专利名称：新的β-内酰胺类、制备紫杉烷的方法及带侧链紫杉烷类的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的β-内酰胺类。本发明β-内酰胺类在制备带侧链紫杉烷类(taxanes)如紫杉酚和紫杉酚衍生物中发现可用作中间体。本发明还涉及偶合β-内酰胺类以形成此类带侧链紫杉烷类的新的方法以及涉及新的带侧链紫杉烷类。
紫杉烷类是在医药领域具有应用价值的双萜类化合物。例如，已经发现紫杉酚，一种具有如下结构的紫杉烷，是有效的抗癌剂， 其中Ph为苯基，Ac为乙酰基并且Bz为苯甲酰基。
天然存在的紫杉烷类如紫杉酚可以在植物原料中发现，并已经由其中分离得到。但是，此类紫杉烷类在植物原物中的含量相当少，例如对于紫杉酚来讲，作为此化合物的来源，需要大量生长缓慢的紫杉属树。因此，现有技术中对于其合成进行了大量研究，其中包括制备天然存在的紫杉烷类如紫杉酚的半合成路线以及合成制备医药上适用的其类似物的制备路线。
本发明提供了下列式Ⅰ新的β-内酰胺类化合物及其盐 其中R1和R2(ⅰ)两者同时为相同的烷基;
(ⅱ)一起形成环烷基;
(ⅲ)一起形成环烯基;或(ⅳ)一起形成杂环基;
R3为烷基;
R4为芳基;
R5为氢、芳基羰基或烷氧羰基。
本发明β-内酰胺类在制备带侧链的紫杉烷类如紫杉酚和紫杉酚衍生物中可用作中间体，特别是此化合物可以与紫杉烷部分偶合从而形成上述侧链。
由于紫杉烷类的立体化学结构可影响它们的药物活性，因此较理想的是使用可得到具有所需立体化学紫杉烷最终产物的β-内酰胺类中间体。在本发明β-内酰胺类中，上述式Ⅰ中用星号标记的碳原子为非不对称碳原子。当此碳原子中心为不对称中心时，则可形成非对映异构体混合物。本发明β-内酰胺类相对于其中在相应位置上含有不对称碳原子的β-内酰胺类，提供了许多优异之处，因为当在制备后一化合物时，或者当它们与紫杉烷部分偶合时，所得产物是立体构型混合物形式。此立体异构体混合物导致原料的无效使用，并使分离和纯化过程复杂化。
本发明式Ⅰ的β-内酰胺类的优点还在于可以良好的产率和纯度制得紫杉烷最终产物。特别是，当本发明β-内酰胺类在制备带侧链的紫杉烷类中用作中间体时，可使得原料有效转化，因而只使用相对少量的原料，并且可简化分离和纯化过程。
本发明还提供了利用上述式Ⅰ的β-内酰胺类制备带侧链的紫杉烷类的新方法以及涉及如此制备的新的带侧链的紫杉烷类。
本发明详述如下在此单独或作为其它基团部分使用的术语“烷基”或“烷”表示可任意取代的直链和支链的饱和烃基，优选正链中具有1～10个碳原子。未取代的此类基团的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。取代基的实例可包括下列一个或多个下列基团卤素、烷氧基、烷硫基、烯基、炔基、芳基、环烷基、环烯基、羟基、或被保护的羟基、羧基(-COOH)、烷氧羰基、烷羰氧基、氨基甲酰基(NH2-CO-)、氨基(-NH2)、一烷基氨基或二烷基氨基、或巯基(-SH)。
此处所用术语“低级烷”或“低级烷基”表示如上所述烷基在其正链上有1～4个碳原子的、可任意取代的基团。
此处所用术语“烷氧基”或“烷硫基”表示分别经氧键(-O-)或硫键(-S-)成键连接的如上所述的烷基。此处所用术语“烷氧羰基”表示经羰基成键连接的烷氧基。此处所用术语“烷羰氧基”表示依次经羰基和经氧键成键连接的烷基。术语“一烷基氨基”或“二烷基氨基”分别表示被上述一或两个烷基取代的氨基。
在此单独或作为其它基团部分使用的术语“烯基”表示进一步含有至少一个碳-碳双键的可任意取代的上述烷基。取代基的实例包括一个或多个上述烷基，或者一个或多个上述烷基的取代基。
在此单独或作为其它基团部分使用的术语“炔基”表示进一步含有至少一个碳-碳三键的可任意取代的上述烷基。取代基的实例包括一个或多个上述烷基，或者一个或多个上述烷基的取代基。
在此单独或作为其它基团部分使用的术语“环烷基”表示可任意取代的、饱和的环烃环，优选含有1～3个环并且每个环含有3～7个碳原子。未取代的此类基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸基、环十二烷基和金钢烷基，取代基的实例包括一个或多个上述烷基，或者一个或多个上述烷基的取代基。
在此单独或作为其它基团部分使用的术语“环烯基”表示上述环烷基中进一步含有至少一个碳-碳双键从而形成一个部分不饱和环的可任意取代的基团。取代基的实例包括一个或多个上述烷基，或者一个或多个上述烷基的取代基。
在此单独或作为其它基团部分使用的术语“芳”或“芳基”表示可任意取代的芳香族碳环基团，优选含有1或2个环并含有6～12个环碳原子。未取代的此类基团的实例包括苯基、联苯基和萘基。取代基的实例包括一个或多个、优选三个或少于三个下述基团硝基、上述烷基、或者上述烷基的取代基。
在此单独或作为其它基团部分使用的术语“芳基羰基”表示经羰基成键连接的上述芳基。
在此单独或作为其它基团部分使用的术语“杂环基”或“杂环”表示可任意取代的、完全饱和的或不饱和的、在至少一个环中具有至少一个杂原子的芳族或非芳族环基，优选每个环中具有5或6个原子的单环或双环基。杂环基可以例如在环中含有1或2个氧原子、1或2个硫原子、和/或1～4个氮原子。每个杂环基可经环系中的任一碳原子或杂原子成键连接。杂环基的实例包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、咪唑基、吡咯烷基、哌啶基、吖庚因基、吲哚基、异氮杂茚基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噁二唑基、苯并呋咱基，特别是四氢吡喃基(如4-四氢吡喃基)。取代基的实例包括一个或多个上述烷基，或者一个或多个上述烷基的取代基。
在此单独或者作为其它基团部分使用的术语“卤素”或“卤”表示氯、溴、氟和碘。
此处所用术语“紫杉烷部分”表示含有下列主结构的基团
其中主结构可以被取代并且在其环系中可含有不饱和烯键。
