学尾静脉注射所产生的具有编码C5蛋白的转基因的基因修饰的动物。将理解除了基因修饰的动物外，所述系统可以用于产生表达其他人类C5的受试者。

在一个实施方式中，使用用人类C5外显子序列(或者外显子和内含子序列)替换非人动物C5外显子序列(或者外显子和内含子序列)，但是保持一种、多种或全部天然非人动物调控元件(例如，启动子、增强子、侧接区、内含子等)序列无变化的系统，产生了从非人动物调控元件表达人类C5的基因修饰的非人动物。尽管可以使用任何适合的系统，但是能够以这种方式产生基因修饰的非人动物的一种示例性系统是CRISPr/Cas9系统。“CRISPR/Cas”系统是指用于防御外源核酸的普遍的细菌系统种类。CRISPR/Cas系统存在于广泛的真细菌和古细菌生物中。CRISPR/Cas系统包括I型、II型和III型亚型。野生型II型CRISPR/Cas系统利用RNA介导的与引导和激活RNA复合的核酸酶Cas9来识别和切割外来核酸。Cas9同源物存在于各种各样的真细菌中，其包括但不限于：以下分类群的细菌：放线菌(Actinobacteria)、产水菌(Aquificae)、拟杆菌-绿菌(Bacteroidetes-Chlorobi)、衣原体-疣微菌(Chlamydiae-Verrucomicrobia)、绿弯菌(Chlroflexi)、蓝细菌(Cyanobacteria)、厚壁菌(Firmicutes)、变形菌(Proteobacteria)、螺旋体(Spirochaetes)和热袍菌(Thermotogae)。示例性的Cas9蛋白是酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9蛋白。其他Cas9蛋白及其同源物描述于(例如)Chylinksi,et al.,RNA Biol.2013 May 1；10(5):726-737；Nat.Rev.Microbiol.2011 June；9(6):467-477；Hou,et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.2013 Sep 24；110(39):15644-9；Sampson et al.,Nature.2013 May 9；497(7448):254-7；和Jinek,et al.,Science.2012 Aug 17；337(6096):816-21。

在一个实施方式中，本发明的基因修饰的非人动物从内源启动子表达人类C5。在本发明中有用的启动子的实例包括但不限于：天然小鼠启动子、DNA pol II启动子、PGK启动子、泛素启动子、白蛋白启动子、球蛋白启动子、卵清蛋白启动子、SV40早期启动子、劳氏肉瘤病毒(RSV)启动子、β-肌动蛋白启动子、反转录病毒LTR和慢病毒LTR。在本发明中有用的启动子和增强子表达系统还包括诱导型和/或组织特异性表达系统。

在一些实施方式中，将本发明的表达人类C5的基因修饰的非人动物用于筛选、测试、评价或评估抗C5抗体和抗C5 mAb融合蛋白。在一些实施方式中，将本发明的表达人类C5的基因修饰的非人动物用于筛选、测试、评价或评估抗C5抗体和抗C5 mAb融合蛋白的特征、性质或活性。

试剂盒

本发明还包括试剂盒，其包含本发明的抗C5抗体(例如，抗C5抗体、抗C5融合蛋白抗体等)或其组合和说明材料，所述说明材料描述了(例如)作为如本文其他处所述的治疗性治疗或非治疗性使用，向个体施用抗C5抗体或其组合。在一个实施方式中，该试剂盒还包括(例如)适合于在向个体施用抗体之前，溶解或混悬包含本发明的抗C5抗体或其组合的所述治疗性组合物的(任选地，无菌的)药物可用的载体。任选地，所述试剂盒包含用于施用抗体的施用器。

实验实施例

现将参考以下实施例描述本发明。仅出于说明的目的提供了这些实施例，并且本发明决不应视为受限于这些实施例，而是应视为涵盖了由于本文所提供的教导内容而变得显而易见的任何和所有改变。

在不进行进一步描述的情况下，据信本领域的技术人员可以使用以上描述和以下说明性实施例制备和使用本发明的化合物和实践所主张的方法。因此，不应以任何方式将以下工作实施例视为对本发明公开的其余部分的限制。

实施例1

产生了人源化2G1(VH-11801(SEQ ID NO:2)和VL-1901(SEQ ID NO:7))的变体(图1)，其目的是开发具有在pH 7.4对C5的结合改善并且在pH 5.8对C5的结合降低的变体。

本文所描述的方法基于以下理解：体外测量的mAb的亲和力和阻断效力不必需与其体内半衰期PK或PD相关。这至少部分是因为在血液中以高浓度存在的可溶性抗原，如C5形成了靶向以从身体中除去的免疫复合物(即结合至抗原的mAb)。因此，一般地，在血液中需要高抗体浓度以阻断这些可溶性抗原的体内活性。

本文所描述的方法基于以下理解，通过提高抗体再循环或半衰期(并因此提高PK)并且通过经由产生具有“pH依赖性”结合性质的mAb所加快的抗原胞内降解，可以提高治疗性抗体的体内效力。就此，所期望的性质在于治疗性mAb将在接近于血液pH的中性pH(～pH 7.4)下与抗原(例如，C5)良好结合。以这种方式，它有效阻断了抗原(例如，C5)的活性。然后，通过细胞吸收免疫复合物，在此将所述免疫复合物移动至内涵体进行蛋白水解降解。早期内涵体的pH是酸性的(～pH 5.8)。因此，当治疗性mAb在酸性pH对其抗原的结合不良时，所述mAb将从所述免疫复合物上解离，然后可以通过FcRn吸收并返回血浆。以这种方式，仅抗原(例如，C5)通过内涵体蛋白水解途径降解，然而通过FcRn的mAb的再循环促进了它在血浆中延长的持久性。

由于其在酸性pH下质子化的倾向(H+)，一旦在酸性pH下质子化，则在它们的CDR中含有组氨酸残基的mAb可以具有弱化的结合亲和力。本文所描述的方法利用了所有CDR残基的“组氨酸扫描”(即用组氨酸替换每个CDR残基)。然后，使用Octet仪(Pall ForteBio)测量mAb和C5在pH 7.4和pH 5.8的解离以识别在pH 5.8具有相对更快的解离并且在pH 7.4具有相对更慢的解离的组氨酸替换变体。

亲代人源化2G1 mAb(VH-11801(SEQ ID NO:2)和VL-1901(SEQ ID NO:7))似乎在pH 5.8对C5具有更好的亲和力(图7)。产生了在mAb的6个CDR中的每一个中的每个残基处具有组氨酸替换的单替换变体(VH-11801(SEQ ID NO:2)和VL-1609(SEQ ID NO:7))并评价了它们的pH依赖性结合性质。对于每个变体，构建VH和VL质粒，然后瞬时转染至HEK细胞中。测试了细胞培养上清液中的mAb在pH 5.8和pH 7.4的结合。

在这些单替换变体中，3种(mAb L3-1、L1-2和H1-4)在pH依赖性结合中显示出一定改善。图2显示了L3-1的序列(SEQ ID NO:1-5、8、9和11-13)。图3显示了L1-2的序列(SEQ ID NO:1-5、9、10和14-16)。图4显示了H1-4的序列(SEQ ID NO:4、5、6-10和17-19)。

