1.本发明涉及甲基酮类衍生物、制备方法、药物组合物及应用，属于化学药物技术领域。


背景技术：

2.蛋白激酶c（protein kinase c，pkc）于1977年首次发现，它是一组磷脂依赖性的蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶，广泛分布于哺乳动物的器官、组织和细胞中，对细胞的代谢生长、增殖和分化起着重要的调节作用。它与蛋白激酶a和蛋白激酶g共同构成丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶agc（pka、pkg和pkc）超家族。
3.pkc由单一多肽链组成，其结构由高度同源性的4个保守区（c1~c4）和低度同源性的5个可变区（v1~v5）组成，可变区在特定pkc同工酶亚型的识别和激活中起作用。因此，在不同的外界刺激下有不同的亚型被选择性地激活。迄今为止，根据同工酶的结构、特性及激活剂的不同，将其分为4大类（12种亚型），分别为：传统型pkc和新型pkc。传统型pkc包括pkcα、βⅰ、βⅱ和γ亚型。新型pkc包括pkcδ、ε、η、θ和μ亚型。正常情况下，pkc处于失活状态；当受到外界刺激时，pkc被激活。激活的pkc可使多种蛋白的丝氨酸/苏氨酸发生磷酸化，从而影响各种内、外分泌腺的分泌、神经递质的释放、细胞凋亡、心肌收缩和代谢途径调节等。
4.一系列的研究表明：多种疾病的发生、发展都与pkc的异常表达有关。比如：在人乳腺癌、结肠癌、肝癌细胞中存在着pkcα表达的明显增加；在甲状腺病变细胞中发现pkcα、pkcβⅱ、pkcδ的异常表达；前列腺癌和结肠癌细胞中pkcβ的表达增多，而膀胱癌中表达降低。此外，在高分化级别的膀胱癌、前列腺癌和子宫内膜癌细胞中，pkcα的表达增加。
5.因此，开发新型强效的pkc抑制剂对于肿瘤的治疗有着非常重要的意义。


技术实现要素：

6.本发明的研究者发现如式i所示的化合物具有抗肿瘤活性，可用于治疗癌症。因此，本发明的目的是为了提供具有如式ι所示结构的甲基酮类衍生物、制备方法、药物组合物及应用。式i所代表的化合物及其各种衍生物具有抗肿瘤药理活性，具体技术方案如下：所述甲基酮类衍生物具有如式ι所示的结构：其中，r1代表取代或不取代的苯基或芳杂环基。
7.作为上述技术方案的改进，所述甲基酮类衍生物选自下述式1-17中的任一化合
物，结构式如下：
作为上述技术方案的改进，所述甲基酮类衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，包括如下步骤：步骤一、中间体iv的合成：化合物ii和化合物iii溶于反应溶剂，降温至0~10℃，加入碱后升温至25~50℃，保温反应，得到中间体iv；所述反应溶剂为四氢呋喃、二氧六环、甲苯、n,n-二甲基甲酰胺（英文简称为dmf）中的至少一种；碱为氢化钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、六甲基氨基锂中的至少一种。
8.步骤二、中间体vi的合成
中间体iv溶于反应溶剂，降温至-80℃~0℃，在碱的作用下进行反应，再加入化合物v保温反应1~3小时后，升温至室温并在室温下反应0.5~1.5小时，得到中间体vi；反应溶剂为四氢呋喃（英文简称为thf）、二氧六环、甲苯、甲基叔丁基醚中的至少一种；碱为正丁基锂（英文简称为buli）、仲丁基锂、叔丁基锂中的至少一种。
9.步骤三、中间体vii的合成中间体vi在酸作用下于反应溶剂中进行反应，得到中间体vii；其中，反应温度为0~40℃；酸为三氟乙酸、甲基磺酸、4-甲基苯磺酸、盐酸、氯化氢的乙醇溶液、氯化氢的乙酸乙酯溶液（乙酸乙酯的英文简称为ea）中的至少一种；反应溶剂为四氢呋喃、二氧六环、甲苯、乙腈、乙酸乙酯中的至少一种。
10.步骤四、化合物i的合成中间体vii与化合物viii在碱的作用下于反应溶剂中进行缩合反应，得到化合物i。其中，反应温度为20~50℃；碱选自碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、三乙胺、二异丙基乙胺（英文简称为diea）中的至少一种；反应溶剂为二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺、四氢呋喃中的至少一种。
11.一种药物组合物，包括：所述甲基酮类衍生物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂。
12.作为上述技术方案的改进，所述甲基酮类衍生物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防肿瘤的药物中的应用。所述甲基酮类衍生物或其药学上可接受的盐作为pkc抑制剂用于治疗肿瘤。
13.作为上述技术方案的改进，所述肿瘤选自皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、脑癌、直肠癌、食管癌、舌癌、肾癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素癌、星型细胞癌、脑膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒细胞白血病、成人t细胞白血病淋巴瘤、肝细胞癌、支气管癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤、精原细胞瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、纤维肉瘤中的任一种。
14.本发明的有益效果：1）、所述甲基酮类衍生物、药学上可接受的盐以及含有这些化合物作为活性成分的药物组合物作为pkc抑制剂用于治疗癌症，副作用较小；可以通过向需要此种治疗或预防的患者给予治疗有效量的一种或者多种本发明所述甲基酮类衍生物达到治疗的目的。
15.2）、本发明所述甲基酮类衍生物的合成方法，合成反应过程中，副产物少，收率高，具有极大的应用价值。
具体实施方式
16.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
17.定义“药学上可接受的盐”是指那些保留母体化合物的生物有效性及特性的盐。该盐包括：酸加成盐，其是通过母体化合物的游离碱与无机酸或与有机酸的反应而获得的；所述无
