基质金属蛋白酶抑制剂的制作方法

专利名称：基质金属蛋白酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及可抑制基质金属蛋白酶特别是间质胶原酶的化合物及其可药用盐，因此它们可通过抑制这样的基质金属蛋白酶治疗哺乳动物有关的疾病。
基质金属蛋白酶是一组与结合组织的降解和改型有关的蛋白酶，其组中成员有一些性质，这些性质包括对锌和钙的依赖性、作为酶原的分泌作用，以及具有40-50％氨基酸序列的同源性。
这组基质金属蛋白酶包括从纤维细胞/巨噬细胞及神经细胞衍生的间质胶原酶，它可催化I、II、III和X型天然胶原的起始的和限速的解离。
胶原作为哺乳动物体内主要的结构蛋白，是许多组织基质的必要成份，例如软骨、骨、腱和皮肤。间质胶原酶是一种很特异的基质金属蛋白酶，它可使胶原解离成为可在生理温度下自发变性的两个碎片，因而变得对特异性较低的酶的解离作用敏感了。由于胶原酶的解离作用破坏了靶组织的结构完整性，这一过程必定为一不可逆过程，因而对于治疗干涉作用是一个很好的目标。
除了间质胶原酶，酶的基质金属蛋白酶组中还包括两种不同的但极相关的明胶酶由纤维细胞分泌的72-KDa酶和由单核吞噬细胞释放的92-KDa酶。这些明胶酶可降解胶(使胶原变性)、IV和V型天然胶原、纤维结合素和不溶性弹性硬蛋白。
基质金属蛋白酶组中也包括基质溶素1和2，它们可解离很广范围的基质底物，包括以非螺旋区域存在的层粘连蛋白、纤维结合素、蛋白聚糖和IV及IX型胶原。
Matrilysin(相关金属蛋白酶或PUMP)是基质金属蛋白酶组中最近发表的一个。Matrilysin可降解宽范围的基质底物，包括蛋白聚糖、明胶、纤维结合素、弹性硬蛋白和层粘连蛋白，这一表达在单核吞噬细胞，大鼠子宫移植物和零星在肿瘤中有所发现。
基质金属蛋白酶的抑制剂可用于治疗关节炎、骨吸收疾病(如骨质疏松)、与糖尿病有关的胶原的严重损害、牙周疾病、角膜渍疡、皮肤渍疡和肿瘤转移。例如，胶原酶抑制剂的设计和潜在的应用可参见J.Enzyme Inhibition(1987)，Vol.2，PP.1-22，和DrugNews & Prospectives(1990)，Vol.3，No.8，PP.453-458。基质金属蛋白酶抑制剂也是许多专利和专利申请的主题，例如U.S.专利Nos.5,189,178(Galardy)和5,183,900(Galardy)，EP专利申请0438223(Beecham)和0276436(F.Hoffmann-La Roche)，专利合作条约国际申请92/21360(Merck)，92/06966(Beecham)和92/09563(Glycomed)。
本发明提供了可用作基质金属蛋白酶特别是间质胶原酶抑制剂的新化合物，并且它们在治疗以基质金属蛋白酶的过高活性为特征的疾病方面是有效的。
因此，一方面，本发明涉及以单一立体异构体或其混合物形式存在的式(I)化合物或其可药用盐
其中虚线表示任意的双键；及当n是1，2或3；m是3或4；A是-CH2-；时R1表示a)-CH2-R4，其中R4表示巯基、乙酰基硫、羧基、羟基氨基羰基、N-羟基-甲酰氨基甲基、羟基氨基烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、苄氧基氨基羰基、或 (其中R6表示任选取代的芳基，所述芳基是喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基)；b)-CH(R7)-R8，其中R7表示烷基、烷氧羰基、或羧基；R8表示羧基、羟基氨基羰基、烷氧羰基或芳烷氧羰基；c)-NH-CH(R9)-R10，其中R9表示氢、烷基或芳烷基；R10表示羧基、烷氧羰基、或芳烷氧羰基、膦酰基、二烷基膦酰基、甲氧基膦酰基；R2表示烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3表示氢、卤素、烷基或烷氧基；或当n是2或3；m是3或4；A是-N(R11)-，其中R11表示氢或烷基；时R1、R2和R3的定义如上；或当n是0；m是4、5或6；A是-CH(R12)-，其中R12表示羧基、烷氧羰基或任选取代的氨基甲酰基；时R1、R2和R3的定义如上；本发明另一方面涉及抑制哺乳动物基质金属蛋白酶的方法，该方法包括向需要治疗的哺乳动物施用治疗有效量的上述式(I)化合物，其中式(I)化合物可以单一立体异构体或其混合物，或其可药用盐的形式存在。
本发明另一方面涉及可抑制哺乳动物基质金属蛋白酶的药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的上述式(I)化合物以及可药用载体，其中式(I)化合物可以单一立体异构体或其混合物，或其可药用盐的形式存在。定义在说明书和附加的权利要求中使用下述术语，除非另有说明，否则其含义如下所述“BOC”是指叔丁氧羰基。
“CBZ”是指苄氧基羰基(苄氧羰基)。
“DMF”是指N，N-二甲基甲酰胺。
“EDCI”是指N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺。
“HOBT”是指1-羟基苯并三唑。
“乙酰基硫”是指基团-SC(O)CH3。
“卤素”是指溴，氯或氟。
“烷基”是指只含有碳和氢的、无不饱和键并具有1-4个碳原子直链或支链单价基团，例如甲基、乙基、正丙基、2-甲基丙基(异丁基)、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基和1，1-二甲基乙基(叔丁基)。
“烷氧基”是指式-ORa基团，其中Ra是定义如上的烷基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、1-甲基乙氧基、正丁氧基、叔丁氧基等。
“芳基”是指苯基或萘基。
“芳氧基”是指-ORb基团，其中Rb定义如上的芳基，例如苯氧基、喹啉-2-基氧基，萘-1-基氧基或萘-2-基氧基。
“芳烷基”是指式-RaRb基团，其中Ra是定义如上的烷基及Rb是定义如上的芳基，例如苄基、苯亚乙基、3-苯基丙基等。
“芳烷氧基”是指式-ORaRb团，其中Ra是定义如上的烷基及Rb定义如上的芳基，例如苄氧基、或3-萘-2-基丙氧基。
“烷氧羰基”是指式-C(O)Rb团，其中Rb定义如上烷氧基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基等。
“芳烷氧羰基”是指-C(O)Rc基团，其中Rc是定义如上的芳烷氧基，例如苄氧羰基、萘-2-基乙氧基羰基等。
“苄氧基氨基羰基”是指-C(O)NHCH2Rd基团，其中Rd是苯基。
“氨基甲酰基”是指基团-C(O)NH2。
“羧基”是指基团-C(O)OH。
“羟基氨基”是指基团-NHOH。
“羟基氨基羰基”是指基团-C(O)NHOH。
“巯基”是指基团-SH。
“磺酰基”是指＝S(O)2。
“膦酰基”是指基团-PO(OH)2。
“任选的”或“任选地”是指随后所述环境的行为可出现或不出现，这种描述包括所述的环境或行为出现的情况，和它们不出现情况。例如“任选取代的喹啉-2-基”是指喹啉-2-基可被取代或不被取代，这个叙述包括取代的喹啉-2-基和未被取代的喹啉-2-基两种情况。
“任选取代的芳基”是指任选地被一或多个选自例如卤素、烷基、烷氧基、羟基和硝基的取代基取代的喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶或苯基，例如6-硝基喹啉-2-基、6-氟喹啉-2-基、6-羟基喹啉-2-基、6-甲氧基喹啉-2-基、6-硝基萘-1-基、6-氯萘-1-基、6-羟基萘-1-基、6-甲氧基萘-1-基、6-硝基萘-2-基、6-氯萘-2-基、6-羟基萘-2-基、6-甲氧基萘-2-基、6-硝基苯基、6-氯苯基、6-羟基苯基、6-甲氧基苯基、3-甲基吡啶基、4-乙基吡啶基等。
“任选取代的氨基甲酰基”是指在氮原子上任选的被一或多个选自烷基和芳烷基的取代基取代的氨基甲酰基。
这里的“氨基-保护基”是指合成中保护氮原子避免不需反应的有机基团，它包括但不限于苄基、酰基、乙酰基、苄氧羰基(苄氧羰基)、对甲氧基苄氧羰基、对硝基苄氧羰基、叔丁氧基羰基等。
“可药用盐”包括可药用的酸加成盐和碱加成盐。
“可药用的酸加成盐”是指保持了游离碱的生物活性和性能的酸加成盐，否则的话这些盐就是没有生物活性的或具有不需要的活性，它是与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等生成的，和与有机酸如乙酸、丙酸、乙醇酸(glycolic acid)、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、瑚珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等生成的。
“可药用的碱加成盐”是指保持了游离酸的生物活性和性质的碱加成盐，否则的话这些盐就是没有生物活性的或具有不需要的活性，这些盐是通过无机碱或有机碱与游离酸的加成制备的。由无机碱制备的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。由有机碱制备的盐包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺，包括天然存在的取代的胺在内的取代的胺，环胺和碱离子交换树脂，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、三甲胺、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、hydrabamine、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。优选的有机碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三乙胺、二环己基胺、胆碱和咖啡因。
“哺乳动物”包括人类和所有的家养和野生的动物，包括但不限于牛、马、猪、羊、山羊、狗、猫等。
“治疗有效量”是指给需要治疗的哺乳动物施用的式(I)化合物的量足以起到治疗作用，正如下面所定义的，这是通过抑制基质金属蛋白酶的活性，特别是通过抑制间质胶原酶的活性而减轻了疾病状态。组成“治疗有效量”的式(I)化合物的量取决于化合物、疾病的情况和严重程度、以及需要治疗的哺乳动物，但是本领域普通技术人员可根据自己的知识和本文的公开基本确定化合物的用量。
“进行治疗”或“治疗”包括对哺乳动物特别是人类的治疗，治疗是通过抑制基质金属蛋白酶的活性，特别是通过抑制间质胶原酶的活性等减轻了疾病状态；包括(i)预防哺乳动物疾病的发生，特别是对于预先诊断可能有病，而还未诊断出发病的动物；(ii)抑制疾病状态，即抑制疾病的发展；(iii)减缓疾病状态，即造成疾病的消退。
“立体异构体”是指具有同样分子式和性质或同样的键接顺序但在空间原子排列不同的化合物。
这里所使用的命名法基本上是I.U.P.A.C命名法的一种改良形式，其中本发明化合物是作为具有三环烷基取代基的次膦酸和链烷酸来命名的。式(I)化合物或其可药用盐在其结构中含有至少两个不对称碳原子；其中一个碳原子是R2取代基所接的碳原子，而另一个是吲哚基甲基所接的碳原子。因此，式(I)化合物及其可药用盐可以单一的立体异构体、外消旋物、以及对映体和非对映体的混合物的形式存在。所有单一的立体异构体、外消旋物及其混合物都在本发明的范围之内。
当命名式(I)化合物单一的立体异构体时，可以根据Cahn，In-gold和Prelog等人的“顺序原则”，对手性碳原子的绝对构型予以描述，如R或S。
例如其中n是2；m是3；A是-CH2-；R1是-CH2R4，其中R4是-C(O)NHOH；R2是2-甲基丙基和R3是氢的式(I)化合物，即下述通式化合物其命名为(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10，6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)六酰胺。用途和施用方法A.用途式(I)化合物可抑制哺乳动物基质金属蛋白酶特别是抑制间质胶原酶，因而可防止哺乳动物体内胶原蛋白的退化。所以化合物可用于治疗与基质金属蛋白酶特别是间质胶原酶的活性增加有关的疾病，例如关节炎和骨关节病、肿瘤转移、牙周疾病和角膜溃疡。参考例如，Arthritis and Rheumatism(1993)，Vol.36，No.2，pp.181-189；Arthritis and Rheumatism(1991)，Vol，34，No.9，pp，1073-1075；Seminars in Arthritis and Rheumatism(1990)，Vol.19，No，4，Supplement 1(February)，pp，16-20；Drugs ofthe Future(1990)，Vol.15，No.5，PP.495-508；和J.EnzymeInhibition(1987)，Vol.2，pp.1-22。B.试验可通过本领域普通技术人员已知的许多在试管中和在体外的试验方法，证明式(I)化合物抑制基质金属蛋白酶特别是抑制间质胶原酶活性的能力。例如单一的金属蛋白酶的活性可采用如Anal.Bi-ochem(1985)，Vol.147.p.437所述的或其改良的试管试验方法证明。基质金属蛋白酶抑制的生理作用可通过体外牛软骨移植试验证实，试验是按Methods of Enzymology(1987)，Vol.144，pp.412-419所述的方法或这一方法的改良的方法进行的；这一生理作用也可通过体外老鼠胎儿长骨试验证实，而试验是按Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1988)，Vol.85，pp，8761-8765或J.Clin.Invest.(1965)，Vol.44，pp.103～116所述的方法或它们的改良的方法进行的。C.通常的施用方法以纯化合物或适当的药物组合物形式施用的式(I)化合物或其可药用盐，在针对类似的情况时，可以采取任何可接受的施用方式或试剂形式。因此，可通过例如口服、鼻、非肠道的、表皮、皮下或直肠施用，采取固体、半固体、冻干粉末或液体剂量形式，这些剂量形式可为如片剂、栓剂、丸剂、软弹性的明胶胶囊或硬的明胶胶囊、粉剂、溶液、悬浮液或气雾剂等，优选以适于简单施用确定剂量的单位剂量形式施用。组合物含有常规的药物载体或赋形剂以及作为活性剂的式(I)化合物，此外，还可含有其它治疗剂、药物制剂、载体和赋形剂等。
通常，取决于施用的方式，可药用的组合物含有约1％-约99％重量的式(I)化合物或其可药用盐，以及约99％-约1％重量的合适的药物赋形剂。优选含有约5％-约75％重量的式(I)化合物或其可药用盐，而其余为合适的药物赋形剂。
优选的施用途径是用常规的日剂量方案口服，而这一方案可根据需要治疗的疾病的严重程度调整。对于这样的口服施用方式而言，含式(I)化合物或其可药用盐的药物组合物是通过使其与常用的赋形剂混合制备的，赋形剂如药物级的甘露糖醇、乳糖、淀粉、预明胶化的淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素醚衍生物、葡萄糖、明胶、蔗糖、柠檬酸盐(酯)、丙基gallate等。所述的组合物采取溶液、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、缓释剂等形式。
优选的组合物形式为胶囊剂、caplet或片剂，因此其中可以含有稀释剂如乳糖、蔗糖、磷酸二钙等；崩解剂如croscarmellose钠或其衍生物；润滑剂如硬脂酸镁等；及结合剂如淀粉、阿拉伯树胶、聚乙烯基吡咯烷酮、明胶、纤维素醚衍生物等。
式(I)化合物或其可药用盐也可制成栓剂形式，例如，可将约0.5％-约50％的活性成份分散在可缓慢在体内溶解的载体中，载体如聚氧乙烯乙二醇和聚乙二醇(PEG)，例如PEG1000(96％)和PEG4000(4％)。
液体可药用组合物可通过使式(I)化合物(约0.5％-约20％)或其可药用盐，以及任选的药物辅剂通过例如溶解或分散的形式进入载体，从而形成溶液或悬浮液，载体如水、盐水、葡萄糖水溶液、丙三醇、乙醇等。
如果需要，本发明的药物组合物也可含有少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、PH缓冲液、抗氧化剂等，具体如柠檬酸、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化的羟基甲苯等。
对于本领域熟练技术人员来说，制备上述剂量形式的实际方法是已知的或是明显的；例如可参见Remington′s Pharmaceutical Sc-ience，18th Ed.，(Mack Publishing Company，Easton，Pennsy-lvania，1990)。在任何情况下，根据本发明的教导，施用的组合物都含有可通过抑制基质金属蛋白酶减轻疾病状态的、治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐。
