专利名称：3-脱氧低聚糖，其制备方法和含有它们的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及3-脱氧低聚糖，其制备方法，和含它们的药物组合物。
肝素是葡糖胺聚糖家族中的一种多糖，其已知具有抗凝血性质。已知(I.Bjo rkand O Lincdahl，Molecular and Cellular Bio-chemistry”，(1982)，Dr.W.Jank Publishers-Holland)凝血是一种复杂的生理现象。一些刺激，如接触激活和组织因子，可触发存在于血浆中的一系列凝血因子的连续活化。不管刺激的性质如何，最终步骤是一样的，即活化的因子X(Xa)激活因子Ⅱ(也称作前凝血酶)，活化形式的因子Ⅱ(Ⅱα也称作凝血酶)又引起可溶性血纤维蛋白原的部分蛋白解，且伴随着主要构成血块的不溶性血纤维蛋白的释放。
在正常生理条件下，凝血因子的活性是通过蛋白质，如存在于血浆中的抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)和肝素辅助因子Ⅱ(HCⅡ)，来调节的。ATⅢ对许多凝血因子，尤其是对因子Ⅹa和Ⅱa，显示出抑制活性。
由于因子Ⅹa或因子Ⅱa都参与了凝血的最后两步，它们与启动刺激无关，因此，因子Ⅹa或Ⅱa的抑制作用就构成了得到抗凝血和抗血栓形成活性的较好方式。
下式的五糖 (1)R＝-COCH3(2)R＝-SO-3代表了用与ATⅢ结合所需的肝素最小序列。该化合物是在大约10年前通过全化学合成(P.Sinaij et al，Carbohydrate Reearch(1984)，1132(5)得到的。
自那以来，通过全化学合成得到具有抗血栓形成和抗凝向活性的许多合成低聚糖已记载在文献中。
欧洲专利EP-0，084，999记载了糖醛酸(葡糖醛酸和艾杜糖醛酸)和葡糖胺单糖单位组成的衍生物且具有抗血栓形成的优点。除羟基取代基外，这些化合物含N-硫酸基和N-乙酰基，在一些情况中，异头羟基可被甲氧基取代。
欧洲申请EP-0，165，134也记载了具有抗血栓形成活性的合成低聚糖。这些化合物由糖醛酸和葡糖胺单糖单位组成，并含有O-硫酸基或O-磷酸基。在葡糖胺单位的3位含有O-硫酸基的糖醛酸和葡糖胺的衍生物也记载在申请EP-0.301，618中，这些化合物具有加强的抗血栓形成和抗凝血性能。专利申请EP-0，454，220记载了具有O-烷基或O-硫酸基作为取代基的糖醛酸和葡萄糖的衍生物。这些后面的化合物也具有抗血栓形成和抗凝血性质。
硫酸化的葡糖胺聚糖(生物)碱(glycoaminoglycanoid)其中N-硫酸基，N-乙酸基或羟基已被烷氧基，芳氧基，芳烷氧基或O-硫酸基取代)也记载在专利申请EP-0.529，715中。这些化合物具有优良的抗血栓形成性质和抑制平滑肌细胞增埴作用。
低聚糖，尤其是与结合ATⅢ的所需肝素的最小序列相似的五糖也记载在Argew、Chem、Int.Ed、Engl(1993)，32，(3)，PP.434-436中。这些化合物含葡糖醛酸或葡萄糖单位，其中的羟基已被O-硫酸基或O-甲基取代。
现已出人意料地发现通过用氢原子在一个或多个糖单元的3位取代一个或多个羟基或O-烷基或O-硫酸基，可得到具有优良生物活性的低聚糖。事实上，本发明化合物因其新的结构和有力且出人意料的生物性质而不同于文献中记载的其它合成肝素生物碱(hepaminoids)。本发明化合物是具有非常高的抗Ⅹa因子活性和对ATⅢ有高亲和性的3-脱氧低聚糖。另外，本发明化合物可通过胃肠道很好地吸收，因此，它们是可口服的产品。
更具体讲，本发明的目的是通式Ⅰ化合物或其药用盐和相应的酸

Y代表式D R代表直链或支链C1-6烷基，R1，R3，R5，R7，R8，R10，R12和R13可相同或不同，分别代表羟基，直链或支链C1-6烷基，或-SO3。
R2，R4，R6，R9和R11可相同或不同，分别代表氢原子，羟基，直链或支链C1-6烷氧基或-OSO3-，条件是取代基R2或R4或R6或R9或R11至少一个代表氢原子。
今后术语“单糖单位”用来代表糖苷单位
取代基独立地连到该单位的2，3或5位上。
针对式B，C和D，键 代表带有通过该键连接的取代基碳原子的构型可是R或S。
本发明化合物为3-脱氧糖衍生物。
因此，形成本发明化合物的至少一个单糖单位必须对应于一个3-脱氧单糖结构。
因此，在式Ⅰ中，取代基R2或R4或R6或R9或R11至少一个代表氢原子。
R2代表氢原子的式Ⅰ化合物是本发明优选的产物。
X代表式(B)或式(C0的式(Ⅰ)化合物也是本发明优选的化合物。
这些化合物相应于下面的式Ⅰa和Ⅰb
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R8，R9，R10，R11，R12和R13具有同式Ⅰ的相同定义。
式Ⅰa化合物是特别优选的。
式Ⅰ化合物，尤其是式Ⅰa和Ⅰb化合物是本发明优选的化合物，其中R1，R3，R5，R7，R8，R10和R13可相同或不同，分别代表直链或支链C1-6烷氧基或-OSO-3，R2，R4，R6和R9可相同或不同，分别代表氢原子或直链或支链C1-6烷氧基，R11代表氢原子，直链或支链C1-6烷氧基或-OSO-3，条件是至少一个R2或R4或R6或R9或R11代表氢，R12代表羟基或-OSO-3。
优选的式Ⅰ化合物尤其指R2和R6代表氢原子，R3、R11和R12代表-OSO-3，R13代表直链或支链C1-6烷氧基的式Ⅰa和Ⅰb化合物。
更优选的式Ⅰ化合物指烷氧基是甲氧基的式Ⅰa和Ⅰb化合物。
本发明目的还涉及制备式Ⅰ化合物的方法，其特征在于将式Ⅱ化合物
其中，X′代表氯乙酰氧基，乙酰丙酰氧基(laevulinyloxy)，式A，式B1 P1，P2，P3和P5可相同或不同，分别代表保护基，如C1-6非环酰基，优选乙酰基，芳酰基，优选苯甲酰基，含2-7个碳原子的2-链烯基，优选烯丙基，或苄基，P4和P6可相同或不同，分别代表保护基，如C1-6烷基，优选甲基，或苄基，R1′，R5′和R8′可相同或不同，分别代表直链或支链C1-6烷氧基，C1-6非环酰氧基，优选乙酰氧基，芳酰氧基，优选苯甲酰氧基，或含2-7个碳原子的2-链烯氧基，优选烯丙氧基，R7′和R10′相同或不同，且与R1′的定义相同，或它们代表氯乙酰氧基或乙酰丙酰氧基(laevulinyloxy)，R2′，R6′和R9′可相同或不同，分别代表氢原子或与R1′定义相同，与式Ⅲ化合物反应 其中R7与式Ⅱ中P4定义相同，R8与式Ⅱ中P1定义相同，R4′和R11′可相同或不同，且与式Ⅱ中R2′定义相同，R3′，R12′和R13′可相同或不同，与式Ⅱ中R1′定义相同，得到式Ⅳ化合物
其中X′，P1，P2，P3，P4，R1′和R2′同式Ⅱ中定义，R7，R3′和R4′同式Ⅱ中定义，Y′为式D1 其中R8，R11′，R12′和R13′同式Ⅲ中定义，然后将其催化氢化，然后皂化，再硫酸化，或首先皂化，然后硫酸化，最后催化氢化，或首先催化氢化，然后硫酸化，最后皂化，由此得到式Ⅰ化合物。
上述方法是本发明的优选方法。但式Ⅰ化合物可通过糖化学的其它已知方法制备，具体讲，可通过将含在羟基或羧基(如有的话)上的保护基(如T.W.Greea，在有机化学保护基，Wiley，N.Y.1981中所述)的单糖与另一保护的单糖反应，形成二糖，然后二糖与另一保护的单糖反应得到三糖，然后由保护的三糖形成保护的四糖，再由四糖得到保护的五糖，然后再得到保护的六糖(分步法)。
保护的低聚糖(四-，五-和六糖)然后脱保护，适宜地硫酸化，或首先部分脱保护，然后硫酸化最后脱保护，从而得到式Ⅰ化合物。
这些方法在碳水化合物化学中是已知的，具体可见G.Jaurand et al. in Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，pp 897-900，by J.Bastan et al.in Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，pp.901-904，by J.Basten et al.in Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992)，2(No.9)，pp.905-910 and by M.Petitou and C.A.A.van Boeckel in "Chemical Synthesis of heparin fragments and;analogues"pp.203-210-Progress in the Chemistry of Organic Natural Products，Ed.Springer Verlag Vienna-N.Y.(1992).