机酸诸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸、硫酸及高氯酸等；所述有机酸诸如乙酸、草酸、(d)或(l)苹果酸、马来酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、苯磺酸(苯磺酸盐)、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、扁桃酸、黏液酸、双羟萘酸、泛酸、琥珀酸、酒石酸或丙二酸等；优选为盐酸或(l)-苹果酸；或者当母体化合物中存在的酸质子被置换为金属离子或与有机碱配位时，形成盐，所述金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子；所述有机碱诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、缓血酸胺、n-甲基葡糖胺及类似物。
[0018]“取代”是指分子中的1个、2个或多个氢原子被其它不同的原子或分子所替换，包括该分子中同位原子或异位原子上的1个、2个或多个取代。“芳杂环”即“芳香杂环”，是具有平种结构特点的杂环，其环中原子构成一个环闭的共轭体系，分子呈平面型，此平面上下两侧有环状的离域电子云，共轭体系中的p电子数都符合休克尔规则。例如：吡啶、呋喃环、噻唑环、嘧啶环等。
[0019]
本发明的化合物可具有一个或多个不对称中心；该化合物因此可以个别(r)-立体异构体或(s)-立体异构体形式制备或以其混合物形式制备。除非另有说明，否则本说明书及权利要求中的特定化合物的描述或名称意欲包括个别对映异构体与其外消旋混合物或其它混合物。用于测定立体化学构型及分离立体异构体的方法在本领域中是熟知的(参见＂advanced organic chemistry＂的第4章中的论述，第4版，j. march，john wiley及sons，new york，1992)。因此，本发明亦涵盖具有抑制pkc活性的任何立体异构形式、其相应对映异构体(d-异构体及l-异构体或(+)异构体及(-)异构体)及其非对映异构体及其混合物且不限于任一种立体异构形式。
[0020]
实施例1如式1所示的化合物：(9-(1-(2-氟苄基)哌啶-4-基)-9h-咔唑-4-基)(1-甲基-1h-吲哚-3-基)甲基酮；其合成反应式如下：第一步：将化合物1a（48.9g，200.0mmol）、将化合物1b（52.6g，200.0mmol）溶于dmf（300ml）中，降温至0℃，分批加入氢化钠（12.0g，300.0mmol），加入完毕后升至25℃，保温反应，tlc监测反应，反应完毕后加水（200ml）淬灭反应，用乙酸乙酯（400ml
×
2）萃取，有机层
干燥、浓缩、柱层析分离得到类白色固体（中间体iv）43.2g，收率50.5%。
[0021]
第二步：将中间体1c（42.8g，100.0mmol）溶于四氢呋喃（500ml）中，降温至-78℃，加入正丁基锂（120mmol，1n），搅拌反应1小时，然后加入化合物1d（21.8g，100.0mmol），保温反应2小时后，升温至室温且于室温反应1小时，tlc监测反应，反应完毕后加饱和氯化铵淬灭反应，用乙酸乙酯（500ml
×
2）萃取，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物1e）31.4g，收率为61.9%。
[0022]
第三步：将化合物1e（31.0g，61.1mmol）溶于乙酸乙酯（300ml）中，室温下加入氯化氢的乙酸乙酯溶液100ml，室温搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后过滤，滤饼干燥得到类白色固体（化合物1f）23.5g，收率为86.7%。
[0023]
第四步：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物1g（187mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物1）334mg，收率为64.9%。esi(+) m/z=516.2。
[0024]
其中，化合物1的结构式如式1所示，即对应化合物序号为1所对应的结构式；其他化合物以此类推。
[0025]
实施例2如式2所示的化合物：(9-(1-(3-氟苄基)哌啶-4-基)
‑ꢀ
9h-咔唑-4-基)(1-甲基-1h-吲哚-3-基)甲基酮；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物2a（188mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物2）298mg，收率为57.9%，esi(+) m/z=516.2。
[0026]
实施例3如式3所示的化合物：(9-(1-(4-氟苄基)哌啶-4-基)
‑ꢀ
9h-咔唑-4-基)(1-甲基-1h-吲哚-3-基)甲基酮；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物3a（188mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有
基)-9h-咔唑-4-基)甲基酮；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物7a（171mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物7）265mg，收率为53.2%，esi(+) m/z=499.2。
[0031]
实施例8如式8所示的化合物：(9-(1-((6-甲氧基吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-基)-9h-咔唑-4-基)( 1-甲基-1h-吲哚-3-基)甲基酮；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物8a（201mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物8）302mg，收率为57.2%，esi(+) m/z=529.2。
[0032]