式(I)化合物或其可药用盐是以治疗有效量施用的，该量取决于许多因素，这些因素包括所用具体化合物的活性、化合物代谢稳定性和作用的持续时间、病人的年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食习惯、服用的方式和时间、排泄速度、联合用药的情况、具体疾病的严重程度以及接受治疗的主体。总的来说，治疗有效的日剂量是每天约0.14mg/kg至约14.3mg/kg体重式(I)化合物或其可药用盐；优选的是每天约0.7mg/kg到约10mg/kg体重；更优选的是每天约1.4mg/kg到约7.2mg/kg体重。例如，对于体重70kg的病人，其服用的剂量范围是每天约10mg到约19式(I)化合物或其可药用盐；优选是每天约50mg到约700mg；更优选是每天约100mg到约500mg。优选的实施方式上述本发明概述中一组优选的式(I)化合物是其中n是2或3；m是3；A是-CH2-；R2是烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素或烷氧基的化合物。
其中更优选的一组化合物是其中n是2；R2是2-甲基丙基；和R3是氢的化合物。
其中再优选的一组化合物是其中R1是-CH2-R4，而R4是羧基、羟基氨基羰基、烷氧羰基、芳氧基羰基、芳基烷氧基羰基或苄氧基氨基羰基的化合物。
其中再优选的一组化合物是其中R1是-CH2-C(O)OH或-CH2-C(O)NHOH的化合物。
另一组优选的化合物是其中R1是-CH2-R4，而R4是巯基或乙酰基硫的化合物。
另一组优选的化合物是其中R1是下式基团的化合物其中R6是任选取代的芳基，其中芳基为喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基。
上述组中优选的一组化合物是其中R6为喹啉-2-基的化合物。
另一组优选的化合物是其中R1是-CH(R7)-R8，而R7是烷基、烷氧羰基或羧基；R8是羧基、羧基氨基羰基、烷氧羰基或芳基烷氧羰基的化合物。
另一组优选的化合物是其中R7是甲氧基羰基的化合物。
特别优选的一组化合物是其中R8是羧基或羟基氨基羰基的化合物。
另一组优选的化合物是其中R1是-NH-CH(R9)-R10，而R9是氢、烷基或芳烷基；R10是羧基、烷氧羰基、或芳基烷氧羰基的化合物。
另一组优选的化合物是其中n是2或3；m是4；A是-N(R11)-，而R11是氢或烷基；R2是烷基和R3是氢、卤素或烷氧基的化合物。
其中优选的一组化合物是其中n是2；R2是2一甲基丙基；R3是氢和R11是甲基的化合物。
其中再优选的一组化合物是其中R1是-CH2-R4，而R4是基、羟基氨基羰基、烷氧羰基、芳氧基羰基、芳基烷氧基羰基或苄氧基羰基的化合物。
特别优选的一组化合物是其中R1是-CH2-C(O)NHOH的化合物。
另一组优选的化合物是其中n是0；m是4、5或6；A是-CH(R12)-，而R12是羧基、烷氧羰基或任选取代的氨基甲酰基；R1、R2和R3的定义同权利要求1的化合物。
这里，最优选的式(I)化合物如下所述(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)六酰胺；(3R，11S)-N-羟基-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)六酰胺；(3R，9S)-N-羟基-5-甲基-3-(8-氧代-1，7-二氮杂三环[9.6.1.012，17]十八碳-11(18)，12(17)，13，15-四烯-9-基氨基甲酰基)六酰胺；(3R，9S)-5-甲基-3-(8-氧代-1，7-二氮杂三环[9.6.1.012，17]十八碳-11(18)，12(17)，13，15-四烯-9-基氨基甲酰基)己酸；(10S)-2-巯基甲基-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)五酰胺；(10S)-4-甲基-2-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)戊基(喹啉-2-基硫代甲基)次膦酸；(10S)-2-乙酰基硫代甲基-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)五酰胺；和(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-2-甲氧基羰基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)六酰胺。式(I)化合物的制备为单立体异构体或其混合物形式的式(I)化合物或其可药用盐是肽衍生物，它可从组成α-氨基酸衍生物制备。形成肽键的标准方法如下文所述M.Bodanszky et al.，The practice of Pe-ptide Synthesis(1984)，Springer-Verlag；M.Bodanszky，Principles of Peptide Synthesis(1984)，Springer-Verlag；J.P.Greenstein et al.，Chemsitry of the Amino Acid(1961)，Vol，1-3，John wiley和sons Inc.；G.R.Pettit，SyntheticPeptide(1970)，Vol.1-2，Van Nostrand Reinhold Company。
生成式(I)化合物的酰胺偶联反应通常是在惰性溶剂如二甲基酰胺(DMF)的存在下，通过碳化二亚胺法与诸如二环己基碳化二亚胺或N′-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(EDCI)的试剂反应进行的。其它可生成酰胺键或肽键的方法包括但不限于通过酰氯、酰基叠氮化物、混合酸酐或活性酯如硝基苯基酯进行的合成途径。典型情况是在有或没有肽片段存在下进行溶液相酰胺的偶联。
制备式(I)化合物时，对于所用化合物氨基和羧基末端的保护基的选择部分取决于具体酰胺或肽的偶联条件，部分取决于参与偶联反应的氨基酸和/或肽组分。常用的氨基保护基包括本领域中熟知的那些，例如苄氧羰基(苄氧基羰基)、对甲氧基苄氧羰基、对硝基苄氧羰基、叔丁氧基羰基(BOC)等。优选BOC或苄氧羰基(CBZ)作为α-氨基酸的保护基，因为它比较容易通过中等强度的酸除去，例如通过乙酸乙酯中的三氟乙酸(TFA)或盐酸除去；或通过催化氢化除去。
式(I)化合物的单一的立体异构体可通过本领域普通技术人员已知的方法进行分离，例如通过选择结晶或色谱法分离，和/或通过这里公开的方法进行分离。
式(I)化合物中取代基和/或变量的组合是允许的，只要这种组合能产生稳定的化合物。A.中间体的制备式(J)化合物下式(J)化合物
其中R3表示氢、卤素、烷基或烷氧基；和p表示5、6、7、或8；这一中间体可用于制备式(I)化合物，其本身的制备如下面的反应路线1所示，其中R3表示氢、卤素、烷基或烷氧基；和p表示5、6、7或8；BOC表示叔丁氧基羰基，R13表示氢、甲磺酰基或甲苯磺酰基反应路线1
式(B)和式(F)化合物是在市场上可得到的，例如从Karl Industri-es，Inc.或Sigma得到，或者可根据本领域熟练技术人员已知的方法制备。
总的来说，式(J)化合物的制备是在碱的存在下，优选在吡啶的存在下，用乙酸酐酯化式(B)的醇，形成式(C)化合物，使其在乙酸酐的存在下还原得到式(D)化合物。在酸性条件下优选在盐酸存在下水解式(D)化合物得到式(E)化合物，然后在标准的肽偶合条件下使其与化合物(F)偶合，例如在DMF中，在HOBT的存在下与EDCI偶合，得到其中R13是羟基的式(G)化合物。用甲苯磺酰氯或甲磺酰氯处理所得化合物，得到其中R13是甲磺酰基或甲苯磺酰基的式(G)化合物。在室温和高度稀释情况下，在过量的NaH存在下和在惰性溶剂中，优选为THF，环化所得的甲苯磺酰化产物得到式(H)化合物。在中等强度的酸性条件下，优选在三氟乙酸的存在下，除去式(H)化合物的保护基得到式(J)化合物。B.式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)化合物的制备式(Ia)化合物是其中n是1、2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1是-CH2-R4，而R4是叔丁氧基羰基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
式(Ib)化合物是其中n是1、2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1是-CH2-R4，而R4是羧基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
式(Ic)化合物是其中n是1、2或3；m是3或4；A是-CH2-，R1是-CH2-R4，而R4是苄氧基氨基羰基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
式(Id)化合物是其中n是1、2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1是-CH2-R4，而R4是羟基氨基羰基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)化合物的制备如下述反应路线2所述，其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；R14是叔丁基或苄基，R7a是氢或烷氧羰基
反应路线2
式(K)化合物可通过这里所述的方法或本领域普通技术人员已知的方法制备。
总的来说，式(Ia)、(Ib)和(Ic)化合物的制备是在标准的肽偶合条件下，首先使式(J)化合物与式(K)化合物偶合得到式(Ia)化合物。然后，在中等强度的酸性条件下除去保护基得到式(Ib)化合物。在标准的肽偶合条件下使式(Ib)化合物与邻-苄基羟基胺偶合得到式(Ic)化合物。催化氢化除去式(Ic)化合物中的苄基保护基得到式(Id)化合物。C.式(Ie)和(If)化合物的制备式(Ie)化合物是其中n是1、2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1是-CH2-R4，而R4是叔乙酰基硫；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢的式(I)化合物。
式(If)化合物是其中n是1、2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1是-CH2-R4，而R4是巯基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷或芳烷基；和R3是氢的式(I)化合物。
式(Ie)和(If)化合物的制备如下述反应路线3所述，其中R2和R3的定义如上，p是5、6、7或8。
反应路线3
式(M)化合物可从市场上得到或可根据本领域熟练技术人员已知的方法制备。
总之，式(Ie)和(If)化合物的制备是在标准的肽偶合条件下，首先使式(M)化合物与式(J)化合物偶合得到式(Ie)化合物。用浓NH4OH的甲醇溶液处理式(Ie)化合物得到相应的式(If)化合物。D.式(K)化合物的单一的立体异构体的制备其中R14是叔丁基或苄基、和R7a是氢、烷氧羰基、羟基氨基甲酰基、羧基或任选取代的氨基甲酰基的式(K)化合物可用于制备式(I)化合物。式(K)化合物单一的立体异构体可用于制备式(I)化合物的单一的立体异构体。特别下式(Ka)化合物其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R7b是氢，它是R2取代基接在具有R构型的碳原子上的式(K)化合物的立体异构体。式(Ka)化合物的制备如下述反应路线4所述，其中R2和R7b的定义如上
反应路线4 按类似的方式，只是以D-(-)2，10-樟脑磺内酰胺代替了L-(+)2，10-樟脑磺内酰胺，制得单一的S构型的相应立体异构体。
式(HH)化合物可从市场上得到或可根据本领域普通技术人员已知的方法制备，例如，通过实施例11所述的方法制备。L-(+)2，10-樟脑磺内酰胺和D-(-)2，10-樟脑磺内酰胺可从市场得到，例如，从Aldrich。
总的来说，式(Ka)化合物的制备是首先使式(HH)化合物与L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺缩合得到式(N)化合物，采用NaHMDS-小时以产生阴离子，用叔丁基溴代乙酸酯使反应骤冷生成相应的式(Q)的酯。然后，在碱性条件下除去樟脑基团，得到式(Ka)化合物的单一的立体异构体，其中R2取代基所接的碳原子是R构型。
式(Kb)化合物其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R7c是烷氧羰基，它也是式(K)化合物的单一立体异构体。式(Kb)化合物的制备如下述反应路线5所述，其中R2和R7c的定义如上反应路线5
式(R)和式(T)化合物可从市场上得到或可根据本领域熟练技术人员已知的方法制备。
总的来说，式(Kb)化合物的制备是首先在二氯甲烷中使式(R)化合物与异丁烯以及催化量的浓硫酸反应，然后蒸馏得到式(S)化合物。然后在叔丁醇钾的存在下，使式(S)化合物与式(T)化合物反应，得到式(U)化合物。在酸性条件下水解式(U)化合物，优选在室温三氟乙酸存在下，得到式(Kb)化合物，其中R7c是烷氧羰基。
采用本领域普通技术人员已知的方法，可以由其中R7c是烷氧羰基的式(Kb)化合物制备其中R7a是羧基的式(K)化合物。
除了上述的制备式(K)化合物单一的立体异构体的方法，其中R7a是烷基的式(K)化合物也可通过在NaN(TMS)2存在下，在非质子溶剂如THF中，用卤代甲烷优选碘甲烷处理其中R7a是氢的式(K)化合物而制备，得到其中R7a是烷基的式(K)化合物。E.式(Ig)化合物的制备式(Ig)化合物是其中n是1、2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1是-CH2-R4，而R4是下式基团其中R6是任选取代的芳基，这里芳基是指喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基；R2是烷基和R3是氢的式(I)化合物。式(Ig)化合物的制备如下面的反应路线6所示，其中p是5、6、7或8；R2、R3和R6的定义如上，以及R12a是甲磺酰基或甲苯磺酰基。
反应路线6 式(W)化合物可根据本领域普通技术人员已知方法制备，或按下述实施例19所述的方法制备。式(Z)化合物可从市场得到或可根据本领域普通技术人员已知方法制备。
总的来说，式(Ig)化合物的制备是首先用甲酰胺处理式(W)化合物得到式(X)化合物，再在碱性条件下用甲苯磺酰氯或甲磺酰氯处理式(X)化合物得到式(Y)化合物。然后使式(Y)化合物与式(Z)化合物的盐(优选是通过式(Z)化合物与氢化钠反应得到的钠盐)反应得到式(AA)化合物。在碱性条件下水解式(AA)化合物得到式(BB)化合物。在标准的肽偶合条件下，使式(BB)化合物与式(J)化合物，优选与1，1′-羰基二咪唑，偶合得到式(Ig)化合物。F.式(Ih)、(Ii)和(Ij)化合物的制备式(Ih)、(Ii)和(Ij)化合物分别是前面B部分所述的其中吲哚环完全饱和的式(Ib)、(Ic)和(Id)化合物。其制备如下面反应路线7所示，其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；R7a是氢和p是5、6、7或8。
反应路线7
总的来说，式(Ih)、(Ii)和(Ij)化合物的制备是首先在催化氢化条件下使式(Ib)化合物还原成式(Ih)化合物，然后在标准的肽偶合条件下使式(Ih)化合物与邻-苄基羟基胺反应得到式(Ii)化合物。在催化氢化条件下除去式(Ii)化合物中的苄基保护基，得到式(Ij)化合物。G.式(Ik)、(Il)、(Im)和(In)化合物的制备式(Ik)化合物是具有烯丙基键，其中n是2或3；m是4；A是-NR11，这里R11是氢或烷基；R1是-CH2-R4，而R4是叔丁氧基羰基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
式(Il)化合物是具有烯丙基键，其中n是2或3；m是4；A是-NR11，这里R11是氢或烷基；R1是-CH2-R4，而R4是羧基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
式(Im)化合物是具有烯丙基键，其中n是2或3；m是4；A是-NR11，这里R11是氢或烷基；R1-CH2-R4，而R4是苄氧基氨基羰基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
式(In)化合物是具有烯丙基键，其中n是2或3；m是4；A是-NR11，这里R11是氢或烷基；R1是-CH2-R4，而R4是羟基氨基羰基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
