包含淀粉酶变体的清洁组合物
1.参考序列表
2.本技术包含计算机可读形式的序列表。所述计算机可读形式以引用方式并入本文。
技术领域
3.本发明涉及包含淀粉酶的清洁组合物、其制备方法和其使用方法。本发明的组合物和方法适合用于家庭清洁组合物或处理组合物，具体地为衣物洗涤组合物和盘碟洗涤组合物，包括手洗和自动衣物洗涤组合物和/或手洗和自动盘碟洗涤组合物。本发明尤其可用于清洁衣物。


背景技术：

4.α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，e.c.3.2.1.1)构成催化淀粉及其他直链和支链1,4-葡糖苷低聚糖和多糖的水解的一组酶。很多年来已经知道这些酶可用于家庭清洁组合物，包括从地衣芽孢杆菌(b.licheniformis)中取用的第一种细菌α-淀粉酶，也称为termamyl碱性淀粉酶，例如来源于aa560(wo 2000/060060)和来源于sp707(由tsukamoto等人，1988，biochem.biophys.res.comm.151:25-31所描述)的那些。已知可修饰这些和其他淀粉酶以改善洗涤剂中的稳定性。例如，wo 96/23873公开了删除sp707(wo 96/23873的seq id no:7)的第181+182位氨基酸或第183+184位氨基酸以改善该淀粉酶的稳定性。wo 96/23873进一步公开了通过将m202替换为例如亮氨酸来修饰sp707淀粉酶以使该分子对氧化稳定。
5.洗涤剂配制人员面临着尤其是以对环境有利的方式改善清洁组合物的功效的不断挑战。由于环境原因，提供有效的(优选地还在通常使用更少体积的水和/或更低的温度的快速洗涤循环中)洗涤剂组合物也变得日益重要。因此，期望拥有在与亲本多肽相比时表现出改善的特性(诸如比活性)的淀粉分解酶。特别优选的淀粉分解酶可在低温下发挥作用，与此同时保留或增强其他期望的特性，诸如比活性(淀粉分解活性)、稳定性和/或洗涤性能，以实现低温下和/或更短洗涤循环中的良好清洁。
6.因此，本发明的一个目标是提供包含α-淀粉酶变体的清洁组合物，所述α-淀粉酶变体在与亲本多肽相比时表现出改善的特性(诸如比活性)并且可用于低温下的洗涤、盘碟洗涤和/或清洁过程。本发明的另外一个目标是提供包含α-淀粉酶变体的清洁组合物，与亲本α-淀粉酶相比或与包含seq id no:1、2、3、4、5、6、7或8中的任一者的α-淀粉酶的清洁组合物相比，所述α-淀粉酶变体在低温下具有改善的洗涤性能。


技术实现要素：

7.本发明提供了一种清洁组合物，该清洁组合物包含：
8.(a)亲本α-淀粉酶多肽的α-淀粉酶变体，其中该变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、
40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、,133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478；并且其中所述变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的至少60％，诸如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本多肽改善的特性；
9.(b)和清洁助剂，优选地其量为0.001重量％至99.999重量％，优选地0.01重量％至99.9重量％。
10.本发明还提供了一种清洁组合物，该清洁组合物包含：
11.(a)亲本α-淀粉酶多肽的变体，该变体具有i)与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、,133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478，ii)与使用seq id no:1进行编号的位置r181、g182、d183和g184相对应的亲本α-淀粉酶中的一个或优选两个或更多个位置处的缺失；(iii)所述α-淀粉酶变体具有与seq idno:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的氨基酸序列的至少60％，诸如至少65％，诸如至少70％，诸如至少75％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少97％，诸如至少99％，但小于100％的序列同一性，并且(iv)其中所述变体具有α-淀粉酶活性，并且(v)其中α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本多肽改善的特性；
12.和
13.清洁助剂，优选地其量为0.001重量％至99.999重量％，优选地0.01重量％至99.9重量％。
14.本公开还提供了一种制备清洁组合物的方法，该方法包括获得亲本α-淀粉酶多肽的淀粉酶变体，包括以下步骤：a)在与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处引入替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、,133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478，b)优选地在与使用seq id no:1进行编号的所述位置r181、g182、d183和g184相对应的亲本α-淀粉酶中的一个或优选两个或更多个位置处引入缺失；所述方法由此提供了所述亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的氨基酸序列的至少60％，诸如至少65％，诸如至少70％，诸如至少75％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少97％，诸如至少99％，但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本多肽改善的特性；以及将α-淀粉酶变体与清洁助剂混合
15.本发明还提供了一种处理表面(优选地，纺织物)的方法，该方法包括：
16.(i)形成水性洗涤液体，该水性洗涤液体包含水、本文所述的淀粉酶和清洁助剂，
17.(ii)优选地在5或60℃，优选地10至40℃，或优选地至多35℃的温度下，更优选地在30℃或更低的温度下或者在20℃或更低的温度下用该水性洗涤液体处理该表面；以及
18.(iii)冲洗该表面。
19.本文的组合物和方法尤其可用于处理包含棉和/或合成纤维(诸如聚酯、尼龙等)的表面，该表面可为纤维或织物的形式，例如单一织物或混合织物，诸如涤棉布。本发明还涉及如上所述的组合物或方法用于以下方面的用途：清洁或去除污渍，尤其是含淀粉或其他碳水化合物的污渍。
具体实施方式
20.定义
21.等位变体：术语“等位变体”指占据相同染色体座位的基因的两个或更多个替代形式中的任何一个。等位变体天然来源于突变，并且可导致种群内的多态性。基因突变可为沉默突变(不改变编码的多肽)或者可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位变体是由基因的等位变体编码的多肽。
22.α-淀粉酶：术语“α-淀粉酶”(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，e.c.3.2.1.1)构成催化淀粉及其他直链和支链1,4-葡糖苷低聚糖和多糖的水解的一组酶。在一个方面，可用于本发明的α-淀粉酶变体具有seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16和/
或17的多肽的α-淀粉酶活性的至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％，但小于100％。
23.α-淀粉酶活性：就本发明的目的而言，根据“实施例”部分中所述的规程来确定α-淀粉酶活性。可根据使用实施例2中所述的微样本测定法的方法来确定α-淀粉酶活性。
24.氨基酸：如本文所用，术语“氨基酸”包括标准二十种基因编码氨基酸及其
‘
d’形式的对应立体异构体(与天然
‘
l’形式相比)、ω-氨基酸、其他天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如，α,α-二取代氨基酸、n-烷基氨基酸等)和化学衍生的氨基酸。可通过与官能侧基反应来获得一种或多种氨基酸的化学衍生物。此类衍生的分子包括例如游离氨基经衍生而形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基、羧基苄氧基、叔丁氧基羰基、氯乙酰基或甲酰基的那些分子。游离羧基可经衍生而形成盐、甲酯和乙酯或其他类型的酯和酰肼。游离羟基可经衍生而形成o-酰基或o-烷基衍生物。作为化学衍生物，还包括那些包含二十种标准氨基酸的天然存在的氨基酸衍生物的肽。例如：4-羟脯氨酸可替换脯氨酸；5-羟赖氨酸可替换赖氨酸；3-甲基组氨酸可替换组氨酸；高丝氨酸可替换丝氨酸，并且鸟氨酸可替换赖氨酸。衍生物还包括包含一个或多个添加或缺失的肽，只要保持必要的活性即可。其他包括的修饰是酰胺化、氨基末端酰化(例如，乙酰化或巯基乙酸酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如，用氨或甲胺)和类似末端修饰。
25.当具体列举氨基酸诸如
‘
丙氨酸’或
‘
ala’或
‘
a’时，除非另外明确说明，否则该术语是指l-丙氨酸和d-丙氨酸两者。其他非常规氨基酸也可以是本发明的多肽的合适组分，只要该多肽保留所需的功能特性即可。对于所示的肽而言，每个编码的氨基酸残基在适当时由与常规氨基酸的俗名相对应的单字母名称表示。在一个实施方案中，本发明的多肽包含l-氨基酸或由其组成。
26.cdna：术语“cdna”意指可通过从获自真核细胞的经剪接的成熟mrna分子的逆转录来制备的dna分子。cdna缺少可能存在于对应基因组dna中的内含子序列。最初的初始rna转录物是mrna的前体，其在作为成熟的经拼接的mrna出现之前，通过一系列步骤，包括拼接，被加工。
27.编码序列：术语“编码序列”指多核苷酸，其直接规定了变体的氨基酸序列。编码序列的边界一般由开放阅读框确定，它通常起始于起始密码子如atg、gtg或ttg并终止于终止密码子如taa、tag或tga。编码序列可为dna、cdna、合成的、或重组的多核苷酸。
28.控制序列：术语“控制序列”是指编码如本文所用的变体的多核苷酸的表达所需的核酸序列。每个控制序列可以是对编码该变体的多核苷酸而言天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或对彼此而言天然的或外源的。此类调控序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、和转录终止子。调控序列至少包括启动子以及转录和翻译终止信号。可以为控制序列设置接头用于引入特异性限制性位点，以便于将该控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区连接起来。
29.对应于：如本文所用，术语“对应于”是指确定序列的特定氨基酸的方式，其中参考特定氨基酸序列。例如，就本发明的目的而言，当参考特定氨基酸位置时，技术人员将能够使另一个氨基酸序列与已参考的所述氨基酸序列比对，以便确定哪个特定氨基酸可能在所述另一个氨基酸序列中是感兴趣的。本文其他地方已描述了另一个氨基酸序列与例如如seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17中所阐述的序列或本文所列
的任何其他序列的比对。可使用替代比对方法并且这些方法是技术人员所熟知的。
30.酶洗净力有益效果：本文使用的术语“酶洗净力有益效果”是指与没有酶的相同洗涤剂相比酶可向洗涤剂增添的有利效果。可由酶提供的重要洗净力有益效果是在洗涤和/或清洁之后没有或只有很少可见污渍的去污；防止或减少洗涤过程中释放的污渍的再沉积(也称为抗再沉积)；完全或部分恢复最初为白色但在反复使用和洗涤之后获得了淡灰色或淡黄色外观的纺织物的白度(也称为增白)。不与催化去污或防止污渍再沉积直接相关的纺织物护理有益效果对于酶洗净力有益效果也可能很重要。此类纺织物护理有益效果的示例是防止或减少从一种织物到另一种织物或相同织物的另一部分的染料转移(也称为染料转移抑制或抗返染)；从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球粒或绒毛(抗起球)；改善织物柔软性；织物的颜色澄清；以及去除截留在织物或衣服的纤维中的颗粒污渍。酶漂白是另外一种酶洗净力有益效果，其中催化活性通常用于催化漂白组分(诸如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
31.表达：术语“表达”包括涉及制备变体的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰和分泌。
32.表达载体：术语“表达载体”是指线性或环状的dna分子，其包含编码变体的多核苷酸，并且可操作地连接至提供其表达的附加核苷酸。
33.片段：术语“片段”是指在seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的氨基和/或羧基末端不存在一个或多个(例如，若干个)氨基酸的多肽。其中该片段具有α-淀粉酶活性。在一个方面，片段包含seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的至少200个连续氨基酸残基，例如seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的至少300个连续氨基酸残基或至少350个连续氨基酸残基或至少400个连续氨基酸残基或至少450个连续氨基酸残基。
34.硬质表面清洁：如本文所用，术语“硬质表面清洁”是指硬质表面的清洁，其中硬质表面可包括地板、桌子、墙壁等以及硬质物体(诸如汽车(汽车清洗)和盘碟(盘碟洗涤))的表面。盘碟洗涤包括但不限于盘子、杯子、玻璃杯、碗、餐具诸如汤匙、餐刀、餐叉、盛器、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃和丙烯酸树脂。
35.高严格性：术语“高严格性条件”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准southern印迹规程，在42℃下在5x sspe、0.3％sds、200毫克/ml剪切并变性的鲑鱼精dna和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最终使用2x ssc、0.2％sds在65℃下洗涤载体材料三次，每次15分钟。宿主细胞：术语“宿主细胞”是指容易被包含本文所述多核苷酸的核酸构建体或表达载体转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”包括了由于在复制过程中发生的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。
36.改善的特性：术语“改善的特性”在本文中被定义为与亲本α-淀粉酶相比得到改善的变体相关特征。此类改善的特性包括但不限于增加的淀粉分解活性、增加的催化效率、增加的催化速率、增加的化学稳定性、增加的氧化稳定性、增加的ph活性、增加的ph稳定性、增加的比活性、增强的底物结合、增强的底物裂解、增加的底物特异性、增加的底物稳定性、增加的表面特性、增加的热活性、增加的热稳定性、增加的洗涤性能(诸如去污性能，例如对含淀粉的污渍、去污、抗变灰的性能)、稳定性(例如热稳定性、ph稳定性或在存在助洗剂(包括螯合剂)的情况下的稳定性、在粉末、液体或凝胶洗涤剂制剂或盘碟洗涤组合物中的稳定
性)、改变的温度相关性能和活性谱、ph活性、底物特异性、产物特异性及化学稳定性。改善的特性可以是本文定义和描述的那些特性中的任何特性。本文中一种优选的改善的特性是增加的比活性。具体地，改善的比活性可指在模型洗涤剂a组合物中测量的改善的比活性。改善因数(if)大于1，优选地至少1.1或至少1.2或至少1.3。
37.改善的洗涤性能：术语“改善的洗涤性能”在本文中被定义为显示出本发明的淀粉酶的洗涤性能相对于亲本α-淀粉酶的洗涤性能和/或相对于seq id no:1或seq id no:2的改变。该改变可例如被看作增强的去污。如果淀粉酶变体具有相对于亲本多肽改善的特性，则洗涤性能得到改善。这可在模型a洗涤剂组合物中确定。改善因数(if)优选地为至少1.1、至少1.2、至少1.3。
38.分离的：术语“分离的”是指自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性示例包括(1)任何非天然存在的物质；(2)至少部分地从一种或多种或全部天然存在的成分移出的任何物质(在自然界中与这些成分相关联)，包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子；(3)相对于自然界中发现的那种物质，经人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加物质的量而修饰的任何物质(例如编码该物质的基因的多个拷贝；使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。分离的物质可存在于发酵液样品中。在一个方面，本发明涉及一种分离的α-淀粉酶变体。
39.分离的多核苷酸：术语“分离的多核苷酸”是指经人工修饰的多核苷酸。在一个方面，分离的多核苷酸是通过琼脂糖电泳所测定的至少1％纯的，例如，至少5％纯、至少10％纯、至少20％纯、至少40％纯、至少60％纯、至少80％纯、至少90％纯和至少95％纯的。多核苷酸可为基因组、cdna、rna、半合成的、合成来源的、或它们的任何组合。
40.分离的变体：术语“分离的变体”是指经人工修饰的变体。在一个方面，该变体是通过sds-page所测定的至少1％纯的，例如，至少5％纯、至少10％纯、至少20％纯、至少40％纯、至少60％纯、至少80％纯和至少90％纯的。
41.低温：“低温”是5至40℃，优选地5至35℃，优选地5至30℃，更优选地5至25℃，更优选地5至20℃，最优选地5至15℃，特别是5至10℃的温度。在一个优选的实施方案中，“低温”是10至35℃，优选地10至30℃或10至25℃或10至20℃或10至15℃的温度。
42.成熟多肽：术语“成熟多肽”是指在翻译和任何翻译后修饰(诸如n末端加工、c末端截短、糖基化、磷酸化等)之后呈其最终形式的多肽。本领域已知，宿主细胞可产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽的混合物(即，具有不同的c末端和/或n末端氨基酸)。
43.成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”是指编码具有α-淀粉酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
44.修饰：在本文多肽的上下文中，术语“修饰”是指通过用不同氨基酸替换、通过氨基酸插入或通过缺失(优选地通过至少一个缺失)来改变参考氨基酸序列(即seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17)内的一个或多个氨基酸。术语“修饰”、“改变”和“突变”可互换使用并且构成相同的含义和目的。
45.中等严格性：术语“中等严格性”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准southern印迹规程，在42℃下在5x sspe、0.3％sds、200毫克/ml剪切并变性的鲑鱼精dna和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最终使用2x ssc、0.2％sds在55℃下洗涤
载体材料三次，每次15分钟。
46.突变体：术语“突变体”是指编码变体的多核苷酸。
47.核酸构建体：术语“核酸构建体”是指包含一个或多个控制序列的单链或双链的核酸分子，它是从天然存在的基因分离的，或者以原本在自然界中不存在的方式进行修饰而包含核酸的片段，或者它是合成的。当所述核酸构建体包含本发明的编码序列的表达所需的控制序列时，术语核酸构建体与术语“表达盒”是同义的。
48.可操作地连接：术语“可操作地连接”是指一种构型，控制序列在其中被置于相对于多核苷酸的编码序列的适当位点上，使得控制序列指导编码序列的表达。
49.亲本或亲本α-淀粉酶：如本文所用，术语“亲本”α-淀粉酶是指对其进行修饰而产生本发明的变体α-淀粉酶的α-淀粉酶。该术语还指本发明的变体与之比较的多肽。亲本可以是天然存在的(野生型)多肽，或其甚至可以是通过任何合适的方式制备的其变体。例如，亲本蛋白质可以是已在氨基酸序列中加以修饰或改变的天然存在的多肽的变体。因此，亲本α-淀粉酶可具有一个或多个(或一个或若干个)氨基酸替换、缺失和/或插入。因此，亲本α-淀粉酶可以是亲本α-淀粉酶的变体。亲本还可以是等位变体，即由占据相同染色体座位的基因的两个或更多个替代形式中的任何一个替代形式编码的多肽。如本文所用，术语“亲本”或“亲本α-淀粉酶”是指seq id no:seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的α-淀粉酶或其杂交体，或具有与seq id no：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的任何多肽的至少60％的序列同一性的任何α-淀粉酶。亲本淀粉酶还可以是包含seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的片段的多肽。
50.序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列同一性”描述。
51.就本发明的目的而言，两个氨基酸序列之间的序列同一性使用needleman-wunsch算法(needleman和wunsch，1970，j.mol.biol.48：443-453)确定，如在emboss程序包的needle程序中实现(emboss:the european molecular biology open software suite,rice等人，2000,trends genet.16:276-277)，优选5.0.0版或更新版。所用的参数可以是，为10的空位开放罚分，为0.5的空位延伸罚分，和eblosum62(emboss版的blosum62)替换矩阵。使用标记为“最长同一性”的needle输出(使用-nobrief选项获得)作为百分比同一性，并且如下计算：
52.(相同残基
×
100)/(序列长度-序列中的总空位数)
53.另选地，所用的参数可以是10的空位开放罚分，0.5的空位延伸罚分，和ednafull(emboss版的ncbi nuc4.4)取代矩阵。使用标记为“最长同一性”的needle输出(使用-nobrief选项获得)作为百分比同一性，并且如下计算：
54.(相同脱氧核糖核苷酸
×
100)/(序列长度-序列中的总空位数)
55.淀粉去除过程：表述“淀粉去除过程”涉及诸如在从纺织物去除淀粉的洗涤过程例如纺织物清洁如衣物洗涤中去除(或转化)淀粉的任何种类的过程。淀粉去除过程还可以是硬质表面清洁诸如盘碟洗涤，或其可以是一般的清洁过程诸如工业或机构清洁。该表述一般还包括其他淀粉去除过程或淀粉转化、乙醇生产、淀粉液化、纺织物退浆、造纸和纸浆生产、啤酒酿造和洗涤剂。
56.子序列：术语“子序列”是指具有从成熟多肽编码序列的5’和/或3’端缺失的一个
或多个(例如，若干个)核苷酸的多核苷酸；其中子序列编码具有α-淀粉酶活性的片段。
57.基本上纯的多核苷酸：术语“基本上纯的多核苷酸”是指不含其他外来或非期望核苷酸并且呈适合在基因工程多肽生产系统内使用的形式的多核苷酸制备物。因此，基本上纯的多核苷酸包含最多10重量％、最多8重量％、最多6重量％、最多5重量％、最多4重量％、最多3重量％、最多2重量％、最多1重量％和最多0.5重量％与其天然或重组相关的其他多核苷酸物质。然而，基本上纯的多核苷酸可包含天然存在的5’和3’非翻译区，诸如启动子和终止子。优选的是，基本上纯的多核苷酸为至少90重量％纯的，例如，至少92重量％纯、至少94重量％纯、至少95重量％纯、至少96重量％纯、至少97重量％纯、至少98重量％纯、至少99重量％纯和至少99.5重量％纯的。本发明的多核苷酸优选地为基本上纯的形式。
58.基本上纯的变体：术语“基本上纯的变体”是指包含最多10重量％、最多8重量％、最多6重量％、最多5重量％、最多4重量％、最多3重量％、最多2重量％、最多1重量％和最多0.5重量％与其天然或重组相关的其他多肽物质的制备物。优选地，该变体按该制备物中存在的总多肽物质的重量计是至少92％纯的，例如，至少94％纯、至少95％纯、至少96％纯、至少97％纯、至少98％纯、至少99％、至少99.5％纯和100％纯的。本发明的变体优选地为基本上纯的形式。这可通过例如熟知的重组方法或经典的纯化方法制备变体来实现。
59.纺织物：从center for testmaterials bv，邮政信箱120，3133kt，荷兰弗拉尔丁恩(vlaardingen,the netherlands)购得纺织物样品cs-27。
60.纺织物护理有益效果：如本文所用，术语“纺织物护理有益效果”被定义为不与催化去污或防止污渍再沉积直接相关，对于酶洗净力有益效果也很重要。此类纺织物护理有益效果的示例是防止或减少从一种纺织物到另一种纺织物或相同纺织物的另一部分的染料转移(也称为染料转移抑制或抗返染的效应)；从纺织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球粒或绒毛(也称为抗起球的效应)；改善纺织物柔软性；纺织物的颜色澄清；以及去除截留在纺织物的纤维中的颗粒污渍。酶漂白是另外一种酶洗净力有益效果，其中催化活性一般用于催化漂白组分诸如过氧化氢或其他过氧化物或其他漂白物质的形成。”61.变体：术语“变体”或“多肽变体”或“α-淀粉酶变体”是指相对于亲本或野生型淀粉酶在一个或多个(例如，若干个)位置处包含改变/突变(即，替换、插入和/或缺失)的具有α-淀粉酶活性的多肽。优选地，该变体包含少于50个修饰，更优选地少于30个修饰。通过在人工干预下修饰亲本α-淀粉酶来获得改变的α-淀粉酶。取代是指占据某一位置的氨基酸被另一不同的氨基酸替换；缺失是指占据某一位置的氨基酸的移除；并且插入是指邻近占据某一位置的氨基酸并紧接在该氨基酸之后添加1-3个氨基酸。本文的α-淀粉酶变体具有seq id no:1至17的多肽的α-淀粉酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％，但小于100％。
[0062]“极高严格性条件”：是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准southern印迹规程，在42℃下在5x sspe、0.3％sds、200毫克/ml剪切并变性的鲑鱼精dna和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最终使用2x ssc、0.2％sds在70℃下洗涤载体材料三次，每次15分钟。
[0063]“极低严格性条件”：是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准southern印迹规程，在42℃下在5x sspe、0.3％sds、200毫克/ml剪切并变性的鲑鱼精dna和
25％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最终使用2x ssc、0.2％sds在45℃下洗涤载体材料三次，每次15分钟。
[0064]
野生型酶：术语“野生型”α-淀粉酶是指由天然存在的微生物(诸如存在于自然界中的细菌、酵母或丝状真菌)表达的α-淀粉酶。
[0065]
术语“洗涤性能”包括一般的清洁例如如盘碟洗涤中的硬质表面清洁，但也包括对纺织物诸如衣物的洗涤性能，并且也包括工业和机构清洁。可通过比较如本文定义中所述的δ强度来测量改善的洗涤性能
[0066]
变体设计的规则
[0067]
就本发明的目的而言，seq id no:1中公开的多肽用于确定另一种α-淀粉酶多肽中对应的氨基酸残基。因此，所有提及的位置和特定替换都是指seq id no：1中使用的编号。然而，技术人员将认识到，本文所公开的任何其他序列的序列也可用于确定另一种α-淀粉酶多肽中对应的氨基酸残基。将另一种α-淀粉酶的氨基酸序列与seq id no：1中所公开的成熟多肽进行比对，并且基于该比对，确定对应于seq id no：1所公开的成熟多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位置编号，其使用了needleman-wunsch算法(needleman和wunsch，1970，j.mol.biol.48：443-453)确定，如在emboss程序包的needle程序中实现(emboss：the european molecular biology open software suite,rice等人，2000,trends genet.16：276-277)，优选5.0.0版或更新版。所用的参数是，为10的空位罚分，为0.5的空位延伸罚分，和eblosum62(emboss版的blosum62)替换矩阵。
[0068]
另一种α-淀粉酶中对应的氨基酸残基的鉴定可通过将多个多肽序列用若干个计算机程序进行比对来确定，程序包括但不限于muscle(基于对数期望的多重序列比较(multiple sequence comparison by log-expectation；版本3.5或更新的；edgar，2004，nucleic acids research 32：1792-1797)，mafft(版本6.857或更新版本；katoh和kuma，2002，nucleic acids research 30:3059-3066；katoh等人，2005，nucleic acids research 33:511-518；katoh和toh，2007，bioinformatics 23:372-374；katoh等人，2009，methods in molecular biology 537:39-64；katoh和toh，2010，bioinformatics 26:1899-1900)，和采用clustalw的emboss emma(1.83或更新的；thompson等人，1994，nucleic acids research 22：4673-4680)，使用它们各自的默认参数。
[0069]
当另一α-淀粉酶与seq id no:1的多肽存在分化由此使得传统的基于序列的比较未检测出它们的关系时(lindahl和elofsson，2000,j.mol.biol.295:613-615)，可使用其他成对序列比较算法。使用利用了多肽家族的概率表现(谱)来检索数据库的检索程序能够获得基于序列的检索中的更高灵敏度。例如，psi-blast程序通过迭代的数据库搜索过程来生成谱，并且能够检测远缘同系物(atschul等人，1997，nucleic acids res.25:3389-3402)。如果多肽的家族或超家族在蛋白质结构数据库中具有一个或多个代表，则能够实现甚至更高的敏感性。诸如genthreader(jones，1999，j.mol.biol.287:797-815；mcguffin和jones，2003，bioinformatics 19：874-881)的程序利用多种来源的信息(psi-blast、二级结构预测、结构比对谱和溶解能)作为预测查询序列的结构性折叠的神经网络的输入。类似地，gough等人，2000，j.mol.biol.313:903-919的方法能够被用于将未知结构的序列与scop数据库中存在的超家族模型比对。这些比对可以继而用于生成多肽的同源性模型，且可以使用多种为此目的开发的工具来评估这类模型的精确性。
[0070]
对于已知结构的蛋白质，已经有数种用于检索和生成其结构性比对的工具和资源。例如，蛋白质的scop超家族已经过了结构性比对，并且可以获取和下载那些比对结果。可使用多种算法诸如距离比对矩阵(holm和sander，1998，proteins 33:88-96)或组合延伸(shindyalov和bourne，1998，protein engineering 11：739-747)来比对两个或多个蛋白结构，这些算法的实现可以另外用于使用感兴趣的结构来检索结构数据库以发现可能的结构同系物(例如，holm和park，2000，bioinformatics 16:566-567)。
[0071]
在对本发明的α-淀粉酶变体的描述中，使用下述命名法以便于参考。采用了公认的iupac单字母或三字母氨基酸缩写。
[0072]
替换：对于氨基酸替换，使用下列命名法：初始氨基酸、位点、替换后的氨基酸。因此，例如在位置226处用丙氨酸取代苏氨酸被命名为“thr226ala”或“t226a”。多个突变由加号(“+”)分隔，例如“gly205arg+ser411phe”或“g205r+s411f”代表分别在位置205和411处用精氨酸(r)取代甘氨酸(g)以及用苯丙氨酸(f)取代丝氨酸(s)。
[0073]
缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：初始氨基酸，位置，*。因此，位置181处的甘氨酸的缺失被命名为“ser181*”或“s181*”。多个缺失由加号(“+”)分隔，例如“ser181*+thr182*”或“s181*+t182*”。
[0074]
插入：对于氨基酸插入，使用以下命名法：初始氨基酸，位置，初始氨基酸，插入的氨基酸。因此，在例如位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸被命名为“gly195glylys”或“g195gk”。多个氨基酸的插入被命名为[初始氨基酸，位置，初始氨基酸，插入的氨基酸#1，插入的氨基酸#2等]。例如，在位置195上的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸被表示为“gly195glylysala”或“g195gka”。
[0075]
在这类情况下，通过在插入氨基酸残基之前的氨基酸残基位置号上添加小写字母，来对插入氨基酸残基编号。如此，在上述示例中，序列将是：
[0076]
亲本：变体：195195 195a 195bgg-k-a
[0077]
多个改变：包含多个改变的变体由加号(“+”)分隔，例如“arg170tyr+gly195glu”或“r170y+g195e”代表分别在位置170和195处用酪氨酸替换精氨酸以及用谷氨酸替换甘氨酸。
[0078]
不同改变：在某一个位置处可以引入不同的改变的情况下，这些不同的改变由逗号分隔，例如“arg170tyr,glu”代表在位置170处用酪氨酸或谷氨酸替换精氨酸。因此，“tyr167gly,ala+arg170gly,ala”指定以下变体：
[0079]“tyr167gly+arg170gly”、“tyr167gly+arg170ala”、“tyr167ala+arg170gly”、和“tyr167ala+arg170ala”。
[0080]
本发明的详细描述
[0081]
变体
[0082]
本发明的清洁组合物包含α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、
139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478；并且其中所述变体具有与seq id no：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本改善的特性。
[0083]
该变体具有与亲本α-淀粉酶的氨基酸序列的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0084]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:1的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0085]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:2的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0086]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:3的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0087]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:4的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0088]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no：5的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0089]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no：6的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序
列同一性。