式Ⅱ化合物(X′为式B1)可通过异头碳活化的单糖，如式Ⅴ化合物

其中P5，R5′和R7′同式Ⅴ中定义，和R1′，R2′，P2和P4同式Ⅱ中定义;
该方法可见T.Peters等人，in Can J.Chem，(1989)67，PP，491-496和G.H.Veeneman和J.H.Van Boom在Tetrahhedron Let-ters(1990)，31，PP275-278中所述。
用已知方法(R.Schmidt，Angew.Chem Int.Ed.England(1986)，25，(3)，PP，212-235)通过处理该化合物，尤其是通过乙酸水解，用苄胺处理，然后用三氯乙腈处理，得到X′为式B1的式Ⅱ化合物。
一些式Ⅶ化合物制备，尤其是R2′和R6′同R′定义，且不为氢原子的该化合物制备见，J.Barten等人，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，PP 905-910中所述。
式Ⅶ化合物也可通过将式Ⅵ化合物与另一活化的单糖，如式(Ⅴ′)化合物反应制备
其中P5，R5′，R6′和R7′同式Ⅴ中定义。
R6′与R1′定义相同且不为氢原子的式Ⅴ′化合物可见M.Petitou和C.A.A Van Boeckel在”Chemical Synthesis of heparinfragments and analogues"PP，203-210-progress in the Chemisry of Organic Natural Products，Ed.Springer Verlag Vienna-N.Y.(1992)中所述。
R6为氢原子的式Ⅴ化合物可由式Ⅷ化合物得到 其中B2代表苄基。
式Ⅷ化合物自3-脱氧-β-D-核糖-吡喃环已糖制备(根据T.V.Rajanbabu的方法，如J.Org.Chem、(1988)，53，PP.4522-4530所述)，方法是使其在碱性溶剂中受苯甲酰氯作用，由此得到的化合物与乙硫醇反应，得到化合物Ⅷ。
R2′表示氢原子的式Ⅵ化合物也可由化合物Ⅷ得到，使其与1，6∶2，3-二脱水-β-D-吡喃甘露糖反应，得到式Ⅸ化合物 其中B2表示苯甲酰基。
然后使该化合物受强碱作用，得到1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-β-D核糖-吡喃环已糖基)-β-D-吡喃甘露糖，即式Ⅹ化合物 自式Ⅹ化合物，采用常规方法(G.Janrand等人，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992)，2(No.9)，PP.897-900;J.Basfen等人，Bioorgamic and Medical Chemistry Letters (1992)，2(No.9)，PP.901-904;J.Basten等人，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，PP，905-910;M.Petitou 和C.A.A.van Boeckel"Chemical Synthesis of heparin fragments and an alogues"PP.203-210-Pregress in the Chemistry of organic Natural Products Ed. Springer Verlag Vienna-N.Y.(1992)]，得到式Ⅺ化合物
其中R1′、P1、P2和P4具有与式Ⅶ相同的含义，P9表示乙酰丙酰基或氯乙酰基。
然后使式Ⅺ化合物与肼反应，得到化合物Ⅵ，其中R2′表示氢原子。
化合物Ⅸ、Ⅹ和Ⅺ是新产物，也是本发明的一部分。
使用其异头碳活化的保护的葡萄糖衍生物取代式Ⅷ化合物作为初始物料，采用相似的方法可得到其中R2′具有R1′的含义、且不表示氢原子的式Ⅵ化合物。该化合物的制备方法由M.Petitou 和C.A.A van Boeckel 述于“Chemical Synthesis of heparin fragments and analogues”pp.203-210-Progress in the Chem-istry of Organic Natural Products，Ed. Springer Verlaag Vienna-N.Y.(1992)。上述文献的作者同时描述了在3位含有保护羟基的式Ⅸ化合物的相似制备方法。
X′表示式Cla的化合物 其中R5′、R6′、R8′、R9′、R10′、P5和P6具有与式C1相同的含义，可以通过使式Ⅵ的化合物与式Ⅻa的化合物反应 其中R5′、R6′、R8′、R9′、R10′、P5和P6具有与式C1相同的含义，得到式ⅩⅢa的化合物 其中R5′、R6′、R8′、R9′、R10′、P5和P6具有与式C1相同的含义，R1′、R2′、P2和P4具有与式Ⅱ相同的含义。
然后如化合物Ⅶ所示对式ⅩⅢa化合物进行处理，得到其中X′表示式Cla所示基团的式Ⅱ化合物。
R9′表示氢原子的式Ⅻa化合物由式ⅩⅣ化合物制备 其中R5′、R6′、R8′、R10′和P6具有与式C1相同的含义，方法是进行乙酸水解，脱保护，然后与三氯乙腈反应。式ⅩⅣ化合物可由式Ⅹ化合物根据关于式Ⅺ所述的方法获得。
R9′具有R1′的含义，且不是氢原子的式Ⅻa化合物由1，6∶2，3-二脱水-4-O-(β-D-吡喃葡糖基)-β-D-吡喃甘露糖衍生物通过上述方法获得。1，6∶2，3-二脱水-4-O-(β-D-吡喃葡糖基)-β-D-吡喃甘露糖衍生物是已知产物，见J.Basten等人在Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，PP.905-910中所述。
式Ⅱ化合物，其中Ⅹ′表示式C1b表示的基团 其中R5′、R6′、R、R9′、R10′、P5和P6具有与式C1相同的含义，可通过使式Ⅻb化合物 其中R5′、R6′、R8′、R9′、R10′、P5和P6具有与式C1相同的含义，与式Ⅵ化合物反应，进行制备 其中R1′、R2′、R5′、R6′、R8′、R9′、R10′、P1′、P2′、P4′、P5和P6具有与式ⅩⅢa相同的含义。
然后按式ⅩⅢa化合物的处理方法对式ⅩⅢb化合物进行处理，得到其中X′表示式C1b所示基团的式Ⅱ化合物。
R9′表示氢原子的式ⅩⅢb化合物式Ⅹ化合物制备。将该化合物转化为式ⅩⅤ化合物 方法如Ichikaiwa等人在Carbohydrate Research，(1988)，172，PP，37-64所述。
由上述化合物，采用已知的方法[见G.Jaurard等人在Bioor-ganic and Medicianl Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，PP. 897-900所述;J.Basten等人在Bioorganic and Mcdicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，PP.901-904所述;J.Ba sten等人在Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)pp.905-910所述;和Me. Petitou和C.A.A. vanBoeckel"Chemical Synthesis of heparin fragments and analogues”pp.203-210-Progress in the Chemistry of organic Natural Products， Ed.Springer Verlag Vienna-N.Y.(1992)]，得到式ⅩⅥ化合物 其中R5′、R;6＇、R8′、R10′和P6具有与式Ⅻb相同的含义。
然后对所述化合物进行乙酸水解，并用苄胺和三氯乙腈进行处理，得到式Ⅻb化合物。
R9′不是氢原子，但具有R1′含义的式Ⅻb化合物可用相同的方法制备。
使获得R5′、R6′、R8′、R10′、P5和P6具有与式C1相同含义，R9′相同含义但水表示氢原子的式Ⅻb成为可能的各种中间体是已知产物，它们的制备方法见G.Jaurand等人在Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，PP，897-900的描述。
X′表示式A所示的基团，R2′表示氢原子的式Ⅱ化合物可由式Ⅹ化合物获得，方法是先将其转化为式ⅩⅦ化合物
式ⅩⅦ化合物或是用苄醇钠处理然后酰化，或是用芳烷基卤、较好是苄基溴，或2-链烯基卤、较好是烯丙基溴处理，然后用苄醇钠处理再酰化，得到式ⅩⅧ化合物 其中R1′、P1和P2具有与式Ⅱ相同的含义。