在此所用术语“紫杉烷”表示含有上述紫杉烷部分的化合物。在此所用术语“带侧链的紫杉烷”表示含有上述紫杉烷部分、且进一步含有侧链成键连接至所述部分的C-13位上的化合物。
在此所用术语“羟基保护基”表示任一可保护游离羟基的基团，其应在参加反应后在不破坏分子的其它部分的情况下脱除。此类基团及其合成可参见“Protective Groups in Orgunic Synthesis”，T.W.Greene，John Wiley and Sons，1981，或Fieser ＆ Fieser。羟基保护基的实例包括甲氧甲基、1-乙氧乙基、1-甲氧基-1-甲基乙基、苄氧甲基、(β-三甲基甲硅烷基乙氧基)甲基、四氢吡喃基、2，2，2-三氯乙氧羰基、叔丁基(二苯基)甲硅烷基、三烷基甲硅烷基、三氯甲氧羰基和2，2，2-三氯乙氧甲基。
此处所用术语“盐”包括与有机和/或无机酸和/或碱形成的盐。
此处所用术语“碱金属甲硅烷基氨化物碱”表示含有下列部分的碱
其中M为碱金属例如锂、钠或钾。
本发明优选的β-内酰胺类为在室温为结晶化合物而非液体(油状物)的式Ⅰ化合物。此结晶化合物比液体化合物有利，因为此结晶化合物特别是在大规模生产时更容易制备并可以较纯的形式获得，因而在随后制备带侧链的紫杉烷类如紫杉酚和紫杉酚衍生物时更适于用作中间体。
特别优选的式Ⅰ化合物为其中R1和R2两者均为相同的未取代的低级烷基，特别是R1和R2均为甲基;R3为未取代的低级烷基，特别是为甲基;R4为苯基;以及R5为氢、苯甲酰基或叔丁氧羰基的式Ⅰ化合物。
式Ⅰ的β-内酰胺类可用下列制备式Ⅰ顺式β-内酰胺类的反应路线中所示方法制备。
反应路线
式Ⅱ原料化合物可用在此用作参考文献的美国专利申请号07/822，015(Patel等人1992年1月15日(代理人登记号LD47))中所述方法制备，特别优选的是使用立体异构体(即对映体)纯的β-内酰胺类。
在酸催化剂存在下通过将式Ⅱ化合物与式Ⅲ或Ⅳ化合物反应可将式Ⅱ化合物转变成式Ⅰ化合物。
其中R1、R2和R3如上定义，并且R1a(ⅰ)当R2为烷基时可使R1a-CH2-是与R2相同的基团或者(ⅱ)与R2和与R1a及R2成键连接的原子一起形成一个均含有至少一个碳-碳双键的环烯基或杂环基。
式Ⅲ化合物的实例包括化合物二甲氧基丙烷、 式Ⅳ化合物的实例包括化合物
制备其中R1和R2两者均为相同的烷基的式1化合物，特别优选的方法是在酸催化剂，例如有机磺酸如对甲苯磺酸吡啶嗡(PPTS)、甲苯磺酸或樟脑磺酸存在下，将式Ⅱ化合物与式Ⅳ化合物反应，其中R3如上定义而R1a为可使R1a-CH2-与R2相同的基团。优选的式Ⅳ化合物为2-甲氧基丙烷。
上述反应优选在约-30℃～约30℃，特别是在约0℃和常压下进行。反应可在例如约0.5小时～约10小时内完成，并优选在惰性气体如氩气氛下进行。
式Ⅲ或Ⅳ化合物对式Ⅱ化合物的优选摩尔比为约6∶1至约1∶1，所用酸的量为催化反应的有效量。
优选使用对反应呈惰性的有机溶剂，特别优选的溶剂为丙酮、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二氯甲烷、乙腈和甲苯。溶剂的优选量为使得式Ⅱ化合物对溶剂的比率为约1∶5至约1∶40(重量∶体积)。
可任意地将其中R5为氢的如此所得的式Ⅰ的β-内酰胺转变成其中R5为芳基羰基或烷氧羰基的式Ⅰ的β-内酰胺，其方法为在预选分离或不分离其中R5为氢的β-内酰胺的情况下，通过将其中R5为氢的β-内酰胺与式Ⅴ或Ⅵ化合物反应，
其中R6为芳基或烷氧基;和X为卤素，特别是氯。
上述反应优选在叔胺如二异丙基(乙基)胺、三乙胺和4-二甲氨基吡啶存在下进行。式Ⅴ化合物优选为苯甲酰氯，用于制备紫杉酚时更是这样。式Ⅵ化合物优选为BOC酸酐(其中R6为叔丁氧基的化合物Ⅵ)，特别是用于制备taxotere时。
在上述反应中，优选采用约-30℃至约30℃，特别是约0℃的温度和常压下进行反应。例如，反应可在约2小时至约10小时内完成，并优选在惰性气体如氩气氛下进行。
式Ⅴ或Ⅵ化合物对其中R5为氢的式Ⅰ的β-内酰胺的优选摩尔比为约1∶1至约5∶1。叔胺对其中R5为氢的式Ⅰ的β-内酰胺的优选摩尔比为约1∶1至约5∶1。
优选使用对反应呈惰性的有机溶剂，特别优选的溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、丙酮、二甲基甲酰胺和甲苯。溶剂的优选使用量为，以溶剂和原料β-内酰胺的总重量计，原料β-内酰胺为约15%至约80%重量比。
在下述偶合方法中优选使用其中R5不为氢的β-内酰胺。
紫杉烷类为含有如上所述的下式紫杉烷部分的二萜类化合物 特别令人感兴趣的是含有其中11，12-位通过烯键成键连接，并且其中13-位含有侧链的紫杉烷部分的紫杉烷类化合物，此紫杉烷类化合物的实例如紫杉酚。具有药物活性的紫杉烷类化合物如紫杉酚可用作抗癌剂用来治疗癌症患者，所述癌症如乳腺癌、卵巢癌、结肠癌或肺癌、黑素瘤和白血病。
本发明提供了一种制备带侧链的紫杉烷的新方法，该方法为偶合本发明β-内酰胺以形成所述的侧链。特别是，本发明提供了一种制备下列式Ⅶ带侧链的紫杉烷或其盐的新方法 其中R1、R2、R3、R4和R5如上定义，T为直接在所述紫杉烷C-13位上成键连接的紫杉烷部分;
其包括的步骤为在偶合剂存在下，将本发明式Ⅰ的β-内酰胺或其盐与下列式Ⅷ紫杉烷化合物或其盐反应HO-T(Ⅷ)其中T如上定义;并可任意地将所述式Ⅶ化合物的-OC(R1)(R2)(OR3)基团转变成羟基，从而形成下列式Ⅸ的带侧链的紫杉烷或其盐 加上如上所述的侧链，其本身和自行地可使紫杉烷产物提高或产生更理想的药物活性，或者与原料化合物相比可使紫杉烷产物更易于转变成具有更强或更理想的药物活性的紫杉烷，可利用本发明制备带侧链的紫杉烷的方法制备的紫杉烷类化合物的实例包括欧洲专利公开号400，971、美国专利号4，876，399、美国专利号4，857，653、美国专利号4，814，470、美国专利号4，924，012和美国专利号4，924，011中所述化合物，上述所有文献在此均作为参考文献。优选制得具有如下结构式的taxotere 或者，最优选的是如式Ⅸ化合物的紫杉酚。