[0090]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:7的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0091]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:8的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0092]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:9的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0093]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:10的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0094]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:12的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0095]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:13的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0096]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no：14的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0097]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:15的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0098]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no：16的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0099]
在另一个实施方案中，该变体具有与seq id no:17的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、
至少95％的序列同一性，诸如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0100]
在一个方面，本发明的变体中的替换数为1至20个，例如1至10个或1至5个，诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个替换。
[0101]
该变体可包含与以下使用seq id no:1进行编号的任何位置相对应的两个或三个或更多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478，并且进一步其中所述变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0102]
该变体可包含与以下任何位置相对应的四个或更多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478。
[0103]
该变体可包含与以下任何位置相对应的五个或更多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、
345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478。
[0104]
该变体可包含与以下任何位置相对应的六个或七个或八个或九个或十个或更多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478。
[0105]
该变体可包含以下位置中的十一个或更多个位置处、至多与以下位置相对应的每个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478。
[0106]
优选的替换选自与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、
g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、
t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且进一步其中所述变体具有与seq id no:1或seq id no:2或seq id no:3或seq id no：4或seq id no：5或seq id no：6或seq id no:7或seq id no:8或seq id no:9或seq id no:10或seq id no：11或seq id no：12或seq id no:13或seq id no:14或seq id no:15或seq id no:16或seq id no:17的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0107]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、
s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:1的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0108]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、
n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、
h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:2的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0109]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、
a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:3的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0110]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、
s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、
g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:4的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0111]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、
k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no：5的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0112]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、
i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、
n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:6的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0113]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、
p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:7的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0114]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、
w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、
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[0115]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、
m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:9的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0116]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、
f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、
n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:10的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0117]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、
s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no：11的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0118]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no：1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、
v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、
g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:12的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0119]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、
w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:13的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0120]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、
r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体
具有与seq id no:14的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0121]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、
r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:15的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0122]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、
r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:16的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0123]
在一个方面，变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、
q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述变体具有与seq id no:17的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0124]
α-淀粉酶变体具有相对于亲本多肽改善的特性，其中改善的特性选自增加的催化效率、增加的催化速率、增加的化学稳定性、增加的氧化稳定性、增加的ph活性、增加的ph稳定性、增加的比活性、储存条件下增加的稳定性、增强的底物结合、增强的底物裂解、增加的底物特异性、增加的底物稳定性、增加的表面特性、增加的热活性和增加的热稳定性。优选地，该变体具有相对于seq id no:1或seq id no:2改善的特性。
[0125]
优选地，改善的特性是增加的比活性。
[0126]
在一个方面，相对于所述亲本多肽改善的特性是模型a洗涤剂组合物中增加的比活性。
[0127]
在一个方面，改善的特性是按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中相对于所述亲本多肽》1.0的增加的比活性。
[0128]
在一个方面，按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中相对于所述亲本多肽增加的比活性≥1.1。
[0129]
在一个方面，按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中相对于所述亲本多肽增加的比活性≥1.2。
[0130]
在一个方面，按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中相对于所述亲本多肽增加的比活性≥1.3。
[0131]
在一个方面，按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中相对于所述亲本多肽增加的比活性≥1.4。
no:1的多肽的替换r26y或由其组成。
[0143]
在另一个方面，该变体包含与第29位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第29位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换d29n或由其组成。
[0144]
在另一个方面，该变体包含与第30位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第30位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换d30f或由其组成。
[0145]
在另一个方面，该变体包含与第35位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第35位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r35p或由其组成。
[0146]
在另一个方面，该变体包含与第37位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第37位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r37a或r37n或由其组成。
[0147]
在另一个方面，该变体包含与第40位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第40位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换t40a或t40c或t40d或t40e或t40g或t40h或t40i或t40k或t40n或t40v或t40w或由其组成。
[0148]
在另一个方面，该变体包含与第41位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第41位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a41c或a41d或a41e或a41h或a41i或a41k或a41n或a41r或a41t或a41v或a41y或由其组成。
[0149]
在另一个方面，该变体包含与第43位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第43位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换w43e或由其组成。
[0150]
在另一个方面，该变体包含与第46位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第46位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换p46a或由其组成。
[0151]
在另一个方面，该变体包含与第50位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第50位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g50m或g50p或g50q或由其组成。
no:1的多肽的替换e86k或e86s或由其组成。
[0162]
在另一个方面，该变体包含与第87位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第87位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no：1的多肽的替换s87g或s87l或s87p或由其组成。
[0163]
在另一个方面，该变体包含与第90位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第90位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换h90p或由其组成。
[0164]
在另一个方面，该变体包含与第91位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第91位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a91q或a91v或a91w或由其组成。
[0165]
在另一个方面，该变体包含与第93位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第93位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k93v或由其组成。
[0166]
在另一个方面，该变体包含与第97位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第97位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换v97c或v97h或由其组成。
[0167]
在另一个方面，该变体包含与第98位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第98位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换q98e或q98f或q98g或q98i或q98k或q98l或q98m或q98r或q98t或q98y或由其组成。
[0168]
在另一个方面，该变体包含与第103位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第103位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换v103c或v10g或v103s或由其组成。
[0169]
在另一个方面，该变体包含与第105位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第105位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换m105f或由其组成。
[0170]
在另一个方面，该变体包含与第110位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第110位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g110k或g110r或由其组成。
[0171]
在另一个方面，该变体包含与第111位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一
个方面，与第111位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a111e或a111q或由其组成。
[0172]
在另一个方面，该变体包含与第113位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第113位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a113t或由其组成。
[0173]
在另一个方面，该变体包含与第114位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第114位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换t114m或t114v或由其组成。
[0174]
在另一个方面，该变体包含与第116位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第116位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n116c或n116y或由其组成。
[0175]
在另一个方面，该变体包含与第117位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第117位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换v117f或由其组成。
[0176]
在另一个方面，该变体包含与第119位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第119位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a119h或a119l或a119y或由其组成。
[0177]
在另一个方面，该变体包含与第120位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第120位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no：1的多肽的替换v120e或由其组成。
[0178]
在另一个方面，该变体包含与第121位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第121位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换e121i或由其组成。
[0179]
在另一个方面，该变体包含与第125位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第125位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n125s或由其组成。
[0180]
在另一个方面，该变体包含与第126位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第126位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n126i或由其组成。
[0181]
在另一个方面，该变体包含与第128位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第128位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n128e或由其组成。
[0182]
在另一个方面，该变体包含与第129位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第129位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换q129t或由其组成。
[0183]
在另一个方面，该变体包含与第131位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第131位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换i131y或由其组成。
[0184]
在另一个方面，该变体包含与第132位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第132位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换s132a或s132d或s132h或s132i或s132k或s132l或s132p或s132r或s132t或s132v或s132y或由其组成。
[0185]
在另一个方面，该变体包含与第133位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第133位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g133e或g133l或g133t或g133v或由其组成。
[0186]
在另一个方面，该变体包含与第135位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第135位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换y135c或y135d或y135e或y135p或由其组成。
[0187]
在另一个方面，该变体包含与第137位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第137位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换i137d或i137n或i137q或i137w或i137y或由其组成。
[0188]
在另一个方面，该变体包含与第138位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第138位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换e138s或e138v或由其组成。
[0189]
在另一个方面，该变体包含与第139位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第139位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a139l或由其组成。
[0190]
在另一个方面，该变体包含与第140位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第140位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、
gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换w140a或w140d或w140m或w140n或w140p或w140s或w140t或w140v或由其组成。
[0191]
在另一个方面，该变体包含与第141位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第141位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换t141g或由其组成。
[0192]
在另一个方面，该变体包含与第142位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第142位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k142e或k142n或由其组成。
[0193]
在另一个方面，该变体包含与第143位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第143位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换f143h或f143i或f143m或由其组成。
[0194]
在另一个方面，该变体包含与第145位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第145位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换f145g或f145h或f145i或f145l或f145s或由其组成。
[0195]
在另一个方面，该变体包含与第146位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第146位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换p146a或p146h或p146n或由其组成。
[0196]
在另一个方面，该变体包含与第147位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第147位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g147d或由其组成。
[0197]
在另一个方面，该变体包含与第149位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第149位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g149f或g149k或由其组成。
[0198]
在另一个方面，该变体包含与第159位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第159位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换w159a或w159e或由其组成。
[0199]
在另一个方面，该变体包含与第161位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第161位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换h161w或由其组成。
[0200]
在另一个方面，该变体包含与第162位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第162位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换f162t或由其组成。
[0201]
在另一个方面，该变体包含与第165位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第165位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no：1的多肽的替换v165p或由其组成。
[0202]
在另一个方面，该变体包含与第167位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第167位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换w167d或w167g或w167p或由其组成。
[0203]
在另一个方面，该变体包含与第169位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第169位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换q169l或q169p或q169v或q169y或由其组成。
[0204]
在另一个方面，该变体包含与第171位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第171位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r171p或由其组成。
[0205]
在另一个方面，该变体包含与第176位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第176位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r176e或r176q或r176v或r176y或由其组成。
[0206]
在另一个方面，该变体包含与第177位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第177位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换i177h或i177p或由其组成。
[0207]
在另一个方面，该变体包含与第179位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第179位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k179a或k179m或k179v或由其组成。
[0208]
在另一个方面，该变体包含与第180位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第180位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换f180d或f180g或由其组成。
[0209]
在另一个方面，该变体包含与第181位相对应的位置处的缺失或替换或由其组成。在另一个方面，与第181位相对应的位置处的氨基酸从seq id no:1的多肽缺失。在另一个方面，该变体包含seq id no：1的多肽的缺失r181*或由其组成。在另一个方面，与第181位
相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r181d或r181e或r181g或r181m或r181y或由其组成。
[0210]
在另一个方面，该变体包含与第185位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第185位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k185t或k185v或k185w或由其组成。
[0211]
在另一个方面，该变体包含与第186位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第186位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a186d或由其组成。
[0212]
在另一个方面，该变体包含与第187位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第187位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换w187t或由其组成。
[0213]
在另一个方面，该变体包含与第195位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第195位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n195y或由其组成。
[0214]
在另一个方面，该变体包含与第196位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第196位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g196d或由其组成。
[0215]
在另一个方面，该变体包含与第197位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第197位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n197v或n197y或由其组成。
[0216]
在另一个方面，该变体包含与第204位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第204位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a204f或a204h或a204l或由其组成。
