本文公开的是生成例如可以用于定向进化中的目的序列的变体文库的有效方法,在一个实施方案中,该方法包括扩增反应,例如易错PCR,以生成目的序列的双链DNA(dsDNA)变体,这之后dsDNA变体的一条链可以选择性降解,以产生单链DNA(ssDNA)变体。
ssDNA变体可以与ssDNA中间体例如尿嘧啶化的环状ssDNA中间体杂交,以形成异源双链DNA,其可以转化到细胞例如大肠杆菌细胞内,获得变体文库。
这种方法消除无效的亚克隆步骤和由许多现有方法要求的昂贵引物组的需要。
M.维纳 M.基斯
艾希奥美公司
美国康涅狄格州
本文公开的是生成例如可以用于定向进化中的目的序列的变体文库的有效方法,在一个实施方案中,该方法包括扩增反应,例如易错PCR,以生成目的序列的双链DNA(dsDNA)变体,这之后dsDNA变体的一条链可以选择性降解,以产生单链DNA(ssDNA)变体。
ssDNA变体可以与ssDNA中间体例如尿嘧啶化的环状ssDNA中间体杂交,以形成异源双链DNA,其可以转化到细胞例如大肠杆菌细胞内,获得变体文库。
这种方法消除无效的亚克隆步骤和由许多现有方法要求的昂贵引物组的需要。