式ⅩⅧ化合物在酸介质中处理，得到式ⅩⅨ化合物 其中R1′、P1和P2具有与式Ⅱ相同的含义。
式ⅩⅨ化合物在6′位进行选择性甲硅烷基化，用乙酰丙酸酐处理，根据Jones条件进行氧化和用烷基卤酯化，脱除乙酰丙酰基，在酸性或中性介质中进行烷基化，得到X′表示式A基团和R2′表示氢原子的式Ⅱ化合物。
用相同方法，可以得到X′表示式A基团和R2′具有与R1′相同含义的式Ⅱ化合物。用于制备所述化合物的中间体在文献中有述，特别是见J.Basten等人在Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，PP.905-910，和C.A.A.van Boeckel等人在J.Carbohydrate Chem.(1985)，4.P，293中的描述。
R4′表示氢原子的式Ⅲ化合物或由式ⅩⅩ化合物制备 其中R3′、R11′、P7和P8具有与式Ⅲ相同的含义，P10表示乙酸丙酰基或氯乙酰基。
使式ⅩⅩ化合物乙酸水解，然后用苄胺处理，与Vilsmeier试剂反应，在碳酸银存在下与醇反应，再通过肼作用，得到所期式Ⅲ(R4′＝H)化合物。
R4′具有与R1′相同含义的式Ⅲ化合物为已知化合物，其制备方法见J.Basten等人在Bioorganic and Medicinal Chemistry Let-ters(1992)，2(No.9)，PP.905-910中的描述。
上述方法使得本发明的化合物可以以盐的形式制取。为得到相应的酸，可以令呈盐形式的本发明的化合物与呈酸形式阳离子交换树脂接触。
然后可以用碱中和呈盐形式的本发明的化合物，得到所需的盐。
为制备式Ⅰ化合物盐，可以使用任何能获得药物上可接受的盐的无机或有机碱。
有利的是使用氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或氢氧化镁。式Ⅰ化合物的钠盐和钙盐是优选的盐。
作为本发明主题的式Ⅰ化合物具有有益的药理和生化性能，它们特别具有高的抗Ⅹa因子活性和高的AT Ⅲ亲和力。
如前所述，在凝血级联中，Ⅹa因子使凝血酶原活化为凝血酶，导致可溶性血纤维蛋白原蛋白水解，释出不溶的血纤维蛋白，血纤维蛋白是血液凝块的主要组成部分。因此，对Ⅹa因子的抑制构成了有利于获得抗凝血和抗血栓活性的方式。
本发明产物抗因子Ⅹa活性根据Teien A.N.t Lie M.在Thtombosis Research(1977)，10，PP.399-410中所述的方法于PH8.4下进行了评价，结果证明本发明的产物具有与已知合成类肝素生物碱(heparinoids)相同或大于其活性的抗Ⅹa活性。
式Ⅰ化合物ATⅢ的亲和力在D.Atha等人在Biochemistry(1987)，26，PP.6454-6461中所述的条件下通过分光荧光法进行了测定。结果显示本发明的化合物具有极高的AT Ⅲ亲和力。
此外，式Ⅰ产物的综合抗血栓活性根据J.Reyers等人在Thronbosis Research(1980)，18.PP.669-674中所述的方法，通过静脉郁滞和用组织促凝血酶原激酶诱发的方式在大鼠中评价。本发明化合物的ED50至少与另一受试产物，即已知的合成类肝素处于同一等级或低于该另一受试产物。因此，本发明的化合物显示出特别有利的特异性和抗凝血和抗血栓活性。
用本发明的产物进行的各种药物动力学研究所获结果表明其吸收性能好，半衰期长。这就使得在医疗使用中可以设计日服用一次。
以上研究还表明作为本发明主题的式Ⅰ产物经消化道吸收，服用量是人体治疗可接受的。因此本发明的化合物适用于制备经非肠道用药和口服用药的药物组合物。
式Ⅰ化合物毒性低，其毒性完全适应于作为医药产物。
本发明的化合物还可用于治疗平滑肌细胞增生，因为已表明该化合物具有对平滑肌细胞增生的抑制作用，这种抑制作用显著高于肝素。
本发明的化合物也作用于血管生成，可用于治疗某些由逆转病毒导致的感染。
此外，本发明的化合物还具有对神经纤维的保护和再生作用。
本发明的化合物极其稳定，因此特别适用于作药物产品的活性成分。
本发明延至含有作为活性成分的式Ⅰ化合物或其药物上可接受的盐以及一种或多种惰性和适宜的赋形剂的药物组合物。
本发明的药物组合物可是各种不同的形式，例如注射或口服液，糖衣片，片剂或硬胶囊。注射液是优选的药物剂型。
药物组合物含有作为活性成分的至少一种式Ⅰ化合物或其盐，所述组合物特别适用于预防和治疗血管壁疾病如动脉粥样硬化和动脉硬化，以及例如外科手术后常见的血液高凝固态，肿瘤的发生和由细菌、病毒或酶活化体诱发的凝血失调。
根据病人的年龄、体重和健康状况，疾病的性质和严重程度以及给药途径的不同，剂量的范围可以很宽，剂量包括肌内或皮下一次或多次的每日用量为0.5mg-1000mg，较好为1-100mg，例如约20mg，或经口服用药的日剂量为200-1000mg。
上述剂量范围可以根据观测结果和预先进行的血液分析针对每个病人进行调节。皮下用药是优选的给药方式。
下面用实施例描述本发明。
制备Ⅰ乙基2，4，6-三-O-苯甲酰基-3-脱氧-1-硫代-D-核糖-吡喃已糖甘(式Ⅷ化合物)步骤A1，2，4，6-四-O-苯甲酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖在Dowex酸性树脂存在下把溶解在水和乙醇混合物中的66mmol3-脱氧1，2∶5，6-二-O-异亚丙基-D-核糖-呋喃已糖于60℃加热3小时，得到3-脱氧-D-核糖-吡喃已糖。蒸干，然后在吡啶存在下通过蒸发干燥。
把由此得到的糖浆溶解在150ml吡啶中并加入356mmol苯甲酰氯。在室温下搅拌3小时。蒸干，用二氯甲烷稀释，用水洗，然后在乙酸乙酯中结晶，得到7.66g1，2，4，6-四-O-苯甲酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖。
产率30%熔点164℃[α]D20＝1°(在CH2Cl2中C＝1.33)步骤B于70℃在氩气下把在上阶段获得的4.51mmol化合物溶解在无水甲苯中，然后加9.03mmol乙硫醇。
加4.51mmol溶在乙醚中的三氟化硼，搅拌3小时。用水洗后蒸干。然后在硅胶柱上纯化以糖浆形式获得的残余物。因此得到1.64g乙基2，4，6-三-O-苯甲酰基-3-脱氧-1-硫代-D-核糖-吡喃已糖苷的α和β端基异构体混合物。
此化合物不需进一步纯化便可应用。
产率70%制备Ⅱ乙基2，4，6-三O-苄基-3-脱氧-1-硫代-D-核糖-吡喃已糖苷(式V化合物)把5.82mmol在制备Ⅰ中得到的化合物溶解在甲醇和二氯甲烷(1∶1V/V)混合物中。加入0.90mmol甲醇钠。于20℃搅拌混合物3小时，然后用Dowex酸性树脂(AG 50 WX2)中和。过滤，蒸干。将残余物溶在18ml无水二甲基甲酰胺中，然后于0℃加入19.7mmol氢化钠和17.0mmol苯甲酰溴。搅拌2小时，然后加入34.1mmol甲醇。
蒸发反应溶剂，然后在硅胶柱上纯化，得到2.12g呈异头异构体混合物形式的目的产品。
产率70%制备Ⅲ1，6∶2，3-二无水-4-O-(2，4，6-三-O-苯甲酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖(式Ⅸ的化合物)根据G.H.Veeneman和J.H.Van Boom d Tetrahedron Letters(1990)，31，275-278页中描述的方法，于-20℃把8.53mmol制备I的产品和7.25mmol1，62，3-脱水-β-D-吡喃甘露糖溶解在分子筛中的220ml甲苯和21.3mmolN-碘代琥珀酰亚胺中，然后逐滴加入1.7mmol0.04M三氟甲磺酸溶液。搅拌反应2.5小时，过滤，在硅胶柱上纯化得到3.07gl，6∶2，3-二脱水-4-O-(2，4，6-三-O-苯甲酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖。
在乙酸乙酯和已烷(90∶10V/V)混合物中结晶。
产率65%熔点153℃[α]D20＝-12°(在CH2Cl中C＝1.10)制备Ⅳ1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基)β-D-吡喃甘露糖(式Ⅹ的化合物)用甲醇钠把1，6∶2，3-二脱水-4-O-(2，4，6-三-O-苯甲酰-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃已糖进行脱苯甲酰基化，得到1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氢-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖。