[0217]
在另一个方面，该变体包含与第206位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第206位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换v206n或由其组成。
[0218]
在另一个方面，该变体包含与第208位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第208位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换m208d或由其组成。
[0219]
在另一个方面，该变体包含与第211位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第211位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换p211c或p211m或由其组成。
[0220]
在另一个方面，该变体包含与第216位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第216位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换e216l或由其组成。
[0221]
在另一个方面，该变体包含与第218位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第218位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r218q或由其组成。
[0222]
在另一个方面，该变体包含与第219位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第219位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r219v或由其组成。
[0223]
在另一个方面，该变体包含与第225位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第225位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换t225d或t225f或t225h或t225k或t225l或t225n或t225r或t225y或由其组成。
[0224]
在另一个方面，该变体包含与第228位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第228位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换l228v或由其组成。
[0225]
在另一个方面，该变体包含与第230位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第230位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换l230c或l230f或由其组成。
[0226]
在另一个方面，该变体包含与第231位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第231位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no：1的多肽的替换d213g或d231t或d231v或由其组成。
[0227]
在另一个方面，该变体包含与第235位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第235位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换i235a或由其组成。
[0228]
在另一个方面，该变体包含与第242位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第242位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、
gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k242l或由其组成。
[0229]
在另一个方面，该变体包含与第243位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第243位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换y243d或y243m或y243n或由其组成。
[0230]
在另一个方面，该变体包含与第247位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第247位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r247g或r247p或r247s或由其组成。
[0231]
在另一个方面，该变体包含与第250位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第250位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换l250s或l250y或由其组成。
[0232]
在另一个方面，该变体包含与第251位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第251位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换t251d或由其组成。
[0233]
在另一个方面，该变体包含与第252位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第252位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换h252p或由其组成。
[0234]
在另一个方面，该变体包含与第253位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第253位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换v253s或v253f或由其组成。
[0235]
在另一个方面，该变体包含与第254位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第254位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r254d或r254f或r254h或r254p或r254t或r254v或r254w或由其组成。
[0236]
在另一个方面，该变体包含与第255位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第255位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n255c或n255f或n255p或由其组成。
[0237]
在另一个方面，该变体包含与第257位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第257位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换t257a或t257c或t257d或t257e或t257g或t257p或t257q或t257s或t257w或t257y或由其组成。
[0238]
在另一个方面，该变体包含与第259位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第259位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k259p或k259v或k259w或k259y或由其组成。
[0239]
在另一个方面，该变体包含与第260位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第260位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换e260v或由其组成。
[0240]
在另一个方面，该变体包含与第261位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第261位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换m261d或m261f或m261p或m261r或m261s或m261w或由其组成。
[0241]
在另一个方面，该变体包含与第262位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第262位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换f262a或f262c或f262e或f262h或f262i或f262k或f262l或f262n或f262p或f262q或f262r或f262s或f262t或f262v或f262w或由其组成。
[0242]
在另一个方面，该变体包含与第263位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第263位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a263e或a263h或a263w或由其组成。
[0243]
在另一个方面，该变体包含与第265位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第265位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a265q或由其组成。
[0244]
在另一个方面，该变体包含与第272位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第272位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换l272w或由其组成。
[0245]
在另一个方面，该变体包含与第273位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第273位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g273q或由其组成。
[0246]
在另一个方面，该变体包含与第274位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第274位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a274d或由其组成。
[0247]
在另一个方面，该变体包含与第279位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第279位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、
id no:1的多肽的替换y298d或y298e或由其组成。
[0257]
在另一个方面，该变体包含与第299位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第299位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n299t或由其组成。
[0258]
在另一个方面，该变体包含与第300位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第300位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a300g或由其组成。
[0259]
在另一个方面，该变体包含与第303位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第303位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换s303a或s303c或s303d或s303e或s303f或s303g或s303h或s303l或s303m或s303n或s303q或s303t或s303v或s303y或由其组成。
[0260]
在另一个方面，该变体包含与第305位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第305位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g305e或由其组成。
[0261]
在另一个方面，该变体包含与第307位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第307位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换y307s或由其组成。
[0262]
在另一个方面，该变体包含与第310位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第310位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a310d或a310n或由其组成。
[0263]
在另一个方面，该变体包含与第311位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第311位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k311c或k311c或由其组成。
[0264]
在另一个方面，该变体包含与第313位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第313位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换l313q或由其组成。
[0265]
在另一个方面，该变体包含与第314位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第314位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n314s或n314p或由其组成。
[0266]
在另一个方面，该变体包含与第315位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一
id no:1的多肽的替换l340m或由其组成。
[0276]
在另一个方面，该变体包含与第342位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第342位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换s342a或s342g或s342t或由其组成。
[0277]
在另一个方面，该变体包含与第344位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第344位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no：1的多肽的替换v344a或v344c或v344i或由其组成。
[0278]
在另一个方面，该变体包含与第345位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第345位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换q345n或由其组成。
[0279]
在另一个方面，该变体包含与第346位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第346位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换e346a或由其组成。
[0280]
在另一个方面，该变体包含与第347位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第347位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换w347a或w347e或w347f或w347g或w347h或w347k或w347n或w347p或w347r或由其组成。
[0281]
在另一个方面，该变体包含与第350位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第350位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no：1的多肽的替换p350a或p350c或p350n或p350t或由其组成。
[0282]
在另一个方面，该变体包含与第359位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第359位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r359c或r359f或r359g或r359m或r359s或r359w或由其组成。
[0283]
在另一个方面，该变体包含与第360位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第360位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换e360d或e360h或e360p或e360t或e360w或由其组成。
[0284]
在另一个方面，该变体包含与第361位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第361位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换q361d或q361h或q361i或q361k或q361l或q361m或q361n或q361p或q361r或q361s或q361t或q361v或q361w或q361y或由其组成。
[0285]
在另一个方面，该变体包含与第362位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第362位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g326m或由其组成。
[0286]
在另一个方面，该变体包含与第362位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第362位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换y363a或y363e或y363f或y363g或y363i或y363l或y363q或y363r或y363s或y363t或y363v或y363w或由其组成。
[0287]
在另一个方面，该变体包含与第364位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第364位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换p364c或由其组成。
[0288]
在另一个方面，该变体包含与第368位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第368位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换y368c或y368q或y368r或y368t或由其组成。
[0289]
在另一个方面，该变体包含与第372位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第372位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换y372c、y327g、y327n、y327t或由其组成。
[0290]
在另一个方面，该变体包含与第375位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第375位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换p375q或p375t或由其组成。
[0291]
在另一个方面，该变体包含与第380位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第380位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换p380f或由其组成。
[0292]
在另一个方面，该变体包含与第382位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第382位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换m328i或由其组成。
[0293]
在另一个方面，该变体包含与第383位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第383位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k383c或k383l或k383p或k383t或由其组成。
[0294]
在另一个方面，该变体包含与第384位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第384位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、
his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a384d或a384n或由其组成。
[0295]
在另一个方面，该变体包含与第385位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第385位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k385n或k385v或由其组成。
[0296]
在另一个方面，该变体包含与第387位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第387位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换d387c或d387p或d387r或d387w或由其组成。
[0297]
在另一个方面，该变体包含与第388位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第388位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换p388i或由其组成。
[0298]
在另一个方面，该变体包含与第391位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第391位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换e399m或由其组成。
[0299]
在另一个方面，该变体包含与第393位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第393位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r393k或r393m或由其组成。
[0300]
在另一个方面，该变体包含与第395位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第395位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n395c或n395d或n395k或n395v或n395w或由其组成。
[0301]
在另一个方面，该变体包含与第396位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第396位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换f396e或f396g或f396t或由其组成。
[0302]
在另一个方面，该变体包含与第397位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第397位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a379v或由其组成。
[0303]
在另一个方面，该变体包含与第398位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第398位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换y398e或由其组成。
[0304]
在另一个方面，该变体包含与第401位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一
个方面，与第401位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换q401h或由其组成。
[0305]
在另一个方面，该变体包含与第402位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第402位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换h402s或由其组成。
[0306]
在另一个方面，该变体包含与第403位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第403位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换d403a或d403e或d403t或由其组成。
[0307]
在另一个方面，该变体包含与第405位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第405位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换f405c或f405n或f405s或f405t或由其组成。
[0308]
在另一个方面，该变体包含与第406位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第406位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换d406v或由其组成。
[0309]
在另一个方面，该变体包含与第407位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第407位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换h407c或h407q或h407t或由其组成。
[0310]
在另一个方面，该变体包含与第407位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第407位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换h407c或h407q或h407t或由其组成。
[0311]
在另一个方面，该变体包含与第410位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第410位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换i410h或i410m或i410r或i410w或由其组成。
[0312]
在另一个方面，该变体包含与第415位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第415位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换r415c或r415l或r415m或r415y或由其组成。
[0313]
在另一个方面，该变体包含与第416位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第416位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换e416d或e416f或e416l或e416n或由其组成。
[0314]
在另一个方面，该变体包含与第418位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第418位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n418a或n418p或n418v或由其组成。
[0315]
在另一个方面，该变体包含与第421位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第421位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换h421a或h421g或h421l或h421p或h421q或h421y或由其组成。
[0316]
在另一个方面，该变体包含与第422位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第422位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换p422d或p422g或p422i或p422n或p422q或p422s或由其组成。
[0317]
在另一个方面，该变体包含与第423位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第423位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n423g或n423h或n423i或n423l或n423m或n423p或n423q或n423v或n423w或n423y或由其组成。
[0318]
在另一个方面，该变体包含与第433位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第433位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g433a或g433n或g433s或由其组成。
[0319]
在另一个方面，该变体包含与第434位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第434位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换p434i或p434l或由其组成。
[0320]
在另一个方面，该变体包含与第435位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第435位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g435c或g435l或g435m或g435t或g435v或由其组成。
[0321]
在另一个方面，该变体包含与第438位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第438位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k438a或k438i或k438q或k438s或k438v或由其组成。
[0322]
在另一个方面，该变体包含与第439位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第439位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换w439a或w439d或w439i或w439k或w439l或w439n或w439s或w439t或w439v或w439y或由其组成。
[0323]
在另一个方面，该变体包含与第446位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一
个方面，与第446位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k446a或k446f或由其组成。
[0324]
在另一个方面，该变体包含与第447位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第447位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a447d或a447y或由其组成。
[0325]
在另一个方面，该变体包含与第449位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第449位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换q449t或由其组成。
[0326]
在另一个方面，该变体包含与第450位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第450位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换v450d或v450n或由其组成。
[0327]
在另一个方面，该变体包含与第452位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第452位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换h452l或由其组成。
[0328]
在另一个方面，该变体包含与第455位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第455位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换t455c或t455m或t455v或由其组成。
[0329]
在另一个方面，该变体包含与第457位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第457位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n457d或n457e或n457i或n457l或n457v或由其组成。
[0330]
在另一个方面，该变体包含与第458位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第458位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换k458d或k458l或由其组成。
[0331]
在另一个方面，该变体包含与第460位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第460位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g460m或g460v或由其组成。
[0332]
在另一个方面，该变体包含与第461位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第461位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换t461f或t461i或t461q或t461v或由其组成。
[0333]
在另一个方面，该变体包含与第462位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第462位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换v462c或由其组成。
[0334]
在另一个方面，该变体包含与第465位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第465位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n465a或n465c或n465e或n465g或n465h或n465l或n465p或n465t或由其组成。
[0335]
在另一个方面，该变体包含与第466位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第466位相对应的位置处的氨基酸被替换为arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换a466f或a466i或a466y或由其组成。