可用于本发明方法中的在其中C-13位上直接键合有OH基团的式Ⅷ化合物的实例如上述参考文献中所述，特别是如欧洲专利公开号400，971中所述，最优选地，式Ⅷ化合物为式X化合物
其中R7为氢、烷基羰基或羟基保护基，特别是乙酰基;
并且R8为氢或羟基保护基;特别是为7-0-三烷基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ如7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ或7-0-三甲基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ(baccatin Ⅲ)。例如，7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ可如本文参考文献(Dents等人，J.Am.Chem.Soc.，110，5917(1988))所述由10-去乙酰基浆果赤霉素Ⅲ得到。优选将7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ按本申请实施例的方法制备。例如，最一般的情况是在偶合侧链之前可就地将其中R7为氢的化合物(X)酰化。
本发明方法中所用偶合剂可以是任何有利于偶合形成式Ⅶ带侧链的紫杉烷的偶合试剂，实例有叔胺类如三乙胺、二异丙基(乙基)胺、吡啶、N-甲基咪唑和4-二甲氨基吡啶(DMAP)，以及可在式Ⅷ紫杉烷C-13位上形成金属醇盐的金属碱如二异丙基氨化锂(LDA)、未取代的低级烷基锂化合物或苯基锂。
本发明方法的偶合剂优选为碱金属甲硅烷基氨化物碱或位阻的碱金属甲硅烷基氨化物碱。此类碱的实例为下列式Ⅺ化合物 其中R9和R10为三烷基甲硅烷基、环烷基、或者与和它们成键连接的氮原子一起形成一个杂环基，并且M为碱金属如锂、钠或钾。
优选的碱，特别是式Ⅺ的碱金属甲硅烷基氨化物碱为于所用反应介质中可溶性碱，最优选的是碱金属六甲基二甲硅烷基氨化物(R9和R10为三甲基甲硅烷基而M为钠、锂或钾)，具体地是六甲基二甲硅烷基氨化锂(LHMDS)。“位阻的碱金属氨化物碱”包括含有基团-N(M)-(其中M如上定义)的碱，并且在β-内酰胺与含C-13羟基紫杉烷的偶合反应中，此碱与六甲基二甲硅烷基氨化锂具有基本上相同、或者更大的位阻作用。此类位阻碱的实例包括碱金属四甲基哌啶类化合物和碱金属二环己基氨化物。
本发明方法中上述碱金属碱，特别是甲硅烷基氨化物的优点在于它们不是强的亲核试剂，因而可减低或消除式Ⅷ紫杉烷原料的降解，并可以较高的产率(优选大于或等于约90%)和纯度(优选大于或等于约98%)得到紫杉烷产物。本发明还提供了一种方法，在该方法中，用碱金属甲硅烷基氨化物或位阻的金属氨化物碱用作偶合剂，将式Ⅷ紫杉烷与任何能在所述紫杉烷C-13位上提供侧链的合适的β-内酰胺(包括但不限于本发明的β-内酰胺类)进行偶合反应。
本发明上述偶合方法优选在约-70℃至约25℃，特别是在约-30℃至约0℃，并且于常压下进行。例如，反应可于约一个半小时至约4小时内完成，并优选在惰性气体如氩气氛下进行。
式Ⅷ紫杉烷原料化合物对β-内酰胺的优选摩尔比为大于约1∶1.6，最优选为约1∶1至约1∶1.3，特别是约1∶1.2。式Ⅷ紫杉烷原料化合物对碱金属碱如甲硅烷基氨化物碱的优选摩尔比为约1∶1.1至约1∶1.5，特别是约1∶1.1。
优选使用对反应呈惰性的有机溶剂。特别优选的溶剂是四氢呋喃(THF)、甲苯和乙醚。优选使用的溶剂量为使式Ⅷ紫杉烷原料对溶剂的比率为约1∶1至约1∶5，优选1∶2.5(重量∶体积)。
本发明方法进一步包括，在形成式Ⅶ带侧的链紫杉烷后，可任意地将基团-OC(R1)(R2)(OR3)转变成羟基。通过适宜的方法，如通过与酸例如无机酸(如HCl或HF)或有机酸(如乙酸等)反应，可任意地将此基团与其它羟基保护基(如紫杉烷部分上的那些)相继或同时转变成羟基。
脱保护反应优选在约-30℃至约60℃，特别是在约0～25℃的温度并于常压下进行。例如，反应可在约2小时至约72小时内完成，并优选在惰性气体如氩气氛下进行。
脱保护反应所用酸对紫杉烷的优选摩尔比为约1∶1至约20∶1(体积∶重量)。优选使用对反应呈惰性的有机溶剂，特别优选的溶剂为乙醇/四氢呋喃混合液或乙腈、丙酮和水。溶剂量优选为使得紫杉烷∶溶剂总量(重量∶体积)为约1∶10至约1∶50，优选1∶30(特别是四氢呋喃/乙醇和HCl/水)时的溶剂量)。
本发明还提供了本文所述式Ⅶ新的带侧链的紫杉烷类及其盐。
紫杉酚一般优选利用本发明方法作为带侧链的紫杉烷化合物而制备。例如，优选在碱金属甲硅烷基氨化物碱存在下，将作为式Ⅷ化合物的7-0-三烷基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ如7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ与作为β-内酰胺的(3R-顺式)-1-苯甲酰基-3-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)-4-苯基-2-氮杂环丁酮反应，可制备紫杉酚。为了得到紫杉酚，在侧链生成后可用例如上述脱保护方法将三乙基甲硅烷氧基和1-甲氧基-1-甲基乙氧基转变成羟基。
在本发明任一方法中，必要时可使用或制备反应物或产物的盐或溶剂化物如水合物。
可以理解，本文所述β-内酰胺类和紫杉烷类化合物可以以一种以上的立体异构体形式存在，所述化合物的所有立体异构体应为单一一种立体异构体(即基本上无其它异构体)，或者是经选择的与其它立体异构体的混合物(如外消旋体)，或是与所有其它立体异构体的混合物。优选的是这些化合物基本上不含有其它异构体，也就是说是纯对映体。