产率95%[α]D20＝-46°(在CH3OH中C＝1.02)制备Ⅴ3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基醛酸苄基酯)-β-D-吡喃葡萄糖(式Ⅵ的化合物)
从制备Ⅳ中描述的化合物1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基)β-D-吡喃甘露糖用类似于已被M.Petitou和C.A.A.Van Boeckel在“Chemical Synthesis of heparin fragment and analogues”203-210页-Progress in the chemistry of Organic Natural Products，Ed.Springer Verlag Vienna-N.Y.(1992)中描述的方法，且尤其是1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-4，6-O-异亚丙基-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖的合成，与苄醇钠反应，乙酰化，用乙酰除去异亚丙基，硅烷化，用乙酰丙酸酐反应，按Jones′条件氧化，用苄基溴酯化，然后用肼处理，制备此化合物。
不同步骤叙述如下步骤A 在氩气氛下向1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱-氧-β-D-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖在二甲基甲酰胺(5mmol在35ml中)的溶液中逐滴加入1.5mmol对甲苯磺酸(也可以使用樟脑磺酸)和250mmol2，2-二甲氧基丙烷。搅拌2.5小时，然后加1.8mmol三乙胺。用二氯甲烷稀释。用水洗，在无水硫酸钠上干燥，过滤，蒸干，得到1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-4，6-O-异亚丙基-β-D-核糖-吡喃已基)-β-D-吡喃甘露糖。在下步中不需纯化可使用此化合物。
产率81%步骤B 把25mmol苄醇钠(在苄基醇中的1M溶液)加到5.0mmol在步骤A中得到的化合物中。加热到110℃，保持30分钟。冷却，用Dowex醇性树脂(AG 50WX2)中和，过滤，通过减压蒸馏除去苄基醇。用甲苯和丙酮(3∶1V/V)的混合物作洗脱剂在硅胶柱上纯化残余物。以糖浆形式得到目的产品。
产率81%步骤C
把4.90mmol在步骤B中得到的化合物溶解在22ml二氯甲烷中，冷却到0℃，加入19.6mmol乙酸酐，1.96mmol4-二甲基氨基吡啶和9.81mmol三乙胺。在室温下搅拌45分钟。加入甲醇，再搅拌30分钟。然后用二氯甲烷稀释反应介质，用KHSO4水溶液洗，然后用水洗，在无水硫酸钠上干燥，蒸干，得到糖浆形式的目的产品。然后用甲苯和丙酮(9∶1V/V)混合物在硅胶柱上纯化。
产率85%步骤D 把4.11mmol前一步骤得到的化合物溶解在2.2ml1，1-二氯乙烷中，然后加入123ml乙酸水溶液(70%)。于50℃搅拌35分钟。浓缩，加甲苯，蒸发，得到糖浆形式的目的产品。用环已烷和丙酮(1∶1V/V)的混合物作洗脱剂在硅胶柱上纯化。
产率90%步骤E
把3.61mmol在步骤D中得到的化合物溶解在二氯甲烷中，加入1.42mmol4-二甲氨基吡啶，10.82mmol三乙胺和5.41mmol叔丁基二甲苯硅烷基氯。
在20℃搅拌约1小时，然后加入43ml无水二氯甲烷和10.8mmol乙酰丙酸酐。搅拌2小时，加150ml二氯甲烷，先用KHSO4水溶液洗，再用NaHSO4水溶液洗，在无水硫酸钠上干燥，过滤，蒸发，直到得到棕色糖浆为止。
在下一步骤用此产品。
步骤F 把2.51g在前一步骤得到的糖浆溶于26ml丙酮中，冷至0℃，然后加入9.56mmol三氧化铬和4.2ml3.5M硫酸溶液。
在室温下搅拌4小时。然后加入250ml二氯甲烷，用水洗，在无水硫酸钠上干燥，过滤，蒸发，直到得到棕色糖浆。
步骤G3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酰丙酰基(laevulinyl)-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡萄糖(式Ⅺ的化合物)的制备 把2.15g在前一步骤得到的产品溶解在22ml无水二甲基甲酰胺中，在氩气下加入7.22mmol碳酸氢钾 和10.83mmol苄基溴。搅拌3小时，然后加入0.5ml甲醇，在室温下继续搅拌1小时。
用乙酸乙酯稀释反应介质，用水洗，在无水硫酸钠上干燥，过滤，蒸发，直到得到棕色糖浆。步骤E，F，G的总产率为81%。
步骤H
把3.6mmol在步骤G中得到的化合物3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酸丙酰基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄基酯)-β-D-吡喃葡萄糖冷至0℃，加入18.1mmol肼[在吡啶和乙酸(3∶2V/V)混合物中的1M溶液]。在室温下搅拌混合物15分钟。浓缩，加入二氯甲烷，用KHSO4溶液洗，然后用水洗，此后用NaHSO4溶液洗，再用水洗，在硫酸钠上干燥，过滤，蒸干，得到棕色糖浆。用环已烷和丙酮(2∶1V/V)混合物作为溶剂在硅胶柱上纯化此3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖吡喃已基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡萄糖。
产率86%[α]D20＝-78°(在CH2Cl2中C＝0.7)制备ⅥO-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酰丙酰基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃葡萄糖基)三氯乙酸亚氨酯(式Ⅻα的化合物)。
从制备Ⅴ中描述的化合物3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酰丙酰基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡萄糖按照已知方法且尤其是乙酰解，异头脱保护并形成亚氨酸酯以制备此化合物。不同步骤如下。
步骤A 向1.02mmol在制备Ⅴ中得到的产品中加入102mmol乙酸酐和10.2mmol三氟乙酰胺。在氩气下搅拌混合物2小时。然后蒸发直到棕色糖浆，并用环已烷和乙酸乙酯(2∶3V/V)作洗脱剂在硅脱柱上纯化。
步骤B
把1.52mmol在前一步骤得到的化合物溶解在二氯甲烷中，加入57.9mmol苯胺。在室温下搅拌4小时，然后让其在-20℃过夜。加入乙酸乙酯，用1N盐酸水溶液洗。用二氯甲烷萃取，在无水硫酸钠上干燥，蒸发，直到得到棕色糖浆。用甲苯和丙酮(5∶1V/V的混合物作为洗脱剂在硅胶柱上纯化。
步骤C 使用0.246mmol在前一步骤得到的二糖，使其溶解在二氯甲烷中。在氩气下加入0.39mmol碳酸钾和1.23mmol三氯乙腈。搅拌16小时，过滤，蒸干。得到呈异头异构体混合物形式的O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酰丙酰基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1-4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃葡萄糖基)三氯乙酰亚胺酯。