[0336]
在另一个方面，该变体包含与第467位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第467位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换d467i或由其组成。
[0337]
在另一个方面，该变体包含与第469位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第469位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换w469a或w469e或w469h或w469l或w469n或w469q或w469r或w469s或w469y或由其组成。
[0338]
在另一个方面，该变体包含与第471位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第471位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n471a或n471d或n471m或n471w或由其组成。
[0339]
在另一个方面，该变体包含与第473位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第473位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no：1的多肽的替换s473n或由其组成。
[0340]
在另一个方面，该变体包含与第475位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第475位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换n475a或n475c或n475d或n475e或n475f或n475g或n475h或n475i或n475l或n475m或n475p或n475q或n475s或n475t或n475v或n475w或由其组成。
[0341]
在另一个方面，该变体包含与第476位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第476位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g476f或g476l或由其组成。
[0342]
在另一个方面，该变体包含与第477位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第477位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换g477a或g477h或g477q或g477s或g477w或由其组成。
[0343]
在另一个方面，该变体包含与第478位相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面，与第478位相对应的位置处的氨基酸被替换为ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val。在另一个方面，该变体包含seq id no:1的多肽的替换s478a或s478f或s478q或由其组成。
[0344]
在一个方面，α-淀粉酶变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的一个或多个替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478，并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的≥1.1的增加的比活性并且进一步其中所述变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0345]
优选地，该一个或多个替换选自与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、
f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、
n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q。
[0346]
优选地，α-淀粉酶变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、
y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且优选地其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥1.1的增加的比活性。
[0347]
优选地，α-淀粉酶变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3p；n3q；n3s；n3t；n3v；t5e；g7e；g7f；g7h；g7k；g7l；g7p；g7r；g7s；g7t；g7v；g7w；t8s；h16d；h16r；p18d；p18n；n25t；r26y；d29n；d30f；r37a；r37n；t40a；t40c；t40d；t40e；t40g；t40h；t40i；t40k；t40n；t40v；t40w；a41c；a41d；a41e；a41h；a41i；a41k；a41n；a41r；a41t；a41v；a41y；w43e；p46a；g50m；g50p；g50q；g57a；g57s；a60e；a60s；a60v；e68f；q71f；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78s；k78t；t81m；q84i；q84w；q84y；e86k；e86s；s87g；s87l；s87p；h90p；a91q；a91v；a91w；k93v；v97c；v97h；q98e；q98f；q98g；q98i；q98k；q98l；q98m；q98r；q98t；q98y；v103c；v103g；v103s；m105f；g110k；g110r；a111e；a111q；a113t；t114m；t114v；n116y；v117f；a119h；a119l；a119y；v120e；e121i；n125s；n126i；n128e；q129t；i131y；s132a；s132d；s132h；s132i；s132k；s132l；s132p；s132r；s132t；s132v；s132y；g133e；g133l；g133t；g133v；y135c；y135d；y135e；y135p；i137d；i137n；i137q；i137w；i137y；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；w140v；t141g；k142e；k142n；f143h；f143i；f143m；f145g；f145h；f145i；f145l；f145s；p146a；p146h；p146n；g147d；g149f；g149k；w159a；h161w；f162t；v165p；w167d；w167g；w167p；q169v；q169y；r171p；r176e；r176q；r176v；r176y；i177h；i177p；k179a；k179m；k179v；f180d；f180g；r181d；r181e；r181g；r181m；r181y；k185v；k185w；a186d；w187t；n195y；g196d；n197v；n197y；a204f；a204h；a204l；m208d；p211c；p211m；e216l；r219v；t225d；t225f；t225h；t225k；t225l；t225n；t225r；t225y；l228v；l230c；l230f；d231g；d231t；d231v；i235a；k242l；y243d；y243m；y243n；r247g；r247p；l250s；l250y；t251d；h252p；v253f；
v253s；r254d；r254f；r254h；r254p；r254t；r254v；r254w；n255c；n255f；n255p；t257a；t257c；t257d；t257e；t257g；t257p；t257q；t257s；t257w；t257y；k259p；k259v；k259w；k259y；e260v；m261d；m261f；m261p；m261r；m261s；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262t；f262v；f262w；a263e；a263h；a263w；a265q；l272w；g273q；l279i；n280p；k281h；k281i；k281s；n283p；w284a；w284d；w284e；w284g；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284t；w284v；w284y；s287i；s287k；s287l；s287p；s287r；s287t；s287v；s287y；p292l；p292m；p292y；h294n；h294s；n296t；y298d；y298e；n299t；a300g；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303l；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；y307s；a310d；a310n；k311a；k311c；l313q；n314p；n314s；g315e；g315m；g315v；q319c；q319e；k320s；k320w；h321f；h321k；h321l；h321r；h321t；h321v；h321w；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323c；m323d；m323e；m323g；m323h；m323l；m323n；m323p；m323r；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324t；h324w；h324y；s334v；g337v；l340m；s342a；s342g；s342t；v344a；v344c；v344i；q345n；e346a；w347a；w347e；w347f；w347g；w347h；w347k；w347n；w347p；w347r；p350a；p350c；p350n；p350t；r359c；r359f；r359g；r359m；r359w；e360d；e360h；e360p；e360t；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361n；q361p；q361r；q361s；q361t；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363e；y363f；y363g；y363i；y363l；y363q；y363s；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y368r；y368t；y372c；y372g；y372n；y372t；p375q；p375t；p380f；m382i；k383c；k383l；k383p；k383t；a384d；a384n；k385n；k385v；d387c；d387p；d387r；d387w；p388i；e391m；r393k；r393m；n395c；n395d；n395k；n395v；n395w；f396e；f396g；f396t；a397v；y398e；q401h；h402s；d403a；d403e；d403t；f405c；f405n；f405s；f405t；d406v；h407c；h407q；h407t；i410h；i410m；i410r；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；e416d；e416f；e416l；e416n；n418a；n418p；n418v；h421a；h421g；h421l；h421p；h421q；h421y；p422d；p422g；p422i；p422n；p422q；p422s；n423g；n423h；n423i；n423l；n423m；n423q；n423v；n423w；n423y；g433a；g433s；p434i；p434l；g435c；g435l；g435m；g435t；g435v；k438a；k438i；k438q；k438s；k438v；w439a；w439d；w439i；w439k；w439l；w439n；w439s；w439t；w439v；w439y；k446a；k446f；a447d；a447y；q449t；v450d；v450n；h452l；t455c；t455m；t455v；n457d；n457e；n457i；n457l；n457v；k458d；k458l；g460m；t461f；t461i；t461q；t461v；v462c；n465a；n465c；n465e；n465g；n465h；n465l；n465p；n465t；a466f；a466i；a466y；d467i；w469a；w469e；w469h；w469l；w469n；w469q；w469r；w469y；n471a；n471d；n471m；n471w；s473n；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475i；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g476f；g476l；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；s478f；和s478q，并且优选地其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥1.2的增加的比活性。
[0348]
优选地，α-淀粉酶变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3p；n3q；n3v；t5e；g7e；g7f；g7h；g7l；g7r；g7s；g7t；g7v；g7w；h16d；r26y；d29n；d30f；r37a；r37n；t40a；t40c；t40d；t40e；t40g；t40h；t40i；t40n；t40v；t40w；a41c；a41d；a41e；a41h；a41i；a41k；
a41n；a41r；a41y；p46a；g50q；g57a；g57s；a60s；a60v；e68f；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；t81m；q84i；q84w；e86s；s87g；h90p；q98f；q98i；q98k；q98l；q98m；q98y；v103c；v103g；g110k；g110r；a111e；a111q；a119l；a119y；v120e；n125s；n128e；i131y；s132a；s132d；s132h；s132i；s132k；s132l；s132r；s132v；s132y；g133e；y135c；y135d；y135e；y135p；i137n；i137w；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；k142e；f143h；f143i；f145i；p146a；p146h；p146n；g147d；g149k；h161w；v165p；w167d；w167p；q169v；r171p；r176e；r176q；r176y；i177h；k179a；k179v；r181e；r181g；r181m；r181y；a186d；w187t；g196d；n197v；n197y；a204h；a204l；p211c；p211m；t225d；t225f；t225h；t225k；t225l；t225n；t225r；t225y；l230c；l230f；d231v；y243d；y243n；r247g；r247p；l250s；h252p；v253f；r254t；r254v；r254w；n255p；t257a；t257c；t257d；t257e；t257g；t257w；k259p；k259v；k259w；e260v；m261d；m261f；m261p；m261r；m261s；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262t；f262v；f262w；a263e；a263h；a263w；a265q；l279i；k281i；n283p；w284a；w284d；w284e；w284g；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284t；w284v；w284y；s287k；s287l；s287r；s287t；s287v；s287y；h294s；n296t；y298d；n299t；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303l；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；y307s；a310n；k311a；k311c；l313q；n314p；n314s；g315e；g315v；q319e；k320w；h321f；h321k；h321l；h321v；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323c；m323d；m323e；m323g；m323h；m323l；m323n；m323p；m323r；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324t；h324w；h324y；g337v；l340m；s342g；v344c；e346a；w347e；w347f；w347g；w347h；w347k；w347n；w347p；w347r；p350c；p350n；p350t；r359g；r359w；e360d；e360t；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361n；q361p；q361r；q361t；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363f；y363g；y363i；y363q；y363s；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y368r；y372c；y372g；p375q；p375t；p380f；k383c；k383t；a384d；k385n；k385v；d387c；d387p；d387r；e391m；r393k；r393m；n395c；n395d；n395w；f396e；f396g；f396t；y398e；h402s；d403a；d403t；f405c；f405n；f405s；f405t；d406v；h407c；h407q；h407t；i410h；i410m；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；e416f；e416l；e416n；n418a；n418p；h421a；h421g；h421l；h421p；h421q；h421y；p422d；p422g；p422n；p422s；n423g；n423i；n423l；n423m；n423q；n423v；n423w；n423y；g433s；p434i；p434l；g435m；g435t；g435v；k438i；k438q；k438s；k438v；w439a；w439d；w439i；w439k；w439l；w439n；w439s；w439t；w439v；k446a；k446f；a447d；a447y；h452l；t455v；n457d；n457e；n457i；n457l；n457v；k458d；k458l；g460m；t461f；t461i；t461q；t461v；v462c；n465a；n465e；n465g；n465l；a466f；a466i；a466y；d467i；w469a；w469e；w469h；w469l；w469q；w469r；w469y；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475i；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g476l；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；和s478f，并且优选地其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥1.3的增加的比活性。优选地，α-淀粉酶变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3v；g7f；g7h；g7r；g7v；g7w；r26y；d29n；r37a；r37n；
t40c；t40d；t40e；t40g；t40i；t40n；t40v；a41c；a41d；a41e；a41k；a41n；a41r；a41y；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；q84i；q84w；s87g；q98i；q98l；v103c；g110k；a111q；a119y；n125s；n128e；s132d；s132i；s132l；s132r；y135c；y135e；i137w；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；k142e；f143i；f145i；p146h；g149k；h161w；v165p；w167d；w167p；q169v；r176q；i177h；p211c；t225f；t225h；t225k；t225r；t225y；l230c；y243d；r247g；v253f；n255p；t257a；t257d；t257e；k259p；k259v；m261d；m261r；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262w；a263h；l279i；n283p；w284d；w284e；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284v；s287k；s287l；s287r；s287y；n296t；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；k311c；l313q；n314p；g315v；h321k；h321l；h321v；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323d；m323e；m323g；m323l；m323p；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324w；l340m；s342g；e346a；w347f；w347k；w347n；w347p；w347r；r359w；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361p；q361r；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363g；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y372c；y372g；k383t；a384d；d387c；d387p；e391m；r393k；r393m；n395d；n395w；f396e；f396t；d403a；f405c；f405n；f405s；d406v；h407c；h407t；i410h；i410m；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；n418p；h421a；h421l；h421p；h421q；p422d；p422g；n423l；n423v；n423w；n423y；g433s；g435m；k438v；w439a；w439i；w439k；w439s；w439t；w439v；k446a；a447y；h452l；t455v；n457e；n457i；n457v；k458d；t461f；t461q；n465a；n465e；n465g；a466i；d467i；w469a；w469e；w469y；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；并且优选地其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥1.4的增加的比活性。优选地，α-淀粉酶变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a；n3c；n3d；n3e；n3g；n3l；g7f；r26y；r37a；r37n；t40c；t40d；t40g；t40i；t40n；t40v；a41c；a41d；a41k；a41n；a41r；g73d；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；q84i；g110k；a111q；n128e；y135e；a139l；w140a；w140m；k142e；f145i；g149k；v165p；w167p；r176q；i177h；t225f；t225h；t225k；t225y；l230c；r247g；t257d；t257e；m261w；f262a；f262e；f262k；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262w；n283p；w284d；w284p；w284s；w284v；s287y；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；l313q；n314p；h321k；h321l；h321v；p322c；p322h；p322y；m323a；m323d；m323y；h324p；h324w；l340m；s342g；e346a；w347n；w347p；w347r；r359w；e360w；q361k；q361l；q361m；q361r；q361w；q361y；y363g；y363v；y363w；y368c；y372c；k383t；d387p；e391m；r393k；r393m；n395d；n395w；d403a；f405c；f405s；d406v；h407c；h407t；i410h；r415c；r415l；r415m；r415y；n418p；h421a；h421l；h421p；p422d；n423l；n423v；g435m；w439a；k446a；h452l；t455v；n457i；k458d；n465e；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475l；n475p；n475q；n475v；n475w；g477a；g477h；g477q；和g477s，并且优选地其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥1.5的增加的比活性。
[0349]
优选地，α-淀粉酶变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：r37a；r176q；t225y；f262p；n283p；s303c；s303d；s303g；s303m；s303n；s303t；s303v；s303y；y368c；n395d；h407t；i410h；r415c；h421a；g435m；n475c；g477a；和g477h，并且优选地其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥2.0的增加的比活性。
[0350]
优选地，本发明的α-淀粉酶变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：s303c；s303t；y368c；和h421a，并且优选地其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥2.5的增加的比活性。
[0351]
可将如本文所阐述的按改善因数(if)测量的＞1.1或更大的增加的比活性与任何亲本进行比较，特别是选自以下的亲本多肽：seq id no:1、seq id no:2、seq id no：3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no：7、seq id no：8、seq id no：9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no：12、seq id no：13、seq id no：14、seq id no：15、seq id no:16或seq id no:17。
[0352]
α-淀粉酶变体还可包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或两个或更多个位置处的缺失：r181、g182、d183和g184。
[0353]
优选地，α-淀粉酶变体包含两个或更多个缺失，包括选自以下的缺失：r181*+g182*、r181*+d183*、r181*+g184*、g182*+d183*、g182*+g184*或d183*+g184*，优选地d183*+g184*。
[0354]
该变体还可包含一个或多个(例如，若干个)其他位置处的一个或多个附加替换和/或缺失。
[0355]
氨基酸变化可能是轻微性质的，即不会显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸替换或插入；通常1至30个氨基酸的小缺失；小氨基末端或羧基末端延伸，诸如氨基末端甲硫氨酸残基；至多20至25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或另一种功能来促进纯化的小延伸，诸如多组氨酸序列(poly-histidine tract)、抗原表位或结合结构域。
[0356]
因此即使α-淀粉酶变体仅可包含提供根据本发明的改善的特性的一个特定替换，其仍可具有得到α-淀粉酶变体的附加修饰，该α-淀粉酶变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的氨基酸序列的至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。这些附加修饰应优选地不显著改变α-淀粉酶变体的改善的特性。
[0357]
保守替换的例子在碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)，疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)，和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、丝氨酸和甲硫氨酸)的组内。通常不改变比活性的氨基酸替换是本领域已知的，并且由例如h.neurath和r.l.hill，1979，in，the proteins，academic press，new york进行了描述。常见的替换有ala/ser、val/ile、asp/glu、thr/ser、ala/gly、ala/thr、ser/asn、ala/val、ser/gly、tyr/phe、ala/pro、lys/arg、asp/asn、leu/ile、leu/val、ala/glu、和asp/gly。
[0358]
多肽中的必需氨基酸可根据本领域已知的方法进行鉴定，例如定点诱变或丙氨酸
扫描诱变(cunningham和wells，1989，science 244:1081-1085)。在后一种技术中，在分子中的每个残基处导入单个丙氨酸突变，并且针对蛋白酶活性测试所得的突变型分子，以鉴定对该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还可参见，hilton等人，1996，j.biol.chem.271:4699-4708。所述酶的活性位点或其它生物学相互作用还可通过结构的物理分析进行测定，如通过诸如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记，与推定接触位点氨基酸突变的技术一起所测定的。参见，例如，de vos等人，1992，science 255:306-312；smith等人，1992，j.mol.biol.224:899-904；wlodaver等人，(1992)febs lett.309:59-64。
[0359]
在一个实施方案中，该变体与亲本多肽相比具有改善的(增加的)比活性。
[0360]
在一个实施方案中，该变体与优选地seq id no:1和/或seq id no:2的亲本多肽相比具有储存条件下改善的(增加的)稳定性。
[0361]
在一个实施方案中，该变体与优选地seq id no:1和/或seq id no:2的亲本多肽相比具有改善的(增加的)热稳定性。
[0362]
在一个实施方案中，该变体与优选地seq id no:1和/或seq id no:2的亲本多肽相比具有改善的(增加的)洗涤性能。
[0363]
亲本α-淀粉酶
[0364]
亲本α-淀粉酶可以是具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽中的任一多肽的至少60％的序列同一性的多肽。
[0365]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:1的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no：1的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no：1的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no：1的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:1的多肽的等位变体。
[0366]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:2的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:2的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:2的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:2的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:2的多肽的等位变体。
[0367]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:3的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:3的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:3的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:3的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:3的多肽的等位变体。
[0368]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no：4的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至
少60％，例如至少65％、至少70％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:4的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:4的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:4的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:4的多肽的等位变体。
[0369]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:5的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:5的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:5的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:5的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:5的多肽的等位变体。