除了产生单替换变体外，将单替换轻链和重链合并以产生双替换变体。在这些双替换变体中，2种(mAb H1-8/L1-9和H2-6/L3-5)在pH依赖性结合中显示出一定改善。图5显示了H1-8/L1-9的序列(SEQ ID NO:4、5、9、10和20-25)。图6显示了H2-6/L3-5的序列(SEQ ID NO:3、5、8、9和26-31)。

图7至图12显示了具有VH-11801SEQ NO:2和VL-1901SEQ ID NO:7的亲代人源化mAb 2G1的C5结合和解离的Octet迹线以及多种单和双组氨酸突变体。使用绵羊红细胞溶胞测定，将它们在阻断C5功能中的相对活性与亲代人源化2G1 mAb(VH-11801/VL-1901)相比较并在图13和图14中显示。除了相对于亲代人源化2G1 mAb显示出相同或改善的活性的mAb L3-1之外，所有其他突变体显示出降低的活性。在两个双替换变体的情况下，它们的活性大大降低，其中H1-8/L1-9基本失去了所有C5-阻断活性。这并不意外，因为尽管我们在pH 5.8，对于mAb H1-8/L1-9和H2-6/L3-5观察到了一些所期望的更快速的解离，但是它们在pH 7.4的解离也急剧加快(这解释了活性的丧失)。

尽管上述组氨酸取代的变体在体外变得活性降低，但是由于通过pH依赖性结合所造成的降解降低，相对于亲代mAb，它们的体内半衰期可能得到改善并因此可以改善它们的PK/PD性质。

为了体内测试PK/PD，通过含有睡美人转座子元件的人类C5 cDNA经由尾静脉的流体动力学注射，制备永久表达人类C5的NOD/SCID小鼠，从而开发了C5人源化小鼠。NOD小鼠天然缺乏C5，因此内源小鼠C5将不会干扰药效学(PD)测定。SCID遗传背景确保转基因表达的人类C5将不会引起对人类C5的免疫应答。通过含有用于稳定基因组整合的睡美人转座子序列元件的人类C5质粒的流体动力学注射，开发了C5人源化小鼠。图16显示了NOD/SCID小鼠中高水平人类C5表达的代表性数据。通常，观察到范围在50至120μg/mL的C5血浆浓度。这与约80μg/mL的人血浆中的C5浓度相当。

评价了5种组氨酸替换变体(即mAb L3-1、L1-2、H1-4、H1-8/L1-9和H2-6/L3-5)的PK/PD。2种双替换变体(即mAb H1-8/L1-9和H2-6/L3-5)显示出最长的持久性。在3种单替换变体中，mAb H1-4和L1-2显示出比mAb L3-1更好的持久性(图17)。因此，尽管L3-1对于人类C5具有最好的pH 7.4亲和力和体外阻断活性，但是它的半衰期最短。有趣地，除了未显示出体内阻断活性的mAb H1-8/L1-9之外，所有其他变体相对于亲代人源化2G1 mAb(VH-11801、VL-1901)具有改善的PD谱(图18和图19)。

考虑到变体mAb H1-8/L1-9显示出最好的pH-结合差异(即在pH 5.8发生的抗原解离比pH 7.4快的多(图12))，但是丧失了其大部分C5阻断活性(因为在pH 7.4的抗原解离也升高)，因此实施了简约诱变(parsimonious mutagenesis)以随机替换H1-8/L1-9的6个CDR中的每个残基(同时保留H1-8和L1-9的组氨酸替换)。在VH中识别了显著改善ScFV构建体的ELISA板测定中的pH 7.4结合的3个“热点”。这些残基为相对于SEQ ID NO:20，VH CDR1中的位置#9处的亮氨酸(即L9)、相对于SEQ ID NO:4，VH CDR2中的位置#4处的脯氨酸(即P4)和相对于SEQ ID NO:5，VH CDR3中的位置#16处的缬氨酸(即V16)。显示出最大结合改善的替换为L9→W9(即L9W)、L9→I9(即L9I)、L9→V9(即L9V)、L9→Y9(即L9Y)、L9→F9(即L9F)、P4→F4(即P4F)、P4→L4(即P4L)、P4→M4(即P4M)、P4→W4(即P4W)、P4→I4(即P4I)、V16→F16(即V16F)、V16→E16(即V16E)和V16→W16(即V16W)(图20)。

产生了这13个替换(即L9→W9(即L9W)、L9→I9(即L9I)、L9→V9(即L9V)、L9→Y9(即L9Y)、L9→F9(即L9F)、P4→F4(即P4F)、P4→L4(即P4L)、P4→M4(即P4M)、P4→W4(即P4W)、P4→I4(即P4I)、V16→F16(即V16F)、V16→E16(即V16E)和V16→W16(即V16W))并且评价了它们作为IgG4的pH依赖性结合性质。对于每个变体，构建VH和VL质粒，然后瞬时转染至Expi-CHO细胞中。测试了细胞培养上清液中的mAb在pH 5.8和pH 7.4的结合。图21和图22总结了这些变体的C5结合性质。图21显示了相对于mAb结合信号的C5结合的比值，并且图22显示了在从结合阶段切换至解离阶段后，在pH 7.4和pH 5.8中结合信号从峰值降低的％。对于任何给定的突变体，图21上的高比值是优选的；并且图22上pH 7.4时较低的解离％(交叉线柱)和pH 5.8时较高的解离％(方格柱)是优选的。

从该13种mAb H1-8/L1-9单组氨酸替换变体的筛选中，选择7种变体用于产生图23上所列的18种替换变体的组合(即L9I/P4M、L9I/P4W、L9I/P4F、L9F/P4M、L9F/P4W、L9F/P4F、L9I/P4M/V16W、L9I/P4W/V16W、L9I/P4F/V16W、L9F/P4M/V16W、L9F/P4W/V16W、L9F/P4F/V16W、L9I/P4M/V16E、L9I/P4W/V16E、L9I/P4F/V16E、L9F/P4M/V16E、L9F/P4W/V16E和L9F/P4F/V16E)。产生了这18种组合替换变体并评价了它们的pH依赖性结合性质。对于每个变体，构建VH和VL质粒，然后瞬时转染至Expi-CHO细胞中。测试了细胞培养上清液中的mAb在pH 5.8和pH 7.4的结合。

图24和图25总结了这18种组合替换变体的C5结合性质。图24显示了相对于mAb结合信号的C5结合的比值，并且图25分别显示了在从结合阶段切换至解离阶段后，在pH 7.4和pH 5.8中结合信号从峰值降低的％。对于任何给定的突变体，图24上的高比值是优选的；并且图25上pH 7.4时较低的解离％(交叉线柱)和pH 5.8时较高的解离％(方格柱)是优选的。

实施例2

基于最大pH 7.4vs pH 5.8结合差异以及最好的pH 7.4结合，将变体IWW、IFW、FME和FMW选为V1-8/L1-9的前4个三重突变克隆以用于进一步表征。实施了亲合力成熟项目的其他分析和数据挖掘并将CDR2位置9处T向His的突变识别为修复V1-8/L1-9的pH 7.4结合的另一种有前景的随机突变(图26至图28)。将IWW、IFW、FME和FMW选为V1-8/L1-9的前4个三重突变克隆。表达IWW、IFW、FME和FMW并纯化蛋白以确认pH依赖性结合性质。还在溶血测定中测试了C5抑制活性(图29、图30、图32至图34)。将以上4种三重突变体与新的His突变(VH的CDR2，位置9，T向H的突变)进一步组合以产生4种四重突变体(IWWH、IFWH、FMEH和FMWH；例如，图31)。测试了这些新的突变体它们的pH依赖性结合性质和C5抑制活性。其中，相对于其三重突变体母体分子FME，将四重突变体FMEH识别为改善的突变体(图35至图37)。