式(Ik)、(Il)、(Im)和(In)化合物的制备如下面反应路线8所示，其中n是2或3；R2和R11的定义如上；R14是叔丁基；和R7a是氢；以及BOC是叔丁氧基羰基。
反应路线8

式(K)化合物可根据本领域普通技术人员已知的方法或下面所述方法制备。
总的来说，式(Ik)、(Il)、(Im)和(In)化合物的制备是在标准肽偶合条件下在惰性溶剂如DMF中，首先使式(F)化合物与二胺烷或单烷基取代的二胺烷，例如与HOBT和EDCI，反应得到式(DD)化合物。然后，在碱性条件下用反-1，4-二氯丁-2-烯与式(DD)化合物反应得到式(EE)化合物，在中等酸性条件下，优选在三氟乙酸存在下，除去式(EE)化合物中的氨基保护基，得到式(FF)化合物。
然后，在标准肽偶合条件下使式(FF)化合物与式(K)化合物偶合，例如与HOBT和EDCI偶合，得到式(Ik)化合物。在中等酸性条件下，优选在三氟乙酸存在下，除去式(Ik)化合物中氨基保护基，得到式(Il)化合物。在标准肽偶合条件下用邻-苄基羟基胺处理式(Il)化合物得到式(Im)化合物。在催化氢化条件下除去式(Im)化合物中的保护基得到式(In)化合物。H.式(Io)和(Ip)化合物的制备式(Io)化合物是其中n是1、2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1是-NH-CH(R9)-R10，而R9是氢、烷基或芳烷基，和R10是芳基烷氧羰基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
式(Ip)化合物是其中n是1、2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1是-NH-CH(R9)-R10，而R9是氢、烷基或芳烷基，和R10是羧基；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基的式(I)化合物。
(Io)和(Ip)化合物的制备如下面反应路线9所示，其中p是5、6、7或8；和R2、R3和R9的定义如上反应路线9
式(JJ)化合物可根据本领域普通技术人员已知的方法或下述实施例36所述方法制备。
总的来说，(Il)和(Im)化合物的制备是首先用三氟甲磺酸(triflic)酸酐处理式(JJ)化合物，再在碱性条件下用式(KK)化合物处理得到式(LL)化合物。然后在中等酸性条件下，优选在三氟乙酸存在下，水解式(LL)化合物得到式(MM)化合物。在标准肽偶合条件下使式(MM)化合物与式(J)化合物偶合得到式(Io)化合物，使(Io)化合物脱保护得到式(Ip)化合物。
而且，用相应的无机酸或有机酸处理可将以游离碱形式存在的式(I)化合物转化成其可药用盐。式(I)化合物的盐也可转化为游离碱形式或转化为其它的盐。
概括来说，式(I)化合物中的式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij)、(Ik)、(Il)、(Im)、(In)、(Io)和(Ip)化合物的制备如下所述1.使式(K)化合物，其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R7a是氢或烷氧羰基；和R14是叔丁基或苄基；与式(J)化合物反应，其中p是5、6、7或8；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；得到式(Ia)化合物，其中p、R2、R3、R7a和R14的定义如式(K)和式(J)化合物；2.处理式(Ia)化合物，其中p是5、6、7或8；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；R7a是氢或烷氧羰基；和R14是叔丁基或苄基；得到式(Ib)化合物，其中p、R2、R3和R7a的定义如式(Ia)化合物；3.用邻-苄基羟基胺处理式(Ib)化合物，其中p是5、6、7或8；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；和R7a是氢或烷氧羰基；得到式(Ic)化合物，其中p、R2、R3和R7a定义如式(Ib)化合物；4.处理式(Ic)化合物，其中p是5、6、7或8；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；和R7a是氢或烷氧羰基；得到式(Id)化合物，其中p、R2、R3和R7a定义如式(Ic)化合物；5.使式(M)化合物，其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；与式(J)化合物反应，其中p是5、6、7或8；R3是氢；得到式(Ie)化合物，其中p、R2和R3的定义如式(M)和式(J)化合物；6.处理式(Ie)化合物，其中p是5、6、7或8；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3是氢；得到式(If)化合物，其中p、R2和R3的定义如式(Ie)化合物；
7.使式(BB)化合物，其中R2是烷基；和R6是任选取代的芳基，其中芳基为喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基和苯基；与式(J)化合物反应，其中p是5、6、7或8；R3是氢；得到式(Ig)化合物，其中p、R2、R3和R6的定义如式(BB)和式(J)化合物；8.处理式(Ib)化合物，其中p是5、6、7或8；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；得到式(Ih)化合物，其中p、R2和R3的定义如式(Ib)化合物；9.处理式(Ih)化合物，其中p是5、6、7或8；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；得到式(Ii)化合物，其中p、R2和R3的定义如式(Ih)化合物；10.处理式(Ii)化合物，其中p是5、6、7或8；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；得到式(Ij)化合物，其中p、R2和R3的定义如式(Ii)化合物；11.使式(FF)化合物，其中n是2或3；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；和R11是氢或烷基；与式(K)化合物反应，其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R7a是氢；和R14是叔丁基；得到式(Ik)化合物，其中p、R2、R3、R7a、R11和R14的定义如式(FF)和式(K)化合物；12.处理式(Ik)化合物，其中n是2或3；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；R7a是氢；R11是氢或烷基；和R14是叔丁基；得到式(Il)化合物，其中n、R2、R3、R7a和R11定义如式(Ik)化合物；13.用O-苄基羟基胺处理(Il)化合物，其中n是2或3；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；R7a是氢；和R11是氢或烷基；得到式(Im)化合物，其中n、R2、R3、R7a和R11定义如式(Il)化合物；14.处理(Im)化合物，其中n是2或3；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；R7a是氢；和R11是氢或烷基；得到式(In)化合物，其中n、R2、R3、R7a和R11定义如式(GG)化合物；15.使式(MM)化合物，其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R9是氢、烷基或芳烷基；与式(J)化合物反应，其中p是5、6、7或8；和R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；得到式(Io)化合物，其中p、R2、R3和R9定义如式(MM)和式(J)化合物；以及16.处理(Io)化合物，其中p是5、6、7或8；R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；和R9是氢、烷基或芳烷基；得到式(Ip)化合物，其中p、R2、R3、和R9定义如式(Io)化合物。
下面具体的实施例只是用来帮助说明本发明的实施，而不是限制本发明的范围。
实施例1式(E)化合物A.在氩气气氛中将6-氰基-1-己醇(7.1g，55.8mmol)溶于30ml乙酸酐中，向该物质中滴加入5.3ml(65.4mmol)吡啶并使混合物搅拌2小时。将烧瓶中物质倾入含50ml冰水的烧杯中并搅拌所得物质15分钟，然后将混合物转移到250ml分离漏斗中并加入乙醚(100ml)。振荡后分离醚相并用乙醚洗涤水相至少2次(2×100ml)，用盐水洗涤合并的醚相、干燥(MgSO4)并过滤。蒸发(旋转蒸发器和真空泵)后得到6-氰基-1-乙酸基己烷(式(C)化合物)，这一物质直接用于下一步骤。
B.在帕尔反应瓶中(容量500ml)将6-氰基-1-乙酸基-己烷(55.8mmol)溶在约100ml乙酸酐中，向其中加入乙酸(0.5ml)，随后加入氧化铂(100mg)。将烧瓶置于帕尔氢化器中并用氢气(40psi)充满，将其搅拌12小时，通过硅藻土过滤(除去催化剂)，加入新制氧化铂(100mg)和充满氢气(40psi)并使之继续搅拌24小时。利用硅藻土过滤所得物质，并在减压下除去所有挥发组份(旋转蒸发器)，所得的1-乙酸基-7-乙酰氨基庚烷的纯度足以使之用于下一步反应(得到11.8g)。
C.在200ml圆底烧瓶中，将1-乙酸基-7-乙酰氨基庚烷(11.8g，54，3mmol)溶于20ml甲醇中，向其中加入50mL 40％盐酸水溶液并加热回流混合物60小时。减压除去所有的挥发组份，得到所需的7-氨基-1-庚醇，为结晶的盐酸盐，m.p.74-81℃，MS131(MH+)。
实施例2式(G)化合物A.在室温、氩气气氛中搅拌条件下，将N-甲基吗啉(2.2ml，19.7mmol)滴加到7-氨基-1-庚醇盐酸盐(3.3g，19.7mmol)的50ml无水DMF溶液中。搅拌5分钟后加入下述物质N-叔丁氧羰基-L-色氨酸(5g，16.45mmol)、1-羟基苯并三唑(2.52g，16.45mmol)和EDCI盐酸化物(4.73g，24.7mmol)。搅拌所得混合物2小时并减压除去DMF，将残余物溶于冷2.5％HCl(100ml)和乙酸乙酯(3×100ml)中，并将其转移到分离漏斗上，分离有机相并顺序用冷2.5％HCl(100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥乙酸乙酯相(MgSO4)、过滤并浓缩得到N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-(7-羟基庚基)酰胺；IR(纯)3300，2921，1685，1645，1490，1356，1157 cm-1；1H NMR(80 MHz，CDCl3)δ0.98-1.62(m，10H，-(CH2)5-)，1.45(s，9H，叔丁基)，2.86-3.32(m，4H，CH-CH2，HN-CH2)，3.68(t，2H，J＝5.6Hz，-CH2OH)，4.22-4.55(m，1H，CH)，5.12-5.32(宽d，IH，NH-CH)，5.65-5.9(宽t，1H，NH-CH2)，6.98-7.92(m，5H，ArH)，8.63(宽s，吲哚NH)。
B.将N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-(7-羟基庚基)酰胺(8.2g)的150ml无水吡啶溶液冷至0℃(冰浴)，将对甲苯磺酰氯(4.7g)一次加到上述溶液中并使冷却的混合物继续搅拌7小时，加入50ml冰水使反应骤冷并减压除去所有的挥发组份。通过硅胶柱色谱，采用10-40％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂，分离得到产物N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-(N′-(7-(4′-甲基苯-1-基)磺酰氧基)庚基)酰胺，放置使之结晶，MS572(MH+)。
C.或者，在室温下和氩气气氛中，向N-叔丁氧羰基-L-色氨酸(5.0g，16.45mmol)，6-氨基-1-己醇(2.31g，19.74mmol)和1-羟基苯并三唑·H2O(2.52g，16.45mmol)的无水DMF(50ml)溶液中加入EDCI(4.73g，24.68mmol)。搅拌过夜后，高真空下除去DMF。使残余物在乙酸乙酯(150ml)和1N HCl(75ml)之间分配，用1N HCl(75ml)，饱和碳酸氢钠溶液(2×75ml)，最后用盐水(50ml)进一步洗涤有机层，干燥有机层(MgSO4)，蒸发至于得到6.45g(97％)N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-N′-(6-羟基己基)酰胺，为白色泡沫状物质。MS404.3(M＋H)+。产品的纯度通过HPLC证实。
D.进一步的操作，于0℃氩气气氛中，向N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-N′-(6-羟基己基)酰胺(5.5g，13.64mmol)的150ml无水吡啶溶液中加入3.9g(20.46mmol)对甲苯磺酰氯。在同样温度下搅拌所得的均匀溶液过夜，用25ml水使反应骤冷并减压除去多余的吡啶。将残余物溶于乙酸乙酯(120ml)中并用1N HCl(2×50ml)、饱合碳酸氢钠溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤。干燥有机相(MgSO4)并蒸发得到浅黄色油，为N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-(N′-(6-(4′-甲基苯-1-基)磺酰氧基)己基)酰胺(5.77g，76％)，MS558.3(M＋H)+。
E.向5-羟色氨酸(3.5g，从Sigma得到)和三乙胺(5.6ml)的水(25ml)和四氢呋喃(50ml)溶液中加入BOC-ON(2-(叔丁氧基-羰氧基亚氨基)-2-苯基乙腈)，2.5小时后，除去四氢呋喃，加入10％Na2CO3(20ml)并使混合物用醚(50ml)分配，用醚(20ml)进一步提取水相，然后在含乙酸乙酯(100ml)的两相系统内用冷10％HCl酸化，分离乙酸乙酯相，并用水(30ml)、盐水洗涤，用无水MgSO4干燥并浓缩得到糖浆。按实施例1C类似的方式，使所得糖浆与6-氨基-1-己醇反应，得到N-叔丁氧羰基-L-(5-羟基)色氨酸-N′-(6-羟基己基)酰胺。在室温将一半的产物溶于40mlDMF中并用K2CO3(5g)和碘甲烷(1.2g)处理过夜。然后使反应混合物在水(50ml)和乙酸乙酯(80ml)之间分配，用水(2×20ml)和盐水进一步洗涤有机相，用无水硫酸镁干燥并浓缩得到油状物。通过硅胶色谱纯化产品，即N-叔丁氧羰基-L-(5-甲氧基)色氨酸-N′-(6-羟基己基)酰胺；1H NMRδ(CDCl3)0.9-1.6(m，CH2，8H)；1.45(S，9H)； 2.7-3.3(m，5H)；3.6(t，2H)；3.85(s，3H)；4.35(m，1H)；5.3(宽d，1H)；5.85(宽t，1H)；6.75-8.3(m，4H)；8.73(宽s，1H)。
F.按类似的方法，制备下述化合物N-叔丁氧羰基-L-(5-乙氧基)色氨酸-N′-(6-羟基己基)酰胺；N-叔丁氧羰基-L-(5-丙氧基)色氨酸-N′-(6-羟基己基)酰胺；N-叔丁氧羰基-L-(5-乙基)色氨酸-N′-(6-羟基己基)酰胺；N-叔丁氧羰基-L-(4-甲基)色氨酸-N′-(6-羟基己基)酰胺。
实施例3式(H)化合物A.将N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-(N′-(4′-甲基苯-1-基)磺酰氧基庚基)酰胺(6.78g)分批加到NaH(60％于油中，1.9g)的1.1升无水四氢呋喃中并使之搅拌过夜。浓缩反应混合物后溶于水(150ml)和CH2Cl2(150ml)中，用2.5％HCl(PH＝3-4)将水相调至弱酸性，分离有机相(3×150ml)并顺序用2.5％HCl(150ml)，5％NaHCO3(150ml)和盐水(150ml)洗涤。干燥有机相(MgSO4)，过滤并浓缩得到黄绿色半固体物质。在硅胶上色谱纯化得到(11S)-11-N′-(苄氧基-羰基)氨基-10-氧代-1，9-二氮杂-三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯，m.p.208-209℃，MS400(M＋H)+。