产率62%(总共)制备Ⅶ1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖(式ⅩⅤ的化合物一葡萄糖和艾杜糖的混合物)步骤A1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-6-艾杜-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D吡喃甘露糖向1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖(22.81mmol)在400ml二氯甲烷和乙腈的混合物的溶液中加入68.43mmol三苯基磷，68.43mmol咪唑和29.65mmol碘。在70℃搅拌4小时。蒸发溶液，用二氯甲烷和丙酮(10∶1V/V)的混合物作溶剂在硅胶柱上纯化由此得到的糖浆。因此得到1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-6-艾杜-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖。
产率72%步骤B把23.4mmol 1，6∶2，3-三脱水-4-O-(3-脱氧-6-艾杜-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖溶解在150ml甲醇中，加入42mmol溶在甲醇中(1M)的甲醇钠。于80℃加热9小时，冷却，在Sephadex LH-20柱上纯化，用二氯甲烷和甲醇(1∶1V/V)混合物洗脱。因此得到1，6∶2，3-三脱水-4-O-(3-脱氧-5，6-挂-亚甲基-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖。将13.3mmol此化合物溶解在100ml四氢呋喃中，于20℃滴加54.4mmol溶在四氢呋喃中的二硼烷。搅拌2小时，然后加65.28mmol乙醇。搅拌1小时，然后加24ml3M氢氧化钠溶液和24ml 30%过氧化氢溶液。加热到50℃，在Dowex酸性树脂(AG 50WX4)上中和，蒸干，得到葡萄和艾杜双糖形式的1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-d-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖(1∶6.25)。
制备Ⅷ3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酰丙酰基-α-L-来苏-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡萄糖(式ⅩⅥ化合物)从制备Ⅶ中描述的化合物，使用标准方法[Jaurand等(Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9).897-900页);J.Basten等(Bioorganic and Medicinal chemistry Letters(1992)，2(No.9)901-904页);J.Basten等(Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters(1992)，2(No.9)，905-910页)]且尤其是两种相应4′，6′-异亚丙基的形成，葡萄和艾杜异构体在硅胶柱上的纯化与分离，与苄醇钠反应，乙酰化，除去异亚丙基，选择性硅烷化，与乙酸丙酸酐反应，按照Jone｀s条件氧化及用苄基溴酯化来制备3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酰丙酰基-α-L-来苏-吡喃乙糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡萄糖。
产率45%不同步骤如下步骤A 把3.6mmol 1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖溶解在25ml二甲基甲酰胺中，然后加入21.64mmol二甲氧基丙烷和3.96mmol对-甲苯磺酸(也可以使用樟脑磺酸)。搅拌1小时30分钟，加入5.94mmol三乙胺。浓缩，直到得到糖浆，用甲苯和乙酸乙酯(2∶3)的混合物作洗剂在硅胶柱上纯化。
产率70%步骤B
向6.8mmol在步骤A中得到的化合物中加入29.7mmol溶解在苄醇中(1M)的苄醇钠。于110℃加热并同时搅拌1小时。然后用200ml二氯甲烷稀释，用Dowex酸性树脂(AG 50 WX4)中和，过滤，减压蒸发，得到棕色糖浆。用二氯甲烷和丙酮(10∶1V/V)的混合物作洗脱剂在硅胶柱上纯化。
产率85%步骤C 把5.76mmol在步骤B中得到的化合物溶解在二氯甲烷中，然后加入3.92mmol4-二甲基氨基吡啶，72.27mmol三乙胺和65.7mmol乙酸酐。在室温下搅拌2小时30分钟，然后加100ml二氯甲烷，用10%KHSO4水溶液洗，在无水硫酸钠上干燥，然后过滤。
用二氯甲烷和丙酮(10∶1V/V)的混合物作洗脱剂在硅胶柱上浓缩并纯化由此获得的糖浆。D20(在CH2Cl2中C＝1.37)步骤D
向5.74mmol在步骤C中得到的化合物中加入25ml70%乙酸水溶液。于80℃加热6小时，在甲苯存在下通过蒸发浓缩得到黄色粉末。
步骤E 用在前步骤得到的产品，按制备Ⅴ中步骤E，F和G描述的方法进行，得到3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酰丙基-d-L-来苏-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡萄糖。
总产率59%制备Ⅸ甲基3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-d-L-来苏-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡萄糖苷(式Ⅲ的化合物)把在制备Ⅷ中得到的二糖进行乙酰解，用苯胺处理，与Vilsmeier＇s试剂反应，然后在碳酸银存在下与甲醇反应。然后用肼处理所得的化合物，得到甲基3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-d-L-来苏-吡喃已糖基糖醛酸苄基酯)-β-D-吡喃葡萄糖苷。不同步骤下面给出步骤A 把102mmol乙酸酐和10.2mmol三氯乙酸加到1.02mmol在制备Ⅷ中得到的二糖中，然后在50℃在氩气下加热2小时。然后蒸发直到得到棕色糖浆，按在制备Ⅵ中步骤A描述的方法纯化，得到目的产物。
产率92%步骤B 把1.52mmol在步骤A中得到的化合物溶解在乙醚中，然后加入57.9mmol苄胺。按在制备Ⅵ的步骤B中描述进行，得到目的产品。
产率79%步骤C 通过于0℃把2.15mmol溴和2.15mmol三苯基磷混合在5ml二甲基酰胺中制备Vilsmeier＇s，试剂。在氩气下滤出白色沉淀，加入0.269mmol在步骤B中得到的。溶解在15ml无水二氯甲烷中的产品，同时保持相同的温度。在室温下搅拌反应混合物2天。然后用二氯甲烷稀释，用水洗，冷至0℃直到达到PH6，在无水硫酸钠上干燥，浓缩直到得到糖浆。用二氯甲烷和乙醚(5∶1V/V)混合物在硅胶柱上纯化。
产率77%步骤D 于0℃在氩气氛下在3ml二氯甲烷中混合0.46ml甲醇，0.34mmol碳酸银和150mg磷碳钙1小时。把0.227mmol在步骤C中得到的化合物溶解在8ml二氯甲烷中。逐滴将此溶液加到反应混合物中，于20℃搅拌抖20小时。避光，然后用二氯甲烷稀释，过滤，浓缩，得到糖浆形式的甲基3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酰丙酰基-α-L-来苏-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-葡萄糖苷。用二氯甲烷和乙醚(5∶1V/V)的混合物作洗脱剂在硅胶柱上纯化。
产率75%[α]20D＝27°(在CH2Cl2中C＝1.18)步骤E 把0.276mmol在前步骤得到的产品溶解在2ml冷至0℃的吡啶中，加入1.38ml在吡啶和乙酸(3∶2V/V)混合物中的1M肼水合物溶液。然后浓缩反应混合物，加入二氯甲烷，用KHSO4水溶液洗，在无水硫酸钠上干燥，过滤，浓缩直到得到糖浆。用二氯甲烷和乙醚(3∶1V/V)混合物在硅胶柱上纯化。