除了实施例1中所描述的并且通过流体动力学注射产生以体内测试一些抗C5 mAb的工程化突变体的PK/PD的NOD/SCID小鼠上的C5人源化小鼠之外，还在SCID/FcRn转基因小鼠的背景上产生了C5人源化小鼠(人FcRn转基因和小鼠FcRn敲除)。后一种株使得能够测试具有IgG4抗体构建体的进一步工程化的Fc结构域(Fc结构域中的3个突变)的pH依赖性抗C5 mAb突变体的综合效果(图38和图39)。

使用SCID/FcRn转基因背景上的C5人源化小鼠，还测试了H1-8/L1-9三重突变体IFW、FMW，以及处于在Fc结构域中具有3个残基突变的IgG4形式(PLA)的FMEH的PK/PD。数据显示相对于原始人源化抗C5 mAb 11801(从中获得了H1-8/L1-9)改善的PK/PD活性(图40至图42)。

实施例3

补体激活包括靶标识别和蛋白水解切割的级联。它可以通过3种不同通路激活，所有通路在C3激活步骤汇合(图43)。这些通路是经典通路、替代通路和凝集素通路(图43)。通过抗原抗体复合物激活CP，并且其包括在C3激活步骤与其他通路合并前的后续C1和C4/C2激活。一旦它们结合至微生物表面糖分子，则通过某些模式识别分子，如MBL、胶原凝集素和纤维胶凝蛋白引发LP。它包括MASP的激活，其随后切割C4/C2并在C3激活步骤加入另一通路(图43)。由于C3的自发水解和激活以产生C3(H2O)，AP是处于低水平的组成型活性的。后者可以与因子B结合，并且一旦通过因子D的蛋白水解激活，则产生初始C3切割酶复合物C3(H2O)Bb(图43)。在不存在调节蛋白的情况下，C3(H2O)Bb复合物的产物C3b可以以与C3(H2O)相同的方式与因子B结合，并因此开始自放大C3激活的另一个循环。

通过3种通路中任一种的C3的激活将始终引发替代通路。因此，在多种补体介导的疾病中，抑制替代通路的激活是至关重要的。C3激活还导致C5-切割酶复合物的产生并起始末端补体激活通路，从而以有效促炎介体C5a和可以引起细胞胞溶和死亡的膜攻击复合物C5b-9的产生告终。为了防止补体导致无差别损伤，宿主细胞表达一些起作用以阻断补体激活和增强的膜-锚定调控因子。这些调控因子，包括衰减加速因子(DAF，CD55)和MCP中的一些起作用以抑制C3激活，而其他调控因子，如CD59在补体激活级联的其他步骤起作用。除膜-锚定补体调控因子外，还存在起作用以优先保护宿主组织的处于血液中的流体相调控因子(fluid phase regulators)。流体相抑制剂包括FH和因子I(FI)，它们是补体激活的替代通路的关键抑制剂，和C4BP和C1抑制剂(C1INH)，它们抑制补体激活的经典通路。流体相和膜-锚定补体调节蛋白两者通常由多个保守SCR结构域组成。例如，FH由20个SCR组成(图44)并且DAF(CD55)的胞外片段含有5个SCR结构域。

FH通过用作FI介导的C3b切割的辅因子并且通过加速C3bBb复合物衰减来抑制替代通路的补体激活，这两种机制防止了AP的放大环路。结构-功能研究已显示在FH内，补体调节活性位于SCR1-5，然而其他SCR结构域，特别是SCR19-20在宿主细胞和表面-沉积的C3b的识别中起重要作用。同样地，DAF(CD55)和MCP(CD46)的胞外SCR结构域已显示负责它们的补体抑制活性，并且已证明DAF和MCP或它们的鼠科同源物的可溶性形式具有补体调节活性。导致补体调节蛋白的不表达或缺陷功能的突变与一些补体依赖性疾病有关。例如，参与GPI锚定生物合成的酶中的基因突变导致PNH患者受影响的造血干细胞和相应红细胞(RBC)、血小板和白细胞上DAF和CD59的表达缺乏。这导致了替代通路介导的补体攻击和受影响的PNH RBC的溶胞以及血小板激活，从而导致了PNH患者中的破坏性疾病病变，如贫血症和血栓形成。同样地，编码FH和MCP的基因中的突变与aHUS有关。目前，在临床上用人源化抗C5 mAb药物依库珠单抗作为标准疗法治疗PNH和aHUS两者。然而，仍存在显著未满足的医学需要并且仍期望在PNH和aHUS的治疗中以及在其他补体介导的疾病中开发更有效且更方便的抗补体药物。

开发靶向补体蛋白的药物的困难之一在于它们的高血浆浓度和/或快速周转(turnover)。例如，人类C3和C5的血浆浓度分别为约1mg/mL和80μg/mL。这表示需要以高剂量和/或频率施用这些蛋白的抑制剂。的确，在PNH和aHUS患者中需要每两周分别以900mg和1200mg的维持剂量通过静脉注射施用抗C5 mAb药物依库珠单抗。尽管已开发了更持久的第二代抗C5 mAb雷夫利珠单抗以将注射频率减轻至每8周，但是雷夫利珠单抗的维持剂量增加至每次注射3600mg。此外，依库珠单抗和雷夫利珠单抗均不能使PNH患者中的LDH和血红蛋白水平正常化。在接受标准依库珠单抗疗法的PNH患者中，经常观察到突破溶胞(breakthrough lysis)并且20-30％的患者仍是输血依赖的。PNH患者中这些未满足的医学需要与以下事实有关：受影响的血细胞上的DAF和CD59的缺陷使它们对于C3激活以及MAC介导的损伤敏感。尽管抗C5 mAb，如依库珠单抗和雷夫利珠单抗可以抑制C5介导的溶血，但是它们不防止受影响的RBC上的C3激活，并因此RBC的C3b的调理作用仍发生并且这导致了很好识别的EVH现象，它是由网状内皮系统中C3b-调理的RBC的吞噬所造成的过程。另外，研究已表明在C5步骤阻断RBC上的补体激活在效力方面具有它的限制，因为如果过多C5转化酶在细胞表面上组装，则它变得不可能通过具有有限亲合力的mAb完全阻断C5切割。这可以解释用依库珠单抗治疗的PNH患者中的突破溶胞现象以及为何抗C5 mAb不能在离体测定中防止兔和PNH RBC细胞的完全溶血，因为PNH和兔RBC两者对通过AP的C3补体激活非常敏感，并且可以容易地在表面上组装大量C5转化酶。尽管仍努力在补体依赖性疾病中靶向C3激活，例如，通过使用C3抑制性环肽或FH的重组短变体，但是这些分子具有非常差的药物动力学并且需要大量且频繁(例如，每天)的剂量施用。