实施例9如式9所示的化合物：(1-甲基-1h-吲哚-3-基)(9-(1-(嘧啶-2-基甲基)哌啶-4-基)-9h-咔唑-4-基)甲基酮；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物9a（172mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物9）340mg，收率为68.1%，esi(+) m/z=500.2。
[0033]
实施例10如式10所示的化合物：2-((4-(4-(1-甲基-1h-吲哚-3-羰基)-9h-咔唑-9-基)哌啶-1-基)甲基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物10a（213mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物10）339mg，收率为62.8%，esi(+) m/z=541.2。
[0034]
实施例11如式11所示的化合物：3-((4-(4-(1-甲基-1h-吲哚-3-羰基)-9h-咔唑-9-基)哌啶-1-基)甲基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物11a（213mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物11）315mg，收率为58.3%，esi(+) m/z=541.2。
[0035]
实施例12如式12所示的化合物：4-((4-(4-(1-甲基-1h-吲哚-3-羰基)-9h-咔唑-9-基)哌啶-1-基)甲基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物12a（213mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物12）355mg，收率为65.7%，esi(+) m/z=541.2。
[0036]
实施例13如式13所示的化合物：2-((4-(4-(1-甲基-1h-吲哚-3-羰基)-9h-咔唑-9-基)哌啶-1-基)甲基)苯甲腈；其合成反应式如下：
将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物13a（195mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物13）361mg，收率为69.2%，esi(+) m/z=523.2。
[0037]
实施例14如式14所示的化合物：3-((4-(4-(1-甲基-1h-吲哚-3-羰基)-9h-咔唑-9-基)哌啶-1-基)甲基)苯甲腈；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物14a（195mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物14）354mg，收率为67.8%，esi(+) m/z=523.2。
[0038]
实施例15如式15所示的化合物：4-((4-(4-(1-甲基-1h-吲哚-3-羰基)-9h-咔唑-9-基)哌啶-1-基)甲基)苯甲腈；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物15a（195mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物15）319mg，收率为61.1%，esi(+) m/z=523.2。
[0039]
实施例16如式16所示的化合物：(9-(1-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌啶-4-基)-9h-咔唑-4-基)(1甲基-1h-吲哚-3-基)甲酮；其合成反应式如下：
将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物16a（201mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物16）355mg，收率为67.2%，esi(+) m/z=529.2。
[0040]
实施例17如式17所示的化合物：(9-(1-(苯并[d][1,3]二氧戊烷-5-基甲基)哌啶-4-基)-9h-咔唑-4-基)(1-甲基-1h-吲哚-3-基)甲酮；其合成反应式如下：将化合物1f（443mg，1.0mmol）、化合物17a（214mg，1.0mmol）、diea（194mg，1.5mmol）溶于二氯甲烷（40ml）中，室温下搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，有机层浓缩，柱层析分离得到类白色固体（化合物17）317mg，收率为58.6%，esi(+) m/z=542.2。
[0041]
实施例18生物学评价试验本实施例通过检测实施例1~17制备的化合物1~17对pkcα（pkcθ）激酶的抑制作用，sotrastaurin为现有pkc抑制剂。
[0042]
激酶活性的测定：将化合物1~17中的任一种化合物溶于二甲基亚砜（简称为dmso）制成化合物溶液，在96孔板中加入25μl化合物溶液和10μl pkcα（pkcθ）及15μl混合溶液[20mm tris-缓冲液，ph7.4，0.1% bsa(200μg/ml)，10mm mg(no3)2，10mm atp和3750bq of 33
p-atp]。在培养箱中于30℃孵育15分钟，加入终止反应液（10μl of 0.5m na2edta，ph 7.4），然后将50μl混合液吸至预润湿的磷酸纤维素板上。将未结合的atp用100μl双蒸水洗涤。将所述磷酸纤维素板在0.5%磷酸中洗涤2次，随后在乙醇中洗涤1次，然后干燥并置于omnifilter中且在topcount放射性技术仪中计数，通过计算得到化合物1~17的ic
50
。结果见表1：表1
其中，化合物序号1所对应的是化合物1，其他以此类推。
[0043]
从表1中可以看出，化合物1~17对pkcα（pkcθ）激酶均有一定的抑制作用，其中，化合物1~3、化合物5~7、化合物9~12、化合物14~17对pkcα的ic50值小于10 nm；化合物1~2、化合物4~6、化合物11~13、化合物15、化合物17对pkcθ的ic50值小于10 nm。
[0044]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。