B.或者，于0℃氩气气氛中，向N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-(N′-(6-(4′-甲基苯-1-基)磺酰氧基)己基)酰胺(5g，8.97mmol)的1升无水THF溶液中，10分钟内小批量加入4当量60％NaH(1.44g，36mmol)，然后在室温下将混合物搅拌过夜，蒸发所得的黄色混合物至约200ml并加入1升蒸馏水，随后用1N盐酸剧烈搅拌酸化所得混合物，通过过滤收集所得的沉淀，在高真空下用P2O5干燥过夜。干燥的粗产品(8g)通过硅胶60色谱纯化，用乙酸乙酯占30％的CH2Cl2洗脱，得到1.2g(35％)(10S)-10-N′-(苄氧羰基)氨基-9-氧代-1，8-二氮杂-三环[10.6.1.013，18十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯，为白色粉末，MS386(M＋H)+，m.p.222-223℃。
C.或者，向N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-(N′-6-(4′-甲基苯-1-基)磺酰氧基)己基)酰胺(1.21g，2.17mmol)的45ml试剂级二氯甲烷溶液中，加入15ml 40％KOH水溶液和0.3当量苄基三乙基氯化铵(0.65mmol，148mg)。在室温剧烈搅拌所得的两相混合物过夜，分离出有机层并用25ml二氯甲烷提取水层，用水(25ml)洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)并蒸发至干。于0℃将残留物在含10％乙醚的石油醚中搅拌15分钟并过滤，得到792mg(93％)(10S)-10-N′-(苄氧羰基)氨基-(9-氧代-1，8-二氮杂-三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯，为白色粉末。
实施例4
式(J)化合物A.将(11S)-10-N′-(苄氧羰基)氨基-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯(850mg)溶于5ml 10％三氟乙酸的二氯甲烷溶液中并搅拌1小时。在减压下除去挥发组份，将残余物溶于CH2Cl2(40ml)和1N NaOH(40ml)中并将其转移到分离漏斗中。分离出有机相并用盐水洗涤、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩得到654mg(11S)-10-氨基-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯。
B.或者，将(10S)-10′-N′-(苄氧羰基)氨基-(9-氧代-1，8-二氮杂-三环[10.6.1.013，18]十九烷-12(19)，13(18)，14，16-四烯(0.5mmol，193mg)于20％TFA/CH2Cl2(10ml)中在室温搅拌2小时。减压除去过量的TAF和溶剂。将残留物溶于乙酸乙酯(30ml)中并用1N HCl(25ml)，盐水(10ml)洗涤，并干燥(MgSO4)，蒸发至干得到140mg(定量)(10S)-10-氨基-19-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯，为白色泡沫状物，m.p.157-160℃，MS286.2(M＋H)+。
实施例5式(Ia)化合物A.在氩气气氛中，向搅拌下的(11S)-10-氨基-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十烷-13(20)，14(19)，15，17-四烯(654mg)和外消旋的4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基-戊酸(800mg)的30ml无水DMF溶液中，加入1-羟基苯并三唑(360mg)，再加入EDCI(940mg)。使混合物搅拌过夜并在减压下除去DMF。将残余物溶于CH2Cl2(100ml)和1.5％冷HCl(100ml)的混合物中并将其转移到分离漏斗中。分离有机相并顺序用1.5％HCl(100ml)、5％NaHCO，(100ml)和盐水(100ml)洗涤。干燥CH2Cl2相(MgSO4)过滤并浓缩得到半结晶的产品，即(11S)-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酸丁酯。在硅胶色谱柱上以乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂，分离出这一化合物的两个单一的立体异构体。极性较小的异构体的熔点为154-157℃，[α]D24＝-43.9℃，C＝23.8mg/2ml CHCl3，而极性较大的异构体的熔点为168-171℃，[α]D24＝-19.1°，C＝11.86mg/2ml CHCl3。
B.或者，在氩气气氛中，向上述制备的(2R)-4-甲基-2-(叔丁氧羰基甲基)戊酸(2.39g，10.4mmol)、HOBtH2O(2.5g，1eq.(当量))，N-甲基吗啉(2.3ml，2eq.)和(10S)-10-氨基-(9-氧代-1，8-二氮杂-三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯(2.96g，1eq.)的无水DMF(200ml)溶液中，加入EDCI(3.96g，2.0eq.)，搅拌所得混合物过夜，第二天早晨于35℃高真空除去DMF。使残余物在CH2Cl2(150ml)/水(75ml)间分配，然后用0.5N HCl(2×75ml)、饱和NaHCO3(2×75)、最后用盐水(1×75ml)洗涤有机相。用Na2SO4干燥CH2Cl2层后，过滤并蒸发至干。通过硅胶柱色谱纯化(石油醚至30％乙酸乙酯/石油醚)得到(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂-三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁基酯(3.24g，62.7％)。
C.按类似的方法，制备下述式(Ia)化合物
(3R，10S)-4-苯基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)丁酸叔丁基酯，MS532(M＋H)+；(3R，10S)-4-环己基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)丁酸叔丁基酯，MS538(M＋H)+；(3R，10S)-6-苯基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁基酯，MS560(M＋H)+；和(3R，10S)-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁基酯，MS484(M＋H)+；和(3R，l0S)-2-甲氧基羰基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸苄基酯，MS590(M＋H)+；D.或者，在-78℃氩气气氛中，向(2R)-4-甲基-2-(叔丁氧羰基甲基)戊酸(19，4.34mmol)的无水THF(100ml)溶液中滴加入NaN(TMS)2(1.0M的THF溶液，10.9ml，2.5eq.)并搅拌所得混合物1小时。加入碘甲烷(0.33ml，1.2eq.)，在-78℃到室温搅拌所得混合物过夜。第二天用水(100ml)使反应骤冷。用乙醚(3×100ml)提取后，使水层与乙酸乙酯层混合并在搅拌下加入4N HCl使PH＝2。加入氯化钠至到饱和并用乙酸乙酯(3×100ml)提取水层。用Na2SO4干燥合并的有机提取物，过滤并浓缩得到(2R)-4-甲基-2-((1-甲基-1-叔丁氧羰基)甲基)戊酸(1g)，为深棕色油(1g)。于0℃氩气气氛中，向这个反应粗产物(500mg)和(10S)-10-氨基-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯(399mg，0.7eq.)的无水DMF溶液中加入HOBt-H2O(1.1eq.，234mg)，随之加入EDCI(663mg，2.5eq.)。从0℃到室温搅拌所得混合物过夜。通过在65℃泵蒸馏除去大部分的DMF。然后使残余物在CH2Cl2(150ml)间分配。用0.5N HCl(2×75ml)、饱和碳酸氢钠(2×75ml)溶液和盐水(1×75ml)洗涤后，用Na2SO4干燥有机相，过滤并蒸发至干。在硅胶上通过快速柱色谱法纯化粗产品，以30％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到三个化合物的混合物。(3R，10S)-2-甲基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂-三环-[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁酯和(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂-三环-[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁酯的两个单一立体异构体。进一步的纯化可分离这三个化合物，(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环-[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁酯(13mg)，为白色固体；为白色固体的1∶1立体异构体的混合物(5mg)；以及极性较小的立体异构体(3R，10S)-2-甲基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环-[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁酯(15mg)；300 MHz1H NMR于CDCl3中(极性较低的异构体)δ(-0.2)-(-0.05)(m，1H)；0.5-0.7(m，IH)；0.9(dd，J＝4Hz，J＝6.7Hz，6H)；1.15(d，J＝8.4Hz，3H)；1.18-1.4(m，3H)；1.41(s，9H)；1.45-1.73(m，4H)；1.75-1.8(m，2H)； 2.5-2.7(m，3H)；2.89(dd，J＝10.9Hz，J＝15Hz，1H)； 3.34-3.5(m，2H)；3.95-4.1(m，1H)；4.25-4.4(m，1H)；4.72-4.82(m，1H)；5.22-5.3(m，1H)；6.52(d，J＝7.5Hz，1H)；6.91(s，1H)；7.13(dd，J＝6.7Hz，J＝8.4Hz，1H)；7.22(dd，J＝5Hz，J＝7.1Hz，1H)；7.34(d，J＝8.4Hz，1H)；7.84(d，J＝8.4Hz，1H)。
实施例6式(Ib)化合物A.极性较低的异构体(11S)-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-1l-基氨基甲酰基)己酸叔丁酯(300mg)用5ml 10％三氟乙酸/二氯甲烷溶液覆盖并搅拌。2.5小时后，TLC表示反应完成了，减压除去所有的挥发组分。将残余物溶于CH2Cl2(40ml)中并移至分离漏斗中，顺序用0.5％HCl(40ml)和盐水(40ml)洗涤。干燥有机相(MgSO4)，过滤并浓缩得到极性较低的立体异构体(11S)-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酸。
B.按类似的方法，水解极性较大的(11S)-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酸叔丁酯得到极性较大的异构体(11S)-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酸。
C.或者，于0℃将(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁酯(3.24g，6.5mmol)溶于95％TFA(水溶液)(30ml)中并搅拌20分钟。除去冰浴后再搅拌混合物1小时。浓缩成油状物后将残留物溶于乙酸乙酯(250ml)中并用水(7×150ml)洗涤。用硫酸钠(Na2SO4)干燥有机层并蒸发至干，得到(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸的单一异构体，为白色粉末，2.83g(98.4％产率)；MS442(M＋H)+(化合物1)。
D.按类似的方法，只是用适当的式(Ia)化合物代替(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)-己酸叔丁酯，得到下述式(Ib)化合物(3R，10S)-4-苯基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九烷-12-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)丁酸，MS474(M－H)-；(3R，10S)-4-环己基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)丁酸，MS482(M＋H)+；(3R，10S)-3-环己基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)丙酸，MS468(M＋H)+；
(3R，10S)-6-苯基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸，MS502(M－H)-；(3R，10S)-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10，6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸，MS426(M－H)-；和(3R，10S)-2-氨基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸，MS457(M＋H)+；(3R，10S)-2-羟基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸，MS458(M＋H)+；和(3R，9S)-5-甲基-3-(8-氧代-1，7-二氮杂三环[9.6.1.012，17]十八碳-11(18)，12(17)，13，15-四烯-9-基氨基甲酰基)己酸。
E.将(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10，6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸(183mg)溶于40ml无水CH2Cl2中，并于0℃加入乙醇(0.5ml，5eq.)，随后加入N，N-二甲氨基吡啶(0.1eq.，5mg)，最后加入EDCI(209mg，5eq.)。从0℃到室温搅拌所得溶液过夜。另外加入CH2Cl2(100ml)并用0.5NHCl(2×50ml)、饱和NaHCO3溶液(2×50ml)、最后用盐水(1×50ml)洗涤。用Na2SO4干燥有机层、过滤并蒸发至干。用乙酸乙酯和石油醚重结晶得到(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸乙酯，为白色固体(产率108mg，55％)，MS470(M＋H)+。
F.或者，将上述实施例5D制备的(3R，10S)-2-甲基-5-甲基-3-(9-氧代-l，8-二氮杂三环-[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁基酯的极性较低异构体(15mg)溶于CH2Cl2(2.4ml)和TFA(0.6ml)中，并在室温搅拌所得混合物4小时，35℃真空除去溶剂，加入乙酸乙酯并用水洗涤溶液(3×10ml)。用Na2SO4干燥有机层、过滤并蒸发至干，用乙酸己酯/石油醚重结晶得到(3R，10S)-2-甲基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10，6.1，013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸(7mg)，为白色固体，MS456.3(M＋H)+。
G.按类似的方法，水解(3R，10S)-2-甲基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸叔丁基酯的1∶1立体异构体的混合物(实施例5D所制)(5mg)得到3mg白色固体；300 MHz1H NMR in CDCl3δ(-0.5)-(-0.3)(m，1H)；0.6-0.8(m，lH)； 0.8-1.05(m，6H)；1.05-1.22(m，2H)；1.35(3H，dd，J＝9Hz)；1.4-1.7(m，3H)；1.7-1.95(m，3H)；2.3-2.48(m，1H)；2.54-2.73(m，1H)； 2.8-3.0(m，2H)；3.38-3.5(m，1H)；3.52-3.72(m，1H)；3.8-3.98(m，1H)；4.34-4.45(m，1H)；4.7-4.84(m，1H)；5.0-5.08(m，1H)；6.8(d，1H)；7.15-7.25(m，1H)；7.25-7.32(m，1h)；7.35(d，J＝8.4Hz，1H)；7.88(d，J＝8.4Hz)。