本发明部分描述了通过向VH和VL引入突变在人源化抗C5 mAb药物中的改善，以获得对人类C5的pH依赖性结合，从而改善其药物动力学，但不损害所述mAb的C5阻断活性。如在SCID/人FcRn转基因小鼠上的C5人源化小鼠中所评价的，当与IgG4 Fc结构域突变组合时，VH和VL中的这些突变产生了显著改善的药物动力学和药效学。

本发明的策略部分基于抗C5 mAb-FH融合蛋白的概念。在FH中使用SCR结构域1-5，如以上所介绍的，它们是参与调节C3激活的域。由于它非常大且是复杂的糖蛋白，因此目标不是制备具有全长FH的融合蛋白，并且具有抗C5 mAb的完整融合蛋白的生产将是困难的。将FH的N末端SCR 1-5连接至人IgG4的Fc结构域的C末端(图44)。在Fc和FH片段之间不存在添加的接头，在IgG4 Fc的最后一个氨基酸之后，将其直接连接至成熟FH的N末端序列。这种抗C5 mAb融合蛋白是双功能的，它起到常规抗C5 mAb的作用以阻断C5活性，并且FH域起到C3补体激活抑制剂的作用。

这种构建体的另一个重要优势在于它使用持久性(再循环)抗C5 mAb来构建FH融合蛋白。将持久性抗C5 mAb工程化以具有对C5的pH依赖性结合(在pH 5.8时从C5的解离比在pH 7.4时更快)，并且偶联了IgG4 Fc结构域突变(S228P、M428L和N434A，称为PLA)。

本文所提供的数据包括基于抗C5 mAb FMEH-IgG4PLA的抗C5 mAb-FH融合蛋白的VH和VL序列(图45和图46)。SDS凝胶显示了显示出预期较大尺寸并且具有优良完整性的融合蛋白的表达VH链(图47)。

mAb-FH融合蛋白仍维持了亲代抗C5 mAb的pH依赖性结合性质(图48和图49)，这是至关重要的，因为这些融合蛋白需要表现为持久药物，这与亲代抗C5 mAb(例如，FMEH)类似。在抑制兔RBC(图50)和PNH RBC溶胞(图57)中，抗C5 mAb-FH融合蛋白比它们相应的亲代mAb(例如，FMEH-IgG4PLA vs FMEH-IgG4PLA-FH SCR1-5)和基准常规抗C5 mAb(依库珠单抗和雷夫利珠单抗)更有效。抗C5 mAb-融合蛋白，而不是相应亲代抗mAb或基准抗C5 mAb(依库珠单抗和雷夫利珠单抗)进一步显示抑制兔和PNH RBC的C3调理作用(图51和图58)。

此外，抗C5 mAb-FH融合蛋白已证实在C5人源化小鼠中具有比常规基准抗C5 mAb(依库珠单抗)更好的PK(半衰期)和与第二代持久性基准抗C5 mAb(雷夫利珠单抗)类似的PK，但是在兔RBC溶胞测试中，具有比两种基准抗C5 mAb更好的PD(药效学)(由于其双功能性)(图52至图56)。

现将描述在本实施例中使用的材料和方法。

用于小鼠中人类C5的检测的夹心ELISA：用于在流体动力学注射人类C5 cDNA质粒后检测表达人类C5的NOD/SCID或FcRn/SCID小鼠中的人类C5的夹心ELISA：在37℃，用最终浓度为2μg/mL的在碳酸氢盐缓冲液中的抗人类C5抗体(Quidel,A217)涂覆96-孔板1小时。在用含有0.05％吐温-20的PBS清洗后，将板在RT下与封闭溶液中的稀释的血浆样品培育1小时。在清洗后，将板与生物素化的抗人类C5 mAb 9G6一起在封闭溶液中，在RT下培育1小时，再次清洗并与缀合至辣根过氧化物酶的抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素(BD pharmigen)一起在封闭溶液中，在RT下培育1小时。在最后一次清洗之后，用HRP底物使所述板显色3min。用2N H2SO4终止反应，并在微量酶标仪中在450nm下读取所述板。用于小鼠中人IgG4检测的夹心ELISA。

用于人IgG4检测的夹心ELISA：用于检测用抗人类C5 IgG4 mAb或者抗C5 mAb-FH SCR1-5融合蛋白处理的小鼠中的人IgG4的夹心ELISA：在37℃，用最终浓度为2μg/mL的在碳酸氢盐缓冲液中的抗人κ轻链抗体(Antibody Solutions,AS75-P)涂覆96-孔板1小时。在用含有0.05％吐温-20的PBS清洗3次后，将板在RT下与封闭溶液中的稀释的血浆样品培育1小时。清洗后，将所述板与抗人IgG4 HRP(1:2000稀释，Invitrogen，A10654)在封闭溶液中，在RT下培育1小时。清洗后，用HRP底物使所述板显色3min。用2N H2SO4终止反应，并在微量酶标仪中在450nm下读取所述板。

用于用抗人类C5 IgG4-FH1-5融合蛋白处理的小鼠中人IgG4-FH1-5融合蛋白的检测的夹心ELISA：在37℃，以2μg/mL的最终浓度，用碳酸氢盐缓冲液中的抗人κ轻链抗体(Antibody Solutions,AS75-P)涂覆96-孔板1小时。在用含有0.05％吐温-20的PBS清洗3次后，将板在37℃下与封闭溶液一起培育1小时。清洗后，将板在RT下与封闭溶液中的稀释的血浆样品一起培育1小时。清洗后，将所述板与生物素缀合的抗人FH(1:100稀释，Thermo Scientific,MA5-17735)在封闭溶液中，在RT下培育1小时。清洗后，将所述板与抗生蛋白链菌素-HRP(1:1000稀释，BD Biosciences,554066)在封闭溶液中，在RT下培育1小时。清洗后，用HRP底物(Thermo Scientific,34029)使所述板显色3min。用2N H2SO4终止反应，并在微量酶标仪中在450nm下读取所述板。

用于小鼠血浆样品中完整FMEH-IgG4PLA-FH1-5融合蛋白的检测的夹心ELISA：在37℃，以2μg/mL的最终浓度，用碳酸氢盐缓冲液中的抗人κ轻链抗体(Antibody Solutions,AS75-P)涂覆96-孔板1小时。在用含有0.05％吐温-20的PBS清洗3次后，将板在37℃下与封闭溶液一起培育1小时。清洗后，将板在RT下与封闭溶液中的稀释的血浆样品一起培育1小时。清洗后，将所述板与生物素缀合的抗人因子-H抗体(1:100稀释，Thermo Scientific,MA5-17735)在封闭溶液中，在RT下培育1小时。清洗后，将所述板与抗生蛋白链菌素-HRP(1:1000稀释，BD Biosciences,554066)在封闭溶液中，在RT下培育1小时。清洗后，用HRP底物(Thermo Scientific,34029)使所述板显色3min。用2N H2SO4终止反应，并在微量酶标仪中在450nm下读取所述板。

绵羊红细胞溶胞测试：在37℃，将绵羊RBC(在PBS中制备的1×10⁷个细胞/测定样品，Complement Technology Inc)与明胶佛罗那缓冲液(GVB2+，Sigma；总测定体积：100μL)中的50％的正常人血清(NHS，来自Complement Technology Inc)培育20min。在添加至绵羊RBC之前，将NHS与抗C5 mAb在4℃预培育1小时。通过添加冰冷的40mM EDTA的PBS溶液终止溶胞反应。将培育混合物以1500rpm离心5min，并且收集上清液并测量OD405nm。将未添加NHS或者添加EDTA的样品用作阴性溶胞对照，并且将用蒸馏水完全溶胞的绵羊RBC样品用作阳性对照(100％溶胞)，将其他样品中的溶胞％对它们进行归一化。