产率87%[α]20D＝+10°(在CH2Cl2中C＝0.99)制备XO-(2，4，6-三-O-苄基-3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1-4)-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1-4)-3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖(式Ⅶ的化合物)把2.03mmol乙基2，4，6-三-O-苄基-3-脱氧-1-硫代-D-核糖-吡喃已糖苷(制备Ⅱ)和1.69mmol3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酸基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡萄糖(制备Ⅴ)溶解在二氯甲烷中，于20℃加入一些分子筛，然后加5.07mmol三氟甲磺酸银和1.52mmol溴。搅拌45分钟，然后过滤反应混合物，用水洗;蒸干。在硅胶柱上纯化得到目的产品。
产率35%制备ⅪO-(6-O-乙酰基-2，4-二-O-苄基-3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃己糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖基三氟乙酸亚胺酯(式Ⅱ化合物)。
将0.51mmol在制备Ⅹ中得到的，溶解在三氟乙酸和乙酸酐的混合物中的化合物乙酰解，然后用乙醚中苄基按处理，此后在碳酸钾存在下用二氯甲烷中的三氯乙腈处理，得到目的产物。
产率50%实施例1甲基O-(3-脱氧)-2，4，6-三-O-磺基-α-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-D-核糖-吡喃己糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-α-L-来苏糖-已糖吡喃巳糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷十三钠盐步骤A甲基O-(6-O-乙酰基-2，4-O-苄基-3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-(3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-O-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-β-D-吡喃葡糖苷。
在3.2ml二氯甲烷中，溶解0.121mmol制备Ⅺ中描述的化合物和0.093mmol制备Ⅸ中描述的化合物。在分子筛存在下、在氩气中，冷却至-20℃，并加入0.470ml三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯在二氯甲烷中的溶液。在-20℃搅拌1小时，然后过滤反应混合物，用水洗涤，蒸发，并使用二氯丙烷与甲醇的混合溶剂(1∶1V/V)在Sephadex LH-20分离柱上提纯，然后使用环已烷与乙酸乙酯的混合溶剂(3V/2V)在硅胶柱上提纯，得到产物。
产率62%步骤B在二氯甲烷(0.43ml)与甲醇(1.7ml)的混合物中溶解0.052mmol步骤A所得产物。然后，加入85mg10%钯/活性炭，在氢气微压下、20℃放4小时。过滤并蒸发干燥，得到甲基O-(6-O-乙酰基-3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖吡喃已糖基糖醛酸)-(1→4)-O-(3，6-二-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2 () 乙酰基 3 脱氧 α 1. 来苏糖 吡喃已糖基糖醛酸)(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-β-D-吡喃萄糖苷。将该化合物溶于0.96ml乙醇中冷却至0℃，然后加入0.30ml5M氢氧化钠。在0℃搅拌5小时并用水作洗脱剂在Sephadex G25柱上提纯。蒸发干燥得到甲基O-(3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸)-(1→4)-O-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-α-L-来苏糖-吡喃己糖基糖醛酸)-(1→4)-β-D-吡喃葡糖苷。
将该化合物溶于5ml二甲基甲酰胺中，萧发至干燥，然后在氩气中重新溶于2.6ml无水二甲基甲酰胺中。加入302mg三氧化硫/三乙胺复合物，并在55℃搅拌20小时。冷却反应混合物，加入溶于水中的491mg碳酸氢钠，并搅拌3小时。
以水作溶剂在Sephadex G-25柱上提纯，然后冷冻干燥，得到甲基O-(3-脱氧-2，4，6-三-O-磺基-α-D-核糖-吡喃己糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-D-核糖吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷十三钠盐。
产率65%[α]D20＝+25°(C＝0.52，在水中)-批料1[α]D20＝33°(C＝0.64，在水中)-批料2核磁共振谱(500MHz，溶剂为D2O)H1∶4.78ppm J1-2∶7.3Hz;H＇1∶5.22ppm，J1＇-2＇∶1.8Hz;H″∶5.26ppm，J1″-2″∶3.5Hz;H″1∶4.78ppm，J1＂＇-2＂＇∶5.4Hz;H＂＂∶5.16ppm，J1＂＂-2＂＂∶3.3Hz实施例2甲基-O-(3-脱氧-2，4，6-三-O-磺基-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-D-核糖吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-甲基-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷十二钠盐。
该化合物根据实施例Ⅰ描述的方法，从O-(6-O-乙酸基-2，4-二-O-苄基-3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃葡糖基三氯乙酰胺和甲基3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-4-O-(2-O-甲基-3-脱氧-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡糖苷制备。根据类似于制备Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ的方法，从1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖制备甲基3，6-二-O-乙酸基-2-O-苄基-4-O-(2-O-甲基-3-脱氧-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡糖苷。〓D+25°(C＝0.48，在水中)H-NMR(500MHz，溶液为D2O)H1∶4.82ppm J1-2∶4.2Hz;H＇1∶5.08ppm，J1＇-2＇∶1.0Hz;H＂1∶5.27ppm，J1＂-2＂∶3.7Hz;H＂＇1∶4.76ppm，J1＂＇-2＂＇∶7.7Hz;H＂＂ ∶5.15ppm，J＂＂-2＂＂∶3.5Hz实施例3甲基-O-(3-脱氧-2，4-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酯根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)--2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷十一钠盐。