[0370]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no：6的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:6的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no：6的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:6的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:6的多肽的等位变体。
[0371]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:7的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:7的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:7的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:7的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:7的多肽的等位变体。
[0372]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:8的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:8的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:8的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:8的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:8的多肽的等位变体。
[0373]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:9的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:9的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包
含seq id no:9的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:9的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:9的多肽的等位变体。
[0374]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:10的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:10的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:10的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:10的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:10的多肽的等位变体。
[0375]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:11的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:11的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:11的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:11的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no：11的多肽的等位变体。
[0376]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no：12的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:12的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:12的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:12的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:12的多肽的等位变体。
[0377]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:13的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:13的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:13的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:13的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:13的多肽的等位变体。
[0378]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:14的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:14的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:14的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:14的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:14的多肽的等位变体。
[0379]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:15的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至
少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:15的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:15的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:15的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:15的多肽的等位变体。
[0380]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:16的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no:16的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no:16的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no:16的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:16的多肽的等位变体。
[0381]
在一个实施方案中，亲本具有与seq id no:17的多肽(其具有α-淀粉酶活性)的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，亲本的氨基酸序列与seq id no：17的多肽相差不超过十个氨基酸，例如，相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸和相差一个氨基酸。亲本优选地包含seq id no：17的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中，亲本包含seq id no：17的多肽或由其组成。在另一个实施方案中，亲本是seq id no:17的多肽的等位变体。
[0382]
seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no：11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17的氨基酸序列或其活性片段可用于设计核酸探针以根据本领域熟知的方法来鉴定和克隆编码来自不同属或种的菌株的亲本的dna。具体地，此类探针可用于遵循标准southern印迹规程与感兴趣的属或种的基因组或cdna进行杂交，以便鉴定和分离其中的对应基因。此类探针可比整个序列短得多，但长度应为至少14个，例如至少25个、至少35个或至少70个核苷酸。优选地，核酸探针的长度为至少100个核苷酸或长度为至少200个核苷酸，长度为至少300个核苷酸、至少400个核苷酸、至少500个核苷酸、至少600个核苷酸、至少700个核苷酸、至少800个核苷酸或至少900个核苷酸。可使用dna和rna探针两者。探针通常被标记以便检测对应基因(例如，标记了
32
p、3h、
35
s、生物素或亲和素)。本发明涵盖此类探针。
[0383]
可在从此类其他生物体制备的基因组dna或cdna文库中筛选与上述探针杂交并且编码亲本的dna。可通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他分离方法来分离来自此类其他生物体的基因组或其他dna。可将来自文库的dna或分离的dna转移并固定到southern印迹中使用的硝酸纤维素或其他合适的载体材料上。
[0384]
就本发明的目的而言，杂交指示该多核苷酸在低至极高严格性条件下杂交到与编码seq id no:1、seq id no:2、seq id no：3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no：13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no：16、seq id no：17的多核苷酸或其子序列相对应的标记的核苷酸探针。可使用例如x射线胶片或本领域已知的任何其他检测手段来
lividans)α-淀粉酶。
[0386]
亲本可以是真菌α-淀粉酶。例如，亲本可以是酵母α-淀粉酶，诸如假丝酵母属(candida)、克鲁维酵母属(kluyveromyces)、毕赤酵母属(pichia)、酵母属(saccharomyces)、裂殖酵母属(schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(yarrowia)α-淀粉酶。例如，亲本可以是丝状真菌α-淀粉酶，诸如枝顶孢霉属(acremonium)、伞菌属(agaricus)、链格孢属(alternaria)、曲霉属(aspergillus)、短梗霉属(aureobasidium)、葡萄座腔菌属(botryospaeria)、拟蜡菌属(ceriporiopsis)、毛壳属(chaetomidium)、金孢子菌属(chrysosporium)、麦角菌属(claviceps)、旋孢腔菌属(cochliobolus)、拟鬼伞属(coprinopsis)、家白蚁属(coptotermes)、棒囊壳属(corynascus)、隐丛赤壳属(cryphonectria)、隐球菌属(cryptococcus)、色二孢属(diplodia)、黑耳属(exidia)、线黑粉菌属(filibasidium)、镰刀菌属(fusarium)、赤霉属(gibberella)、全鞭毛虫属(holomastigotoides)、腐质霉属(humicola)、耙齿菌属(irpex)、香菇属(lentinula)、小球腔菌属(leptospaeria)、巨座壳属(magnaporthe)、黑果菌属(melanocarpus)、亚灰树花菌属(meripilus)、毛霉属(mucor)、毁丝霉属(myceliophthora)、新美鞭菌属(neocallimastix)、脉孢菌属(neurospora)、拟青霉属(paecilomyces)、青霉属(penicillium)、显革菌属(phanerochaete)、梨囊鞭菌属(piromyces)、泼氏霉属(poitrasia)、假暗盘菌属(pseudoplectania)、伪披发虫属(pseudotrichonympha)、根毛霉属(rhizomucor)、裂褶菌属(schizophyllum)、柱顶孢霉属(scytalidium)、篮状菌属(talaromyces)、嗜热子囊菌属(thermoascus)、梭孢壳属(thielavia)、弯颈霉属(tolypocladium)、木霉属(trichoderma)、长毛盘菌属(trichophaea)、轮枝孢属(verticillium)、小包脚菇属(volvariella)或炭角菌属(xylaria)α-淀粉酶。在另一个方面，亲本是卡尔斯伯酵母(saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(saccharomyces diastaticus)、道格拉斯酵母(saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(saccharomyces norbensis)或卵形酵母(saccharomyces oviformis)α-淀粉酶。在另一个方面，亲本是解纤维枝顶孢霉(acremonium cellulolyticus)、棘孢曲霉(aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(aspergillus awamori)、臭曲霉(aspergillus foetidus)、烟曲霉(aspergillus fumigatus)、日本曲霉(aspergillus japonicus)、构巢曲霉(aspergillus nidulans)、黑曲霉(aspergillus niger)、米曲霉(aspergillus oryzae)、狭边金孢子菌(chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌(chrysosporium keratinophilum)、勒克瑙金孢子菌(chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(chrysosporium merdarium)、毡金孢子菌(chrysosporium pannicola)、昆士兰金孢子菌(chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌(chrysosporium tropicum)、带纹金孢子菌(chrysosporium zonatum)、杆孢状镰孢(fusarium bactridioides)、禾谷镰孢(fusariumcerealis)、克鲁克韦尔镰孢(fusarium crookwellense)、黄色镰孢(fusarium culmorum)、禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)、禾赤镰孢(fusarium graminum)、异孢镰孢(fusarium heterosporum)、合欢木镰孢(fusarium negundi)、尖孢镰孢(fusarium oxysporum)、多枝镰孢(fusarium reticulatum)、粉红镰孢(fusarium roseum)、接骨木镰孢(fusarium sambucinum)、肤色镰孢(fusarium sarcochroum)、拟枝孢镰孢(fusarium sporotrichioides)、硫色镰孢
(fusarium sulphureum)、圆镰孢(fusarium torulosum)、拟丝孢镰孢(fusarium trichothecioides)、镰孢霉(fusarium venenatum)、灰腐质霉(humicola grisea)、特异腐质霉(humicola insolens)、柔毛腐质霉(humicola lanuginosa)、白耙齿菌(irpex lacteus)、米黑毛霉(mucor miehei)、嗜热毁丝霉(myceliophthora thermophila)、粗糙脉孢菌(neurospora crassa)、绳状青霉(penicillium funiculosum)、产紫青霉(penicillium purpurogenum)、黄孢原毛平革菌(phanerochaete chrysosporium)、无色梭孢壳(thielavia achromatica)、白丝梭孢壳(thielavia albomyces)、白毛梭孢壳(thielavia albopilosa)、澳洲梭孢壳(thielavia australeinsis)、粪梭孢壳(thielavia fimeti)、小孢梭孢壳(thielavia microspora)、卵孢梭孢壳(thielavia ovispora)、秘鲁梭孢壳(thielavia peruviana)、毛梭孢壳(thielavia setosa)、瘤孢梭孢壳(thielavia spededonium)、耐热梭孢壳(thielavia subthermophila)、太瑞斯梭孢壳(thielavia terrestris)、哈茨木霉(trichoderma harzianum)、康氏木霉(trichoderma koningii)、长枝木霉(trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(trichoderma reesei)或绿色木霉(trichoderma viride)α-淀粉酶。
[0387]
在另一个方面，亲本是芽孢杆菌属(bacillus sp.)α-淀粉酶，例如seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no：12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no：16、seq id no：17的α-淀粉酶。
[0388]
应当理解的是，对于前述菌种，本发明涵盖了完全和不完全阶段，和其它分类学的等同物，例如无性型，而无论它们已知的种名如何。本领域的技术人员会容易地识别适合的等同物的身份。公众能够从许多培养物保藏机构容易地取得这些种的菌株，所述保藏机构如美国典型培养物保藏中心(american type culture collection)(atcc)、德意志微生物和细胞培养物保藏中心(deutsche sammlung vonmikroorganismen und zellkulturen gmbh)(dsm)、真菌菌种保藏中心(centraalbureau voor schimmelcultures)(cbs)、和农业研究机构专利培养物保藏中心北区研究中心(agricultural research service patent culture collection，northern regional research center)(nrrl)。
[0389]
也可以使用上述的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从自然物质(例如，土壤、堆肥、水等)中获得的dna样品鉴定和获得亲本。用于从天然生境分离微生物和直接分离dna的技术为本领域内的人们所熟知。随后可通过相似地筛选另外的微生物或混合的dna样品的基因组或cdna文库来得到编码亲本的多核苷酸。一旦用探针检测到编码亲本的多核苷酸，就能够使用本领域普通技术人员已知的技术分离或克隆该多核苷酸(参见，例如，sambrook等人，1989，见上)。
[0390]
亲本可以是杂交体多肽，一种多肽的部分在其中被融合到另一种多肽的部分的n末端或c末端。亲本还可以是融合多肽或可裂解的融合多肽，一种多肽在其中被融合到另一种多肽的n末端或c末端。通过使编码一种多肽的多核苷酸与编码另外的多肽的多核苷酸融合，产生融合的多肽。用于制备融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列以使它们在阅读框中，和使所述融合多肽的表达在相同启动子和终止子的控制下。融合蛋白也可以使用内含肽技术构建，该技术中融合是翻译后创建的(cooper等人，1993,embo j.12：2575-2583；dawson等人，1994,science 266:776-779)。融合多肽还可包
含两种多肽之间的裂解位点。融合多肽被分泌时，该位点被裂解，从而释放两种多肽。裂解位点的示例包括但不限于公布于以下中的位点：martin等人，2003,j.ind.microbiol.biotechnol.3:568-576；svetina等人，2000,j.biotechnol.76:245-251；rasmussen-wilson等人，1997,appl.environ.microbiol.63:3488-3493；ward等人，1995,biotechnology 13:498-503；以及contreras等人，1991,biotechnology 9:378-381；eaton等人，1986,biochemistry 25:505-512；collins-racie等人，1995,biotechnology 13:982-987；carter等人，1989,proteins:structure,function,and genetics 6:240-248；以及stevens,2003,drug discovery world 4:35-48。
[0391]
变体的制备
[0392]
可通过一种方法来制备具有α-淀粉酶活性的变体，该方法包括(a)向亲本α-淀粉酶中引入与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478，并且所述变体具有α-淀粉酶活性；以及(b)回收所述变体。
[0393]
优选地，向亲本α-淀粉酶中引入的一个或多个位置处的替换选自使用seq id no：1进行编号的n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、
k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，以及(b)回收该变体。
[0394]
该变体可以使用本领域中已知的任何诱变规程来制备，例如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等等。
[0395]
定点诱变是其中在编码亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点制造一个或多个(若干个)突变的技术。
[0396]
定点诱变能在体外通过pcr完成，所述pcr涉及包含期望突变的寡核苷酸引物的使用。定点诱变也能在体外通过盒诱变进行，所述盒诱变涉及限制性酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的一个位点上裂解以及随后将包含突变的寡核苷酸连入多核苷酸中。通常消化质粒和寡核苷酸的限制性酶是相同的，使得质粒的粘性末端和插入序列彼此连接。参见，例如，scherer和davis，1979，proc.natl.acad.sci.usa 76:4949-4955；和barton等人，1990，nucleic acids res.18：7349-4966。
[0397]
定点诱变也可通过本领域已知的方法在体内完成。参见，例如，美国专利申请公布no.2004/0171154；storici等人，2001，nature biotechnol.19:773-776；kren等人，1998，nat.med.4：285-290；以及calissano和macino，1996，fungal genet.newslett.43：15-16。
[0398]
本发明能够使用任何定点诱变程序。有许多可利用的商品化试剂盒能够用于制备变体。
[0399]
合成基因构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码受关注的多肽。基因合成能够利用多个技术进行，诸如tian等人(2004,nature 432:1050-1054)描述的基于多元微芯片的技术，以及其中在可光编程的微流体芯片上合成和装配寡核苷酸的类似技术。
[0400]
能使用已知的诱变、重组、和/或重排方法生成并测试单个或多个氨基酸替换、缺失、和/或插入，随后进行有关的筛选程序，诸如那些由以下文献公开的程序：reidhaar-olson和sauer，1988，science 241:53-57；bowie和sauer，1989，proc.natl.acad.sci.usa 86:2152-2156；wo 95/17413；或wo 95/22625。能够使用的其它方法包括易错pcr、噬菌体展示(例如，lowman等人，1991，biochemistry 30:10832-10837美国专利5,223,409；wo 92/06204)和区域定点诱变(derbyshire等人，1986，gene 46:145；ner等人，1988，dna 7：127)。
[0401]
诱变/重排方法可以和高通量的、自动的筛选方法相结合，以检测宿主细胞表达的克隆的、诱变处理的多肽的活性(ness等人，1999，nature biotechnology 17:893-896)。编码活性多肽的诱变dna分子可从宿主细胞中回收并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许多肽中单个氨基酸残基重要性的快速确定。
[0402]
半合成基因构建通过组合使用合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组来完成。半合成构建的典型是通过利用合成的多核苷酸片段与pcr技术相结合的方法。因此可从头合成限定的基因区域，而其它区域可使用位点特异性诱变引物进行扩增，而其它区域可经过易错pcr或非易错pcr进行扩增。然后多核苷酸亚序列可以被重排。在一个方面，seq id no:18的多核苷酸序列编码多肽seq id no:1和/或seq id no：2。
[0403]
多核苷酸
[0404]
还公开了编码本文所述的任何变体的分离的多核苷酸。因此，本发明涉及编码变体的分离的多核苷酸，该变体包含与以下使用seq id no：1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、
147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478，并且其中该变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17中所阐述的氨基酸序列的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％，诸如至少85％、至少90％，诸如至少95％，诸如至少97％，但小于100％的序列同一性，并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
[0405]
核酸构建体
[0406]
本文还公开了包含编码用于掺入本发明的组合物中的变体的多核苷酸的核酸构建体，该多核苷酸可操作地连接至一个或多个(若干个)控制序列，所述控制序列指导编码序列在合适的宿主细胞中、在与控制序列相容的条件下表达。因此，本发明涉及包含编码变体的多核苷酸的核酸构建体，该变体包含与以下使用seq id no：1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478，其中该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列，所述控制序列指导编码序列在合适的宿主细胞中、在与控制序列相容的条件下表达。
[0407]
可以多种方式操纵多核苷酸以提供变体的表达。根据表达载体在其插入载体之前对所述多核苷酸的操作可为可取的和必需的。利用重组dna方法修饰多核苷酸的技术为本领域所熟知。
[0408]
控制序列可以是启动子序列，该启动子序列被宿主细胞识别而表达该多核苷酸。启动子序列包含转录控制序列，其介导该变体的表达。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何核酸序列，其包括突变型、截短的和杂交体启动子，可得自对宿主细胞同源的或异源的、编码细胞外或细胞内多肽的基因。
[0409]
用于在细菌宿主细胞中指导本发明的核酸构建体的转录的合适启动子的示例为得自下列的启动子：解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)α-淀粉酶基因(amyq)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)α-淀粉酶基因(amyl)、地衣芽孢杆菌
(bacillus licheniformis)青霉素酶基因(penp)、嗜热脂肪芽胞杆菌(bacillus stearothermophilus)麦芽糖淀粉酶基因(amym)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)果聚糖蔗糖酶基因(sacb)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)xyla和xylb基因、大肠杆菌(e.coli)乳糖操纵子、天蓝色链霉菌(streptomyces coelicolor)琼脂糖酶基因(daga)以及原核β-内酰胺酶基因(villa-kamaroff等人，1978，proc.natl.acad.sci.usa 75:3727-3731)、以及tac启动子(deboer等人，1983，proc.natl.acad.sci.usa 80，21-25)。另外的启动子在gilbert等人，1980，scientific american 242：74-94的“来自重组细菌的有用的蛋白质(useful proteins from recombinant bacteria)”和sambrook等人，1989，同上中有所描述。
[0410]
用于在丝状真菌宿主细胞中指导本发明的核酸构建体的转录的合适启动子的示例为得自下列的基因的启动子：构巢曲霉(aspergillus nidulans)乙酰胺酶、黑曲霉(aspergillus niger)中性α-淀粉酶、黑曲霉(aspergillus niger)酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉(aspergillus niger)或泡盛曲霉(aspergillus awamori)葡糖淀粉酶(glaa)、米曲霉(aspergillus oryzae)taka淀粉酶、米曲霉(aspergillus oryzae)碱性蛋白酶、米曲霉(aspergillus oryzae)磷酸丙糖异构酶、尖孢镰孢(fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(wo 96/00787)、镰孢霉(fusarium venenatum)淀粉葡萄糖苷酶(wo 00/56900)、镰孢霉(fusarium venenatum)daria(wo 00/56900)、镰孢霉(fusarium venenatum)quinn(wo 00/56900)、米黑根毛霉(rhizomucor miehei)脂肪酶、米黑根毛霉(rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉(trichoderma reesei)纤维二糖水解酶i、里氏木霉(trichoderma reesei)纤维二糖水解酶ii、里氏木霉(trichoderma reesei)内切葡聚糖酶i、里氏木霉(trichoderma reesei)内切葡聚糖酶ii、里氏木霉(trichoderma reesei)内切葡聚糖酶iii、里氏木霉(trichoderma reesei)内切葡聚糖酶iv、里氏木霉(trichoderma reesei)内切葡聚糖酶v、里氏木霉(trichoderma reesei)木聚糖酶i、里氏木霉(trichoderma reesei)木聚糖酶ii、里氏木霉(trichoderma reesei)β-木糖苷酶，以及na2-tpi启动子(包含编码曲霉(aspergilli)中的中性α-淀粉酶的基因的经修饰的启动子，其中非翻译前导序列已被替换为来自编码曲霉(aspergilli)中的磷酸丙糖异构酶的基因的非翻译前导序列；非限制性示例包括包含编码黑曲霉(aspergillus niger)中的中性α-淀粉酶的基因的经修饰的启动子，其中非翻译前导序列已被替换为来自编码构巢曲霉(aspergillus nidulans)或米曲霉(aspergillus oryzae)中的磷酸丙糖异构酶的基因的非翻译前导序列)；以及它们的突变的、截短的和杂交体启动子。
[0411]
在酵母宿主中，可用的启动子得自以下的基因：酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)烯醇酶(eno-1)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)半乳糖激酶(gal1)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(adh1、adh2/gap)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)磷酸丙糖异构酶(tpi)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)金属硫蛋白(cup1)和酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)3-磷酸甘油酸激酶。其它对于酵母宿主细胞有用的启动子在romanos等人，1992，yeast 8:423-488中有所描述。
[0412]
控制序列还可为合适的转录终止子序列，其被宿主细胞识别以终止转录。终止子
序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的3
’‑
末端。可使用在宿主细胞中有功能性的任何终止子。
[0413]
对于丝状真菌宿主细胞优选的终止子得自以下的基因：构巢曲霉(aspergillus nidulans)邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉(aspergillus niger)α-葡糖苷酶、黑曲霉(aspergillus niger)葡糖淀粉酶、米曲霉(aspergillus oryzae)taka淀粉酶和尖孢镰孢(fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶。
[0414]
对于酵母宿主细胞优选的终止子得自以下的基因：酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)烯醇酶、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)细胞色素c(cyc1)和酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)甘油醛-3-磷酸脱氢酶。romanos等人，1992，同上描述了对于酵母宿主细胞有用的其它终止子。
[0415]
控制序列还可为合适的前导序列，即对通过宿主细胞翻译重要的mrna的非翻译区。前导序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的5
’‑
末端。可使用在宿主细胞中有功能性的任何前导序列。
[0416]
对于丝状真菌宿主细胞优选的前导序列得自米曲霉(aspergillus oryzae)taka淀粉酶和构巢曲霉(aspergillus nidulans)磷酸丙糖异构酶的基因。
[0417]
适用于酵母宿主细胞的前导序列得自以下的基因：酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)烯醇酶(eno-1)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)α-因子和酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(adh2/gap)。
[0418]
控制序列还可为聚腺苷酸化序列，该序列可操作地连接至变体编码序列的3
’‑
末端，并且当被转录时被宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加至被转录的mrna的信号。可使用在宿主细胞中有功能性的任何聚腺苷酸化序列。
[0419]
对于丝状真菌宿主细胞优选的聚腺苷酸化序列得自以下的基因：构巢曲霉(aspergillus nidulans)邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉(aspergillus niger)葡糖淀粉酶、黑曲霉(aspergillus niger)α-葡糖苷酶、米曲霉(aspergillus oryzae)taka淀粉酶和尖孢镰孢(fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶。
[0420]
对于酵母宿主细胞有用的聚腺苷酸化序列在guo和sherman，1995，mol.cellular biol.15:5983-5990。