式Ⅰ化合物的优选立体构型是基团-OC(R1)(R2)(OR3)和R4为顺式构型，亦即 特别地式Ⅰ化合物具有与化合物(3R-顺式)-1-苯甲酰基-3-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)-4-苯基-2-氮杂环丁酮相同的绝对立体构型。
式Ⅶ和Ⅸ化合物C-13侧链的优选立体构型与上述顺式β-内酰胺类的立体构型相一致，亦即
其中侧链具有与紫杉酚相同的绝对立体构型。
下列实施例进一步描述了本发明，但这些实施例仅限于说明，而对本发明权利要求的范围无任何限制作用。
实施例1(3R-顺式)-3-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)-4-苯基-2-氮杂环丁酮的制备(a)(3R-顺式)-3-羟基-4-苯基-2-氮杂环丁酮
按下述方法制得标题化合物酶促水解外消旋3-乙酰氧基-4-苯基-2-氮杂环丁酮(参见美国申请号07/822，015，Patel等人于1992年1月15日申请)生成(3R-顺式)-3-乙酰氧基-4-苯基-2-氮杂环丁酮，随后用碱水解生成旋光的标题化合物。
(b)(3R-顺式)-3-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)-4-苯基-2-氮杂环丁酮 将上述步骤(a)的产物(8.49g，52.0mmol)加入500ml干燥的三颈瓶(于120℃烘箱中干燥约12小时并装上磁性搅拌棒和数控温度计)中，用氩气清洗并溶于丙酮(300ml新开瓶的HPLC级丙酮;重量%H2O(K.F.)<0.001)。将黄色溶液冷至0℃(内部温度为1℃)，于30秒钟内滴加2-甲氧基丙烯(15.0ml，156mmol)(重量%H2O(K.F.)<0.001)，在加入2-甲氧基丙烯期间内部温度升至约2℃。在加入对甲苯磺酸吡啶鎓(PPTS)(1.3g，5.2mmol)(重量%H2O(K.F.)＝0.001)之前将所得溶液于0℃搅拌5分钟。于0℃搅拌30分钟后，TLC(薄层色谱法)分析表明反应已完全。(反应粗产物TLC分析(硅胶，溶剂乙酸乙酯，显色剂磷钼酸/乙醇)显示出产物的一个点(Rf＝0.50)而无原料存在(Rf＝0.31)。
于分液漏头中将溶液与乙酸乙酯(250ml)、饱和NaHCO3水溶液(200ml)和H2O(100ml)混合，将混合物振荡后分离，水层用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。合并的有机相用饱和NaCl水溶液(200ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并于旋转蒸发仪上浓缩，得到灰白色固体，于旋转蒸发仪上的所有浓缩过程均于35℃水浴温度进行。
将粗产物溶于乙酸乙酯(200ml)中并加入中性活性炭(2g)，混合物温和沸腾5分钟，冷至室温，经一层硅藻土吸滤，如上所述于旋转蒸发仪上除去溶剂，随后暴露于高真空下(约1mmHg，45分钟)，得到11.9g灰白色固体。将固体溶于沸腾的乙酸乙酯(75ml)中，并以每份50ml加入沸腾的己烷(400ml)。使所得浑浊溶液冷至室温。移去热源后约1分钟内溶液开始析晶，于室温静置45分钟后，将混合物于4℃冷室中冷却15小时。将结晶于吸滤器上过滤，用1∶19乙酸乙酯/己烷(3×100ml)洗涤，高真空干燥(约0.15mmHg，20小时)，得到9.55g(78%)灰白色针状结晶的标题产物。
将上述母液于旋转蒸发仪上浓缩，暴露于高真空下(约1mmHg，0.5小时)，然后于乙酸乙酯/己烷中析晶，得到1.48g(12%)少量灰白色结晶的标题化合物。(析晶过程如上述第一批产物所述相似方式进行。将固体溶于5ml沸腾的乙酸乙酯中，以每份约5ml加入沸腾的己烷(约40ml)直至有少量结晶出现，冷至室温立即开始析晶。使混合物于室温静置1.5小时，然后于4℃静置16小时。将结晶于吸滤器上过滤，用3×25ml 1∶19乙酸乙酯/己烷洗涤，高真空下干燥(约0.2mmHg，24小时)。
标题产物元素分析(%)
C13H17NO3计算值 实测值:
C 66.36 66.30H 7.28 7.40N 5.95 6.04H2O(KF) 0.00 0.00m.p.136-137℃[α]22D+6.7°(c 1.0，CHCl3)[α]22365+93.3°(c 1.0，CHCl3)TLCRf＝0.47(硅胶，乙酸乙酯)，经磷钼酸/乙醇显色目测。
实施例2(3R-顺式)-3-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)-4-苯基-2-氮杂环丁酮的制备将上述实施例1步骤(a)的标题产物(30.1g，184mmol，带褐色)加到经火焰干燥、氩气清洗的500ml烧瓶(烧瓶于120℃烘箱中干燥约12小时，并装上磁性搅拌棒和数控温度计)中，并溶于二甲基甲酰胺(300ml，重量%H2O(K.F.)＝0.05)。将红棕色溶液冷至0℃，内部温度为2℃，于2分钟内滴加2-甲氧基丙烯(53.0ml，553mmol)(在加入2-甲氧基丙烯期间内部温度升至约2℃)，在加入对甲苯磺酸吡啶鎓(PPTS，4.6g，18.4mmol)之前，将所得溶液于0℃搅拌5分钟，加入PPTS后约5分钟，反应温度升至最高4.8℃。反应进行中溶液颜色逐渐变浅，于0℃搅拌1小时后，TLC分析表明反应已完全(乙酸乙酯和水之间分配的等分试样的TLC分析(硅胶，溶剂乙酸乙酯，显色剂磷钼酸/乙醇)表明有一个产物点(Rf＝0.51)而无原料(Rf＝0.33)存在)。
将溶液用3∶1乙酸乙酯/己烷混合液(600ml)稀释并用半饱和NaHCO3水溶液(500ml)洗涤，在用NaHCO3洗涤期间，大部分有色杂质被萃取到水相中，但有机相仍呈红棕色。水相用乙酸乙酯(2×150ml)萃取，合并的有机相用H2O(500ml)洗涤(H2O洗液经TLC分析表明无产物损失到水层中)，用饱和NaCl水溶液(200ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并于旋转蒸发仪上浓缩得灰白色固体。于旋转蒸发仪上的全部浓缩过程均于40℃水浴温度进行。将固体溶于沸腾的乙酸乙酯(180ml)中，然后以每份约20ml加入己烷(250ml)直至有少量结晶出现。除去所得溶液的热源并使其冷至室温，在溶液离开热源后约1分钟内开始大量析晶。室温静置1小时后，混合物于4℃冷室中冷却17小时。将结晶于吸滤器上过滤，用1∶19乙酸乙酯/己烷(3×150ml)洗涤并高真空下干燥(约0.5mmHg，22小时)，得到32.6g(75.4%)蓬松的白色针状结晶的标题产物。