根据实施例1描述的方法，该经合物从甲基O-(6-O-苄基-2，4-二-O-甲基3-脱氧-α-核糖-吡喃已糖)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃葡糖基三氯乙酸胺和甲基3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡糖苷制备。根据在制备X中描述的方法，从乙基6-O-苄基-2，4-二-O-甲基-3-脱氧-1-硫代-α-D-核糖-吡喃已糖苷和乙基3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡糖苷制备)-(6-O-苄基-2，4-二-O-甲基-3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃已糖基三氯乙酰胺。〓D+24°(C＝0.6，在水中)H-NMR(500MHz，溶液为D2;O)H1∶4.77ppm J1-2∶5.0Hz;H＇1∶5.22ppm，J1＇-2＇∶2.2Hz;H＂1∶5.24ppm，J1＂-2＂∶3.7Hz;H＂＇1∶4.76ppm，J1＂＇-2＂＇∶7.5Hz;H＂＂∶5.10ppm，J1＂＂-2＂＂∶3.6Hz实施例4甲基-O-(3-脱氧-4-二-O-甲基-2，6-二-O-磺基-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-O-磺基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酯根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷十二钠盐。
根据实施例1描述的方法，该化合物从制备Ⅸ所述化合物与O-(2，6-O-苄基-4--O-甲基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖)-(1→4)-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃己糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3∶6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃葡糖基三氯乙酸胺制备。后者之三糖衍生物根据制备Ⅹ和Ⅺ描述的方法从乙基2，6-二-O-苄基-4-O-甲基-3-脱氧-1-硫代-D-核糖-吡喃已糖苷和制备Ⅴ中描述的化合物制备。D20＝+22°(C＝0.54，在水中)H＇-NMR(500MHz，溶液为D2O)H1∶4.78ppm J1-2∶5.1Hz; H＇1∶5.22ppm，J1＇-2＇∶2.6Hz;H＂1∶5.27ppm，J1＂-2＂∶3.9Hz;H＂＇1∶4.75ppm，J1＂′-2＂＇∶7.9Hz;H＂＂∶5.11ppm，J1＂＂-2＂＂∶3.5Hz实施例5甲基O-(3-脱氧-2，4，6-三-O-磺基-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-甲基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-甲基-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷十一钠盐。
根据实施例1描述的方法，该化合物从甲基3，6-二-O-乙酸基-2-O-苄基-4-O-(2-O-甲基-3-脱氧-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯-β-D-吡喃葡糖苷和O-(6-O-乙酸基-2，4-二-O-苄基-3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(2-O-甲基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃葡糖基三氟乙酰胺制备。根据制备Ⅹ和Ⅺ中描述的方法，从3-O-乙酰基-1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-甲基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡糖和制备Ⅱ中描述的化合物制备用作原料的三糖。D20＝+20°(C＝0.39，D在水中)H′-NMR(500MHz，溶液为D2O)H14.83 ppm J1-23.0 Hz;H′15.11 ppm，J1′-2′2.0 Hz;H″15.31 ppm，J1″-2″3.3 Hz;H″′14.68 ppm，J1″′-2″′7.7 Hz;H″″5.18 ppm，J1″″-2″″3.2 Hz实施例6甲基O-(3-脱氧-2，4，6-三-O-磺基-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-甲基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-α-L-来苏糖-吡喃己糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷十二钠盐。
根据实施例1描述的方法，该化合物从O-(6-O-乙酰基-2，4，-二-O-苄基-3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖)-(1→4)-O-(2-O-甲基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃葡糖基三氯乙酸胺和制备Ⅸ中描述的化合物制备。D20＝+30°(C＝0.40，在水中)H′-NMR(500MHz，溶液为D2O)H1∶4.77ppm J1-2∶5.0Hz;H＇1∶5.20ppm，J1＇-2＇∶2.5Hz;H＂1∶5.27ppm，J1＂-2＂∶4.0Hz;H＂＇14.67ppm，J1＂＇-2＂＇∶8.0Hz;H＂＂∶5.14ppm，J1＂＂-2＂＂∶3.5Hz实施例7甲基O-(3-脱氧-2，4，6-三-O-磺基-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-甲基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O-甲基-2-O-磺基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷十二钠盐。
根据实施例1的描述的方法，该化合物从O-(6-O-乙酰基-2，4-二-O-苄基-3-脱氧-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(2-O-甲基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃葡糖基三氯乙酰胺和甲基2，3，6-三-O-苄基-4-O-(2-O-苄基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸苄酯)-α-D-吡喃葡糖苷制备。后一化合物根据M.Petitou和C.A.A.Van Boechel在“Chemical synthesis of heparin fragments and analogues”PP.203-210-Progress in the Chemistry of Organic Natural Products Ed.Springer Verlag Vienna，N.Y.1992上描述的方法制备。D20＝+46°(C＝0.58，在水中)H′-NMR谱(500MHz，溶液为D2O)H1∶5.10ppm J1-2∶3.0Hz;H＇1∶5.10ppm，J1＇-2＇∶5.0Hz;H＂1∶5.48ppm，J1＂-2＂∶3.60Hz;H＂1∶4.68ppm， J1＂＇-2＂＇∶7.5Hz;H＂＂∶5.16ppm，J1＂-2＂＂∶3.6Hz实施例8甲基O-(3-脱氧-2，4-二-O-磺基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃已糖基糖醛酯根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷十六钠盐。
该化合物从O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-4-O-乙酰丙酰基-β--D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-(1→4)-3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-D-吡喃葡糖基)三氯乙酰胺(制备Ⅵ)和3-O-乙酰基1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡糖(制备Ⅴ)制备。将这两种化合物在实施例1步骤A中所述条件下反应，得到下列化合物 产率64%根据制备Ⅵ、步骤A描述的方法，将所得产物进行乙酰解，然后在制备Ⅵ步骤B描述的条件下用苄胺作用，以释放异头羟基。根据制备Ⅵ、步骤C描述的方法，然后在碳酸钾存在下，与三氯乙腈反应，制得相应的亚氨酸酯。