[0421]
控制序列还可为信号肽编码区，其编码连接至变体的n-末端的信号肽并指导该变体进入细胞的分泌途径。多核苷酸的编码序列的5
’‑
端可固有地包含信号肽编码区，其与编码该变体的编码区的片段天然地连接在翻译阅读框中。另选地，编码序列的5
’‑
端可包含信号肽编码区，其对该编码序列是外源的。在所述编码序列天然不包含信号肽编码区的情况下，需要外源信号肽编码区。另选地，外源信号肽编码区可简单地替换天然信号肽编码区以增强该变体的分泌。然而，可使用指导被表达的变体进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码区。
[0422]
对于细菌宿主细胞有效的信号肽编码序列是得自以下的基因的信号肽编码序列：芽孢杆菌属(bacillus)ncib 11837麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌(bacillus stearothermophilus)α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌
(bacillus stearothermophilus)中性蛋白酶(nprt、nprs、nprm)和枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)prsa。另外的信号肽在simonen和palva，1993，microbiological reviews 57:109-137中有所描述。
[0423]
对于丝状真菌宿主细胞有效的信号肽编码序列是得自以下的基因的信号肽编码序列：黑曲霉(aspergillus niger)中性淀粉酶、黑曲霉(aspergillus niger)葡糖淀粉酶、米曲霉(aspergillus oryzae)taka淀粉酶、特异腐质霉(humicola insolens)纤维素酶、特异腐质霉(humicola insolens)内切葡聚糖酶v、柔毛腐质霉(humicola lanuginosa)脂肪酶和米黑根毛霉(rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶。
[0424]
对于酵母宿主细胞有用的信号肽是得自酿酒酵母α-因子和酿酒酵母反转酶的基因。romanos等人，1992，同上描述了其它有用的信号肽编码序列。
[0425]
控制序列还可为前肽编码区，其编码定位在变体的n-末端的前肽。所得的多肽被称为酶原或多肽原(或有时候为酶原)。多肽原是大体失活的，并且能够通过来自多肽原的多肽的催化或自催化裂解转变为活性多肽。前肽编码区可得自以下的基因：枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)碱性蛋白酶(apre)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)中性蛋白酶(nprt)、嗜热毁丝霉(myceliophthora thermophila)漆酶(wo 95/33836)、米黑根毛霉(rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)α-因子。
[0426]
在信号肽和前肽区均存在于变体的n-末端的情况下，前肽区被定位在变体的n-末端旁边并且信号肽区被定位在前肽区的n-末端旁边。
[0427]
添加调控序列也是可取的，其允许相对于宿主细胞的生长来调控变体的表达。调控系统的示例是导致基因响应于化学或物理刺激(包括调控化合物的存在)而开启或关闭表达的那些。原核系统中的调控系统包括lac、tac和trp操纵子系统。在酵母中，也可使用adh2系统或gal1系统。在丝状真菌中，可使用黑曲霉(aspergillus niger)葡糖淀粉酶启动子、米曲霉(aspergillus oryzae)takaα-淀粉酶启动子和米曲霉(aspergillus oryzae)葡糖淀粉酶启动子。调控序列的其它例子是允许基因扩增的那些。在真核系统中，这些调控序列包括在甲氨蝶呤的存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因，以及与重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下，编码该变体的多核苷酸将与调控序列可操作地连接。
[0428]
表达载体
[0429]
本公开还涉及重组表达载体，其包含本发明的多核苷酸、启动子以及转录和翻译终止信号。因此，本公开涉及重组载体，所述重组载体包含编码变体的多核苷酸、启动子以及转录和翻译终止信号，该变体包含与以下使用seq id no:1时的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、
415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478。可将各种核苷酸和控制序列结合在一起以制备重组表达载体，其可包括一个或多个(若干个)方便的限制性位点以允许在此类位点插入或替换编码该变体的多核苷酸。作为另外一种选择，可通过将所述多核苷酸或包含所述多核苷酸的核酸构建体插入合适的用于表达的载体来表达所述多核苷酸。在创建表达载体中，所述编码序列位于载体中使得所述编码序列与合适的用于表达的对照序列可操作地连接。
[0430]
重组表达载体可为任何载体(例如，质粒或病毒)，其可方便地进行重组dna规程并可引起该多核苷酸的表达。载体的选择通常取决于载体与被导入所述载体的宿主细胞的相容性。载体可为线性或封闭的环形质粒。
[0431]
载体可为自主复制载体，即，作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如，质粒、染色体外元件、微型染色体或人工染色体。所述载体可包含任何形式以确保自我复制。作为另外一种选择，所述载体可为一种载体，当其被导入宿主细胞时被整合进基因组并连同被整合进的染色体一起复制。此外，可使用单个载体或质粒、或同时包含被导入宿主细胞的基因组的总dna的两个或更多个载体或质粒、或转座子。
[0432]
载体优选地包含一个或多个(若干个)选择性标记，其允许简单选择转化的、转染的、转导等的细胞。选择性标记是一个基因，其产物提供了生物灭杀剂或病毒抗性、重金属抗性、原养型到营养缺陷型等等。
[0433]
细菌选择性标记的示例是来自地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)或枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)的dal基因，或赋予抗生素抗性(诸如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素或四环素抗性)的标记。对于酵母宿主细胞合适的标记是ade2、his3、leu2、lys2、met3、trp1和ura3。
[0434]
载体优选地包含元件，其允许载体整合至宿主细胞基因组或在细胞中独立于基因组自主复制载体。
[0435]
对于整合进入宿主细胞基因组，载体可依赖于编码该变体的多核苷酸的序列或载体的任何其他元件，通过同源或非同源重组整合进基因组。另选地，载体可包含另外的核苷酸序列，用于指导通过同源重组在染色体的精确位置整合进入宿主细胞的基因组。为了增加在精确位置整合的可能性，整合元件应包含足够数量的核酸，诸如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对以及800至10,000个碱基对，其与对应的靶序列具有高度的同一性以提高同源重组的概率。所述整合元件可为与宿主细胞基因组中靶序列同源的任何序列。此外，所述整合元件可为非编码或编码核苷酸序列。另一方面，所述载体可通过非同源重组整合进宿主细胞的基因组。
[0436]
对于自主复制，所述载体还包含复制起点，使得所述载体在所考虑的宿主细胞中自主复制。所述复制起点可为在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制因子。术语“复制起点”或“质粒复制因子”是指使得质粒或载体在体内复制的核苷酸序列。
[0437]
可将多于一个拷贝的多核苷酸变体插入宿主细胞以增加变体的制备。可通过将至少一个附加的拷贝的所述序列整合进宿主细胞基因组、或在细胞包含扩增拷贝的选择性标记基因的情况下通过包含所述多核苷酸的可扩增的选择性标记来获得所述多核苷酸拷贝数的增加，从而能通过在合适的选择性试剂的存在下培养所述细胞而选择所述多核苷酸的
subtilis)和苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)细胞。
[0444]
细菌宿主细胞还可为任何链球菌属(streptococcus)细胞，包括但不限于似马链球菌(streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(streptococcus uberis)和马链球菌兽瘟亚种(streptococcus equi subsp.zooepidemicus)细胞。
[0445]
细菌宿主细胞还可为任何链霉菌属(streptomyces)细胞，包括但不限于不产色链霉菌(streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(streptomyces avermitilis)、天蓝色链霉菌(streptomyces coelicolor)、灰色链霉菌(streptomyces griseus)和变铅青链霉菌(streptomyces lividans)细胞。
[0446]
将dna导入芽孢杆菌属(bacillus)细胞可例如通过原生质体转化(参见，例如，chang和cohen，1979，mol.gen.genet.168:111-115)、使用感受态细胞(参见，例如young和spizizen，1961，j.bacteriol.81:823-829，或dubnau和davidoff-abelson，1971，j.mol.biol.56:209-221)、电穿孔(参见，例如shigekawa和dower，1988，biotechniques 6:742-751)或结合(参见，例如koehler和thorne，1987，j.bacteriol.169:5271-5278)来实现。将dna导入大肠杆菌(e.coli)细胞可例如通过原生质体转化(参见，例如hanahan，1983，j.mol.biol.166:557-580)或电穿孔(参见，例如dower等人，1988，nucleic acids res.16:6127-6145)来实现。将dna导入链霉菌属(streptomyces)细胞可例如通过原生质体转化和电穿孔(参见，例如gong等人，2004，folia microbiol.(praha)49:399-405)、结合(参见，例如mazodier等人，1989，j.bacteriol.171:3583-3585)或转导(参见，例如burke等人，2001，proc.natl.acad.sci.usa 98:6289-6294)来实现。将dna导入假单胞菌属(pseudomonas)细胞可例如通过电穿孔(参见，例如choi等人，2006，j.microbiol.methods 64:391-397)或结合(参见，例如pinedo和smets，2005，appl.environ.microbiol.71:51-57)来实现。将dna导入链球菌属(streptococcus)细胞可例如通过自然感受态(参见，例如perry和kuramitsu，1981，infect.immun.32:1295-1297)、原生质体转化(参见，例如catt和jollick，1991，microbios 68:189-2070)、电穿孔(参见，例如buckley等人，1999，appl.environ.microbiol.65:3800-3804)或结合(参见，例如clewell，1981，microbiol.rev.45:409-436)来实现。然而，可使用本领域已知的将dna导入宿主细胞的任何方法。
[0447]
所述宿主细胞还可为真核细胞，诸如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
[0448]
可以通过涉及原生质体形成、原生质体转化和细胞壁再生的方法，以本身已知的方式转化真菌细胞。用于转化曲霉属(aspergillus)和木霉属(trichoderma)宿主细胞的合适的规程在ep 238023和yelton等人，1984，proc.natl.acad.sci.usa 81:1470-1474中有所描述。用于转化镰孢属(fusarium)菌种的合适的方法在malardier等人，1989，gene 78:147-156和wo 96/00787中有所描述。可使用becker和guarente，载于abelson,j.n.和simon,m.i.编辑，guide to yeast genetics and molecular biology，methods in enzymology，第194卷，第182-187页，academic press，inc.，new york；ito等人，1983，j.bacteriol.153:163；和hinnen等人，1978，proc.natl.acad.sci.usa 75:1920所述的规程转化酵母。
[0449]
制备方法
[0450]
本发明还涉及一种制备组合物的方法，该方法包括制备变体，包括：(a)在适合该变体表达的条件下培养本发明的宿主细胞；和(b)回收该变体，以及(c)将该变体与清洁助剂混合。因此，本发明涉及制备清洁组合物的方法，该方法包括制备变体，包括(a)在适合该变体表达的条件下培养宿主细胞，该宿主细胞包含编码变体的表达载体或多核苷酸，该变体包含与以下使用seq id no：1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478；和(b)回收该变体；以及(c)将该变体与清洁助剂混合。
[0451]
在一个方面，本发明涉及一种制备清洁组合物的方法，该方法包括获得α-淀粉酶变体，包括向亲本α-淀粉酶中引入与选自以下的使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478，并且该变体具有α-淀粉酶活性；和回收该变体；以及将该变体与清洁助剂混合。
[0452]
使用本领域已知的方法在适于制备该变体的营养培养基中培养宿主细胞。例如，该细胞可以在实验室或工业发酵罐中，在合适的培养基中和在允许该多肽被表达和/或分离的条件下，通过摇瓶培养、或小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)来培养。在包含碳源和氮源和无机盐的合适的营养培养基中，使用本领域已知的步骤进行培养。合适的培养基可购自商业供应商或可根据公布的组合物(例如，在美国典型培养物保藏中心(american type culture collection)的目录中)制备。如果该变体被分泌在营养培养基中，可直接从培养基中回收该变体。如果该变体不是分泌的，可从细胞裂解液中回收它。
[0453]
可使用本领域已知的对所述变体为特异性的方法来检测该变体。这些检测方法可包括使用特异性抗体、形成酶产物或酶底物的消失。例如，可使用酶反应分析法以测定该变体的活性。
[0454]
可通过本领域中已知的方法回收该变体。例如，可通过常规规程，包括但不限于采集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从营养培养基回收该变体。
[0455]
可通过本领域中已知的多种规程，包括但不限于色谱法(例如，离子交换、亲和、疏水、色谱聚焦和体积排阻)、电泳规程(例如，制备性等电聚焦)、溶解度差异(例如，硫酸铵沉淀)、sds-page或提取(参见，例如，protein purification，j.-c.janson和lars ryden编辑，vch publishers，new york，1989)纯化该变体以获得基本上纯的变体。
[0456]
在一个另选的方面，不回收该变体，而是使用表达变体的本发明的宿主细胞作为变体源。
[0457]
清洁组合物
[0458]
本发明的清洁组合物优选地涉及用于以下的产品和/或涉及以下的方法和/或用于以下的受权利要求保护的组合物的用途：空气护理、汽车护理、盘碟洗涤、织物调理(包括软化)、衣物洗涤、衣物洗涤和漂洗添加剂和/或护理、硬质表面清洁和/或处理、以及用于消费者或机构用途的其他清洁。优选地，该组合物包含衣物洗涤剂。本发明的组合物可以是固体、液体、凝胶和/或单位剂量洗涤剂组合物，例如衣物洗涤剂组合物或盘碟洗涤剂组合物。尤其优选的是液体衣物洗涤剂组合物，其任选地包封在小袋的形式、任选多组分小袋的形式的水溶性材料中。
[0459]
除了淀粉酶之外，此类清洁组合物还包含另外的清洁/洗涤剂助剂，优选地清洁/洗涤剂助剂组分的混合物。通常，清洁助剂将以从0.001重量％或从0.01重量％至99.999重量％、更通常地从0.01重量％至99.9重量％或至80重量％的清洁助剂的量存在于组合物中。合适的清洁助剂包括：表面活性剂、助洗剂、漂白剂、漂白催化剂、着色剂、漂白增强剂、螯合剂、染料转移剂、沉积助剂、分散剂、另外的酶和酶稳定剂，催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、荧光增白剂、光活化剂、荧光剂、织物调色剂、织物调理剂、预成形过酸、聚合物分散剂、粘土污垢去除/抗再沉积剂、填料盐、水溶助长剂、增白剂、抑泡剂、结构增弹剂、织物软化剂、可水解表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂、抗收缩剂、杀菌剂、杀真菌剂、抗变色剂、抗腐蚀剂、碱度来源、增溶剂、载体、加工助剂、颜料、染料、香料和ph控制剂、包封物、聚合物。例如，这些清洁助剂可包含：漂白成分，诸如亚胺漂白增强剂；过氧化氢源，诸如过碳酸盐和/或过硼酸盐，特别是涂覆有诸如碳酸盐和/或硫酸盐、硅酸盐、硼硅酸盐、以及它们的任何混合物的材料的过碳酸盐；预成形过酸，包括胶囊包封形式的预成形过酸；过渡金属催化剂；抑泡剂或抑泡体系，诸如基于有机硅的抑泡剂和/或基于脂肪酸的抑泡剂；织物软化剂，诸如粘土、硅氧烷和/或季铵化合物；絮凝剂，诸如聚环氧乙烷；染料转移抑制剂，诸如聚乙烯吡咯烷酮、聚4-乙烯基吡啶n-氧化物和/或乙烯基吡咯烷酮和乙烯基咪唑的共聚物；织物完整组分，例如通过咪唑和表氯醇缩合生成的低聚物；污垢分散剂和污垢抗再沉积助剂例如烷氧基化的聚胺和乙氧基化的乙烯亚胺聚合物；抗再沉积组分，诸如聚酯；羧酸盐聚合物，诸如马来酸聚合物或马来酸和丙烯酸的共聚物；香料，诸如香料微胶囊、淀粉包封调和物、香料喷雾；皂环；美观颗粒；染料；填料，诸如硫酸钠和/或柑橘纤维，但是该组合物可优选地基本上不含填料；硅酸盐，诸如硅酸钠(包括1.6r和2.0r硅酸钠)或偏硅酸钠；二羧
酸和二醇的共聚酯；纤维素聚合物，例如甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟基乙氧基纤维素、或其他烷基或烷基烷氧基纤维素；溶剂，诸如1,2-丙二醇、单乙醇胺；二甘醇、乙醇、以及它们的任何混合物；水溶助长剂，诸如异丙基苯磺酸钠、二甲苯磺酸钠、甲苯磺酸钠、以及任何混合物；有机酸，诸如柠檬酸；以及它们的任何组合。优选地，该组合物包含清洁助剂，包括选自以下的一种或多种助剂：(i)香料微胶囊；(ii)织物调色剂；(iii)蛋白酶；(iv)两亲性清洁聚合物；(v)脂肪酶；(vi)脱氧核糖核酸酶和/或核糖核酸酶；(vii)甘露聚糖酶；或(viii)它们的混合物。
[0460]
优选地，该组合物包含表面活性剂，该表面活性剂优选地占该组合物的0.1重量％至60重量％、或0.5重量％至50重量％、或1重量％至40重量％。该表面活性剂优选地包括表面活性剂体系，该体系包含超过一种表面活性剂的混合物，该表面活性剂可为非离子的(包括半极性的)和/或阴离子的和/或阳离子的和/或两性离子的和/或两性的和/或具两性的和/或半极性非离子的和/或它们的混合物。
[0461]
优选地，组合物包含阴离子表面活性剂。优选的阴离子表面活性剂为磺酸盐和硫酸盐表面活性剂，优选地为烷基苯磺酸盐和/或(任选地烷氧基化的)烷基硫酸盐。特别优选的阴离子表面活性剂包括直链烷基苯磺酸盐(las)。优选的烷基硫酸盐包括烷基醚硫酸盐，特别是c-9-15醇醚硫酸盐(特别是具有0.5至7、优选地1至5的平均乙氧基化度的那些)、c8-c16酯硫酸盐和c10-c14酯硫酸盐(如单十二烷基酯硫酸盐)。在根据本发明的优选的组合物中，表面活性剂包括阴离子表面活性剂，优选地包括烷基苯磺酸盐和/或任选地乙氧基化烷基硫酸盐，优选地具有0至7、更优选地0.5至3的乙氧基化度。las的异构体、支链烷基苯磺酸盐(babs)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(aos)、聚烯烃磺酸盐、单烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟烷基磺酸盐和二磺酸盐，烷基硫酸盐(as)，诸如十二烷基硫酸钠(sds)、脂肪醇硫酸盐(fas)、伯醇硫酸盐(pas)、醇醚硫酸盐(aes或aeos或fes，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)，仲烷基磺酸盐(sas)、石蜡磺酸盐(ps)、酯磺酸盐、磺化脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-sfme或ses)(包括甲酯磺酸盐(mes))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烷基/十四烷基琥珀酸(dtsa)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸的盐(皂)、以及它们的组合也是合适的阴离子表面活性剂。在一个优选的实施方案中，表面活性剂包括阴离子表面活性剂，优选地包括烷基苯磺酸盐和/或任选地乙氧基化烷基硫酸盐，优选地具有0至7、更优选地0.5至3的乙氧基化度。
[0462]
阴离子表面活性剂可优选地以盐形式加入到洗涤剂中。优选的阳离子为碱金属离子，诸如钠和钾。然而，阴离子表面活性剂的盐形式可通过使用碱(诸如氢氧化钠或胺如单乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺)中和表面活性剂的酸形式而原位形成。优选地，表面活性剂包括非离子表面活性剂。优选地，该表面活性剂包括阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂，该阴离子表面活性剂与该非离子表面活性剂的重量比优选地为30:1至1:2、优选地20:1至2:3、或1∶1。
[0463]
非离子表面活性剂的非限制性示例包括醇乙氧基化物(ae或aeo)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(pfa)、烷氧基化脂肪酸烷基酯，诸如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(ape)、壬基酚乙氧基化物(npe)、烷基多苷(apg)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(fam)、脂肪酸二乙醇酰胺(fada)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(efam)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(pfam)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的n-酰基n-烷基衍生物
(葡糖酰胺，ga或脂肪酸葡糖酰胺，faga)、以及可以商品名span和tween购得的产品、以及它们的组合。尤其优选的是醇乙氧基化物，其优选地具有c9-18烷基链、优选地c12-15烷基链，并且优选地具有3至9、更优选地3至7的平均乙氧基化度。可商购获得的非离子表面活性剂包括得自basf的plurafac
tm
、lutensol
tm
和pluronic
tm
，得自cognis的dehypon
tm
系列，和得自clariant的cognis和genapol
tm
系列。
[0464]
清洁组合物优选地包含约1％至约40％的阴离子表面活性剂。清洁组合物优选地包含0.2％至约40％的非离子表面活性剂，诸如醇乙氧基化物、乙氧基壬基酚、烷基多苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的n-酰基n-烷基衍生物(“葡糖酰胺”)。
[0465]
清洁组合物可包含一种或多种另外的酶。因此，优选的组合物包含：(a)如本文所定义的淀粉酶，和(b)一种或多种另外的酶，该另外的酶优选地选自氨基肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤素过氧化物酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、黄原胶裂解酶、黄原胶酶以及它们的混合物。优选地，组合物包含另外的酶，该另外的酶选自黄原胶裂解酶、黄原胶酶、甘露聚糖酶、以及它们的混合物。尤其优选的是甘露聚糖酶。还尤其优选的是黄原胶裂解酶和黄原胶酶以及它们的混合物。另外的酶可例如由属于曲霉属(aspergillus)的微生物产生，例如棘孢曲霉(aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(aspergillus awamori)、臭曲霉(aspergillus foetidus)、烟曲霉(aspergillus fumigatus)、日本曲霉(aspergillus japonicus)、构巢曲霉(aspergillus nidulans)、黑曲霉(aspergillus niger)或米曲霉(aspergillus oryzae)；由属于镰刀霉属(fusarium)的微生物产生，例如杆孢状镰孢(fusarium bactridioides)、禾谷镰孢(fusarium cerealis)、fusarium crookwellense、大刀镰孢(fusarium culmorum)、禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)、禾赤镰孢(fusarium graminum)、fusarium heterosporum、fusarium negundi、尖孢镰孢菌(fusarium oxysporum)、多枝镰孢(fusarium reticulatum)、粉红镰孢(fusarium roseum)、接骨木镰孢(fusarium sambucinum)、肤色镰孢(fusarium sarcochroum)、硫色镰刀菌(fusarium sulphureum)、fusarium toruloseum、丝孢镰刀菌(fusarium trichothecioides)、或镰孢霉(fusarium venenatum)；由属于腐质霉属(humicola)的微生物产生，例如特异腐质霉(humicola insolens)或humicola lanuginosa；或由属于木霉属(trichoderma)的微生物产生，例如哈茨木霉(trichoderma harzianum)、康宁木霉(trichoderma koningii)、长梗木霉(trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(trichoderma reesei)或绿色木霉(trichoderma viride)。
[0466]
优选地，该组合物包含蛋白酶或超过一种蛋白酶的混合物、脂肪酶或超过一种脂肪酶的混合物、过氧化物酶或超过一种过氧化物酶的混合物、一种或多种另外的淀粉分解酶(例如另外的α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、麦芽糖淀粉酶，优选地为另外的α-淀粉酶)、一种cgtase或超过一种cgtase的混合物和/或纤维素酶或超过一种纤维素酶的混合物、甘露聚糖酶(诸如novozymes，denmark的mannaway
tm
)或超过一种甘露聚糖酶的混合物、果胶酶、果胶酸裂解酶、角质酶和/或漆酶、或超过这些酶中的一者或多者中的一种的混合物。
[0467]
一般来讲，所选择酶的特性通常将与所选择的洗涤剂相容(即最适ph、与其他酶或非酶成分相容等)，并且该酶应当以有效量存在。优选地，本发明的组合物包含至少0.01mg、优选地约0.05mg至约10mg、更优选地约0.1mg至约6mg、特别是约0.2mg至约5mg另外的活性酶/g组合物。
[0468]
蛋白酶：合适的蛋白酶包括金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶，包括中性或碱性微生物丝氨酸蛋白酶，诸如枯草杆菌蛋白酶(ec 3.4.21.62)。合适的蛋白酶包括动物源、植物源或微生物源的那些。在一个方面，此类合适的蛋白酶可为微生物源。合适的蛋白酶包括前述合适蛋白酶的经化学修饰或基因修饰的突变体。在一个方面，合适的蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶，诸如碱性微生物蛋白酶或/和胰蛋白酶型蛋白酶。合适的中性或碱性蛋白酶的示例包括：
[0469]
(a)枯草杆菌蛋白酶(ec 3.4.21.62)，包括来源于芽孢杆菌属(bacillus)的那些，诸如us 6,312,936 b1、us 5,679,630、us 4,760,025、us 7,262,042和wo09/021867中所述的迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)、嗜碱芽孢杆菌(b.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)和吉氏芽孢杆菌(bacillusgibsonii)。
[0470]
(b)胰蛋白酶型或胰凝乳蛋白酶型蛋白酶，诸如胰蛋白酶(例如源自猪或牛的胰蛋白酶)，包括描述于wo 89/06270的镰孢属(fusarium)蛋白酶和描述于wo 05/052161和wo 05/052146的来源于纤维单胞菌属(cellumonas)的胰凝乳蛋白酶。
[0471]
(c)金属蛋白酶，包括wo 07/044993a2中所述的来源于解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)的那些。
[0472]
优选的蛋白酶包括来源于吉氏芽孢杆菌(bacillus gibsonii)或迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)的那些。
[0473]
合适的可商购获得的蛋白酶包括以商品名合适的可商购获得的蛋白酶包括以商品名liquanasesavinase和由novozymes a/s(denmark)出售的那些，以商品名a/s(denmark)出售的那些，以商品名purafectpurafect和purafect由genencor international出售的那些，以商品名和由solvay enzymes出售的那些，得自henkel/kemira的那些即blap(序列示于us 5,352,604图29中，具有下列突变s99d+s101r+s103a+v104i+g159s，下文称为blap)、blap r(具有s3t+v4i+v199m+v205i+l217d的blap)、blap x(具有s3t+v4i+v205i的blap)和blap f49(具有s3t+v4i+a194p+v199m+v205i+l217d的blap)-均得自henkel/kemira；以及来自kao的kap(具有突变a230v+s256g+s259n的嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。另外合适的蛋白酶描述于wo2011/03623、wo2011/140316、wo2011/140364和wo2012/05778中。
[0474]
脂肪酶：合适的脂肪酶包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或蛋白质工
程化的突变体。可用脂肪酶的示例包括来自腐质霉属(同义词嗜热真菌属(thermomyces))的脂肪酶，例如来自柔毛腐质霉(疏绵状嗜热丝孢菌(t.lanuginosus))或来自特异腐质霉的脂肪酶，假单胞菌属脂肪酶(pseudomonas lipase)，例如来自产碱假单胞菌(p.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(p.pseudoalcaligenes)、洋葱假单胞菌(p.cepacia)、施氏假单孢菌(p.stutzeri)、荧光假单胞菌(p.fluorescens)、假单胞菌属(pseudomonas sp.)菌株sd 705，威斯康星假单胞菌(p.wisconsinensis)的脂肪酶，芽孢杆菌属脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(dartois等人(1993年)biochemica et biophysica acta(《生物化学与生物物理学报》)，第1131卷，第253-360页)，嗜热脂肪芽孢杆菌(b.stearothermophilus)或短小芽孢杆菌。
[0475]
脂肪酶可为“第一循环脂肪酶”，诸如美国专利6,939,702 b1和美国专利2009/0217464中所述的那些。在一个方面，脂肪酶为第一洗涤脂肪酶，优选地为来自包含t231r和n233r突变的疏绵状嗜热丝孢菌的野生型脂肪酶的变体。野生型序列是swissprot登录号为swiss-prot o59952(来源于疏绵状嗜热丝孢菌(棉毛状腐质霉(humicola lanuginosa)))的269个氨基酸(氨基酸23-291)。优选的脂肪酶将包括以商品名和出售的那些。
[0476]
纤维素酶：合适的纤维素酶包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属(bacillus)、假单胞菌属(pseudomonas)、腐质霉属(humicola)、镰孢属(fusarium)、梭孢壳属(thielavia)、枝顶孢霉属(acremonium)的纤维素酶，例如由特异腐质霉(humicola insolens)、嗜热毁丝菌(myceliophthora thermophila)和尖孢镰孢菌(fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。
[0477]
在一个方面，优选的酶包括源自微生物的内切葡聚糖酶，其表现出内切-β-1,4-葡聚糖酶活性(e.c.3.2.1.4)，优选地选自以下物质：
[0478]
(a)芽孢杆菌属成员内源性的细菌多肽，其具有与us 7,141,403b2中氨基酸序列seq id no:2至少90％、94％、97％和甚至99％的同一性的序列；
[0479]
(b)糖基水解酶，其具有对木葡聚糖和非晶形纤维素底物的酶活性，其中该糖基水解酶选自gh第5、12、44或74家族；
[0480]
(c)糖基水解酶，其具有与wo09/148983中的氨基酸序列seq id no:3有至少90％、94％、97％和甚至99％的同一性的序列；
[0481]
(d)以及它们的混合物。
[0482]
合适的内葡聚糖酶以商品名和(novozymes a/s，bagsvaerd，denmark)出售。
[0483]
其他可商购获得的纤维素酶包括和(novozymes a/s)、和puradax(genencor international inc.)以及(kao corporation)。
[0484]
其他淀粉酶：优选地，该组合物包含另外的淀粉酶。合适的另外淀粉酶包括α-淀粉酶，包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或基因修饰的突变体(变体)。优选的碱性