如上所述将母液于旋转蒸发仪上浓缩，然后于乙酸乙酯/己烷中结晶，得到6.25g(14.4%)蓬松的白色结晶状标题产物。结晶过程如上述第一批产物相似的方式进行。将固体溶于25ml沸腾的乙酸乙酯，以每份约5ml加入己烷(约60ml)直至有少量结晶出现，冷却至室温后立即开始析晶。使混合物于室温静置1小时，然后于4℃静置14小时。将结晶于吸滤器上过滤，用3×100ml 1∶19乙酸乙酯/己烷洗涤，并高真空(约0.6mmHg)干燥16小时。(产率＝90%)。
元素分析(%)C13H17NO3计算值 实测值:
C 66.36 66.40
H 7.28 7.20N 5.95 5.68H2O(KF) 0.00 0.00m.p.＝141℃[α]22D+6.5°(c 1.0，CHCl3)[α]22365+95.0°(c 1.0，CHCl3)TLCRf＝0.47(硅胶，乙酸乙酯)，经磷钼酸/乙醇显色目测下述方法可供选择用于制备标题产物(1)于氩气氛下，在0℃将实施例1步骤(a)的标题产物(79.7mg，0.488mmol)、二甲氧基丙烷(0.3ml，2.44mmol)、PPTS(约12mg，0.049mmol)和二甲基甲酰胺(2ml)的混合物搅拌3小时，然后于约4℃搅拌24小时。所得产物用乙酸乙酯萃取并进行处理(用10ml乙酸乙酯稀释，用0.5ml饱和NaHCO3水溶液洗涤;水相用2×5ml乙酸乙酯萃取;合并的有机相用1×10ml水、10ml饱和NaHCO3水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩)得到定量产率的产物，其为原料和标题产物的1∶1.7混合物(TLC分析测定)。
(2)按下法制备标题产物将实施例1步骤(a)的标题产物(92.5mg)加到烘干的5ml烧瓶中，用氩气清洗，二甲基甲酰胺(1.5ml)稀释并冷至0℃。加入二甲氧基丙烷(0.18g)，随后加入PPTS(14mg)，将溶液于0℃搅拌5小时并如上所述处理(产生约1∶1.1原料和标题产物的混合物)。
(3)按下法制备标题产物将实施例1步骤(a)的标题产物(89.4mg)加到经火焰干燥、氩气清洗的烧瓶中，将其溶于丙酮(3.5ml)并冷至0℃，加入二甲氧基丙烷(0.17g)，随后加入PPTS(14mg)。溶液于0℃搅拌3小时，转移至4℃冷室中冷却24小时，处理后得到原料标题产物杂质之比为8∶2∶1的标题产物。
实施例3(3R-顺式)-1-苯甲酰基-3-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)-4-苯基-2-氮杂环丁酮的制备 将上述实施例1步骤(b)的标题产物(8.69g，36.9mmol)加到干燥的250ml三颈瓶(于120℃烘箱中干燥24小时并装有磁性搅拌棒和数控温度计)中，用氩气清洗并溶于CH2Cl2(90ml)(重量%H2O(K.F.)<0.05)。于30秒钟内加入二异丙基(乙基)胺(i-Pr2NEt，7.10ml，40.6mmol)(重量%H2O(K.F.)＝0.016)，然后一次性加入4-二甲氨基吡啶(0.90g，7.4mmol)(重量% H2O (K.F.)<0.05)。将所得溶液冷却至0℃(测得内部温度为1℃)，然后于7分钟内滴加苯甲酰氯(4.70ml，40.6mmol)。在加入过程中，内部温度升至8℃，加入后得到轻微浑浊溶液，于0℃搅拌下变成透明黄色溶液。然后将溶液于0℃搅拌1.5小时，此时TLC分析表明反应已完全。(反应粗产物的TLC分析(硅胶，溶剂乙酸乙酯)显色剂磷钼酸/乙醇)表明有一个产物点(Rf＝0.61)而无原料存在(Rf＝0.49)。
溶液用CH2Cl2(150ml)稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，并分离两层，水层用CH2Cl2(75ml)萃取。合并的有机层用5.7%NaH2PO4水溶液(300ml，测得5.7% NaH2PO4水溶液的pH＝4.25±0.05;测得所得洗液的pH＝5.57±0.05)、饱和NaCl水溶液(100ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并于旋转蒸发仪上浓缩，得到灰白色泡沫状物。在旋转蒸发仪上的全部浓缩过程均于35℃水浴温度进行。将粗产物溶于乙酸乙酯(150ml)中并加入中性活性炭(2g)，所得混合物温和沸腾5分钟，冷却至室温，并经一层硅藻土吸滤。溶液比用活性炭处理前颜色明显变浅。如上所述于旋转蒸发仪上除去溶剂随后所得泡沫状物用己烷(50ml)研制，得到浆状固体产物。
如上所述将浆状物于旋转蒸发仪上浓缩并暴露于真空下(约2mmHg，15分钟)，得到12.2g灰白色固体。将固体溶于热乙酸乙酯(7ml)中并以每份约2ml加入热己烷(约45ml)，小心进行此结晶过程，避免有油状产物出现。将所得浑浊溶液脱离热源，冷却数分钟后，加入晶种并于10分钟内开始析晶。于室温1小时后，将混合物置于4℃冷室中保持4小时。然后将结晶于吸滤器上过滤，用1∶19乙酸乙酯/己烷(3×50ml)洗涤并高真空下干燥(约0.2mmHg，16小时)，得到9.23g(73.7%)灰白色结晶状标题产物。母液中还含有产物(经TLC分析)，但第二批产物未进行结晶。
元素分析(%)C20H21NO4·H2O计算值 实测值C 70.41 70.14
H 6.26 6.10N 4.11 4.13H2O(KF) 0.53 0.55m.p.89-94℃[α]22D+173.1°(c 1.0，CHCl3)TLCRf＝0.58(硅胶，乙酸乙酯)，经磷钼酸/乙醇显色目测。