将后一产物与3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-4-O-(2-O-乙酰基-3-脱氧-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸苄酯)-β-D-吡喃葡糖苷(制备Ⅸ)反应，得到甲基O-(3-脱氧-2，4-二-O-磺基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，4，6-三-O-磺基-α-D-哟喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，4，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷十六钠盐。
′H-NMR谱(500MHz，溶液为D2O)。
H1∶4.78ppm J1-2∶7.0Hz;H＇1∶5.22ppm，J1＂＇-2＇∶1.9Hz; H＂1∶5.25ppm，J1＂-2＂∶3.50Hz;H＂1∶4.79ppm，J1＂＇-2＂＇∶5.6Hz;H＂＂∶5.31ppm，J1-2∶3.50Hz;H＂＂＇∶4.80ppm，J1＂＂＇-2＂＂＇∶5.9Hz
权利要求
1.式Ⅰ化合物及其药物可用盐及相应的酸 式中-X表示-OSO3-，式A表示基团R-O (A)式B表示基团 或式C表示的基团 R表示具1至6个碳原子的直链或支链烷基，R1、R3、R5、R7、R8、R10、R12和R13可以相同或不同，分别表示羟基、具1至6个碳原子的直链或支链烷氧基或-SO3-，-R2、R4、R6、R9和R11可以相同或不同，分别表示氢原子，羟基，具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基或-OS3O-，前提条件是，至少存在一个R2或R4或R6或R9或R11取代基表示氢原子。
2.根据权利要求1的式Ⅰ化合物，其对应于式Ⅰa 其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R11、R12和R13的定义同权利要求1的式Ⅰ。
3.根据权利要求1的式Ⅰ化合物，其对应于式Ⅰb 其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、R10、R11和R13的定义同权利要求的式Ⅰ。
4.根据权利要求1的式Ⅰ化合物，其中，-R1、R3、R5、R7、R8、R10和R13可以相同或不同，分别表示具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基或-OSO-3，-R2、R4、R6和R9可以相同或不同，分别表示氢原子或具有1至6个碳原子直链或支链烷氧基，R11表示氢原子、具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基或-OSO-3，其前提条件是，至少存在一个R2或R4或R6或R9或R11取代基表示氢原子，以及-R12表示羟基或-OSO-3。
5.根据权利要求1的式Ⅰ化合物，其中，R2表示氢原子。
6.根据权利要求1的式Ⅰ化合物，其中，-R2和R6表示氢原子，-R3、R11和R12表示-OSO-3和-R13表示具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基。
7.权利要求1的式Ⅰ所示化合物为甲基O-(3-脱氧-2，4，6-三-O-磺基-α-D-核糖-吡喃己糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷及其与碱的可药用盐。
8.权利要求1的式Ⅰ所示化合物为甲基O-(3-脱氧-2，4，-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷及其与碱的可药用盐。
9.权利要求1的式Ⅰ所示化合物为甲基O-(3-脱氧-4-O-甲基-2，6-二-O-磺基-α-D-核糖-吡喃已糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-β-D-核糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-脱氧-2-O-磺基-α-L-来苏糖-吡喃已糖基糖醛酸根)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡糖苷及其与碱的可药用盐。
10.权利要求1的式Ⅰ化合物的制备方法，其特征在于使式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物反应来制备式Ⅳ化合物， 式中-X′球表示氯代乙酰氧基、乙酰丙酰氧基、权利要求1的式Ⅰ中式A所示基团，式B1所示基团 P1、P2、P3和P5可以相同或不同，分别表示如具有1至6个碳原子非环酰基、优选乙酰基，芳香酰基、优选苯甲酰基，具有2至7个碳原子的2-链烯基、优选烯丙基，或苄基的保护基团。-P4和P6可以相同或不同，分别表示如具有1至6个碳原子烷基、优选甲基，或者苄基的保护基团，R1′、R5′和R8′可以相同或不同，分别表示具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，具有1至6个碳原子的非环酰氧基、优选乙酰氧基，芳香酰氧基、优选苯甲酰氧基，或者具有2至7个碳原子的2-链烯基氧基、优选烯丙基氧基，-R7′和R10′可以相同或不同，它们与R1′的意义相同，或者表示氯代乙酰氧基或乙酰丙酰氧基，-R2′、R6′和R9′可以相同或不同，分别表示氢原子或与R1′的意义相同， 式中-P7与式Ⅱ中的P4意义相同，P8与式Ⅱ中的P1意义相同，-R4′和R11′可以相同或不同，与式Ⅱ中的R2′的意义相同，-R3′，R12′和R13′可以相同或不同，与式Ⅱ中的R1′的意义相同， 式中-X1、P1、P2、P3、P4、R1′和R2′与式Ⅱ中的意义相同，-P7、R3′和R4′与式Ⅲ中的意义相同，-Y′表示式D1所示基团 式中R8、R11′、R12′和R13′与式Ⅲ中的意义相同，然后，或者将其催化氢化，然后皂化和硫酸化，或者先将其皂化，然后硫酸化、然后催化氢化，或者先将其催化氢化、然后硫酸化、然后皂化，来制得式Ⅰ化合物。
11.权利要求1式Ⅰ化合物的制备方法，其特征在于使含有在羟基上以及如适宜在羧基上(如果有的话)的保护基的单糖与另一种被保护的单糖反应，形成双糖，然后再与另一种被保护的单糖反应，制得被保护的三糖，从三糖然后可以制得被保护的四糖，然后制得被保护的五糖、然后制得被保护的六糖，然后将四糖、五糖或六糖去保护并适宜硫酸化，或者首先部分去保护、然后硫酸化、然后去保护。
12.权利要求1至9中任一要求的式Ⅰ化合物用作医药产品的用途。
13.药物组合物，它含有与药物可接受、无毒、惰性赋形剂组合或混合且作为活性成分的权利要求1至9中任一要求的化合物或其与药物可接受碱形成的盐。
14.式Ⅸ化合物1，6∶2，3-二脱水-4-O-(2，4，6-三-O-苄酰基-3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖 式中Bz表示苄酰基。
15.式X化合物1，6∶2，3-二脱水-4-O-(3-脱氧-β-D-核糖-吡喃已糖基)-β-D-吡喃甘露糖
16.式Ⅺ化合物 式中-R1′表示具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，具有1至6个碳原子的非环酰氧基、优选乙酰氧基，芳香酰氧基、优选苯甲酰氧基，或者具有2至7个碳原子的2-链烯基氧基、优选烯丙基氧基，-P1和P2可以相同或不同，分别表示选自具有1至6个碳原子的非环酰基、优选乙酰基，芳香酰基、优选苯甲酰基，具有2至7个碳原子的2-链烯基、优选烯丙基，或苄基的保护基团，-P4表示选自具有1至6个碳原子的烷基、优选甲基，或苄基的保护基团，-P9表示乙酰丙酰基或氯代乙酰基。
全文摘要
本发明涉及式I的3-脱氧低聚糖及其与碱形成的可药用盐，式I中各符号的定义参见说明书。
文档编号C07H3/04GK1099038SQ9410496
公开日1995年2月22日 申请日期1994年4月21日 优先权日1993年4月22日
发明者M·琵缇托, G·F·B·朱伦德, C·A·A·万博克尔 申请人:艾尔夫·萨诺费, 阿克佐诺贝尔公司