H.或者，将(3R，10S)-2-甲氧羰基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸苄基酯溶于乙醇中(35ml，需要一定的加热)并加入甲酸铵(1642mg，3eq.)，随后加入置于活性炭上的10％Pd(100mg)。在氩气气氛中室温搅拌3小时后反应完成。通过1cm硅酸盐床吸滤所得混合物，然后浓缩，加入MeOH并通过棉塞过滤。浓缩后，向残余物中加入CH2Cl2并将其剧烈搅拌后过滤。浓缩滤液并用乙酸乙酯/石油醚重结晶，得到(3R，10S)-2-甲氧羰基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸(产率140mg)，为白色固体，MS500.3(M＋H)+。
I.将(3R，10S)-2-甲氧羰基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸溶于乙醇(25ml)中，然后滴加入1NLiOH(0.3ml，3eq.)。在室温度下搅拌所得的均匀溶液3小时，30℃减压除去大部分乙醇，然后加入水(5ml)和乙酸乙酯(30ml)，并在搅拌下加入4N HCl直到PH＝2。用盐水进一步洗涤乙酸乙酯层，用Na2SO4干燥、过滤并蒸发至于，通过反相HPLC纯化得到47mg(3R，10S)-2-羧基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸，为白色固体，MS484.5(M－H)-。
实施例7式(Ic)化合物A.在氩气气氛中，将较小极性的(11S)-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酸异构体(210mg)和5-羟基苯并三唑单水合物(109mg)的无水DMF(20ml)溶液冷至0℃(冰浴)，向这个混合物中加入EDCI(282mg)并持续搅拌0.5小时。向溶液中加入邻-苄基-羟基胺(0.27ml)，并放置反应混合物过夜使之温热至室温。减压除去所有的挥发组分。将残留物溶于CH2Cl2(100ml)和20％HCl(100ml)中并移至分离漏斗中。分离有机相并用CH2Cl2(2×100ml)洗涤水相。顺序用5％NaHCO3、盐水洗涤有机物，用MgSO4干燥，过滤并浓缩得到(11S)-N-苄氧基-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)六酰胺，为结晶产物。通过硅胶柱色谱法进一步纯化产物，再用热的乙酸乙酯/CH2Cl2重结晶，得到化合物极性较大的异构体，其熔点为232-233℃，极性较小的异构体熔点为251-253℃。
B.或者，在0℃向(3R，10S)-5-甲基(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸(2.5g，5.82mmol)、HOBtH2O(0.89g，1eq.)和邻-苄基羟基胺(2.2ml，3eq.)的DMF(200ml)溶液中加入EDCI(2.77g，2.5eq.)，搅拌所得的混合物过夜，然后于65℃通过泵蒸馏除去DMF。随后向残留物中加入甲醇(14ml)再加入乙醚(140ml)。在0℃搅拌下加入0.5N HCl(140ml)，再加入石油醚(140ml)，在0℃搅拌所得的混合物15分钟，然后吸滤所得的白色固体，用水(100ml)和1∶1乙醚/石油醚(100ml)洗涤。真空干燥(P2O5)3小时得到(3R，10S)-5-甲基-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，为白色固体(2.7g，84.9％)。
C.按类似的方法，用适当取代的式(Ib)化合物代替(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸，得到下式(Ic)化合物(3R，10S)-N-苄氧基-2-甲氧基羰基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[1 0.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，MS605.3(M＋H)+；(3R，10S)-N-苄氧基-6-苯基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，MS609(M＋H)+；(3R，10S)-N-苄氧基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，MS533(M＋H)+；实施例8式(Id)化合物A.向(11S)-N-苄氧基-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺极性较大异构体(90mg)的乙醇/四氢呋喃(350ml；2∶1)溶液中加入10％钯炭(30mg)。在有持续的氢气泡通过的情况下搅拌所得的物质。3小时后TLC(10％H3OH/CH2Cl2)表示反应完成。通过硅藻土床(3X)过滤所得的物质并减压浓缩至几乎干的残留物。加入二氯甲烷(15ml)并再减压浓缩至几乎干的残留物，然后再重复。向残留物中加入3-4滴甲醇，再加入二氯甲烷(15ml)。在冷却条件下(冰浴)搅拌所得的物质并加入乙醚(5ml)和己烷(2ml)，缓慢出现的结晶通过过滤收集，得到50mg(11S)-N-羟基-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺的极性较大的异构体，其熔点为197-201℃，[α]D23＝-85.1°(3.5mg/1.0ml DMSO)。(化合物2)B.按类似的方法，但用极性较低的(11S)-N-苄氧基-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺的立体异构体代替其极性较高的异构体，得到极性较低的(11S)-N-苄氧基-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺的立体异构体，熔点为212-216℃，[α]D23＝-38.5°(4.7mg/1.0mlCH3OH)。
C.或者，将(3R，10S)-N-苄氧基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺(1.0g，1，83mmol)溶于20％THF的乙醇溶液(500ml)中，然后分批加入置于活性炭上的Pd(200mg)。在向溶液中缓缓通入氢气的情况下搅拌所得的糖浆，4小时后，通过硅藻土床(1.5cm)吸滤所得的反应混合物，浓缩滤液并将其溶于甲醇(30ml)中，通过棉塞过滤。用甲醇/乙酸乙酯/乙醚/石油醚重结晶，得到(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺(768mg，92％)，MS455(M－H)+；
D.按类似的方法，用适当取代的式(Ic)化合物代替(3R，10S)-N-苄氧基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，得到下式(Id)化合物(3R，10S)-N-羟基--2-甲氧基羰基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，MS515(M＋H)+；(3R，10S)-N-羟基-6-苯基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，MS517(M－H)-；(3R，10S)-N-羟基-2-氨基羰基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，MS483(MH+)-H2O；(3R，10S)-N-羟基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，MS443(MH+)；和(3R，9S)-5-甲基-3-(8-氧代-1，7-二氮杂三环[9.6.1.012，17]十八碳-11(18)，12(17)，13，15-四烯-9-基氨基甲酰基)己酰胺。
实施例9式(Ie)化合物A.在室温氩气气氛中，向4-甲基-2-乙酰基硫甲基戊酸(612mg，3mmol)、(10S)-10-氨基-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯(427mg，1.5mmol)、和HOBtH2O(230mg，1.5mmol)的无水DMF(30ml)溶液中一次加入EDCI(863mg，4.5mmol)，搅拌所得的混合物过夜，然后于30℃高真空除去DMF得到黄色的半固体。将其溶于乙酸乙酯(50ml)中，用1N HCl(30ml)、5％NaHCO3溶液(30ml)和最后用盐水(30ml)洗涤。干燥有机相(MgSO4)并蒸发至干。在50％乙醚-石油醚(40ml)中搅拌所得的浅黄色油状物，得到600mg(85％)的(10S)-2-乙酰基硫甲基-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺，为1∶1立体异构体的混合物。通过快速柱色谱法分离立体异构体的混合物(LPS-2)，以20％乙酸乙酯/石油醚洗脱得到极性较低的异构体，熔点226℃，而极性较高的异构体熔点为220℃。
实施例10化合物(If)A.在0℃氩气气氛中，向极性较低的(10S)-2-乙酰基硫甲基-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺立体异构体(50mg，0.106mmol)的10ml甲醇溶液中加入0.5ml浓NH4OH，在0℃(加入NH4OH后移开冰浴)至室温搅拌反应混合物，再进一步在室温放置1小时。减压除去过量的甲醇得到白色固体残留物，使残留物在乙酸乙酯(30ml)和0.1N HCl(15ml)之间分配，用盐水(15ml)洗涤有机相并干燥(MgSO4)，蒸发至干。在50％乙醚/石油醚中搅拌所得的固体残留物，过滤得到极性较高的(10S)-2-巯甲基-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺立体异构体，为白色粉末，产率41mg(90％)熔点224℃(化合物3)。
实施例11式(HH)化合物A.在25℃水浴下向4-甲基戊酸(25g，0.125mmol)中缓慢加入亚硫酰氯(20.4ml，1.3g)，然后在氩气气氛中于50℃加热混合物3小时(直到气体的蒸发停止)。在大气压下蒸馏反应混合物粗品得到4-甲基戊酰氯(25.3g，87.3％)，沸点143℃。
B.按类似的方法，但是以5-苯基戊酸(5g)代替4-甲基戊酸，得到5-苯基戊酰氯(4.4g)，为无色液体，沸点91-93℃。
实施例12式(N)化合物A.在室温氩气气氛中，向60％NaH(836mg，1.5eq.)的甲苯(200ml)悬浮液中分批加入L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺(3.0g，3.9mmol)。在室温剧烈搅拌混合物1小时，在0℃向溶液中小心地滴加4-甲基戊酰氯。在室温搅拌反应混合物3小时后，用10ml水使反应骤冷并加入70ml乙醚。先用0.5N HCl(2×50ml)，再用5％K2CO3(3×50ml)，最后用盐水(1×50ml)洗涤反应混合物，用MgSO4干燥有机相，过滤并蒸发至干。通过柱色谱纯化(1∶6乙酸乙酯/石油醚为洗脱剂)得到N-4-甲基戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺(3.39g，78％)。
B.按类似的方法，只是以适当的酰氯代替了4-甲基戊酰氯，制得化合物(N)
N-3-苯基丙酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺，MS347(M+；N-5-苯基戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺，MS375M+；N-戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺，MS300(M＋H)+。
实施例13式(Q)化合物A.在-78℃氩气气氛中，在5分钟内向N-4-甲基戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺(3.39g，10.8mmol)的75ml无水THF溶液中滴加入NaH(TMS)2(1.0M THF，11.34ml，1.05eq.)。在-78℃搅拌1小时后，向混合物中加入六甲基磷酰胺(5ml)，再加入叔丁基溴代乙酸酯(5.2ml，3eq.)，和一步加入400mg四正丁基碘化铵。在-78℃氩气气氛中保持所得的混合物过夜。第二天清晨，用水(100ml)使反应骤冷，然后用乙醚提取(3×100ml)，用盐水洗涤合并的醚层，然后用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，通过柱色谱纯化(5∶95乙酸乙酯/石油醚-10∶90乙酸乙酯/石油醚为洗脱剂)得到N-(4-甲基-2-叔丁氧基羰基甲基)戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺(4g，86.5％)。
B.按类似的方法，只是以适当的式(N)化合物代替了N-4-甲基戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺，制得下式(Q)化合物N-(3-苯基-2-叔丁氧基羰基甲基)丙酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺，MS461(M+)；N-(5-苯基-2-叔丁氧基羰基甲基)戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺，MS490(M+H)+；
N-(2-叔丁氧基羰基甲基)戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺，MS414(M＋H)+。
实施例14式(Ka)化合物A.在0℃氢气气氛中，向搅拌下的N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基)戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺(5.45克，12.7mmol)的50％THF水溶液(150ml)中加入LiOH·H2O晶体(2.14g，4eq.)，再加入30％H2O2(11.5ml)。然后移去冰浴并搅拌所得的乳液3小时直到澄清。在35℃减压除去大部分THF，然后加入CH2Cl2(150ml)并在搅拌下加入4N HCl调至PH＝2。加入NaCl后，用CH2Cl2(3×150ml)进一步提取水层。在35℃减压除去CH2Cl2并将残余物溶于乙酸乙酯(150ml)中，用5％K2CO3(3×150ml)溶液提取所得的溶液并用乙醚(50ml)洗涤提取物。在搅拌下将CH2Cl2与NaCl一起加到水层中，用CH2Cl2(3×70ml)提取水层，并用Na2SO4干燥合并提取物，过滤并浓缩得到(2R)-4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基戊酸，为无色油(2.95g，定量产率)。
B.按类似的方法，但是用适当的式(Q)化合物代替N-(4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基)戊酰基-L-(+)-2，10-樟脑磺内酰胺，得到下述式(Ka)化合物(2R)-3-苯基-2-叔丁氧羰基甲基-丙酸，MS265(M＋H)+；(2R)-5-苯基-2-叔丁氧羰基甲基-戊酸，MS293(M＋H)+；(2R)-2-叔丁氧羰基甲基-戊酸，(无色油，1.09g)。
C.将(2R)-3-苯基-2-叔丁氧羰基甲基-丙酸(55mg)溶于冰乙酸(20ml)中并向乙酸中加入PtO2(25mg)。然后将烧杯置于帕尔高压气体贮罐(Parr bomb)中，抽空后用100psi H2充满。搅拌3天后，通过1cm硅藻土床吸滤所得混合物，浓缩滤液得到黄色油，即(2R)-3-环己基-2-叔丁氧羰基甲基-丙酸(56mg)，MS269(M－H)-。
实施例15式(R)化合物在0℃1小时15分内向D-亮氨酸(50g，0.381mo1)的570ml 3NHBr(水溶液)的溶液中分批加入硝酸钠(42g，1.6eq.)，在0℃进一步搅拌反应3小时并用乙醚(1000ml)提取。用水(2×500ml)洗乙醚层后用MgSO4干燥，浓缩。然后，使所得的红色糖浆与氯仿(3×200ml)共蒸发以除去颜色，然后通过泵抽得到(2R)-2-溴-4-甲基戊酸，为无色油，恒重71.3g。