实施例4[2aR-[2aα，4β，4aβ，6β，9α(αR＊，βS＊)，11α，12α，12aα，12bα]]-β-(苯甲酰氨基)-α-(1-甲氧苯-1-甲基乙氧基)羟基苯丙酸，6，12b-双(乙酰氧基)-12-(苯甲酰氧基)-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氢-4-三乙基甲硅烷氧基-11-羟基-4a，8，13，13-四甲基-5-氧代-7，11-亚甲基-1H-环癸并[3，4]苯并[1，2-b]氧杂环丁烷-9-基-酯。
(a)7-TES浆果赤霉素Ⅲ 其中Ac为乙酰基，Bz为苯甲酰基和TES为三乙基甲硅烷基。
(ⅰ)[2aR-[2aα，4β，6β，9α，11β，12α，12aα，12bα)]]-苯甲酸，12b-乙酰氧基-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氢-6，9，11-三羟基-4a，8，13，13-四甲基-5-氧代-4-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-7，11-亚甲基-1H-环癸并[3，4]苯并[1，2-b]氧杂环丁烷-12-基酯(7-0-TES-10-去乙酰基浆果赤霉素Ⅲ) 将10-去乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(27.4g，50.3mmol)(经测(两次)未校正杂质量为H2O1.0%(1.57%)，CH3OH1.49%(1.6%)，乙酸乙酯0.1%(0.09%)，己烷(0.03%))和4-二甲氨基吡啶(2.62g，21.4mmol)(重量%H2O(K.F.)＝0.09)加到经火焰干燥的、氩气清洗的1L三颈瓶(装有机械搅拌器和数控温度计)中并溶于无水二甲基甲酰胺(122ml)(重量%H2O(K.F.)＝<0.01)中。加入CH2Cl2(256ml)(重量%H2O(K.F.)＝<0.01)并将所得均匀溶液冷却至-50℃(在加入CH2Cl2过程中反应溶液的温度由23℃升至25℃)。于3分钟内滴加三乙胺(NEt3，16ml，120mmol)(重量% H2O(K.F.)＝0.08)并在滴加纯三乙基甲硅烷基氯(Et3SiCl，18.6ml，111mmol)之前将所得溶液于-50℃搅拌5分钟，于10分钟内加入Et3SiCl，反应温度不超过-50℃，在加入Et3SiCl期间反应物变得十分混浊。于约-50℃将所得混合物搅拌1小时，然后使其于-48℃冷冻箱中静置22小时(无需搅拌)。(对照试验表明于-48℃搅拌反应8小时导致约60%转化。)然后由冷冻箱中取出混合物并温热至约-10℃。(混合物TLC分析(溶剂乙酸乙酯，显色剂磷钼酸/乙醇)表明无原料存在并只有一个产物点(Rf＝0.60)。)将冷混合物与EtOAc(1L)混合并用H2O(890ml)洗涤。分离出所得水层并EtOAc(250ml)萃取。合并的有机层用5.7% NaH2PO4水溶液(2×250ml)(测得5.7% NaH2PO4水溶液的pH＝4.30±0.05;测得合并的NaH2PO4洗液的pH＝5.75±0.05)、半饱和NaCl水溶液(250ml)、饱和NaCl水溶液(250ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并于旋转蒸发仪上浓缩。(全部浓缩过程均于旋转蒸发仪上在35℃水浴温度进行。)所得半固体状物经暴露于高真空下进一步干燥(约1mmHg，20分钟)，得到41.5g白色固体。将粗产物溶于CH2Cl2(400ml)(需于35℃水浴中加热溶解固体)并于旋转蒸发仪上将所得溶液的体积减至约150ml。立即开始析晶并使混合物于室温静置1小时。加入己烷(100ml)并将混合物轻微搅拌，使混合物于4℃冷室中静置16.5小时。将固体于吸滤器上过滤，并用1∶9CH2Cl2/己烷(3×250ml)洗涤，并在高真空下干燥(约0.2mmHg，42小时)，得到26.1g(79%)白色粉末状标题产物。将母液于旋转蒸发仪上浓缩，残余物于CH2Cl2中结晶，得到4.5g(14%)白色结晶状标题产物。以与第一批产物相似的方式进行重结晶不加热下将固体溶于CH2Cl2(100ml)中并于旋转蒸发仪上将所得溶液的体积减至约7ml，于5分钟内开始析晶。使混合物于室温静置1小时，然后于4℃冷室中静置42小时。将结晶于吸滤器上过滤，用1∶9 CH2Cl2/己烷(3×50ml)洗涤，并在高真空下干燥(约0.2mmHg，18小时)。此批产物的1H NMR与第一批产物的1H NMR相同。
两批产物的总产率为93%(未校正)。
元素分析(%)
C35H50O10Si计算值 实测值C 63.80 63.43H 7.65 7.66KF(H2O) 0.00 0.00mp239-242℃(分解)[α]22D-53.6°(c 1.0，CHCl3)TLCRf＝0.60(硅胶，EtOAc);经磷钼酸/乙醇显色目测。
另一方法如下于配备有氩气入口的经火焰干燥的250ml三颈瓶中加入10-去乙酰基-浆果赤霉素Ⅲ(5.44g，10mmol，水含量为1.56重量%，甲醇含量为1.6重量%)、4-二甲氨基吡啶(0.49g，4mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(24ml，4A分子筛干燥)。于室温搅拌混合物直至均匀。加入二氯甲烷(50ml，HPLC级，无需纯化)并将温度降至-50℃。于5分钟内滴加三乙胺(2.9ml，21mmol)，随后于10分钟内滴加三乙基甲硅烷基氯(3.4ml，20mmol)。使混合物于-48℃静至21小时，用200ml乙酸乙酯和175ml水稀释。(反应经TLC(用EtOAc作洗脱剂)监测原料的Rf＝0.56，产物的Rf＝0.83，UV和PMA目测)分出水层并用乙酸乙酯(50ml×1)萃取，将有机层合并并用5%磷酸二氢钾水溶液(50ml×2)(5%KH2PO4水溶液的pH值为4.3)、半饱和氯化钠溶液(50ml×1)，盐水(50ml×1)洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到固体状标题产物粗品(7.45g)。将粗产物溶于75ml热二氯甲烷中并经加热将总体积减少至30ml，开始析晶。将其于室温静置2小时，于4℃静置16小时。于布氏漏斗将结晶过滤，用冷的10%二氯甲烷的己烷液(25ml)洗涤并真空干燥，得到5.38g标题产物。将母液和洗液真空浓缩，通过溶于8ml二氯甲烷使固体残余物析晶，按照上述析晶方法，得到0.72g第二批产物。标题产物7-TES-10-去乙酰基浆果赤霉素Ⅲ的总产量为6.10g(93%)，其为白色固体，m.p.238～240℃。