鸡红细胞溶胞测定：用抗鸡兔RBC抗体(Rockland Immunochemicals Inc#103-4139)(150μg/mL)使鸡RBC(Rockland Immunochemicals Inc#R401-0050)敏化30min并用GVB缓冲液清洗两次。将用mAb BB5.1预处理以阻断鼠科C5活性的C5人源化小鼠来匹卢定血浆和消除C5的人血清(Quidel#A501)样品在GVB缓冲液中稀释至10％(即5mL至50mL最终测定体积)并与5mL抗体敏化的cRBC细胞μl(5×10⁸/mL)以50mL的最终体积混合，并在37℃培育30min。用100mL冷的10mM EDTA在PBS中的溶液终止反应。将细胞在4℃以1500rpm离心5min。在405测量收集的上清液的OD。

兔红细胞溶胞测试：将兔RBC(Rockland Immunochemicals Inc cat#R403-0100)(在PBS中制备的1×10⁷个细胞/测定样品，Complement Technology Inc)在37℃与明胶佛罗那缓冲液(GVB2+EGTA，Sigma；总测定体积：100μL)中的25％的正常人血清(NHS，来自Complement Technology Inc)或者50％的食蟹猴血清(CMS，Innovative research)培育30min。在添加至兔RBC之前，将NHS或CMS与抗C5 mAb或者抗C5 mAb-fH SCR1-5融合蛋白在4℃预培育1小时。通过添加冰冷的40mM EDTA的PBS溶液终止溶胞反应。将培育混合物以1500rpm离心5min，并且收集上清液并测量OD405nm。将未添加NHS或CMS或者添加EDTA的样品用作阴性溶胞对照，并且将用蒸馏水完全溶胞的兔RBC样品用作阳性对照(100％溶胞)，将其他样品中的溶胞％对它们进行归一化。

使用用于药效学研究的杂交的人和小鼠补体系统的兔红细胞溶胞测试：为了测试多种抗hC5 mAb和它们的fH SCR1-5融合蛋白在C5人源化FcRn/SCID小鼠中的药效学，使用与测试C5人源化FcRn/SCID小鼠的血浆(作为人类C5的来源)混合的消除C5的人血清进行rRBC溶胞测定。用2种抗小鼠C5抗体BB5.1和21A9(在最终反应中分别为400μg/mL)阻断测定混合物中的小鼠C5。将小鼠来匹卢定血浆和消除C5的人血清(Quidel#A501)样品在GVB EGTA缓冲液中稀释至10％并与5μL兔RBC细胞μl(5×10⁸/mL)在50μL的最终体积中混合，并在37℃培育30min。通过用100μL冷的10mM EDTA在PBS中的溶液终止反应。将细胞在4℃以1500rpm离心5min。测量收集上清液在405的OD。

人类C5转座子质粒构建：将来自pCMV Sport6的C5 cDNA在EcoRI位点亚克隆至pCAGGS载体。在Hinc II位点SB IR/DR(L)转座子识别序列的增强子的5'位点和在rBG Stu I位点SB IR/DR(R)识别序列之后的3'位点通过infusion克隆法进行克隆。对于向NOD/SCD小鼠的流体动力学注射，通过尾静脉注射2μg pCMV-T7-SB100质粒和25μg在具有转座子位点的pCAGGS中的hC5。在第1天后，通过hC5 ELISA核对转染效率。到注射后2周，通过hC5 ELISA再次检查稳定整合。

组氨酸扫描：人源化mAb 2G1(VH-11801和VL-1901)的组氨酸扫描：将HEK细胞置于24孔板中并使用8μL X-TremeGene HP DNA转染试剂(Roche#6366546001)，用1μg VH和2μg VL质粒转染。转染后2天收集上清液并用于Octet测定。在Octet Red E仪(ForteBio Inc.)上通过生物膜干涉测量法分析11801组氨酸突变体的pH依赖性解离。抗人IgG生物传感器(ForteBio#18-5060)。通过将它们在200μL转染上清液中浸没600秒，将抗体捕获到传感器上。随后，将这些生物传感器与hC5培育600秒，然后在pH 7.4和pH 5.8解离。

简约诱变：为了识别改善pH 7.4时的C5结合的点氨基酸替换突变，通过定点突变将mAb H1-8/L1-9的所有6个互补决定区(CDR)单个突变至其他19种氨基酸。通过(Agilent)或者定点突变(NEB)，将每个位置的寡核苷酸编码的设计的突变用于向靶向CDR位置引入突变。为了筛选结合改善的变体，从每个转染反应挑选88个克隆并且在捕获ELISA中测试从大肠杆菌(E.coli)细胞培养基中分泌的scFv。在捕获ELISA中，将抗Fd抗体的滴定的量用于涂覆所述孔以从细菌上清液捕获scFv。在此之后，与生物素化的抗原一起培育。使用HRP缀合的抗Lc抗体，然后与TMB底物培育来检测结合信号。用0.2M H2SO4使所述反应淬灭，并在450nm读取板。挑选显示出光密度(OD)450nm信号大于亲代克隆的克隆。重复两次通过ELISA重新测定来自再次生长的上清液的scFv(如上)以确认阳性结果。在其中将抗原涂覆在ELISA孔中的直接结合ELISA中进一步确认了结合改善的克隆，并且使用了通过scFv定量ELISA确定的scFv的计算量。对反复显示出大于亲代scFv结合的克隆测序。

pH依赖性结合/解离的测量：亲合成熟的H1-8L1-9抗C5 mAb突变体和相应FH SCR 1-5融合蛋白的pH依赖性结合：将2-3×10⁶/mL ExpiCHO接种到24孔板中，并使用8μL X-TremeGene HP DNA转染试剂(Roche#6366546001)，用2μg VH和4μg VL质粒转染。转染后2天收集上清液并用于Octet测定。在Octet Red E仪(ForteBio Inc.)上通过生物膜干涉测量法分析组氨酸突变体的pH依赖性解离。用3μg/mL捕获-选择生物素抗人IgG 4 fab(Thermo fisher#7102902100)涂覆抗生蛋白链菌素生物传感器(ForteBio#18-5019)250-300秒并用2mM生物胞素淬灭600秒。将这些生物传感器与10μg/mL hC5(Complement tech#A320)培育600秒以饱和hC5对生物传感器的非特异性结合。通过将它们在200μL转染上清液中浸没600秒，将抗体捕获到传感器上。随后，将这些生物传感器与hC5培育600秒，然后在pH 7.4和pH 5.8解离。

大规模转染：大规模ExpiCHO转染规程：对于用于体内研究的mAb和mAb-FH融合蛋白的大规模生产，根据生产商的说明，使用最大滴度规程，使用了ExpiCHO转染系统(Gibco#A29133)。对于200mL的Expi CHO培养基，将150μg VH和300μg VL用于转染。