实施例16式(S)化合物异丁烯加入二氯甲烷(80ml)中缩合以使体积扩大为2倍(于-50℃，CHCl3干冰)，向该溶液中加入(2R)-2-溴-4-甲基戊酸(28g，143.6mmol)并保持温度在-40℃到-50℃，滴加入浓硫酸(1ml)。使反应混合物在20小时内升至室温。浓缩溶液后另外加入二氯甲烷(300ml)再用饱和碳酸氢钠(2×100ml)溶液和水(2×100ml)洗涤。在Na2SO4上干燥后，过滤并浓缩有机层得到黄色油，蒸馏所得物质得到23g(2R)-2-溴-4-甲基戊酸叔丁基酯，为澄清无色的油。
实施例17式(U)化合物于0℃在1小时内，向苄基甲基丙二酸酯(2.13ml，1eq.)和叔丁醇钾(1.36g，leq.)的无水DMF(100ml)溶液中滴加入(2R)-2-溴-4-甲基戊酸叔丁基酯(2.89g，11.5mmol)的50ml DMF溶液，在0℃搅拌所得溶液3天。然后，使反应混合物在乙醚(150ml)和饱和氯化铵(80ml)间分配，通过硅藻土吸滤所得的反应混合物使两相分开，用乙醚(3×100ml)进一步提取水相，并用水(6×100ml)洗涤合并的乙醚提取物。用MgSO4干燥后，过滤有机层并蒸发至干，通过快速柱色谱纯化(用4∶96乙酸乙酯/石油醚洗脱)，得到(2R)-2-[(-甲氧基-羰基-1-苄氧羰基)甲基]-4-甲基戊酸叔丁基酯(2.55g)，为澄清的无色油，MS322(M-丙酮)+。
实施例18式(Kb)化合物在室温将(2R)-2[(1-甲氧基羰基-1-苄氧羰基)-甲基]-4-甲基戊酸叔丁基酯溶于5ml 80％TFA(eq.)中并通过TLC搅拌1.5小时。反应仅完成30％，所以还需加入TFA(10ml)，在半小时内反应完成。于45℃高真空除去TFA并将残余物溶于乙酸乙酯中，用水(5×30ml)洗涤。用Na2SO4干燥后，过滤乙酸乙酯层，浓缩并泵抽得到(2R)-2-[(1-甲氧羰基-1-苄氧羰基)甲基]-4-甲基戊酸，为固体(1.68g)，MS322(M+)。
实施例19式(W)化合物在室温在纯的三乙基原甲酸酯(22ml，0.20mol)中搅拌次膦酸晶体(8.4g，0.13mol)90分钟，然后通过套管转移到已冷至0℃10分钟的乙基异丁基丙烯酸酯(8g，0.036mol)和四甲基胍(4.5ml，0.036mol)的搅拌溶液中，移去冰浴并搅拌反应混合物4小时。用200ml乙醚稀释反应混合物并用1N HCl(100ml)、水(4×100ml)和盐水(100ml)洗涤溶液，用硫酸镁干燥，减压蒸发得到8.15g2-(乙氧基)-膦酰基甲基-4-甲基戊酸乙酯，为浅黄色固体油，MS349(M－H2O)+。
实施例20式(X)化合物将2-(乙氧基)-膦酰基甲基-4-甲基戊酸乙酯粗产物(26g)溶于600ml THF/CH2Cl2(50/50)中并冷却到0℃，向溶液中加入二异丙-乙胺(32ml)和90.8ml-二-(三甲基甲硅烷基)乙酰胺，搅拌所得的混合物20分钟后加入仲甲醛(5.5g)。使溶液温度达到室温后在37℃加热18小时。蒸除溶剂，并将得到的油状物溶于200ml乙酸乙酯中，用50ml lN的HCl(2X)和50ml盐水(2X)洗涤溶液，用MgSO4干燥，过滤并蒸发得到19.3g 2-(乙氧基)(羟甲基)膦酰基甲基-4-甲基戊酸乙酯，为浅黄色油，MS281(MH+)。
实施例21式(Y)化合物A.将2-(乙氧基)(羟甲基)膦酰基甲基-4-甲基戊酸乙酯(5g)溶于20ml CH2Cl2中并冷至-20℃(双份)，向溶液中滴加入甲磺酰氯(1.5ml)和三乙胺(3.0ml)。15分钟后移去冰浴并在室温放置反应混合物3.5小时。然后用冷的10ml 2％HCl，10ml NaHCO3(饱和)溶液和10ml盐水洗涤各溶液、用MgSO4干燥、过滤并蒸发得到12.8g(总合产率)的2-(乙氧基)(甲烷-磺酰氧甲基)膦酰基甲基-4-甲基戊酸乙酯。
B.按类似的方法，但用对甲苯磺酰氯代替甲磺酰氯，得到2-(乙氧基)(对甲苯磺酰氧基甲基)膦酰基甲基-4-甲基戊酸乙酯。
实施例22式(AA)化合物A.在0℃在50ml DMF中，搅拌氢化钠(1.52g，(60％))和6g2-喹啉硫醇。在H2释放停止后，在室温搅拌混合物2.5小时，然后将混合物冷至0℃，并通过套管加入溶在10ml DMF中的2-(乙氧基)(甲磺酰氧基甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸乙酯(12.8g)，搅拌所得的混合物18小时后，使其缓缓升至室温。蒸除DMF，将残留物溶于50ml乙酸乙酯中，用50ml H2O(2X)、盐水(50ml)洗涤，用MgSO4干燥并蒸发得到黄色半固体。通过快速色谱纯化，采用10％乙酸乙酯/己烷～80％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到10g 2-(乙氧基)(喹啉-2-基硫甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸乙酯(Rf0.35，80％乙酸乙酯/己烷)，MS424(MH+)。
B.按类似的方法，但用1-萘硫酚、2-萘硫酚或苯硫酚代替2-喹啉硫醇，可以制得下面式(AA)化合物2-(乙氧基)(萘-1-基硫甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸乙酯；2-(乙氧基)(萘-2-基硫甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸乙酯；和2-(乙氧基)(苯基硫甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸乙酯。
实施例23式(BB)化合物A.将2-(乙氧基)(喹啉-2-基硫甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸乙酯(4.5g)溶于100ml THF中，并将12.5ml 2N NaOH和足够甲醇加入以使溶液变得均匀。18小时后蒸除THF，将残余物用50ml H2O稀释和50ml乙酸乙酯洗涤，将水相酸化至PH4，并用50ml乙酸乙酯(2X)提取产物，用20ml盐水洗涤乙酸乙酯层，用MgSO4干燥并蒸发得到3.8g的2-(羟基)(喹啉-2-基硫甲基)-膦酰基-甲基-4-甲基戊酸，为黄色油，MS368(MH+)。
B.按类似的方法可以制备下面式(BB)化合物2-(羟基)(萘-1-基硫甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸；2-(羟基)(萘-2-基硫甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸；和2-(羟基)(苯基硫甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸；实施例24式(BB)化合物的折分将2-(羟基)(喹啉-2-基硫甲基)膦酰基-甲基-4-甲基戊酸(5.3g)溶于50ml热乙醇(无水)中并加入4.2g(-)-辛可尼定。室温放置30分钟后盐开始沉淀。用箔封闭烧瓶并放置2天，吸滤除去盐，并蒸发滤液得到黄色泡沫状物。将盐和滤液各自溶于100ml乙酸乙酯中，保持PH大于4并顺序用1％HCl洗涤以除去辛可尼定。两溶液都用MgSO4干燥并蒸发，得到2.4g单一的立体异构体，[α]D24＝+10.68°(9.73mg甲醇溶液(2ml))，以及得到2.5g另一单一立体异构体，[α]D24＝-8.70°(9.88mg甲醇溶液(2ml))。
实施例25式(Iq)化合物于0℃在6ml THF中搅拌2-(羟基)(喹啉-2-基硫甲基)膦酰基甲基-4-甲基戊酸(300mg，0.81mmol)的单一立体异构体和1，1′-羰基二咪唑(174mg，1.0mmol)1.5小时。向溶液中加入(10S)-10-氨基-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯(270mg，0.95mmol)，并使所得混合物升至室温，然后搅拌18小时。蒸除THF并将残余物溶于60ml乙酸乙酯中。用10ml H2O，10ml盐水洗乙酸乙酯层，用MgSO4干燥并蒸发，得到(10S)-[4-甲基-2-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)戊基](喹啉-2-基硫甲基)次膦酸，为黄色油。通过反相HPLC纯化，采用乙腈和50mm NH4OAc缓冲液作为洗脱剂梯度洗脱。用41％乙腈得到极性较高立体异构体(30mg)，用43％乙腈时得到极性较低的立体异构体(10mg)，冻干馏份得到灰色粉末，MS635(MH+)(化合物4)。
实施例26式(Ih)化合物将(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸(200mg，0.45mmol)溶于10ml冰乙酸中，并在室温帕尔反应器中和在Pt2O(60mg)存在下，在100psi H2压力下将其氢化15小时。向反应混合物中鼓入氩气15分钟，滤除催化剂(Pt2O)(通过硅藻土漏斗)。将澄清滤液蒸发至干并与甲苯共蒸馏两次，定量得到(3R，10S)-5-甲基(9-氧代-1，8-二氮杂三环10.6.1.013，18]十九碳-10-基氨基甲酰基)己酸，为白色固体。MS448(M－H)-。
实施例27式(Ii)化合物在室温，向(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳基氨基甲酰基)己酸和邻-苄基羟基胺(5eq.，2.25mmol，277mg)的10ml无水DMF溶液中加入1-羟基苯并三唑·H2O(2eq.，0.9mmol，122mg)和EDCI(5eq.，2.25mmol，431mg)，在室温搅拌所得的澄清反应混合物过夜，在室温高真空除去溶剂并使残余物在乙酸乙酯(15ml)和1N HCl(15ml)间分配。用1N HCl(15ml)进一步提取乙酸乙酯层，用4N NaOH碱化合并的含水层至PH 10，用NaCl饱和并用CH2Cl2提取(3×15ml)，干燥(MgSO4)合并的CH2Cl2提取物，过滤并蒸发至干得到半-固体。在0℃乙醚中(10ml)搅拌这一半固体30分钟，过滤得到85mg(34％)(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳氨基甲酰基)己酰胺，为白色粉末，MS555(M＋H)+。
实施例28式(Ij)化合物在10％Pd-C(35mg)存在下，在无水乙醇(5ml)中和在1大气压的H2压力下氢化(3R，10S)-N-苄氧基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6，1.013，18]十九碳-10-基氨基甲酰基)己酰胺2小时，向反应混合物中通氩气10分钟并通过硅藻土漏斗过滤反应混合物，在硅藻土漏斗上的催化剂用5ml乙醇进一步洗涤，蒸发合并的滤液至干得到固体残余物。将该固体溶于10ml 5％MeOH/乙醚中并在0℃搅拌30分钟，过滤后得到57mg(91％)(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-10-基氨基甲酰基)己酰胺，为灰色粉末，MS465(M＋H)+。
实施例29
式(DD)化合物向N-叔丁氧羰基色氨酸(3mmol，914mg)和N-甲基乙二胺(3.6mmol，0.27g，0.32ml)的无水DMF(15ml)溶液中加入1-羟基苯并三唑·H2O(3mmol，459mg)和EDCI(4.5mmol，863mg)。在氩气气氛中室温搅拌混合物过夜，35℃高真空条件下除去过量的溶剂(DMF)。将残余物溶于乙酸乙酯(40ml)中，在1N HCl(3×25ml)中提取加成化合物。用K2CO3固体碱化合并的含水提取物并用乙酸乙酯(3×25ml)提取。用盐水(30ml)洗涤合并的有机提取物并干燥(MgSO4)。蒸发至干得到920mg(85％)经HPLC分折的纯产物，即N′-叔丁氧羰基色氨酸-N-((甲基)氨基乙基)酰胺，为白色泡沫。
实施例30式(EE)化合物向剧烈搅拌下的N′-叔丁氧羰基-色氨酸-N-((甲基)氨基乙基)酰胺(2g，5.55mmol)和反-1，4-二氯丁-2-烯(8.32mmol，1.04g，0.88ml)的二氯甲烷(75ml)和40％KOH(50ml)的溶液中，加入0.3当量的苄基三乙基氯化铵(1.66mmol，378mg)。在室温搅拌过夜后，分离黄色有机层并用30ml CH2Cl2进一步提取含水层。用盐水洗涤合并的二氯甲烷提取物并干燥(MgSO4)。将残余物溶于10ml MeOH中，并且在0℃搅拌下加入50ml乙醚。滤除得到的黄色固体，将滤液蒸发至干得到1.12g 11-N′-(叔丁氧羰基)氨基-10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基-三环[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-五烯，HPLC证明是纯化合物，为浅黄色粉末，MS413(M＋H)+。
实施例31式(FF)化合物在室温搅拌11-N′-(叔丁氧羰基)氨基-10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基三环[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-五烯(414mg，1mmol)的40％TFA/CH2Cl2(10ml)溶液1小时。减压除去过量的TFA和溶剂，将残余物溶于二氯甲烷(30ml)中并用5％K2CO3溶液(2×15ml)和盐水(15ml)洗涤，干燥有机层(MgSO4)并蒸发得到240mg(76％)浅黄色泡沫状物，即11-氨基-10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基三环[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-戊烯，MS313(M＋H)+。
实施例32式(Ik)化合物在室温氩气气氛中，在HOBt(0.7mmol)，EDCI(1.4mmol，268mg)和N-甲基吗啉(1.4mmol，0.15ml)存在下，搅拌11-氨基-10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基三环[1l.6.l.014，19]二十碳-3(4)，l3(20)，l4(l9)，15，17-五烯(161mg，0.7mmol)和(2R)-4-甲基-2-叔丁氧羰基甲基-戊酸(220mg，0.7mmol)的无水DMF(15ml)溶液。减压除去过量的DMF，将残余物溶于二氯甲烷(30ml)中并用水(30ml)洗涤。用CH2Cl2(30ml)提取水相，干燥(MgSO4)合并的二氯甲烷提取物并蒸发得到浅棕色油，该浅棕色油通过反相HPLC纯化(C18柱；CH3CN-50 MM NH4OH2梯度)，冻干所需的馏份得到148mg(40％)(3R，11S)-5-甲基-3-(l0-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基三环-[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-五烯-11-基氨基甲酰基)己酸叔丁基酯，为浅黄色粉末，MS525.2(M＋H)+。
实施例33式(Il)化合物在室温在含20％TFA的CH2Cl2(5ml)中搅拌(3R，11S)-5-甲基-3-(10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基三环[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-五烯-11-基氨基甲酰基)己酸叔丁酯(0.228mmol，120mg)1小时，减压除去多余的溶剂(于30℃旋转蒸发)得到酸粗产物，即(3R，11S)-5-甲基-3-(10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基三环[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-五烯-11-基氨基甲酰基)己酸，为浅棕色油，通过反相HPLC纯化，以CH3CN-NH4OAc缓冲液梯度洗脱，得到90mg(75％)的酸，为浅黄色粉末，MS469.1(M＋H)+。