元素分析(%)C35H50O10Si计算值 实测值C 63.80 63.76H 7.65 7.66mp239-242℃[α]D-53.7(c 1.0，CHCl3)TLCRf＝0.53(硅胶，50% EtOAc的己烷液);UV和PMA目测。
HI＝98.9%。
(ⅱ)[2aR-[2aα，4β，4aβ，6β，9α，11β，12α，12aα，12bα)]-6，12b-双(乙酰氧基)-12-(苯甲酰氧基)-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氢-9，11-二羟基-4a，8，13，13-四甲基-4-[(三乙基甲硅烷基)氧基]-7，11-亚甲基-1H-环癸并[3，4]苯并[1，2-b]氧杂环丁烷-5-酮。
(7-0-TES-浆果赤霉素Ⅲ)
将上述步骤(ⅰ)中制备的7-0-TES-10-去乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(21.4g，32.4mmol)加到经火焰干燥的氩气清洗的1L三颈瓶(装备有机械搅拌器和数控温度计)中并溶于THF(350ml，与钠和二苯酮新鲜蒸馏得到)。将所得溶液冷却至-70℃，于23分钟内滴加正丁基锂溶液(n-BuLi，14.6ml的2.56M己烷溶液，37.3mmol，于0℃用二苯基乙酸滴定三份)，在滴加期间反应温度不高于-68℃。在加入n-BuLi时有固体生成且于-70℃溶解不明显。将所得混合物于-70℃搅拌20分钟，然后温热至-48℃。(热至-48℃时得到一透明均相溶液)于-48℃搅拌1/2小时后，于7分钟内滴加乙酸酐(4.6ml，49mmol，使用前于氩气氛下(137-138℃，1大气压)蒸馏)，在滴加期间反应温度不高于-45℃。将所得溶液于-48℃搅拌20分钟，然后于0℃搅拌1小时，溶液用乙酸乙酯(350ml)稀释，用饱和NH4Cl水溶液(250ml)洗涤，分层。水层用乙酸乙酯(200ml)萃取。合并的有机层用饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并于旋转蒸发仪上浓缩。(所有浓缩过程均于旋转蒸发仪上于35℃水浴温度进行)，将半固体状物暴露于高真空下(约1.5mmHg，1/2小时)，得到24.7g白色固体。将粗品产物溶于CH2Cl2(300ml)中并于旋转蒸发仪上将所得溶液的体积减少至约70ml，1分钟内开始析晶，使混合物于室温静置45分钟，然后于4℃冷室中静置18小时。将结晶于吸滤器上过滤，用1∶9CH2Cl2/己烷(3×100ml)洗涤，并高真空下干燥(约0.2mmHg，19小时)，得到20.9g(92.0%)精细白色针状结晶的标题产物。将母液于旋转蒸发仪上浓缩，残余物于CH2Cl2/己烷中结晶，得到0.82g(3.6%)少量白色结晶状标题产物。结晶过程如下进行将残余物溶于CH2Cl2(10ml)，于旋转蒸发仪上将所得溶液的体积减少至约5ml。于室温静置1/2小时后，无结晶生成。以每份1ml加入己烷(5ml)并搅荡溶液，此时有少量结晶出现，使混合物于室温静置1/2小时(有更多结晶生成)，然后于4℃冷室中静置18小时。将结晶于吸滤器上过滤，用1∶9CH2Cl2/己烷洗涤，高真空下干燥(约0.15mmHg，21小时)。
两批产物的总产率为95.6%。
mp218～219℃(分解)[α]22D-78.4°(c 1.0，CHCl3)TLCRf＝0.37(硅胶，1∶9丙酮/CH2Cl2);经磷钼酸/乙醇显色目测。
(b)[2aR-[2aα，4β，4aβ，6β，9α(αR＊，βS＊)，11α，12α，12aα，12bα]]-β-苯甲酰氨基)-α-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)羟基苯丙酸，6，12b-双(乙酰氧基)-12-(苯甲酰氧基)-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氢-4-三乙基甲硅烷氧基-11-羟基-4a，8，13，13-四甲基-5-氧代-7，11-亚甲基-1H-环癸并[3，4]苯并[1，2-b]氧杂环丁烷-9-基酯 其中Ph为苯基，MOP为1-甲氧基-1-甲基乙基，并且THF为四氢呋喃。
20分钟内剧烈搅拌下向上述步骤(a)制备的化合物(50.00g，71.33mmol)的THF(与钠和二苯酮新蒸得的，125ml)溶液中于-50℃(只在化合物完全溶解于THF中后冷却)滴加六甲基二甲硅烷基氨化锂(LHMDS，55.1ml，1.36M THF溶液，74.90mmol;试剂用1，3-二苯丙酮对甲苯磺酰腙滴定)，并使得内部温度不高于-48℃。加完后将反应混合物热至-35℃并于室温搅拌5分钟。
于7分钟内将新制备的实施例3所制化合物(“化合物3”)(27.85g，82.03mmol)的THF(35ml)溶液滴加到反应混合物中，未观察到有明显的放热。将含有化合物3的烧瓶用5ml THF洗涤并将洗液转移至反应混合物中，用冰水浴代替干冰浴使所得溶液升至0℃并再搅拌90分钟。反应经反相硅胶(EM Science RP-18 WF254s)TLC监测，用乙腈/水(70/30)作展开剂，标题产物的Rf为0.31，7-TES-紫杉酚(即在紫杉酚结构中7-位羟基被TES-O-取代)的Rf为0.41，7-TES-浆果赤霉素Ⅲ的Rf为0.47，化合物3的Rf为0.63。