FMEH-IgG4PLA和FMEH-IgG4PLA-FH1-5对人或食蟹猴FcRn的亲和力分析：使用BIAcore 3000仪(Biacore AB,Uppsala,Sweden)将表面等离子共振分析用于测量FMEH-IgG4PLA和FMEH-IgG4PLA-FH1-5与固定化人或犬FcRn的结合的结合和解离速率常数，并且所有Biacore实验是在25℃下进行的。通过胺偶联化学，使用CM5传感器芯片的羧酸化葡聚糖基质来偶联纯化的人或犬FcRn以分别获得280RU或200RU的表面密度。将FMEH-IgG4PLA或者FMHE-IgG4PLA-FH1-5在HBS(HEPES缓冲盐水)缓冲液中稀释至200、100、50、25、12.5和0nM，并且将样品注入200s，并且使结合的分析物的解离进行300s。通过BIA评价软件3.2，采用二价结合模型来分析数据。

C5-人源化小鼠中完整FMEH-IgG4PLA-FH1-5融合蛋白的药物动力学的确定：通过眶后途径，向C5和FcRn人源化SCID小鼠注射40mg/kg剂量的FMEH-IgG4PLA-FH1-5融合蛋白。如数据图中所指明的，在药物施用后的多个时间点收集EDTA血浆。

通过SDS-PAGE的FMEH-IgG4PLA-FH1-5的鉴定：使用SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)鉴定FMEH-IgG4PLA-FH1-5蛋白。FMEH-IgG4PLA-FH1-5处于具有或不具有还原剂的PBS缓冲液中。在99℃，将样品加热10min，并且将5μg蛋白标志物和2μg还原和非还原样品加载至12％SDS-PAGE凝胶中。将凝胶在80v下运行30min，然后在170v运行1h，然后将凝胶在考马斯亮蓝-R-250溶液中染色。使凝胶脱色并使用Gel Doc XR成像系统(Bio-Rad Laboratories,Inc.,USA)成像。

通过SEC-HPLC的FMEH-IgG4PLA-FH1-5的纯度分析：将SEC-HPLC(尺寸排阻色谱-高效液相色谱)用于测量FMEH-IgG4PLA-FH1-5蛋白的纯度。在实验中使用了LC-20AT HPLC系统(Shimadzu Scientific Instruments,Japan)和TSK凝胶G3000SWXL柱(Tosoh Corporation,Japan)。在柱温箱温度35℃，流速1mL/min和流动相PBS(磷酸盐缓冲盐水)的工作条件下进行SEC-HPLC实验。将TSK凝胶G3000SWXL柱连接至LC-20AT HPLC系统并用PBS平衡。将0.242mg FMEH-IgG4PLA-FH1-5蛋白溶液进样并在214nm检测吸光值15min。通过Lab Solutions软件分析数据。

FMEH-IgG4PLA-FH1-5对人和食蟹猴C5的结合亲和力分析：将生物膜干涉技术用于测量FMEH-IgG4PLA和FMEH-IgG4PLA-FH1-5对可溶性人和食蟹猴C5的结合性(binding)结合和解离速率常数。使用Bio-Layer Interferometry Gator(Probe Life Inc.China)并且所有实验均在30℃进行。将HFC(抗HIgG Fc)探针在K缓冲液(磷酸盐缓冲盐水，含有牛血清白蛋白)中浸渍300秒。然后，将HFC探针在FMEH-IgG4PLA-FH1-5中浸渍以获得1nm表面密度。在K缓冲液中的200-秒基线浸渍后，将HFC探针在含有不同浓度(40、20、10、5、2.5、1.25和0.625nM)的纯化的人或食蟹猴C5的溶液中浸渍，然后是在K缓冲液中的600秒解离期。在pH 7.4或pH 5.8缓冲条件下进行实验以确定pH对结合动力学的影响。使用1:1结合模型，通过Gator评价软件(Probe Life Inc.,China)分析数据。

FMEH-IgG4PLA-FH1-5的分子量分析：将质谱用于测量FMEH-IgG4PLA-FH1-5的分子量。在实验中使用了U3000 UPLC系统和Q Exactive Plus质谱仪(Thermo Fisher Scientific Inc.,USA)。使用肽-N-糖苷酶F(Peptide-N-Glycosidase F)制备了去糖基化的FMEH-IgG4PLA-FH1-5，并且使用二硫苏糖醇制备了还原的FMEH-IgG4PLA-FH1-5。如生产商所描述的，分别通过LC-MASS分离并检测了完整的去糖基化和还原的FMEH-IgG4PLA-FH1-5。通过Biopharma Finder软件(Thermo Fisher Scientific Inc.,USA)分析数据。

PNH患者RBC溶胞测定：将PNH RBC在AP缓冲液中混悬(GVB+5mM Mg²⁺+20mM EGTA，pH 6.4)，然后在37℃与0.2M在明胶佛罗那缓冲液(Complement Technology,Texas USA)中的HCl酸化的正常人血清一起培育40min。将NHS与FMEH-IgG4PLA-FH1-5、依库珠单抗或雷夫利珠单抗在4℃预培育1小时。然后，将HCl-处理的(0.2M)PNH RBC和预培育的抗体血清在试管中混合并培育xxx min。总反应体积为50μl。通过添加冰冷的40mM EDTA的PBS溶液终止溶胞反应。将培育混合物以1500rpm离心5min，并且收集上清液并测量OD405nm。将添加EDTA的样品用作阴性溶胞对照，并且将用蒸馏水完全溶胞的PNH RBC样品用作阳性对照(100％溶胞)。使用公式(OD405(特异性ab浓度)-OD405(40mM EDTA))/((OD405(水)-OD405(40mM EDTA))*100％，计算溶胞％。

C3b沉积分析：在RBC溶胞测定后，通过离心收集未溶胞的RBC。用PBS清洗细胞，然后在PBS缓冲液中再混悬。添加APC标记的抗C3b抗体(Biolegend,California USA)，并在冰上避光培育30min。对C3b+染色的细胞设门并使用流式细胞仪CytoFLEX(Beckman Coulter,Suzhou,China)或者FACSCelesta(BD Biosciences,California USA)分析。ND表示未检出。

本文所引用的每篇专利、专利申请和专利公开的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。

尽管已参考具体实施方式公开了本发明，但是显然在不背离本发明的真正精神和范围的情况下，本领域其他技术人员可以设计本发明的其他实施方式和变化。所附权利要求旨在视为包括所有这些实施方式和等价变化。

序列表

<110> 宾夕法尼亚大学理事会(The Trustees of the University of Pennsylvania)

宋文超(Song, Wenchao)

三轮隆史(Miwa, Takashi)

达莫达·古尔莉帕利(Gullipalli, Damodar)

佐藤纱也加(Sato, Sayaka)

崔平(Tsui, Ping)

朱英杰(Zhu, Yingjie)

朱细华(Zhu, Xihua)

<120> 双功能人源化抗C5抗体和因子H融合蛋白以及它们的用途

<130> 046483-6180-00WO

<150> US 62/837,853

<151> 2019-04-24

<160> 84

<170> PatentIn 版本 3.5

<210> 1

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801

<400> 1

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac tacaatttgg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtcctaact atggttatac tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgatgtct ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 2