实施例34式(Im)化合物在室温氩气气氛中，在HOBt(2eq.，1mmol，135mg)，EDCI(5eq.，2.5mmol，479mg)和N-甲基吗啉(10eq.，5mmol，0.55ml)存在下，在无水DMF(30ml)中搅拌(3R，11S)-5-甲基-3-(10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基三环[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-五烯-11-基氨基甲酰基)己酸和邻-苄基羟基胺(5eq.，2.5mmol，308mmg)15小时。在室温高真空下除去溶剂，将残余物溶于蒸馏水(35ml)中并用含10％乙酸乙酯的石油醚提取以除去极性校低的杂质。用CH2Cl2(2×35ml)从水层中提取所需的产物，用盐水(25ml)洗涤有机提取物、干燥(MgSO4)并蒸发得到黄色油(330mg)。通过反相HPLC纯化粗产物(CH3CN-NH4OAc缓冲液；梯度)并冻干得到175mg(61％)(3R，11S)-N-苄氧基-5-甲基-3-(10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基-三环[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-五烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺，为灰色粉末，MS572(M－H)-。
实施例35式(In)化合物在室温在3％HCOOH的乙醇(5ml)溶液中，搅拌(3R，11S)-N-苄氧基-5-甲基-3-(10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基三环-[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-五烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺(40mg，0.07mmol)和10％Pd-C(10mg)的混合物1小时。通过硅藻土锥形漏斗过滤混合物并真空浓缩。向1ml 50％AcOH/MeOH中的固体残余物中，在搅拌下一次加入5ml乙醚。通过过滤收集灰色粉末，得到26mg(68％)(3R，11S)-N-羟基-5-甲基-3-(10-氧代-1，6，9-三氮杂-6-甲基三环[11.6.1.014，19]二十碳-3(4)，13(20)，14(19)，15，17-五烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺，MS488.5(MH+)。
实施例36式(JJ)化合物A.向(±)-2-羟基丁酸钠(2.54g，20.1mmol)的无水DMF(30ml)溶液中加入苄基溴(2.9ml，1.2eq.)和无水KI(330mg，0.1eq.)。在100℃加热所得悬浮液24小时并减压蒸除DMF。将残余物溶于乙醚中，用水和饱和Na2S2O3洗涤、干燥(MgSO4)并浓缩。蒸馏残余的油状物得到3.7g(95％)(±)-2-羟基丁酸苄基酯，为无色油，沸点95℃(0.45托)。
B.或者，向冷的(0℃)NaH(3.8g，60％重量的矿物油分散液，95.0mmol)的THF(50ml)悬浮液中，通过套管滴加入乙醇酸(gly-colic acid)(7.2g，95mmol)的THF(50ml)溶液。使所得溶液升温至25℃并真空浓缩，将所得的盐悬浮于DMF(100ml)中并用KI(1.57g，0.1eq.)和苄基溴(12.3ml，1.1eq.)处理。在氩气气氛中100℃加热混合物23小时并蒸除DMF。将残余物溶于乙醚中，并用水、饱和Na2S2O3和盐水洗涤，用MgSO4干燥，蒸馏后得到甘醇酸苄基酯(8.5g，54％)，为无色油状态物，沸点85-87℃(0.5托)。
实施例37式(LL)化合物A.向冷的(0℃)(±)-2-羟基-丁酸苄基酯(1.75g，9.01mmol)的CH2Cl2(50ml)溶液中加入2，6-二甲基吡啶(1.2ml，1.1eq.)，再滴加入三氟甲磺酸酸酐(1.7ml，1.1eq.)，10分钟后，于0℃向其中滴加入L-亮氨酸叔丁基酯(1.7g，1eq.)和二异丙基乙基-胺(1.7ml，1.1eq.)的CH2Cl2(30ml)溶液。将溶液升温至25℃36小时，用CH2Cl2稀释并用饱和NaHCO3(50ml)洗涤。干燥(Na2SO4)和真空浓缩之后，使残余油通过快速色谱分离非对映异构体(硅胶，5％乙酸乙酯/己烷)。极性较低的非对映异构体(1R)-N-(2-苄氧羰基)丙基-L-亮氨酸叔丁基酯(Rf0.22，5％乙酸乙酯/己烷)，和极性较高的非对映异构体(1S)-N-(2-苄氧羰基)丙基-L-亮氨酸叔丁基酯(Rf0.13)可通过HPLC(5％乙酸乙酯/己烷)进一步单独纯化，得到1.1g极性较高的非对映异构体和0.78g极性较低的非对映异构体，MS(FAB)364(MH+)。
B.按类似的方法，从甘醇酸苄基酯(379mg，2.7mmol)、L-亮氨酸叔丁基酯(435mg，2.7mmol)、2，6-二甲基吡啶(0.35ml，2.8mmol)、二异丙基乙基胺(0.53ml，0.28mmol)以及三氟甲磺酸酐(0.51ml，2.8mmol)制得383mg(50％)N-苄氧羰基-甲基-L-亮氨酸叔丁基酯，为无色油，MS(FAB)336(MH+)。
实施例38式(Io)化合物A.向(0℃)(1S)-N-(2-苄氧羰基)丙基-L-亮氨酸叔丁基酯(143mg，0.393mmol)的CH2Cl2(3ml)溶液中加入TFA(0.5ml)。在25℃搅拌溶液4小时并真空浓缩，得到(1S)-N-(2-苄氧羰基)丙基-L-亮氨酸的盐(式(MM)化合物)、将其与(10S)-10-氨基-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10，6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯(124mg，1.1eq.)和HOBT(80mg，1.5eq.)一起溶于DMF(3ml)中。冷至0℃后，加入N-甲基吗啉(60ml，1.5eq.)和EDCI(113mg，1.5eq.)。在25℃18小时后，用10ml乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和NaHCO3(3×10ml)和水(2×10ml)洗涤、干燥(Na2SO4并浓缩。对残余物进行快速色谱分离(硅胶，1％MeOH/CH2Cl2)并收集Rf为0.5的馏份(5％MeOH/CH2Cl2)。采用反相HPLC得到(2R，1′S，10S)-2-[N-(1-苄氧羰基)丙氨基]-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺(46mg)，MS(FAB)575(MH+)。
B.按类似的方法，但以(1R)-N-(2-苄氧羰基)丙基-L-亮氨酸叔丁基酯(270mg)代替(lS)-N-(2-苄氧羰基)丙基-L-亮氨酸叔丁基酯，得到(2R，1′R，10S)-2-[N-(1-苄氧羰基)丙氨基]-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺(175mg)，MS(FAB)575(MH+)。
实施例39式(Ip)化合物A.在氩气气氛中，向(2R，1′S，10S)-2-[N-(1-苄氧羰基)丙氨基]-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6，1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺(46mg)的THF/MeOH(1∶1，2ml)溶液中加入1M氢氧化钡(0.3ml)。在25℃24小时后，向溶液中通入CO2并滤除所得的碳酸钡沉淀。减压除去溶剂并用1M HCl将含水残余物的PH调至5.5。除去水后，通过反相HPLC得到(2R，1′S，10S)-2-[N′-(1-羧基)丙氨基]-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺，为白色固体，MS(FAB)48 3(M－H)-(化合物5)。按类似的方法可以制备(2RS，10S)-2-[羧基甲基氨基]-2-环己基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)乙酰胺，497(M＋H)+；(2RS，10S)-2-[羧基甲基氨基]-3-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺，471(M＋H)+；(2RS，10S)-2-[膦酰基甲基氨基]-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺。
B.按类似的方法，从(2R，1′R，10S)-2-[N′-(1-苄氧基羰基)丙氨基]-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6，1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺，制得(2R，1′S，10S)-2-[N′-(1-羧基)丙氨基]-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺(16mg)，MS(FAB)483(M－H)-。
C.按上述式(Io)化合物的制备方法，从N-[(苄氧羰基)甲基]-L-亮氨酸叔丁基酯(156mg，0.465mmol)、HOBT(94mg，1.5eq.)，EDCI(134mg，1.5eq.)、N-甲基吗啉(77μl)和(10S)-10-氨基-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯(133mg，1eq.)，经过快速色谱分离(3％MeOH/CH2Cl2)得到苄基酯粗产物，将此粗产物溶于THF/MeOH(1∶1，6ml)中并用1M氢氧化钡(0.9ml)水解过夜。向溶液中通入CO2并滤除所得的沉淀。浓缩滤液，用1M HCl将含水残余物调至PH 5.5。通过反相HPLC得到(2R，10S)-N′-(羧甲基)氨基-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基)戊酰胺(17mg)，为白色固体，MS(FAB)457(MH+)。
实施例40式(6)化合物4-甲基-2-亚甲基戊酸A.于0℃向纯异丁基丙二酸乙酯(25g，0.13mol)中缓缓加入冰冷的二乙胺(15.1ml，0.15mol)。搅拌15分钟后，滴加入甲醛水溶液(11.1ml，37％甲醛水溶液)，使混合物在25℃搅拌3天，用20g K2CO3于40ml水中的溶液处理反应混合物并用乙醚(2×100ml)提取。合并醚提取物、用盐水洗涤，用MgSO4干燥并在20℃减压浓缩。
将含一些乙醚的反应粗产物4-甲基-2-亚甲基戊酸乙酯溶于无水乙醇(250ml)中并用乙腈(250ml)、1M LiOH(9.7g，250ml水溶液，0.23mol)处理。搅拌过夜后，减压蒸除有机溶剂并用乙酸乙酯(2×150ml)提取含水残余物，用盐水洗涤合并的提取物、用MgSO4干燥并减压浓缩，得到10.5g 4-甲基-2-亚甲基戊酸，为无色油。
B.按类似的方法，可以制备下式(Gd)化合物4-苯基-2-亚甲基丁酸；3-环己基-2-亚甲基丙酸；5-苯基-2-亚甲基戊酸；2-亚甲基戊酸；和3，3-二甲基-2-亚甲基丁酸。
实施例41式(Id)化合物(反异羟肟酸酯)A.将4-甲基-2-亚甲基戊酸(3.5g)和邻-苄基羟基胺的溶液在120℃加热8小时，使反应混合物在50ml 1.0N NaOH溶液和50ml乙醚间分配，分离水相，用10％HCl酸化至PH3并用50ml乙醚洗涤。通过离子交换色谱(Dowex-50W)，以20％吡啶/水洗脱，得到2-(苄氧氨基甲基)-4-甲基戊酸。300 MHz1H NMR(CDCl3)δ0.9-1.0(dd，6H，CH3)；1.25-1.35(m，1H，CH)；1.6-1.75(m，2H，CH2)；2.8-2.9(m，lH，Ca-H)；3.0-3.2(ABq，2H，CH2N)；4.7-4.75(ABq，2H，CH2O)；7.3-7.4(m，5H，Ph)。
B.二氯甲烷中采用甲酸/乙酸酐使2-(苄氧氨基甲基)-4-甲基戊酸甲酰化，得到N-甲酰基-2-(苄氧氨基甲基)-4-甲基戊酸，使其与化合物(J)偶合向N-甲酰基-2-(苄氧氨基甲基)-4-甲基戊酸(175mg)和溶于5％吡啶/二氯甲烷(30ml)的化合物J(230mg)中，在室温加入4-二甲氨基吡啶(DMPA)(200mg)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺氢氯化物(EDCI)。搅拌反应混合物8小时并浓缩，使其在30ml乙酸乙酯和30ml 20％HCl之间分配。用水(20ml)，5％NaHCO3(20ml)和盐水洗涤有机相，用MgSO4干燥并浓缩。在硅胶上纯化，用50％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到的产物是两个异构体的混合物。在甲醇中利用10％Pd/C氢解，得到(2RS，10S)-2-[N-甲酰基，N-羟基氨基甲基]-4-甲基-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，6-四烯-10-基)戊酰胺，为两个异构体的混合物，MS 455(M－H)+，(化合物6)。
按类似的方法可以制备(2RS，10S)-2-[异丙氧基羰基甲基]-4-甲基-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，6-四烯-10-基)戊酰胺，MS 455(M＋H)+。
(2RS，10S)-2-[吗啉代乙酯基甲基]-4-甲基-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，6-四烯-10-基)戊酰胺，MS 555(M＋H)+。
实施例42这一实施例说明了含有式(I)化合物或其可药用盐，例如(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，适于口服的典型药物组合物的制备A.成份％wt./wt.
式(I)化合物 20.0％乳糖 79.5％硬脂酸镁 0.5％将上述成份混合，并分装到各含100mg的硬壳明胶囊中，每一胶囊大约是一天所需的总剂量。
B.成份％wt./wt.
式(I)化合物20.0％硬脂酸镁 0.9％淀粉 8.6％乳糖 79.6％PVP(聚乙烯吡咯烷) 0.9％将除硬脂酸镁外的上述成份混合，以水作为粒化液体使其粒化，然后干燥所得的制剂并与硬脂酸镁混合，通过适当的制片机制成片剂。
C.成份式(I)化合物0.1g丙二醇 20.0g聚乙二醇40020.0g多乙氧基醚 1.0g水足量至100ml将式(I)化合物溶于丙二醇、聚乙二醇400和多乙氧基醚中，然后在搅拌下加入足够量的水得到100ml溶液，将其过滤并装瓶。
D.成份％wt./wt.
式(I)化合物20.0％花生油 78.0％山梨糖醇酯类60(span 60)2.0％将上述成份熔化，混合并填充到柔软弹性胶囊中。
实施例43这一实施例说明了含有式(I)化合物或其可药用盐，例如(3R，11S)-N-羟基-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11，6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺，适于非肠道施用的典型药物制剂的制备成份式(I)化合物0.02g丙二醇 20.0g
聚乙二醇40020.0g多乙氧基醚 1.0g0.9％盐溶液足量至100ml将式(I)化合物溶于丙二醇、聚乙二醇400和多乙氧基醚中，然后在搅拌下加入足够量的0.9％盐溶液形成100ml静脉注射溶液，通过0.2μ膜过滤器将其过滤并在无菌条件下包装。
实施例44这一实例说明了含有式(I)化合物或其可药用盐，例如(10S)-2-巯基甲基-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6，1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)戊酰胺，为栓剂形式的典型药物组合物的制备成份％wt./wt.
式(I)化合物1.0％聚乙二醇1000 74.5％聚乙二醇4000 24.5％在蒸汽浴上将所有成份熔化并混合，倾入2.5g至模具中成型。
实施例45这一实例说明了含有式(I)化合物或其可药用盐，例如(10S)-4-甲基-2-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)戊基-(喹啉-2-基硫甲基)次膦酸，适于吹入施用的典型药物制剂的制备
成份％wt./wt.
降低颗粒体积的式(I)化合物1.0％降低颗粒体积的乳糖 99.0％将上述成份研磨、混合，并通过装有剂量泵(dosing pump)的吹入机包装。
实施例46这一实例说明了含有式(I)化合物或其可药用盐，例如(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺，采用喷雾剂形式的典型药物制剂的制备成份％wt./wt.
式(I)化合物 0.005％水 89.995％乙醇10.000％将式(I)化合物溶于乙醇中并与水混合，然后通过装有计量泵的喷雾机包装。
实施例47这一实例说明了含有式(I)化合物或其可药用盐，例如(3R，llS)-N-羟基-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺，采用气雾剂形式的典型药物制剂的制备
成份％wt./wt.