α-淀粉酶来源于芽孢杆菌(bacillus)的菌株，诸如地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)、嗜热脂肪芽孢杆菌(bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、或其它芽孢杆菌属(bacillus sp.)，诸如芽孢杆菌属ncbi 12289、ncbi 12512、ncbi 12513、dsm 9375(usp 7,153,818)、dsm 12368、dsmz no.12649、ksm ap1378(wo 97/00324)、ksm k36或ksm k38(ep 1,022,334)。优选的另外淀粉酶可选自：(a)wo 94/02597、wo 94/18314、wo96/23874和wo 97/43424中所述的变体，尤其是相对于如wo 96/23874中seq id no:2所列的酶在一个或多个以下位置具有替换的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408和444；(b)wo 96/23873、wo00/60060、wo06/002643和wo2017/192657中所述的变体，尤其是相对于如wo06/002643中seq id no.12所列的aa560酶在以下位置具有一个或多个替换的变体：26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、203、214、231、246、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、461、471、482、484，其优选地还包含d183*和g184*缺失；(c)表现出与wo06/002643中的seq id no.4(来自芽孢杆菌属sp722的野生型酶)的至少90％的同一性的变体，尤其是在183和184位具有缺失的变体，以及wo 00/60060中描述的变体，将所述文献以引用方式并入本文；(d)变体表现出与来自芽孢杆菌属707(bacillus sp.707)的野生型酶(us 6,093,562中的seq id no:7)，尤其是包含下列突变中的一个或多个：m202、m208、s255、r172和/或m261的那些，至少95％的同一性。优选地，所述淀粉酶包含m202l、m202v、m202s、m202t、m202i、m202q、m202w、s255n和/或r172q中的一个或多个。尤其优选的是包含m202l或m202t突变的那些；(e)描述于wo 09/149130中的变体，优选地表现出与wo 09/149130中的seq id no:1或seq id no：2(来自嗜热脂肪芽孢杆菌的野生型酶或其截短形式)的至少90％的同一性的那些。(f)表现出与wo2016091688中的seq id no:1的至少89％的同一性的变体，特别是在位置h183+g184处包含缺失并且还在第405位、第421位、第422位和/或第428位处包含一个或多个突变的那些；(g)表现出与来自解凝乳类芽孢杆菌yk9(paenibacillus curdlanolyticus yk9)的“pcuamylα-淀粉酶”(wo2014099523中的seq id no:3)的至少60％氨基酸序列同一性的变体；(h)表现出与来自噬细胞菌属(cytophaga sp.)的“cspamy2淀粉酶”(wo2014164777中的seq id no:1)的至少60％氨基酸序列同一性的变体；(i)表现出与来自枯草芽孢杆菌的amye(wo2009149271中的seq id no：1)的至少85％的同一性的变体；(j)表现出与来自芽孢杆菌属ksm-k38的野生型淀粉酶(登录号ab051102)的至少90％的同一性的变体；(k)表现出与来自芽孢杆菌属的aai10的成熟氨基酸序列(wo2016180748中的seq id no:7)的至少80％的同一性的变体；(l)表现出与脂环酸芽孢杆菌属(alicyclobacillus sp.)淀粉酶的成熟氨基酸序列(wo2016180748中的seq id no:8)的至少80％的同一性的变体；或它们的混合物。在存在的情况下，本发明的组合物优选地包含从至少0.01mg、优选地从约0.05mg至约10mg、更优选地从约0.1mg至约6mg、特别是从约0.2mg至约5mg另外的活性淀粉酶/g组合物。
[0485]
合适的可商购获得的α-淀粉酶包括淀粉酶包括termamyl
stainzymestainzyme和(novozymes a/s,bagsvaerd,denmark)、at 9000 biozym biotech trading gmbh wehlistrasse 27b a-1200 wien austria、optisize htpreferenz系列(包括preferenz和preferenz)、purastar(dupont.,palo alto,california)和(kao,14-10 nihonbashi kayabacho,1-chome,chuo-ku tokyo 103-8210,japan)。在一个方面，合适的淀粉酶包括淀粉酶包括和stainzyme以及它们的混合物。
[0486]
过氧化物酶/氧化酶：合适的过氧化物酶/氧化酶包括源自植物、细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。可用的过氧化物酶的示例包括来自鬼伞属(coprinus)(例如来自灰盖鬼伞(c.cinereus))的过氧化物酶及它们的变体，如wo 93/24618、wo 95/10602和wo 98/15257中所述的那些。
[0487]
可商购获得的过氧化物酶包括(novozymes a/s)。
[0488]
其他酶：其他优选的酶包括以商品名出售的果胶酸裂解酶以及以商品名(均来自novozymes a/s,bagsvaerd,denmark)和(genencor international inc.,palo alto,california)出售的甘露聚糖酶。
[0489]
可通过加入包含一种或多种酶的单个添加剂或通过加入包含所有这些酶的混合添加剂将洗涤剂酶加入洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂(即，单个添加剂或混合添加剂)可被配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂制剂是颗粒，具体地为无粉尘颗粒、液体，具体地为稳定液体、或混悬液。
[0490]
可生产无粉尘颗粒，并且可任选地通过本领域已知的方法进行涂覆。蜡质涂层材料的示例为聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，peg)，其具有1000至20000平均摩尔量；具有16至50个亚乙基氧单元的乙氧基化对壬基苯酚；乙氧基化脂肪醇，其中该醇包含12至20个碳原子，并且其中存在15至80个亚乙基氧单元；脂肪醇、脂肪酸；和脂肪酸甘油一酯和甘油二酯和甘油三酯。成膜涂层材料可例如通过流化床技术来施加。例如液体酶制备可根据已建立的方法，通过加入多元醇如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸来稳定。
[0491]
组合物可包含织物调色剂(有时被称为遮光剂、上蓝剂或美白剂)。调色剂通常向织物提供蓝色或紫色色调。调色剂能够单独使用或组合使用，以产生特定的调色色调和/或对不同的织物类型调色。这可例如通过将红色和蓝绿色染料混合以产生蓝色或紫色色调来提供。调色剂可选自任何已知化学类别的染料，包括但不限于吖啶、蒽醌类(包括多环醌类)、吖嗪、偶氮(例如，单偶氮、双偶氮、三偶氮、四偶氮、多偶氮)、包括预金属化偶氮、苯并二呋喃和苯并二呋喃酮、类胡萝卜素、香豆素、花菁、二氮杂半花菁、二苯甲烷、甲臜、半花菁、靛蓝类、甲烷、萘酰亚胺、萘醌、硝基和亚硝基、噁嗪、酞菁、吡唑类、二苯乙烯、苯乙烯基、三芳基甲烷、三苯甲烷、氧杂蒽以及它们的混合物。
[0492]
合适的织物调色剂包括染料、染料-粘土缀合物、以及有机颜料和无机颜料。合适
的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自属于染料索引(c.i.)分类的直接、碱性、活性、或水解的活性、溶剂或分散染料(例如被分类为蓝、紫、红、绿或黑的)并且单独地或组合地提供所期望的色调的小分子染料。在另一个方面，合适的小分子染料包括选自以下颜色索引(society of dyers and colourists,bradford,uk)编号的小分子染料：直接紫染料诸如9、35、48、51、66和99，直接蓝染料诸如1、71、80和279，酸性红染料诸如17、73、52、88和150，酸性紫染料诸如15、17、24、43、49和50，酸性蓝染料诸如15、17、25、29、40、45、75、80、83、90和113，酸性黑染料诸如1，碱性紫染料诸如1、3、4、10和35，碱性蓝染料诸如3、16、22、47、66、75和159，诸如ep1794275或ep1794276中所述的分散染料或溶剂染料、或如us 7,208,459 b2中所公开的染料、以及它们的混合物。在另一方面，合适的小分子染料包括选自以下颜色索引编号的小分子染料：酸性紫17、直接蓝71、直接紫51、直接蓝1、酸性红88、酸性红150、酸性蓝29、酸性蓝113、或它们的混合物。
[0493]
合适的聚合物染料包括选自以下的聚合物染料：含有共价结合(有时被称为缀合)的色原体的聚合物(染料-聚合物缀合物)(例如具有共聚至该聚合物主链中的色原体的聚合物)以及它们的混合物。聚合物染料包括wo2011/98355、wo2011/47987、us2012/090102、wo2010/145887、wo2006/055787和wo2010/142503中所述的那些。
[0494]
在另一方面，合适的聚合物染料包括选自以下的聚合物染料：以商品名(milliken，spartanburg，south carolina，usa)销售的织物-实体着色剂、由至少一种活性染料和聚合物形成的染料-聚合物缀合物，该聚合物选自包含以下部分的聚合物，该部分选自羟基部分、伯胺部分、仲胺部分、硫醇部分以及它们的混合物。在另一方面，合适的聚合物染料包括选自以下的聚合物染料：violet ct，共价键合到活性蓝、活性紫或活性红染料的羧甲基纤维素(cmc)诸如与c.i.活性蓝19缀合的cmc(由megazyme,wicklow,ireland以产品名azo-cm-cellulose，产品代码s-acmc销售)、烷氧基化的三苯基-甲烷聚合物着色剂、烷氧基化的噻吩聚合物着色剂、以及它们的混合物。
[0495]
优选的调色染料包括存在于us2008/0177090中的烷氧基化噻吩偶氮增白剂，其可任选地为阴离子的，诸如选自wo2011/011799的表5中的实施例1至42的那些。其他优选的染料公开于us 8138222中。
[0496]
合适的染料粘土缀合物包括选自以下的染料粘土缀合物：至少一种阳离子/碱性染料和绿土粘土、以及它们的混合物。在另一方面，合适的染料粘土缀合物包括选自以下的染料粘土缀合物：一种阳离子/碱性染料，其选自：c.i.碱性黄1至108，c.i.碱性橙1至69，c.i.碱性红1至118，c.i.碱性紫1至51，c.i.碱性蓝1至164，c.i.碱性绿1至14，c.i.碱性棕1至23、ci碱性黑1至11以及粘土，该粘土选自蒙脱石粘土、锂蒙脱石粘土、皂石粘土以及它们的混合物。在另一个方面，合适的染料粘土缀合物包括选自以下的染料粘土缀合物：蒙脱石碱性蓝b7 c.i.42595缀合物、蒙脱石碱性蓝b9 c.i.52015缀合物、蒙脱石碱性紫v3 c.i.42555缀合物、蒙脱石碱性绿g1 c.i.42040缀合物、蒙脱石碱性红r1 c.i.45160缀合物、蒙脱石c.i.碱性黑2缀合物、锂蒙脱石碱性蓝b7 c.i.42595缀合物、锂蒙脱石碱性蓝b9 c.i.52015缀合物、锂蒙脱石碱性紫v3 c.i.42555缀合物、锂蒙脱石碱性绿g1 c.i.42040缀合物、锂蒙脱石碱性红r1 c.i.45160缀合物、锂蒙脱石c.i.碱性黑2缀合物、皂碱性蓝b7 c.i.42595缀合物、皂碱性蓝b9 c.i.52015缀合物、皂碱性紫v3 c.i.42555缀合物、皂碱性
绿g1 c.i.42040缀合物、皂碱性红r1 c.i.45160缀合物、皂c.i.碱性黑2缀合物，以及它们的混合物。
[0497]
合适的颜料包括选自以下的颜料：黄烷士酮、蓝蒽酮、包含1至4个氯原子的氯化蓝蒽酮、皮蒽酮、二氯皮蒽酮、单溴二氯皮蒽酮、二溴二氯皮蒽酮、四溴皮蒽酮、二萘嵌苯-3,4,9,10-四羧酸二酰亚胺，其中所述酰亚胺基团可为未取代的或者被c1至c3的烷基或苯基或杂环基取代，并且其中苯基和杂环基可另外带有不提供水中溶解度的取代基、蒽嘧啶羧酸酰胺、蒽酮紫、异蒽酮紫、二噁嗪颜料、每个分子可包含至多2个氯原子的铜酞菁、多氯铜酞菁或每个分子包含至多14个溴原子的多溴氯铜酞菁、以及它们的混合物。
[0498]
在另一方面，合适的颜料包括选自以下的颜料：群青蓝(c.i.颜料蓝29)、群青紫(c.i.颜料紫15)以及它们的混合物。助洗剂-清洁组合物还可包含助洗剂，诸如基于碳酸盐、碳酸氢盐或硅酸盐的助洗剂，硅酸盐的助洗剂可为沸石，如沸石a、沸石map(高铝类型p)。可用于衣物洗涤的沸石优选地具有式na
12
(alo2)
12
(sio2)
12
·
27h2o并且沸石a的粒度通常在1μm至10μm之间，沸石map的粒度通常在0.7μm至2μm之间。其他助洗剂为偏硅酸钠(na2sio3·
nh2o或na2si2o5·
n h2o)强碱，并且优选地用于盘碟洗涤。在优选的实施方案中，洗涤剂助洗剂的量可高于5％、高于10％、高于20％、高于30％、高于40％或高于50％，并且可低于80％、65％。在盘碟洗涤剂中，助洗剂的含量通常为40％至65％，尤其是50％至65％或甚至75％至90％。
[0499]
包封物：组合物可包含包封物。在一个方面，包封物包括芯、具有内表面和外表面的壳，所述壳包封所述芯。
[0500]
在所述包封物的一个方面，所述芯可包含选自以下的材料：香料；增白剂；染料；驱虫剂；硅氧烷；蜡；风味剂；维生素；织物软化剂；皮肤护理剂，在一个方面，石蜡；酶；抗菌剂；漂白剂；感觉剂；以及它们的混合物；并且所述外壳可包含选自下列的材料：聚乙烯；聚酰胺；聚苯乙烯；聚异戊二烯；聚碳酸酯；聚酯；聚丙烯酸酯；氨基塑料，在一个方面所述氨基塑料可包含聚脲、聚氨酯、和/或聚脲氨酯，在一个方面所述聚脲可包括聚甲醛脲和/或三聚氰胺甲醛树脂；聚烯烃；多糖，在一个方面所述多糖可包括藻酸盐和/或脱乙酰壳多糖；明胶；紫胶；环氧树脂；乙烯基聚合物；水不溶性无机物；硅氧烷；以及它们的混合物。
[0501]
在所述包封物的一个方面，所述芯可包含香料。此类包封物为香料微胶囊。
[0502]
在所述包封物的一个方面，所述壳可包含三聚氰胺甲醛和/或交联的三聚氰胺甲醛。
[0503]
在一个方面，合适的包封物可包括芯材料和外壳，公开了至少部分包围所述芯材料的所述外壳。至少75％、85％或甚至90％的所述包封物可具有约0.2mpa至约10mpa、约0.4mpa至约5mpa、约0.6mpa至约3.5mpa、或甚至约0.7mpa至约3mpa的破裂强度；和0％至约30％，0％至约20％，或甚至0％至约5％的有益剂渗漏度。
[0504]
在一个方面，至少75％、85％或甚至90％的所述包封物可具有约1微米至约80微米、约5微米至60微米、约10微米至约50微米、或甚至约15微米至约40微米的粒度。
[0505]
在一个方面，至少75％、85％或甚至90％的所述包封物可具有约30nm至约250nm、约80nm至约180nm、或甚至约100nm至约160nm的颗粒壁厚。
[0506]
在一个方面，所述包封物的芯材料可包含选自以下组成的组的材料：香料原料和/或任选地选自以下的材料：植物油(包括纯植物油和/或共混植物油)，包括蓖麻油、椰子油、
棉籽油、葡萄油、菜籽油、大豆油、玉米油、棕榈油、亚麻籽油、红花油、橄榄油、花生油、椰子油、棕榈仁油、蓖麻油、柠檬油、以及它们的混合物；植物油的酯、酯，包括己二酸二丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、己二酸苄基丁酯、已二酸辛基苄酯、磷酸三甲苯酯、磷酸三辛酯、以及它们的混合物；直链或支链烃，包括具有大于约80℃的沸点的那些直链或支链烃；部分氢化的三联苯、邻苯二甲酸酯、烷基联苯(包括单异丙基联苯)、烷基化萘(包括二丙基萘)、石油溶剂油(包括煤油)、矿物油、以及它们的混合物；芳族溶剂，包括苯、甲苯、以及它们的混合物；硅油；以及它们的混合物。
[0507]
在一个方面，所述包封物的壁材料可包含合适的树脂，该树脂包含醛和胺的反应产物，合适的醛包括甲醛。合适的胺包括三聚氰胺、脲、苯胍胺、甘脲、以及它们的混合物。合适的三聚氰胺包括羟甲基三聚氰胺、甲基化羟甲基三聚氰胺、亚氨基三聚氰胺以及它们的混合物。合适的脲包括二羟甲基脲、甲基化二羟甲基脲、脲-间苯二酚、以及它们的混合物。
[0508]
在一个方面，合适的甲醛清除剂可与包封物一起用于例如胶囊浆液中，和/或在包封物添加到消费产品中之前、期间或之后添加到此类消费产品中。
[0509]
合适的胶囊可购自appleton papers inc.(appleton，wisconsin usa)。
[0510]
在一个方面，组合物可包含选自以下的酶稳定剂：(a)无机盐，该无机盐选自钙盐、镁盐以及它们的混合物；(b)碳水化合物，该碳水化合物选自低聚糖、多糖以及它们的混合物；(c)高效可逆蛋白酶抑制剂，高效可逆蛋白酶抑制剂选自苯基硼酸以及它们的衍生物；以及(d)它们的混合物。
[0511]
在另一个实施方案中，组合物包含：(1)可逆蛋白酶抑制剂，诸如含硼化合物；(2)1-2丙二醇；(3)甲酸钙和/或甲酸钠；以及(4)它们的任意组合。
[0512]
在一个方面，组合物可包含选自以下的结构剂：甘油二酯和甘油三酯、乙二醇二硬脂酸酯、微晶纤维素、基于纤维素的材料、微纤维纤维素、生物聚合物、黄原胶、结冷胶、以及它们的混合物。
[0513]
聚合物
[0514]
清洁组合物可包含一种或多种聚合物。示例为羧甲基纤维素、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡啶-n-氧化物)、聚(乙烯基咪唑)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物和两亲性聚合物。
[0515]
两亲性清洁聚合物
[0516]
优选地，两亲性清洁聚合物是具有以下通式结构的化合物：双((c2h5o)(c2h4o)n)(ch3)-n
+-c
xh2x-n
+-(ch3)-双((c2h5o)(c2h4o)n)，其中n＝20至30，并且x＝3至8，或它们的硫酸化或磺酸化变体。
[0517]
本发明的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物是指具有平衡的亲水特性和疏水特性的任何烷氧基化聚合物，使得它们能够从织物和表面去除油脂颗粒。本发明的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物的具体的实施方案包含芯结构和连接到该芯结构的多个烷氧基化物基团。这些可包括烷氧基化的聚烯亚胺，优选地具有内部聚环氧乙烷嵌段和外部聚环氧丙烷嵌段。
[0518]
芯结构可包含聚亚烷基亚胺结构，该聚亚烷基亚胺结构以缩合形式包含式(i)、(ii)、(iii)和(iv)的重复单元：
[0519][0520]
其中在每种情况下，#表示两个相邻的式(i)、(ii)、(iii)或(iv)的重复单元的氮原子和基团a1的自由结合位置之间的键的二分之一；在每种情况下，*表示与烷氧基化物基团中的一个基团连接的键的二分之一；并且a1独立地选自直链或支链c
2-c
6-亚烷基；其中聚亚烷基亚胺结构由1个式(i)的重复单元、x个式(ii)的重复单元、y个式(iii)的重复单元和y+1个式(iv)的重复单元组成，其中在每种情况下，x和y具有0至约150范围内的值；其中聚亚烷基亚胺芯结构的平均重均分子量mw为约60g/mol至约10,000g/mol范围内的值。
[0521]
芯结构可另选地包含至少一种选自式(i.a)和/或(i.b)的n-(羟烷基)胺的化合物的缩合产物的聚链烷醇胺结构，
[0522][0523]
其中a独立地选自c
1-c
6-亚烷基；r1、r1*、r2、r2*、r3、r3*、r4、r4*、r5和r5*独立地选自氢、烷基、环烷基或芳基，其中最后三个提及的基团可任选地被置换；并且r6选自氢、烷基、环烷基或芳基，其中最后三个提及的基团可任选地被置换。
[0524]
连接到芯结构的所述多个亚烷氧基基团独立地选自式(v)的亚烷氧基单元
[0525][0526]
其中在每种情况下，*表示与式(i)、(ii)或(iv)的重复单元的氮原子连接的键的二分之一；在每种情况下，a2独立地选自1,2-丙烯、1,2-丁烯和1,2-异丁烯；a3为1,2-丙烯；在每种情况下，r独立地选自氢和c
1-c
4-烷基；m具有0至约2范围内的均值；n具有约20至约50范围内的均值；n具有约10至约50范围内的均值。
[0527]
两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物的具体的实施方案可选自具有内部聚环氧乙烷嵌段和外部聚环氧丙烷嵌段的烷氧基化聚亚烷基亚胺，其具有不高于或低于特定限制值的乙氧基化度和丙氧基化度。根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺的具体的实施方案具有聚乙烯嵌段与聚丙烯嵌段(n/p)的约0.6的最小比和约1.5(x+2y+1)
1/2
的最大比。已发现n/p比为约0.8至约1.2(x+2y+1)
1/2
的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有特别有利的特性。
[0528]
根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有由伯胺、仲胺和叔氨基氮原子组成的主链，这些氨基氮原子通过亚烷基a彼此连接并且是随机排列的。起始或终止聚亚烷基亚胺主
链的主链和侧链并且其随后被亚烷氧基单元取代的剩余氢原子的伯氨基部分分别称为式(i)或(iv)的重复单元。随后被亚烷氧基单元取代的剩余氢原子的仲氨基部分称为式(ii)的重复单元。使主链和侧链支化的叔氨基部分称为式(iii)的重复单元。
[0529]
由于环化可发生在聚亚烷基亚胺主链的形成过程中，因此主链中也可存在少量环状氨基部分。当然，此类包含环状氨基部分的聚亚烷基亚胺以与非环状伯氨基部分和仲氨基部分组成的那些相同的方式被烷氧基化。
[0530]
由氮原子和基团a1组成的聚亚烷基亚胺主链具有约60g/mol至约10,000g/mol，优选地约100g/mol至约8,000g/mol，并且更优选地约500g/mol至约6,000g/mol的平均分子量mw。
[0531]
(x+2y+1)之和对应于存在于一个单独的聚亚烷基亚胺主链中的亚烷基亚胺单元总数，并且从而与聚亚烷基亚胺主链的分子量直接相关。然而，说明书中给出的值涉及存在于混合物中的所有聚亚烷基亚胺的数量均值。(x+2y+2)之和对应于存在于一个单独的聚亚烷基亚胺主链中的氨基总数。
[0532]
连接氨基氮原子的基团a1可为相同的或不同的、直链或支链的c
2-c
6-亚烷基，诸如1,2-亚乙基、1,2-亚丙基、1,2-亚丁基、1,2-亚异丁烯、1,2-亚戊基、1,2-亚己基或六亚甲基。优选的支链亚烷基为1,2-丙烯。优选的直链亚烷基为乙烯和己二醇。更优选的亚烷基为1,2-乙烯。
[0533]
聚亚烷基亚胺主链中伯氨基和仲氨基的氢原子被式(v)的亚烷氧基单元取代。
[0534][0535]
在该式中，变量优选地具有以下给出的含义中的一个含义：
[0536]
在每种情况下，a2选自1,2-丙烯、1,2-丁烯和1,2-异丁烯；优选地，a2为1,2-丙烯。a3为1,2-丙烯；在每种情况下，r选自氢和c
1-c
4-烷基，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基；优选地，r为氢。在每种情况下，指数m具有0至约2的值；优选地，m为0或大约为1；更优选地，m为0。指数n具有在约20至约50范围内、优选地在约22至约40范围内、并且更优选地在约24至约30范围内的均值。指数p具有在约10至约50范围内、优选地在约11至约40范围内、并且更优选地在约12至约30范围内的均值。
[0537]
优选地，式(v)的亚烷氧基单元为烷氧基化物嵌段的非随机序列。非随机序列是指首先加入[-a
2-o-]m(即最接近式(i)、(ii)或(iii)的重复单元的氮原子的键)，其次加入[-ch
2-ch
2-o-]n，并且第三次加入[-a
3-o-]
p
。该取向提供了烷氧基化聚亚烷基亚胺，其具有内部聚环氧乙烷嵌段和外部聚环氧丙烷嵌段。
[0538]
这些式(v)的亚烷氧基单元的主要部分由氧乙烯单元-[ch
2-ch
2-o)]
n-和氧丙烯单元-[ch
2-ch2(ch3)-o]
p-形成。亚烷氧基单元还可另外具有小比例的氧丙烯或氧丁烯单元-[a
2-o]
m-，即，氢原子饱和的聚亚烷基亚胺主链最初可与每摩尔所含nh-部分为至多约2mol、尤其是约0.5mol至约1.5mol，具体地为约0.8mol至约1.2mol的环氧丙烷或环氧丁烷反应(即初期的烷氧基化)。
[0539]
如有必要，对聚亚烷基亚胺主链的这种初始修饰允许烷氧基化中反应混合物的粘
度降低。然而，修饰一般不影响烷氧基化聚亚烷基亚胺的性能特性，因此不构成优选的量度。
[0540]
本发明的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物以按织物和家庭护理产品的重量计约0.05％至10％范围内的含量存在于织物和家庭护理产品中，该油脂清洁聚合物包括但不限于洗涤剂。织物和家庭护理产品的实施方案可包含约0.1重量％至约5重量％的油脂清洁聚合物。更具体地讲，这些实施方案可包含约0.25％至约2.5％的油脂清洁聚合物。
[0541]
羧酸酯聚合物：本发明的消费产品还可包含一种或多种羧酸酯聚合物，诸如马来酸酯/丙烯酸酯无规共聚物或聚丙烯酸酯均聚物。在一个方面，羧酸酯聚合物为聚丙烯酸酯均聚物，其具有4,000da至9,000da，或6,000da至9,000da的分子量。
[0542]
去垢性聚合物：本发明的消费产品还可包含一种或多种去垢性聚合物，该去垢性聚合物具有由以下结构(i)、(ii)或(iii)中的一个结构定义的结构：
[0543]
(i)-[(ochr
1-chr2)
a-o-oc-ar-co-]d[0544]
(ii)-[(ochr
3-chr4)
b-o-oc-sar-co-]e[0545]
(iii)-[(ochr
5-chr6)
c-or7]f[0546]
其中：
[0547]
a、b和c为1至200；
[0548]
d、e和f为1至50；
[0549]
ar为1,4-取代的亚苯基；
[0550]
sar为在位置5被so3me取代的1,3-取代的亚苯基；
[0551]
me为li、k、mg/2、ca/2、al/3、铵、单烷基铵、二烷基铵、三烷基铵或四烷基铵，其中烷基为c
1-c
18
烷基或c
2-c
10
羟烷基或它们的混合物；
[0552]
r1、r2、r3、r4、r5和r6独立地选自h或c
1-c
18
正烷基或c
1-c
18
异烷基；和
[0553]
r7为直链或支链的c
1-c
18
烷基，或直链或支链的c
2-c
30
烯基，或具有5个至9个碳原子的环烷基，或c
8-c
30
芳基，或c
6-c
30
芳基烷基。
[0554]
合适的去垢性聚合物为聚酯去垢性聚合物，诸如repel-o-tex聚合物，包括由rhodia供应的repel-o-tex sf、sf-2和srp6。其他合适的去垢性聚合物包括texcare聚合物，包括由科莱恩公司(clariant)供应的texcare sra100、sra300、srn100、srn170、srn240、srn300和srn325。其它合适的去垢性聚合物为marloquest聚合物，诸如由sasol提供的marloquest sl。
[0555]
纤维素聚合物：本发明的消费产品还可包含一种或多种纤维素聚合物，包括选自以下的那些：烷基纤维素、烷基烷氧基烷基纤维素、羧烷基纤维素、烷基羧烷基纤维素。在一个方面，纤维素聚合物选自羧甲基纤维素、甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、甲基羧甲基纤维素、以及它们的混合物。在一个方面，羧甲基纤维素具有0.5至0.9的羧甲基取代度和100,000da至300,000da的分子量。
[0556]
洗涤剂可包含漂白体系，该漂白体系可包含h2o2源(诸如过硼酸盐或过碳酸盐)，其可与形成过酸的漂白活化剂诸如四乙酰乙二胺或壬酰氧基苯磺酸盐混合。另选地，漂白体系可包含过氧酸(例如酰胺、酰亚胺、或砜类过氧酸)。一般来讲，当使用漂白剂时，本发明的组合物可包含按主题清洁组合物的重量计约0.1％至约50％或甚至约0.1％至约25％的漂白剂。
[0557]
螯合剂：本文的消费产品可包含螯合剂。合适的螯合剂包括铜、铁和/或锰螯合剂、以及它们的混合物。当使用螯合剂时，主题消费产品可包含按该主题消费产品的重量计约0.005％至约15％、或甚至约3.0％至约10％的螯合剂。合适的螯合剂包括dtpa(二亚乙基三胺五醋酸)、hedp(羟乙烷二膦酸酯)、dtpmp(环丁烷三胺五(亚甲基膦酸))、1,2-二羟基苯-3,5-二磺酸二钠盐水合物、乙二胺、环丁烷三胺、乙二胺二琥珀酸(edds)、n-羟乙基乙二胺三乙酸(hedta)、三亚乙基四胺六乙酸(ttha)、n-羟乙基亚氨基二乙酸(heida)、二羟乙基甘氨酸(dheg)、乙二胺四丙酸(edtp)以及它们的衍生物。
[0558]
可使用以下的常规稳定剂和/或蛋白酶抑制剂来稳定本发明的酶变体：例如多元醇(诸如丙二醇或甘油、糖或糖醇)、盐(诸如氯化钠和氯化钾)、乳酸、甲酸、硼酸或硼酸衍生物(例如芳族硼酸酯，或苯基硼酸衍生物诸如4-甲酰基苯基硼酸)、或肽醛(诸如二肽醛、三肽醛或四肽醛或醛类似物)(b1-b0-r形式中的任一种，其中r为h、ch3、cx3、chx2或ch2x(x＝卤素)，b0为单个氨基酸残基(优选地具有任选取代的脂族或芳族侧链)；并且b1由一个或多个氨基酸残基(优选地一个、两个或三个氨基酸残基)组成，任选地包含n末端保护基团，或如wo09118375、wo98/13459中所述的)、或蛋白质类型的蛋白酶抑制剂诸如rasi、basi、wasi(稻、大麦和小麦的双官能α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂)或ci2或ssi。在一些实施方案中，本文所用的酶由成品组合物中存在的可向酶提供的水溶性锌(ii)、钙(ii)和/或镁(ii)离子以及其他金属离子(例如钡(ii)、钪(ii)、铁(ii)、锰(ii)、铝(iii)、锡(ii)、钴(ii)、铜(ii)、镍(ii)和氧钒(iv))源来稳定。
[0559]
组合物还可包含其他常规洗涤剂成分(诸如织物调理剂)，包括粘土、泡沫促进剂、抑泡剂、防蚀剂、污垢悬浮剂、抗污垢再沉积剂、染料、杀菌剂、荧光增白剂、水溶助长剂、变色抑制剂、有机溶剂(诸如乙醇)、或香料。另外，洗涤剂可包含预点滴剂或增效剂，其被添加到洗涤中以增强一般清洁程度，这些添加剂中的一些添加剂也可用作在洗涤步骤之前施加到纺织物的预处理剂。
[0560]
目前考虑的是，在洗涤剂组合物中，任何酶(具体地为本发明必需的酶)可以对应于每升洗涤液体0.001mg至100mg酶蛋白的量、优选地每升洗涤液体0.005mg至5mg酶蛋白的量、更优选地每升洗涤液体0.01mg至1mg酶蛋白的量、并且具体地以每升洗涤液体0.1mg至1mg酶蛋白的量来添加。然而，本发明的组合物包含至少0.0001重量％至约0.1重量％的纯酶蛋白，例如约0.0001％至约0.01％、约0.001％至约0.01％或约0.001％至约0.01％。然而，当使用配制的酶时，洗涤剂组合物包含约0.02重量％至约20重量％的配制的酶，例如或约0.05重量％至约15重量％、或约0.05重量％至约20重量％、或约0.05重量％至约5重量％、或约0.05重量％至约3重量％。
[0561]
可用于本发明的α-淀粉酶变体可另外掺入到wo 97/07202中所公开的洗涤剂制剂中，该文献以引用方式并入本文。
[0562]
本发明的洗涤剂组合物可为任何方便的形式，例如棒、片剂、粉末、颗粒、糊剂、凝胶或液体的形式，或洗涤剂可为片材的形式。优选的形式是单位剂量形式，其可为片剂、片材或优选地包含液体和/或固体组合物的小袋。优选的是多隔室小袋。组合物可为粉末形式的多功能“重垢型”洗涤剂、多功能糊剂形式、重垢型液体类型、精细织物液体、手洗盘碟洗涤剂、轻垢型盘碟洗涤剂、高起泡类型、机洗盘碟洗涤剂。盘碟洗涤组合物可为液体、凝胶或粉末的形式，并且其可为单位剂量的形式，诸如片剂或小袋，并且优选地为主洗组合物或漂
洗助剂类型。组合物还可存在于单位剂量包装中，包括本领域已知的那些以及水溶性、水不溶性和/或水可渗透的那些。液体洗涤剂可为水性的，通常包含至多70％的水和0％至30％的有机溶剂，或为非水的或包含大于0.5g/l洗涤剂组合物的溶液。
[0563]
本发明的组合物可例如被配制成手洗或机洗衣物洗涤剂组合物，该组合物包括适于预处理带污渍的织物的衣物洗涤添加剂组合物和漂洗加入的织物软化剂组合物，或被配制成用于一般的家居硬质表面清洁操作的洗涤剂组合物，或被配制成用于手洗或机洗盘碟洗涤操作。
[0564]
使用方法
[0565]
本发明包括用于清洁和/或处理部位(尤其是表面或织物)的方法。在一个方面，此类方法包括以下步骤：洗涤和/或漂洗所述表面或织物，包括使所述表面或织物与本说明书中公开的任何清洁组合物接触，然后任选地洗涤和/或漂洗所述表面或织物。
[0566]
如本文所用，洗涤包括但不限于擦洗和机械搅拌。如本领域的技术人员将会知道的，本发明的清洁组合物理想地适用于衣物洗涤应用中。因此，本发明包括洗涤织物的方法。该方法包括以下步骤：使待洗涤的织物与所述清洁衣物洗涤溶液接触，该方法包括申请人的清洁组合物、清洁添加剂或它们的混合物的至少一个实施方案。织物可包括能够在正常消费者和机构用途的条件下洗涤的任何织物。溶液优选具有从约4或从约7或8至约12，优选地至约10.5的ph。所述组合物优选以溶液中约500ppm至约15,000ppm的浓度使用。水温通常在约5℃至约90℃的范围内。水与织物的比率通常为约1:1至约30:1。
[0567]
下列段落进一步描述了本发明。
[0568]
1.一种清洁组合物，该清洁组合物包含亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性并包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478；并且其中所述变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本多肽改善的特性；和清洁助剂，优选地其量为0.01重量％至99.999重量％。
[0569]
2.根据段落1所述的包含α-淀粉酶变体的清洁组合物，其中该变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、
26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478；并且其中所述变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于seq id no：1的所述亲本多肽改善的特性。
[0570]
3.根据段落1所述的清洁组合物，其中该变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478；并且其中所述变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于seq id no:2的所述亲本多肽改善的特性。
[0571]
4.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中该变体具有相对于亲本多肽改善的特性，其中改善的特性选自增加的催化效率、增加的催化速率、增加的化学稳定性、增加的氧化稳定性、增加的ph活性、增加的ph稳定性、增加的比活性、储存条件下增加的稳定性、增强的底物结合、增强的底物裂解、增加的底物特异性、增加的底物稳定性、增加的表面特性、增加的热活性和增加的热稳定性。
[0572]
5.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中相对于所述亲本多肽的所述改善的特性是增加的比活性，特别是模型a洗涤剂组合物中增加的比活性。
[0573]
6.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述改善的特性是在与具有α-淀粉酶活性的所述亲本多肽相比时按改善因数(if)测量的》1.0的增加的比活性。
[0574]
7.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478；并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的≥1.1的增加的比活性。
[0575]
8.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中不同氨基酸残基选自a、c、d、e、f、g、h、i、k、l、m、n、p、q、r、s、t、v、w和y，前提条件是不同氨基酸残基与天然存在的氨基酸残基不同。
[0576]
9.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、
l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的≥1.1的增加的比活性。
[0577]
10.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含与以下使用seq id no：1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a、n3c、
n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、
k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q，并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥1.1的增加的比活性。
[0578]