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801（氨基酸）

<400> 2

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1人源化2G1 VH-11801（氨基酸）

<400> 3

Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr Asn Leu Asp

1 5 10

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2人源化2G1 VH-11801（氨基酸）

<400> 4

Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

<210> 5

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR3人源化2G1 VH-11801（氨基酸）

<400> 5

Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10 15

<210> 6

<211> 428

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901

<400> 6

gtcagagccc tggggaggaa ctgctcagtt aggacccaga gggaaccatg gaagccccag 60

ctcagcttct cttcctcctg ctactctggc tcccagatac caccggagac atccagttga 120

cccagtctcc atccttcctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc acttgcagga 180

caagtaagag cataagcaaa tatttagcct ggtatcagca aaaaccaggg aaagccccta 240

agctcctgat ctattctgga tccaccttgc aatctggggt cccatcaagg ttcagcggca 300

gtggatctgg gacagaattc actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa gattttgcaa 360

cttattactg tcaacaacat aatgaatacc cgtacacgtt tggccagggg accaagctgg 420

agatcaaa 428

<210> 7

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901（氨基酸）

<400> 7

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Lys Ser

35 40 45

Ile Ser Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

50 55 60

Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn

100 105 110

Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

<210> 8

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1人源化2G1 VL-1901（氨基酸）

<400> 8

Arg Thr Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2人源化2G1 VL-1901（氨基酸）

<400> 9

Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR3人源化2G1 VL-1901（氨基酸）

<400> 10

Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR3人源化2G1 VL-1901变体（CDR3中的Q->H突变）（氨基酸）

<400> 11

His Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 12

<211> 428

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901变体（CDR3中的Q->H突变）

<400> 12

gtcagagccc tggggaggaa ctgctcagtt aggacccaga gggaaccatg gaagccccag 60

ctcagcttct cttcctcctg ctactctggc tcccagatac caccggagac atccagttga 120

cccagtctcc atccttcctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc acttgcagga 180

caagtaagag cataagcaaa tatttagcct ggtatcagca aaaaccaggg aaagccccta 240

agctcctgat ctattctgga tccaccttgc aatctggggt cccatcaagg ttcagcggca 300

gtggatctgg gacagaattc actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa gattttgcaa 360

cttattactg tcatcaacat aatgaatacc cgtacacgtt tggccagggg accaagctgg 420

agatcaaa 428

<210> 13

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901变体（CDR3中的Q->H突变）（氨基酸）

<400> 13

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Lys Ser

35 40 45

Ile Ser Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

50 55 60

Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln His Asn

100 105 110

Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

<210> 14

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1人源化2G1 VL-1901变体（CDR1中的T->H突变）（氨基酸）

<400> 14

Arg His Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 15

<211> 428

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901变体（CDR1中的T->H突变）

<400> 15

gtcagagccc tggggaggaa ctgctcagtt aggacccaga gggaaccatg gaagccccag 60

ctcagcttct cttcctcctg ctactctggc tcccagatac caccggagac atccagttga 120

cccagtctcc atccttcctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc acttgcaggc 180

atagtaagag cataagcaaa tatttagcct ggtatcagca aaaaccaggg aaagccccta 240

agctcctgat ctattctgga tccaccttgc aatctggggt cccatcaagg ttcagcggca 300

gtggatctgg gacagaattc actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa gattttgcaa 360

cttattactg tcaacaacat aatgaatacc cgtacacgtt tggccagggg accaagctgg 420

agatcaaa 428

<210> 16

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901变体（CDR1中的T->H突变）（氨基酸）

<400> 16

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg His Ser Lys Ser

35 40 45

Ile Ser Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

50 55 60

Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn

100 105 110

Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

<210> 17

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1人源化2G1 VH-11801变体（CDR1中的I->H突变）

（氨基酸）

<400> 17

Arg His Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 18

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801变体（CDR1中的I->H突变）

<400> 18

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac acatacagac tacaatttgg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtcctaact atggttatac tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgatgtct ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 19

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801变体（CDR1中的I->H突变）（氨基酸）

<400> 19

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr His

35 40 45

Thr Asp Tyr Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 20

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1人源化2G1 VH-11801变体（CDR1中的N->H突变）

（氨基酸）

<400> 20

Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr His Leu Asp

1 5 10

<210> 21

<211> 481

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801变体（CDR1中的N->H突变）

<400> 21

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatttgg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtcctaact atggttatac tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgatgtct ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

c 481

<210> 22

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801变体（CDR1中的N->H突变）（氨基酸）

<400> 22

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr His Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 23

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1人源化2G1 VL-1901变体（CDR1中的Y->H突变）（氨基酸）

<400> 23

Arg Thr Ser Lys Ser Ile Ser Lys His Leu Ala

1 5 10

<210> 24

<211> 428

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901变体（CDR1中的Y->H突变）

<400> 24

gtcagagccc tggggaggaa ctgctcagtt aggacccaga gggaaccatg gaagccccag 60

ctcagcttct cttcctcctg ctactctggc tcccagatac caccggagac atccagttga 120

cccagtctcc atccttcctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc acttgcagga 180

caagtaagag cataagcaaa catttagcct ggtatcagca aaaaccaggg aaagccccta 240

agctcctgat ctattctgga tccaccttgc aatctggggt cccatcaagg ttcagcggca 300

gtggatctgg gacagaattc actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa gattttgcaa 360

cttattactg tcaacaacat aatgaatacc cgtacacgtt tggccagggg accaagctgg 420

agatcaaa 428

<210> 25

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901变体（CDR1中的Y->H突变）（氨基酸）

<400> 25

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Lys Ser

35 40 45

Ile Ser Lys His Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

50 55 60

Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn

100 105 110

Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

<210> 26

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2人源化2G1 VH-11801变体（CDR2中的Y->H突变）

<400> 26

Asp Ile Ser Pro Asn His Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 27

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801变体（CDR2中的Y->H突变）

<400> 27

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac tacaatttgg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtcctaacc atggttatac tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgatgtct ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 28

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801变体（CDR2中的Y->H突变）（氨基酸）

<400> 28

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Pro Asn His Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 29

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR3人源化2G1 VL-1901变体（CDR3中的E->H突变）（氨基酸）

<400> 29

Gln Gln His Asn His Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 30

<211> 428

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901变体（CDR3中的E->H突变）

<400> 30

gtcagagccc tggggaggaa ctgctcagtt aggacccaga gggaaccatg gaagccccag 60

ctcagcttct cttcctcctg ctactctggc tcccagatac caccggagac atccagttga 120

cccagtctcc atccttcctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc acttgcagga 180

caagtaagag cataagcaaa tatttagcct ggtatcagca aaaaccaggg aaagccccta 240

agctcctgat ctattctgga tccaccttgc aatctggggt cccatcaagg ttcagcggca 300

gtggatctgg gacagaattc actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa gattttgcaa 360

cttattactg tcaacaacat aatcattacc cgtacacgtt tggccagggg accaagctgg 420

agatcaaa 428

<210> 31

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VL-1901变体（CDR3中的E->H突变）（氨基酸）

<400> 31

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Lys Ser

35 40 45

Ile Ser Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

50 55 60

Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn

100 105 110

His Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

<210> 32

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG4重链恒定区（氨基酸）

<400> 32

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 33

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG4重链恒定区，具有S228P突变（氨基酸）

<400> 33

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 34

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2 人源化2G1 VH-11801 variant (T->H mutation in CDR2)

<400> 34

Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 35

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801 variant (T->H mutation in CDR2)