式(I)化合物 0.10％推进剂11/12 98.90％油酸1.00％将式(I)化合物分散到油酸和推进剂中，然后将所得混合物倾入装有计量阀的气雾容器中。
实施例48体外试验从不含血清的GM0010A细胞培养基中纯化得到纤维细胞I型胶原酶，用PMA刺激，这是通过肝素和锌-螯合的琼脂糖，再通过FPLC(MONO S柱)进行的。通过胰旦白酶的培养而使胶原酶得到活化。
通过锌-螯合和明胶-琼脂糖柱，再通过FPLC(MONO S柱)，从含血清的纤维细胞(GM0010A)培养基中纯化得到IV型胶原酶。通过SDS-PAGE显示出该酶是均一的，并可通过用1mmol APMA在35-37℃培养1小时而活化。
将式(I)化合物溶于DMSO中，并将其加到含0.2μg I型或0.03μg IV型胶原酶的1ml TC缓冲液(20mM三羟甲基氨基甲烷，5mMCaCl2，PH7.5)(2％DMSO最终浓度)的比色杯中。选择式(I)化合物浓度，使得活性每变化20％都至少有一个数据点。可允许酶和化合物在37℃预培养3分钟。为促使反应开始，向每个比色杯中加2入N-(7-二甲氨基-4-甲基)香豆素(“DACM”)(Sigma)和硫代肽(Ac-Pro-Leu-Gly-S-“Leu”-Leu-Gly-OEt，Bachem Bioscien-ce Inc.)至20μM。在激活和发射波长395nm和485nm处分别测定记录荧光分析结果。每个数据点是两个试验的平均值。在Enzfitter方法中通过IC50符合情况分析针对于化合物浓度而言，表示每分钟荧光变化的至少六个数据点。
在这一试验中，式(I)化合物表现出抑制胶原酶活性的能力。
K1或IC50(nM)HFC HNC HNGMatrSLN化合物1(实施例6)2514115850 4500化合物2(实施例8)0.1 0.4 0.23 9化合物3(实施例10) 2.3 --- ---114 ＞800化合物4(实施例25) 5 4 14 78 ＞800化合物5(实施例39) 20--- ---322525000化合物6(实施例41) 0.5 --- 1.09 7.5实施例49体外试验这一试验可测定式(I)化合物是否可抑制35S-标记的糖胺聚糖(GAG′S)从软骨移植物中释放。
从刚杀的牛的膝关节得到小的软骨移植物(直径3mm)并用35SO4标记。作为对rhIL-1-alpha加入的反应，35S-标记的糖胺聚糖(GAG′S)被释放到培养基中，而rhIL-1-alpha导致了软骨细胞基质金属蛋白酶(MMP′S)的表达，包括基质溶素和胶原酶。在不存在rhIL-1-alpha时，标记的GAG′S对自发释放的抑制百分比可被校正。对五组移植物来说每组的结果表示为平均±S.E.M。
在这一试验中，式(I)化合物表现出抑制35S-标记的GAG′S从软骨释放的能力。
化合物2(实施例8) IC50＝40μM化合物4(实施例25)IC50＝40μM实施例50体外试验在体外试验中采用胎鼠长骨模型研究式(I)化合物的反-骨(anti-bone)吸收作用。采用牛PTH诱发骨的体外吸收作用。骨的吸收作用是通过从45Ca预-标记的胎鼠长骨释放到培养其中的45Ca的量表征。式(I)化合物对于牛PTH诱导的骨吸收的抑制效果是由平均抑制百分比±sem表示的。
解剖45Ca-预标记的胎鼠长骨(从前臂得到)并在Linbro培养皿和补充了1mg/ml BSA的BGJb介质中于37℃培养过夜。在每组中有五对骨骼。首先将式(I)化合物溶于乙醇，然后稀释至各种浓度，并在第一天同时加入1×108M的PTH(1-34)。化合物溶液中的乙醇浓度低于0.05％，这不影响试验进行。试验在第6天结束，在第3天有一组介质改变。
在每个介质发生变化后，对培养基中存在的45Ca计数。用0.1NHCl分解所余的骨骼并对分解的骨中存在的45Ca也计数。结果表示为占从每对骨骼中释放45Ca总量的百分比。1×10-8M的牛PTH诱发了最高水平的骨吸收，它被作为100％，而这一浓度被作为标准浓度。仅在介质存在下骨吸收的基线水平被定为0％。所有用化合物处理的组均与1×10-8M的牛PTH(1-34)比较，化合物抑制骨吸收50％时的浓度被定义为IC50。
在这个试验中，式(I)化合物表现出抑制牛PTH-诱导的骨吸收的能力。
化合物3(实施例10)IC50＝0.1μM化合物4(实施例25)IC50＝5μM毒性在上述试验中未观察到严重毒性作用。
权利要求
1.单一立体异构体或其混合物形式存在的式(I)化合物或其可药用盐其中虚线表示任意的双键；及当n是1，2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1表示a)-CH2-R4，其中R4表示巯基、乙酰基硫、羧基、羟基氨基羰基、N-羟基-甲酰氨基甲基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、苄氧基氨基羰基、或其中R6表示任选取代的芳基，所述芳基是喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基；b)-CH(R7)-R8，其中R7表示烷基、羟基、氨基、氨基甲基、烷基磺酰基酰氨基甲基、芳烷基磺酰基酰氨基甲基、烷氧羰基、烷氧羰基氨基甲基、烷基氨基羰基酰氨基甲基、苯并噁唑氨基甲基、氨基羰基或羧基；R8表示羧基、羟基氨基羰基、烷氧羰基或芳烷氧羰基；C)-NH-CH(R9)-R10，其中R9表示氢、烷基或芳烷基，R10表示羧基、烷氧羰基、或芳烷氧羰基、膦酰基、二烷基膦酰基；R2表示烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3表示氢、卤素、烷基或烷氧基；或当n是2或3；m是3或4；A是-N(R11)-，其中R11表示氢或烷基；R1、R2和R3的定义如上；或当n是0；时m是4、5或6；A是-CH(R12)-，其中R12表示羧基、烷氧羰基或任选取代的氨基甲酰基；和R1、R2和R3的定义如上；
2.根据权利要求1的化合物，其中n是1、2或3；m是3；A是-CH2-；R2是烷基和芳烷基；和R3是氢、卤素或烷氧基。
3.根据权利要求2的化合物，其中R1是-CH2-R4，其中R4是羧基、羟基氨基羰基、烷氧羰基、芳氧基羰基、芳基烷氧基羰基、苄氧基氨基羰基或N-羟基甲酰氨基甲基；R2是2-甲基丙基和R3是氢。
4.根据权利要求3的化合物，其中n是2且R1是-CH2-C(O)OH、-CH2-C(O)NHOH或-CH2-N(OH)CHO。
5.权利要求4化合物的单一立体异构体，即(3R，10S)-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酸，或(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺。
6.权利要求3的化合物，其中n是3和R1是-CH2-C(O)NHOH。
7.权利要求6化合物的单一的立体异构体，即(3R，11S)-N-羟基-5-甲基-3-(10-氧代-1，9-二氮杂三环[11.6.1.014，19]二十碳-13(20)，14(19)，15，17-四烯-11-基氨基甲酰基)己酰胺。
8.权利要求3的化合物，其中n是1和R1是-CH2-C(O)OH或-CH2-C(O)NHOH。
9.权利要求8化合物的单一的立体异构体，即(3R，9S)-5-甲基-3-(8-氧代-1，7-二氮杂三环[9，6，1.012，17]十八碳-11(18)，12(17)，13，15-四烯-9-基氨基甲酰基)己酸，或(3R，9S)-N-羟基-5-甲基-3-(8-氧代-1，7-二氮杂三环[9.6.1.012，17]十八碳-11(18)，12(17)，13，15-四烯-9-基氨基甲酰基)己酰胺。
10.权利要求2的化合物，其中R1是-CH2-R4，而R4是巯基或乙酰基硫。
11.权利要求10的化合物，其中n是2和R1是-CH2SH或-CH2SC(O)-CH3。
12.权利要求11的化合物，即(10S)-2-巯基甲基-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)戊酰胺；或(10S)-2-乙酰基硫甲基-4-甲基-N-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)戊酰胺。
13.权利要求2的化合物，其中R1是其中R6是任选取代的芳基，而芳基是喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基。
14.权利要求13的化合物，其中n是2和R6是喹啉-2-基。
15.权利要求14的化合物，即(10S)-[4-甲基-2-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)戊基]-(喹啉-2-基硫甲基)次膦酸。
16.权利要求2化合物，其中R1是-CH(R7)-R8，其中R7表示烷基、烷氧羰基、或羧基和R8表示羧基、羟基氨基羰基、烷氧羰基、芳烷氧羰基或膦酰基。
17.权利要求16的化合物，其中R7是甲氧基羰基或甲基。
18.权利要求17的化合物，其中R8是羟基-氨基羰基。
19.其中n为2的权利要求18化合物的单一的立体异构体，即(3R，10S)-N-羟基-5-甲基-2-甲氧基羰基-3-(9-氧代-1，8-二氮杂三环[10.6.1.013，18]十九碳-12(19)，13(18)，14，16-四烯-10-基氨基甲酰基)己酰胺。
20.权利要求2的化合物，其中R1是-NH-CH(R9)-R10，其中R9表示氢、烷基或芳烷基，R10表示羧基、烷氧羰基或芳烷氧羰基。
21.权利要求20的化合物，其中R9是烷基和R10是羧基或烷氧羰基。
22.权利要求1的化合物，其中n是2或3；m是4；A是-N(R11)-，而R11表示氢或烷基；R2表示烷基；R3表示氢、卤素或烷氧基。
23.权利要求22的化合物，其中R2是2-甲基丙基；R3是氢和R11是甲基。
24.权利要求23的化合物，其中R1是-CH2-R4，而R4是羧基、羟基氨基羰基、N-羟基甲酰氨基甲基、烷氧羰基、芳氧基羰基、芳基烷氧基羰基或苄氧基羰基。
25.权利要求24的化合物，其中n是2和R1是-CH2-C(O)NHOH。
26.含有可药用赋形剂和治疗有效量的、以单一立体异构体或其混合物形式存在的式(I)化合物或其可药用盐的药物组合物其中虚线表示任意的双键；及当n是1，2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1表示a)-CH2-R4，其中R4表示巯基、乙酰基硫、羧基、羟基氨基羰基、N-羟基甲酰氨基甲基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、苄氧基氨基羰基、或其中R6表示任选取代的芳基，所述芳基是喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基；b)-CH(R7)-R8，其中R7表示烷基、羟基、氨基、氨基甲基、烷基磺酰基酰氨基甲基、芳烷基磺酰基酰氨基甲基、烷氧羰基、烷氧羰基氨基甲基、烷基氨基羰基酰氨基甲基、苯并唑氨基甲基、氨基羰基或羧基；R8表示羧基、羟基氨基羰基、烷氧羰基或芳烷氧羰基；c)-NH-CH(R9)-R10，其中R9表示氢、烷基或芳烷基，R10表示羧基、烷氧羰基、芳烷氧羰基、膦酰基或二烷基膦酰基；R2表示烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3表示氢、卤素、烷基或烷氧基；或当n是2或3；m是3或4；A是-N(R11)-，其中R11表示氢或烷基；和R1、R2和R3的定义如上；或当n是0；m是4、5或6；A是-CH(R12)-，其中R12表示羧基、烷氧羰基或任选取代的氨基甲酰基；和R1、R2和R3的定义如上；
27.以单一立体异构体或其混合物形式存在的式(I)化合物或其可药用盐在制备抑制哺乳动物基质金属蛋白酶活性的药物中的应用其中虚线表示任意的双键；及当n是1，2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1表示a)-CH2-R4，其中R4表示巯基、乙酰基硫、羧基、羟基氨基羰基、N-羟基-甲酰氨基甲基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、苄氧基氨基羰基、或其中R6表示任选取代的芳基，所述芳基是喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基；b)-CH(R7)-R8，其中R7表示烷基、羟基、氨基、氨基甲基、烷基磺酰基酰氨基甲基、芳烷基磺酰基酰氨基甲基、烷氧羰基、烷氧羰基氨基甲基、烷基氨基羰基酰氨基甲基、苯并噁唑氨基甲基、氨基羰基或羧基；R8表示羧基、羟基氨基羰基、烷氧羰基或芳烷氧羰基；c)-NH-CH(R9)-R10，其中R9表示氢、烷基或芳烷基，R10表示羧基、烷氧羰基、芳烷氧羰基、膦酰基或二烷基膦酰基；R2表示烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3表示氢、卤素、烷基或烷氧基；或当n是2或3；m是3或4；A是-N(R11)-，其中R11表示氢或烷基；和R1、R2和R3的定义如上；或当n是0；m是4、5或6；A是-CH(R12)-，其中R12表示羧基、烷氧羰基或任选取代的氨基甲酰基；和R1、R2和R3的定义如上。
28.制备式(I)化合物或其可药用盐的方法其中虚线表示任意的双键；及当n是1，2或3；m是3或4；A是-CH2-；R1表示a)-CH2-R4，其中R4表示巯基、乙酰基硫、羧基、羟基氨基羰基、N-羟基-甲酰氨基甲基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、苄氧基氨基羰基、或其中R6表示任选取代的芳基，所述芳基是喹啉-2-基、萘-1-基、萘-2-基、吡啶基或苯基；b)-CH(R7)-R8，其中R7表示烷基、羟基、氨基、氨基甲基、烷基磺酰基酰氨基甲基、芳烷基磺酰氨基甲基、烷氧羰基、烷氧羰基氨基甲基、烷基氨基羰基酰氨基甲基、苯并噁唑氨基甲基、氨基羰基或羧基；R8表示羧基、羟基氨基羰基、烷氧羰基或芳烷氧羰基；c)-NH-CH(R9)-R10，其中R9表示氢、烷基或芳烷基，R10表示羧基、烷氧羰基、芳烷氧羰基、膦酰基或二烷基膦酰基；R2表示烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；和R3表示氢、卤素、烷基或烷氧基；或当n是2或3；m是3或4；A是-N(R11)-，其中R11表示氢或烷基；和R1、R2和R3的定义如上；或当n是0；m是4、5或6；A是-CH(R12)-，其中R12表示羧基、烷氧羰基或任选取代的氨基甲酰基；且R1、R2和R3的定义如上。该方法包括(a)使式(J)化合物，其中R3是氢、卤素、烷基或烷氧基；p是5、6、7或8；与式(K)化合物反应，其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基；R7a是氢或烷氧羰基；和R14是叔丁基或苄基，得到式(Ia)化合物，其中R2、R3、R7a、R14和p定义如式(J)和式(K)化合物；或(b)在中等酸性条件下处理式(Ia)化合物，其中R2、R3、R7a、R14和p的定义如上所述，得到式(Ib)化合物，其中R2、R3、R7a和p的定义如上所述；或(c)用邻-苄基羟基胺与式(Ib)化合物反应，其中R2、R3、R7a和p的定义如上所述；得到式(Ic)化合物，基中R2、R3、R7a和p的定义如上所述；或(d)在催化氢化条件下处理式(Ic)化合物，其中R2、R3、R7a和p的定义如上所述；得到式(Id)化合物其中R2、R3、R7a和p的定义如上所述；或(e)使式(J)化合物，其中R3是氢、卤素、烷基或烷氧基和p是5、6、7或8，与式(M)化合物反应，其中R2是烷基、环烷基、环烷基烷基或芳烷基，得到式(Ie)化合物，其中R2、R3和p的定义如式(J)和式(M)化合物；或(f)用NH4OH处理式(Ie)化合物，其中R2、R3和p的定义如上，得到式(If)化合物，其中R2、R3和p的定义如上；或(g)使式(I)化合物的游离碱与酸反应得到可药用的酸加成盐；或(h)使式(I)化合物的酸加成盐与碱反应得到相应的游离碱；或(i)将式(I)化合物的酸加成盐转化为其它的酸加成盐。
全文摘要
以单一立体异构体或其混合物形式存在式(I)化合物及其可药用盐，它可用于抑制哺乳动物基质金属蛋白酶的活性，式(I)化合物和式(i)化合物如下图所示，其中虚线表示任意的双键；及当n是1，2或3；m是3或4；A是-CH
文档编号C07D487/08GK1132511SQ94193630
公开日1996年10月2日申请日期1994年7月27日优先权日1993年8月5日
发明者阿林多·L·卡斯特汉诺, 陆圣炎, 斯蒂芬·霍恩, 袁征宇, 亚历山大·克兰茨申请人:辛太克斯(美国)公司