11.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3p；n3q；n3s；n3t；n3v；t5e；g7e；g7f；g7h；g7k；g7l；g7p；g7r；g7s；g7t；g7v；g7w；t8s；h16d；h16r；p18d；p18n；n25t；r26y；d29n；d30f；r37a；r37n；t40a；t40c；t40d；t40e；t40g；t40h；t40i；t40k；t40n；t40v；t40w；a41c；a41d；a41e；a41h；a41i；a41k；a41n；a41r；a41t；a41v；a41y；w43e；p46a；g50m；g50p；g50q；g57a；g57s；a60e；a60s；a60v；e68f；q71f；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78s；k78t；t81m；q84i；q84w；q84y；e86k；e86s；s87g；s87l；s87p；h90p；a91q；a91v；a91w；k93v；v97c；v97h；q98e；q98f；q98g；q98i；q98k；q98l；q98m；q98r；q98t；q98y；v103c；v103g；v103s；m105f；g110k；g110r；a111e；a111q；a113t；t114m；t114v；n116y；v117f；a119h；a119l；a119y；v120e；e121i；n125s；n126i；n128e；q129t；i131y；s132a；s132d；s132h；s132i；s132k；s132l；s132p；s132r；s132t；s132v；s132y；g133e；g133l；g133t；g133v；y135c；y135d；y135e；y135p；i137d；i137n；i137q；i137w；i137y；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；w140v；t141g；k142e；k142n；f143h；f143i；f143m；f145g；f145h；f145i；f145l；f145s；p146a；p146h；p146n；g147d；g149f；g149k；w159a；h161w；f162t；v165p；w167d；w167g；w167p；q169v；q169y；r171p；r176e；r176q；r176v；r176y；i177h；i177p；k179a；k179m；k179v；f180d；f180g；r181d；r181e；r181g；r181m；r181y；k185v；k185w；a186d；w187t；n195y；g196d；n197v；n197y；a204f；a204h；a204l；m208d；p211c；p211m；e216l；r219v；t225d；t225f；t225h；t225k；t225l；t225n；t225r；t225y；l228v；l230c；l230f；d231g；d231t；d231v；i235a；k242l；y243d；y243m；y243n；r247g；r247p；l250s；l250y；t251d；h252p；v253f；v253s；r254d；r254f；r254h；r254p；r254t；r254v；r254w；n255c；n255f；n255p；t257a；t257c；t257d；t257e；t257g；t257p；t257q；t257s；t257w；t257y；k259p；k259v；k259w；k259y；e260v；m261d；m261f；m261p；m261r；
m261s；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262t；f262v；f262w；a263e；a263h；a263w；a265q；l272w；g273q；l279i；n280p；k281h；k281i；k281s；n283p；w284a；w284d；w284e；w284g；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284t；w284v；w284y；s287i；s287k；s287l；s287p；s287r；s287t；s287v；s287y；p292l；p292m；p292y；h294n；h294s；n296t；y298d；y298e；n299t；a300g；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303l；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；y307s；a310d；a310n；k311a；k311c；l313q；n314p；n314s；g315e；g315m；g315v；q319c；q319e；k320s；k320w；h321f；h321k；h321l；h321r；h321t；h321v；h321w；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323c；m323d；m323e；m323g；m323h；m323l；m323n；m323p；m323r；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324t；h324w；h324y；s334v；g337v；l340m；s342a；s342g；s342t；v344a；v344c；v344i；q345n；e346a；w347a；w347e；w347f；w347g；w347h；w347k；w347n；w347p；w347r；p350a；p350c；p350n；p350t；r359c；r359f；r359g；r359m；r359w；e360d；e360h；e360p；e360t；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361n；q361p；q361r；q361s；q361t；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363e；y363f；y363g；y363i；y363l；y363q；y363s；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y368r；y368t；y372c；y372g；y372n；y372t；p375q；p375t；p380f；m382i；k383c；k383l；k383p；k383t；a384d；a384n；k385n；k385v；d387c；d387p；d387r；d387w；p388i；e391m；r393k；r393m；n395c；n395d；n395k；n395v；n395w；f396e；f396g；f396t；a397v；y398e；q401h；h402s；d403a；d403e；d403t；f405c；f405n；f405s；f405t；d406v；h407c；h407q；h407t；i410h；i410m；i410r；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；e416d；e416f；e416l；e416n；n418a；n418p；n418v；h421a；h421g；h421l；h421p；h421q；h421y；p422d；p422g；p422i；p422n；p422q；p422s；n423g；n423h；n423i；n423l；n423m；n423q；n423v；n423w；n423y；g433a；g433s；p434i；p434l；g435c；g435l；g435m；g435t；g435v；k438a；k438i；k438q；k438s；k438v；w439a；w439d；w439i；w439k；w439l；w439n；w439s；w439t；w439v；w439y；k446a；k446f；a447d；a447y；q449t；v450d；v450n；h452l；t455c；t455m；t455v；n457d；n457e；n457i；n457l；n457v；k458d；k458l；g460m；t461f；t461i；t461q；t461v；v462c；n465a；n465c；n465e；n465g；n465h；n465l；n465p；n465t；a466f；a466i；a466y；d467i；w469a；w469e；w469h；w469l；w469n；w469q；w469r；w469y；n471a；n471d；n471m；n471w；s473n；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475i；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g476f；g476l；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；s478f；和s478q，并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥1.2的增加的比活性。
[0579]
12.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含与以下使用seq id no：1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3p；n3q；n3v；t5e；g7e；g7f；g7h；g7l；g7r；g7s；g7t；g7v；g7w；h16d；r26y；d29n；d30f；r37a；r37n；t40a；t40c；t40d；t40e；t40g；t40h；t40i；t40n；t40v；t40w；a41c；a41d；a41e；a41h；a41i；a41k；a41n；a41r；a41y；p46a；g50q；g57a；g57s；a60s；a60v；e68f；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；t81m；q84i；q84w；e86s；s87g；h90p；q98f；q98i；q98k；q98l；q98m；q98y；v103c；v103g；g110k；g110r；a111e；a111q；
a119l；a119y；v120e；n125s；n128e；i131y；s132a；s132d；s132h；s132i；s132k；s132l；s132r；s132v；s132y；g133e；y135c；y135d；y135e；y135p；i137n；i137w；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；k142e；f143h；f143i；f145i；p146a；p146h；p146n；g147d；g149k；h161w；v165p；w167d；w167p；q169v；r171p；r176e；r176q；r176y；i177h；k179a；k179v；r181e；r181g；r181m；r181y；a186d；w187t；g196d；n197v；n197y；a204h；a204l；p211c；p211m；t225d；t225f；t225h；t225k；t225l；t225n；t225r；t225y；l230c；l230f；d231v；y243d；y243n；r247g；r247p；l250s；h252p；v253f；r254t；r254v；r254w；n255p；t257a；t257c；t257d；t257e；t257g；t257w；k259p；k259v；k259w；e260v；m261d；m261f；m261p；m261r；m261s；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262t；f262v；f262w；a263e；a263h；a263w；a265q；l279i；k281i；n283p；w284a；w284d；w284e；w284g；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284t；w284v；w284y；s287k；s287l；s287r；s287t；s287v；s287y；h294s；n296t；y298d；n299t；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303l；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；y307s；a310n；k311a；k311c；l313q；n314p；n314s；g315e；g315v；q319e；k320w；h321f；h321k；h321l；h321v；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323c；m323d；m323e；m323g；m323h；m323l；m323n；m323p；m323r；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324t；h324w；h324y；g337v；l340m；s342g；v344c；e346a；w347e；w347f；w347g；w347h；w347k；w347n；w347p；w347r；p350c；p350n；p350t；r359g；r359w；e360d；e360t；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361n；q361p；q361r；q361t；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363f；y363g；y363i；y363q；y363s；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y368r；y372c；y372g；p375q；p375t；p380f；k383c；k383t；a384d；k385n；k385v；d387c；d387p；d387r；e391m；r393k；r393m；n395c；n395d；n395w；f396e；f396g；f396t；y398e；h402s；d403a；d403t；f405c；f405n；f405s；f405t；d406v；h407c；h407q；h407t；i410h；i410m；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；e416f；e416l；e416n；n418a；n418p；h421a；h421g；h421l；h421p；h421q；h421y；p422d；p422g；p422n；p422s；n423g；n423i；n423l；n423m；n423q；n423v；n423w；n423y；g433s；p434i；p434l；g435m；g435t；g435v；k438i；k438q；k438s；k438v；w439a；w439d；w439i；w439k；w439l；w439n；w439s；w439t；w439v；k446a；k446f；a447d；a447y；h452l；t455v；n457d；n457e；n457i；n457l；n457v；k458d；k458l；g460m；t461f；t461i；t461q；t461v；v462c；n465a；n465e；n465g；n465l；a466f；a466i；a466y；d467i；w469a；w469e；w469h；w469l；w469q；w469r；w469y；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475i；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g476l；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；和s478f，并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥1.3的增加的比活性。
[0580]
13.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3v；g7f；g7h；g7r；g7v；g7w；r26y；d29n；r37a；r37n；t40c；t40d；t40e；t40g；t40i；t40n；t40v；a41c；a41d；a41e；a41k；a41n；a41r；a41y；g73d；g73h；
g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；q84i；q84w；s87g；q98i；q98l；v103c；g110k；a111q；a119y；n125s；n128e；s132d；s132i；s132l；s132r；y135c；y135e；i137w；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；k142e；f143i；f145i；p146h；g149k；h161w；v165p；w167d；w167p；q169v；r176q；i177h；p211c；t225f；t225h；t225k；t225r；t225y；l230c；y243d；r247g；v253f；n255p；t257a；t257d；t257e；k259p；k259v；m261d；m261r；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262w；a263h；l279i；n283p；w284d；w284e；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284v；s287k；s287l；s287r；s287y；n296t；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；k311c；l313q；n314p；g315v；h321k；h321l；h321v；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323d；m323e；m323g；m323l；m323p；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324w；l340m；s342g；e346a；w347f；w347k；w347n；w347p；w347r；r359w；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361p；q361r；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363g；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y372c；y372g；k383t；a384d；d387c；d387p；e391m；r393k；r393m；n395d；n395w；f396e；f396t；d403a；f405c；f405n；f405s；d406v；h407c；h407t；i410h；i410m；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；n418p；h421a；h421l；h421p；h421q；p422d；p422g；n423l；n423v；n423w；n423y；g433s；g435m；k438v；w439a；w439i；w439k；w439s；w439t；w439v；k446a；a447y；h452l；t455v；n457e；n457i；n457v；k458d；t461f；t461q；n465a；n465e；n465g；a466i；d467i；w469a；w469e；w469y；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a，并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥1.4的增加的比活性。
[0581]
14.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：n3a；n3c；n3d；n3e；n3g；n3l；g7f；r26y；r37a；r37n；t40c；t40d；t40g；t40i；t40n；t40v；a41c；a41d；a41k；a41n；a41r；g73d；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；q84i；g110k；a111q；n128e；y135e；a139l；w140a；w140m；k142e；f145i；g149k；v165p；w167p；r176q；i177h；t225f；t225h；t225k；t225y；l230c；r247g；t257d；t257e；m261w；f262a；f262e；f262k；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262w；n283p；w284d；w284p；w284s；w284v；s287y；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；l313q；n314p；h321k；h321l；h321v；p322c；p322h；p322y；m323a；m323d；m323y；h324p；h324w；l340m；s342g；e346a；w347n；w347p；w347r；r359w；e360w；q361k；q361l；q361m；q361r；q361w；q361y；y363g；y363v；y363w；y368c；y372c；k383t；d387p；e391m；r393k；r393m；n395d；n395w；d403a；f405c；f405s；d406v；h407c；h407t；i410h；r415c；r415l；r415m；r415y；n418p；h421a；h421l；h421p；p422d；n423l；n423v；g435m；w439a；k446a；h452l；t455v；n457i；k458d；n465e；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475l；n475p；n475q；n475v；n475w；g477a；g477h；g477q；和g477s，并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥
1.5的增加的比活性
[0582]
15.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：r37a；r176q；t225y；f262p；n283p；s303c；s303d；s303g；s303m；s303n；s303t；s303v；s303y；y368c；n395d；h407t；i410h；r415c；h421a；g435m；n475c；g477a；和g477h，并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥2.0的增加的比活性。
[0583]
16.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含与以下使用seq id no:1进行编号的位置相对应的位置处的以下替换中的一个或多个替换：s303c；s303t；y368c；和h421a，并且其中所述α-淀粉酶变体具有按改善因数(if)测量的模型a洗涤剂组合物中≥2.5的增加的比活性。
[0584]
17.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，该清洁组合物还包含与使用seq id no:1进行编号的位置r181、g182、d183和g184相对应的两个或更多个位置处的缺失。
[0585]
18.根据段落17所述的清洁组合物，其中该缺失选自r181*+g182*、r181*+d183*、r181*+g184*、g182*+d183*、g182*+g184*或d183*+g184*，优选地d183*+g184*。
[0586]
19.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中该亲本多肽具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的至少60％，例如至少62％、至少63％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0587]
20.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述亲本多肽包含seq id no:1或seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16或seq id no:17的多肽或由其组成。
[0588]
21.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，该清洁组合物具有与亲本多肽的氨基酸序列的至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％的同一性、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％，但小于100％的序列同一性。
[0589]
22.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，其中所述变体包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个位置处的替换。
[0590]
23.根据前述段落中任一段落所述的清洁组合物，该清洁组合物包含该变体和至少一种附加活性组分。
[0591]
24.根据任一前述段落所述的清洁组合物，其中该至少一种附加活性组分是酶。
[0592]
25.根据任一前述段落所述的清洁组合物，其中所述组合物是液体衣物洗涤组合物或液体盘碟洗涤组合物诸如自动盘碟洗涤(adw)液体洗涤剂组合物，或粉末衣物洗涤组合物诸如皂条，或粉末盘碟洗涤组合物诸如adw单位剂量洗涤剂组合物以及诸如手洗盘碟洗涤(hdw)洗涤剂组合物。
[0593]
26.一种获得清洁组合物的方法，该方法包括获得亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，包括以下步骤：
[0594]
a)在与以下使用seq id no：1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处引入替换：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、
86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477和478；
[0595]
b)任选地在与使用seq id no:1进行编号的所述位置r181、g182、d183和g184相对应的亲本α-淀粉酶中的两个或更多个位置处引入缺失；
[0596]
并且所述方法由此提供了所述亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体具有与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的氨基酸序列的至少60％，诸如至少65％，诸如至少70％，诸如至少75％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少97％，诸如至少99％，但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本改善的特性；以及将所述变体与清洁助剂混合。
[0597]
实施例
[0598]
实施例1：根据本发明的变体的生成
[0599]
酶：sp722：seq id no:1，可购自novozymes，并且公开于wo 95/26397中。按标准规程通过以下方式制备seq id no:1的淀粉酶变体(sp722)：向该基因中引入随机突变和/或定点突变，用这些突变的基因转化枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)宿主细胞，并且使转化的宿主细胞发酵(例如，如wo 2004/111220的实施例1中所述)。按类似方式在枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)中重组产生seq id no:1的参考淀粉酶或亲本多肽。
[0600]
生成在选自以下使用seq id no:1进行编号的位置的不同位置中具有替换的变体文库：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、
p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、
n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f和s478q。
[0601]
实施例2：变体的比活性
[0602]
为了确定是否保持或甚至改善相应变体(如实施例1中所述的那样生成)的活性，通过微样本测定法来评估这些变体。制备以下洗涤剂组合物：
[0603]
表1：模型洗涤剂a(按重量/重量给出的百分比)
[0604][0605][0606]
模型a洗涤剂(0.33％)的制备：
[0607]
具有6000dh(水硬度)的4:1摩尔比cacl2与mgcl2储备溶液。
[0608]
称取125.8g的cacl2.2h2o到1升瓶中并且向其中添加500ml的i级水并充分搅拌。向其中称取并添加43.8g的mgcl2.6h2o并使之充分溶解，并且用i级水将最终体积定容至1000ml。
[0609]
0.535m的nahco3溶液：
[0610]
将44.9g的碳酸氢钠溶解于100ml的i级水中。
[0611]
具有15(15
°
dh)水硬度的模型a洗涤剂：
[0612]
称取3.335g的模型a洗涤剂并将其转移到1升瓶中并且向其中添加865ml的i级水并充分混合。向其中添加7.5ml的0.535m nahco3，充分混合，并且用1级水定容至1升。为了将水硬度调节至15
°
dh，添加2.5ml具有6000
°
dh的4:1摩尔比cacl2.2h2o与mgcl2.6h2o储备溶液并且将混合物搅拌15分钟。
[0613]
实验规程
[0614]
母板的制备：
[0615]
通过菌落挑选器(kbiosystems)从转化的板上挑取菌落并且将菌落接种于包含tbgly培养基的96孔培养板中以让其生长。让培养物在37℃下生长3天，并且通过离心来从板回收上清液。
[0616]
底物板的制备：
[0617]
从center for testmaterials(cft,the netherlands)购得5米样本-cs-27并且使用样本打孔机将其切成6mm微样本。在96孔nunc板的每个孔中放入一个样本，向每个孔中添加180μl的模型a洗涤剂(0.33％)。使用含0.1mm cacl2、0.01％triton-x的100mm mops(ph 7)将培养上清液稀释到500x。向包含样本和模型a洗涤剂的板中添加20μl的稀释上清液并在25℃、800rpm下温育10分钟。将40μl的反应混合物转移到另一个96孔板，并且为了将所有释放的低聚糖消化成葡萄糖，添加10μl的0.1mg/ml淀粉葡萄糖苷酶(amg)并在室温下温育5分钟。amg纯化自商业产品amg 300l(novozymes)。通过对羟基苯甲酸酰肼(pahbah)方法来检测还原端(lever m anal biochem.81:21-7)。为了制备1.5％pahbah试剂，将1.5g的对羟基苯甲酸酰肼(pahbah)溶解于包含1.0m na2co3、0.17m酒石酸钾钠和5mm bi(no3)3.5h2o的缓冲液中。向50μl amg消化物中添加50μl的1.5％pahbah试剂并且在95℃下加热10分钟。在405nm下测量所得混合物的吸光度，该吸光度与酶活性成比例。通过elisa使用特异性抗体来确定表达的酶的浓度。通过取比活性与浓度之比来计算比活性，并且命中被鉴定为比亲本α-淀粉酶的比活性更高的任何值。参考α-淀粉酶或亲本α-淀粉酶具有seq id no：1。参考α-淀粉酶或亲本α-淀粉酶的改善因数(if)为if＝1.0。
[0618]
改善因数(if)计算如下：
[0619]
改善因数(if)＝[变体的比活性]/[亲本α-淀粉酶的比活性]
[0620]
表2：如通过上述方法获得的培养上清液形式的变体的改善因数(if)(氨基酸替换涉及seq id no：1)：
[0621]
[0622]
[0623]
[0624]
[0625]
[0626][0627]
对于模型a洗涤剂显示出至少1.1的if的变体被认为在与亲本α-淀粉酶(即，具有seq id no:1中所阐述的氨基酸序列的α-淀粉酶)相比时具有改善的性能。
[0628]
洗涤剂实施例
[0629]
实施例1至6
[0630]
设计用于手洗或顶部加载式洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
[0631][0632]
[0633]
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
[0634]
实施例7至12
[0635]
设计用于前加载式自动洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
[0636][0637][0638]
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
[0639]
实施例13至18重垢型液体衣物洗涤剂组合物
[0640][0641]1无规接枝共聚物为聚乙酸乙烯酯接枝的聚环氧乙烷共聚物，其具有聚环氧乙烷主链和多个聚乙酸乙烯酯侧链。聚环氧乙烷主链的分子量为约6000，并且聚环氧乙烷与聚乙酸乙烯酯的重量比为约40至60，并且每50个环氧乙烷单元具有不超过1个接枝点。
[0642]2聚乙烯亚胺(mw＝600)，每个-nh具有20个乙氧基化基团。
[0643]3两亲烷氧基化油脂清洁聚合物为聚乙烯亚胺(mw＝600)，其中每个-nh具有24个乙氧基化基团，并且每个-nh具有16个丙氧基化基团
[0644]
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
[0645]
实施例19至21重垢型液体衣物洗涤剂组合物
[0646]
[0647][0648]
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
[0649]
**基于总清洁和/或处理组合物重量计，共计不超过7％的水。
[0650]
针对组合物实施例1至21的原材料和说明
[0651]
具有c
11-c
18
平均脂族碳链长度的直链烷基苯磺酸盐
[0652]c12-18
二甲基羟乙基氯化铵
[0653]
ae3s为c
12-15
烷基乙氧基(3)硫酸盐
[0654]
ae7为c
12-15
醇乙氧基化物，平均乙氧基化度为7
[0655]
ae9为c
12-16
醇乙氧基化物，平均乙氧基化度为9
[0656]
hsas是如us 6,020,303和us 6,060,443所公开的具有约16-17的碳链长度的中间支化伯烷基硫酸盐
[0657]
聚丙烯酸酯mw 4500是由basf提供的
[0658]
羧甲基纤维素为由cp kelco(arnhem,netherlands)供应的v
[0659]
chec是阳离子改性的羟乙基纤维素聚合物。
[0660]
膦酸盐螯合剂是，例如，二亚乙基四胺五乙酸(dtpa)羟乙烷二磷酸盐(hedp)
[0661]
celluclean
tm
、和均是novozymes(bagsvaerd，denmark)的产品。
[0662]
purafect是genencor international，palo alto，
california，usa的产品
[0663]
荧光增白剂1是ams，荧光增白剂2是cbs-x，直接紫9是violet bn-z nobs是壬酰氧苯磺酸钠
[0664]
taed是四乙酰基乙二胺
[0665]
s-acmc为与c.i.活性蓝19产品名azo-cm-cellulose
[0666]
去垢剂为pf
[0667]
丙烯酸/马来酸共聚物的分子量为70,000，丙烯酸根与马来酸根的比率为70:30
[0668]
edds是乙二胺-n,n'-二琥珀酸的钠盐，(s,s)异构体抑泡剂附聚物是由dow corning，midland，michigan，usa提供的
[0669]
hsas是中间支化的烷基硫酸盐
[0670]
violet ct由milliken，spartanburg，south carolina，usa提供
[0671]1无规接枝共聚物为聚乙酸乙烯酯接枝的聚环氧乙烷共聚物，其具有聚环氧乙烷主链和多个聚乙酸乙烯酯侧链。聚环氧乙烷主链的分子量为约6000，并且聚环氧乙烷与聚乙酸乙烯酯的重量比为约40至60，并且每50个环氧乙烷单元具有不超过1个接枝点。
[0672]2聚乙烯亚胺(mw＝600)，每个-nh具有20个乙氧基化基团。
[0673]3两亲性烷氧基化聚合物是聚乙烯亚胺(分子量＝600)，制备自被衍生为每个-nh包含24个乙氧基化物基团且每个
–
nh包含16个丙氧基化物基团的聚合物。
[0674]
淀粉酶4是本文a)至k)中的任何一种(mg活性蛋白)。
[0675]
实施例22至26单位剂量衣物洗涤剂组合物。此类单位剂量制剂可包括一个或多个隔室。
[0676][0677]
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
[0678]1聚乙烯亚胺(mw＝600)，每个-nh具有20个乙氧基化基团。
[0679]
实施例27多隔室单位剂量组合物
[0680]
下文中提供了本发明的多隔室的单位剂量衣物洗涤剂配方。在这些实施例中，单位剂量具有三个隔室，但类似的组合物能够以两个、四个或五个隔室被制得。用于包封所述隔室的膜是聚乙烯醇。
[0681][0682]
多隔室配方
[0683][0684]
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
[0685]
本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。