<400> 35

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac tacaatttgg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtcctaact atggttatca tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgatgtct ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 36

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化2G1 VH-11801变体（CDR2中的T->H突变）（氨基酸）

<400> 36

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 37

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1 IWW-VH（氨基酸）

<400> 37

Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr His Ile Asp

1 5 10

<210> 38

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2 IWW-VH（氨基酸）

<400> 38

Asp Ile Ser Trp Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 39

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR3 IWW-VH（氨基酸）

<400> 39

Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys Trp Tyr Phe Asp Trp

1 5 10 15

<210> 40

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IWW-VH

<400> 40

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatatcg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agttggaact atggttatac tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgattggt ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 41

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IWW-VH（氨基酸）

<400> 41

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr His Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Trp Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Trp Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 42

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1 IFW-VH（氨基酸）

<400> 42

Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr His Ile Asp

1 5 10

<210> 43

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2 IFW-VH（氨基酸）

<400> 43

Asp Ile Ser Phe Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 44

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR3 IFW-VH（氨基酸）

<400> 44

Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys Trp Tyr Phe Asp Trp

1 5 10 15

<210> 45

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IFW-VH

<400> 45

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatatcg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtttcaact atggttatac tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgattggt ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 46

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IFW-VH（氨基酸）

<400> 46

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr His Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Phe Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Trp Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 47

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1 FME-VH（氨基酸）

<400> 47

Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr His Phe Asp

1 5 10

<210> 48

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2 FME-VH（氨基酸）

<400> 48

Asp Ile Ser Met Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 49

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR3 FME-VH（氨基酸）

<400> 49

Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys Trp Tyr Phe Asp Glu

1 5 10 15

<210> 50

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> FME-VH

<400> 50

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatttcg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtatgaact atggttatac tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgatgagt ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 51

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FME-VH（氨基酸）

<400> 51

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr His Phe Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Met Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 52

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR1 FMW-VH（氨基酸）

<400> 52

Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr His Phe Asp

1 5 10

<210> 53

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2 FMW-VH（氨基酸）

<400> 53

Asp Ile Ser Met Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 54

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR3 FMW-VH（氨基酸）

<400> 54

Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys Trp Tyr Phe Asp Trp

1 5 10 15

<210> 55

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> FMW-VH

<400> 55

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatttcg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtatgaact atggttatac tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgattggt ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 56

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMW-VH（氨基酸）

<400> 56

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr His Phe Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Met Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Trp Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 57

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2 FMEH-VH（氨基酸）

<400> 57

Asp Ile Ser Met Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 58

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> FMEH-VH

<400> 58

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatttcg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtatgaact atggttatca tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgatgagt ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 59

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMEH-VH（氨基酸）

<400> 59

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr His Phe Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Met Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 60

<211> 984

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG4 Fc PLA域突变

<400> 60

gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60

agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 240

tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 300

aaatatggtc ccccatgccc accatgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 360

ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 420

tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 480

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 540

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 600

tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 660

gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 720

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 780

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 840

gacggctcct tcttcctcta cagcaggctc accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 900

aatgtcttct catgctccgt gctgcatgag gctctgcacg cccactacac acagaagagc 960

ctctccctgt ctctgggtaa atga 984

<210> 61

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人IgG4 Fc PLA域突变（氨基酸）

<400> 61

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 62

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2 IWWH-VH（氨基酸）

<400> 62

Asp Ile Ser Trp Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 63

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IWWH-VH

<400> 63

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatatcg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agttggaact atggttatca tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgattggt ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 64

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IWWH-VH（氨基酸）

<400> 64

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr His Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Trp Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Trp Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 65

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2 IFWH-VH（氨基酸）

<400> 65

Asp Ile Ser Phe Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 66

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IFWH-VH

<400> 66

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatatcg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtttcaact atggttatca tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgattggt ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 67

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IFWH-VH（氨基酸）

<400> 67

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr His Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Phe Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Trp Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 68

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR2 FMWH-VH（氨基酸）

<400> 68

Asp Ile Ser Met Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 69

<211> 482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> FMWH-VH

<400> 69

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatttcg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtatgaact atggttatca tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgattggt ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

ca 482

<210> 70

<211> 144

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMWH-VH（氨基酸）

<400> 70

Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile

35 40 45

Thr Asp Tyr His Phe Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Met Asn Tyr Gly Tyr His Ile Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys

115 120 125

Trp Tyr Phe Asp Trp Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 71

<211> 2384

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> FMEH-IgG4PLA-FH1-5的VH序列

<400> 71

cagcatatga tcagtgtcct ctccaaagtc cttgaacata gactctaacc atggactgga 60

cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag gttcagctgg 120

tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 180

ctggatacac aatcacagac taccatttcg actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 240

ttgagtggat gggagatatt agtatgaact atggttatca tatctacaac cagaaattca 300

aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg gagctgagga 360

gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt cgttactccg 420

gtaattccta caaatggtac ttcgatgagt ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt 480

cagctagcac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg agcacctccg 540

agagcacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt 600

cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct 660

caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacgaaga 720

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<210> 72

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 72

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<220>

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<210> 74

<211> 234

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMEH-IgG4-FH1-5的VL序列（氨基酸）

<400> 74

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<210> 75

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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gtaccgaaag tggatggcga ccactcccct catgcgaaga gaagtcctgt gataatccat 2220

acatccctaa tggtgattat tccccccttc gaataaagca tcggacagga gacgagatca 2280

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<210> 76

<211> 777

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IWWH-IgG4PLA-FH1-5的VH序列（氨基酸）

<400> 76

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530 535 540

Pro Phe Gly Thr Phe Thr Leu Thr Gly Gly Asn Val Phe Glu Tyr Gly

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565 570 575

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580 585 590

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660 665 670

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675 680 685

Lys Cys Asn Met Gly Tyr Glu Tyr Ser Glu Arg Gly Asp Ala Val Cys

690 695 700

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770 775

<210> 77

<211> 2384

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IFWH-IgG4PLA-FH1-5的VH序列

<400> 77

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ccaaatatgg tcccccatgc ccaccatgcc cagcacctga gttcctgggg ggaccatcag 840

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cgtgcgtggt ggtggacgtg agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg 960

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caccagaaaa cgggaaaatc gtatctagcg caatggagcc agaccgcgaa taccatttcg 1920

ggcaggcagt gaggtttgtt tgcaattccg gttataagat agaaggggat gaggagatgc 1980

actgtagcga cgatggtttt tggtccaagg aaaagcccaa gtgcgtcgaa ataagttgca 2040

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aacgatttca atataagtgt aatatggggt atgaatactc cgagagaggt gatgccgtct 2160

gtaccgaaag tggatggcga ccactcccct catgcgaaga gaagtcctgt gataatccat 2220

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ctacaggatg gatacctgcc ccacgatgta ccttgaagcc ctga 2384

<210> 80

<211> 777

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMWH-IgG4PLA-FH1-5的VH序列（氨基酸）

<400> 80

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Ala Lys Cys Thr Ser Thr Gly Trp Ile Pro Ala Pro Arg Cys Thr Leu

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His Ile His Cys Thr Gln Asp Gly Trp Ser Pro Ala Val Pro Cys Leu

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<213> 人工序列

<220>

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<400> 83

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Leu

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<213> 人工序列

<220>

<223> P08603-2的氨基酸序列; 人补体因子H同工型2

<400> 84

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