反应用pH7的磷酸盐缓冲液(50ml)、随后立即用饱和NaHCO3溶液(150ml)骤停，将其用乙酸乙酯(EtOAc，600ml)稀释并分层。有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到浅黄色固体状标题产物粗品(82.3g)。将固体溶于热EtOAc(200ml)中并于回流温度下滴加己烷(110ml)。将结晶混合物于室温静置2小时(冷却下迅速有沉淀生成)，然后于冷室中静置7小时。将固体过滤并用冷己烷/EtOAc，5/1混合液(2×80ml)洗涤，将所得白色结晶于吸滤器上干燥1小时，然后真空(约0.6mmHg)干燥过夜，得到67.37g标题产物(以7-TES-浆果赤霉素Ⅲ为基准产率为91%;1H NMR表明有0.4mol EtOAc，其校正产率为87%)，其有效纯度(homogeneity index，HI)为99.25%(标题产物为95.73%，而7-TES-紫杉酚为3.52%)。
将母液和洗液合并并蒸发至干。残余物溶于热EtOAc(25ml)中并于回流温度滴加己烷(40ml)，冷却至室温后，将混合物于室温静置1小时，随后于冷室中静置7小时。于吸滤器上过滤收集固体、干燥、然后真空(0.7mmHg)干燥过夜，得到6.06g(8%)标题产物，其有效纯度(HI)为96.6%(标题产物为92.6%而7-TES-紫杉酚为4.0%)。
元素分析(%)C57H73NO15Si·0.4EtOAc计算值 实测值C 65.44 65.49H 7.14 7.44N 1.30 1.47m.p.153-155℃[α]D-59.6(c 1，CHCl3)TLCRf＝0.31反相HPTLC，乙腈/水，70∶30，UV目测。
制备2′-MOP-7-三乙基甲硅烷基紫杉酚的另一种方法是按如下所述将7-0-TES浆果赤霉素Ⅲ就地偶合将7-0-TES-10-去乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(1.5177mmol)溶于3.5ml无水四氢呋喃中并冷却至-65～70℃。滴加六甲基二甲硅烷基氢化锂(LHMDS)(0.5相当量)并将混合物搅拌20分钟，然后加入乙酸酐(0.5相当量)并再搅拌20分钟。脱保护/酰化过程重复三次(总共1.5相当量LHMDS和2.0相当量乙酸酐)，在阴离子形成过程中有沉淀产生(反应混合物变稠)，并将混合物温热至0℃维持5分钟。
随后冷至-50℃并再滴加LHMDS处理，直接进行与化合物3的偶合反应(按照上述步骤(b)中所述方法)，由7-0-TES-10-去乙酰基浆果赤霉素Ⅲ得到851mg(55%)所需化合物。
实施例5[2aR-[2aα，4β，4aβ，6β，9α(αR＊，βS＊)，11α，12α，12aα，12bα]]-β-(苯甲酰氨基)-α-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)羟基苯丙酸，6，12b-双(乙酰氧基)-12-(苯甲酰氧基)-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氢-4-三乙基甲硅烷氧基-11-羟基-4a，8，13，13-四甲基-5-氧代-7，11-亚甲基-1H-环癸并[3，4]苯并[1，2-b]氧杂环丁烷-9-基酯的制备(2′-MOT-7-三乙基甲硅烷基-紫杉酚) 于17分钟内剧烈搅拌下向7-TES-浆果赤霉素Ⅲ(5.00g，7.13mmol)的THF(与钠和二苯酮新蒸的，12.5ml)溶液中于-50℃(仅于化合物完全溶于THF后冷却)滴加入LHMDS(7.85ml，1.0M THF溶液，7.85mmol)，并使得内部温度不超过-48℃，在滴加近于完成时有沉淀生成，这使得搅拌十分困难。为了能够进行有效搅拌，再加入1.5ml THF。然后使反应混合物热至-35℃并在此温度搅拌10分钟。将所得混浊溶液由-35℃再冷至-42℃，然后用导管滴加到氮杂环丁酮，化合物3(3.03g，8.92mmol)的THF(2.5ml)溶液中，在滴加期间保持温度在-19℃至-10℃之间，历时7分钟。烧瓶和导管用THF(0.5ml)洗涤并将洗液转移到反应中。滴加完成时，通过用冰水浴代替干冰浴将所得溶液升至0℃并再搅拌75分钟。反应经反相硅胶(EM Science RP-18 WF254s)TLC监测，用乙腈/水(70/30)作展开剂，标题产物的Rf为0.31，7-TES-紫杉酚的Rf为0.41，7-TES-浆果赤霉素Ⅲ的Rf为0.47。
反应用pH7的磷酸盐缓冲液(12ml)、随后立即用饱和NaHCO3溶液(30ml)骤停。将其用EtOAc(100ml)稀释并分层，有层用EtOAc(10ml)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到棕黄色固体状标题化合物粗品(9.13g)。将其溶于热EtOAc(20ml)中并于回流温度滴加己烷(13ml)。使溶液于室温静置36小时，然后于冷室中静置2小时。将固体过滤并用冷的己烷/EtOAc，5/1混合液(2×10ml)洗涤。(分别收集母液(1.52g，有效HI为52.4)和洗液(0.32g，有效HI为53.4)并放置一边)将所得白色结晶于吸滤器上干燥20分钟，然后真空(约0.5mmHg)干燥过夜，得到6.59g标题产物(以7-TES-浆果赤霉素Ⅲ为基准产率为89%)，其有效HI为99.3%(标题产物为96.0%和7-TES-紫杉酚为3.3%)。
元素分析(%)C57H73NO15Si计算值 实测值C 65.81 65.47H 7.07 7.12N 1.35 1.64m.p.153-155℃[α]D-59.6(c 1，CHCl3)TLCRf＝0.31 反相HPTLC，乙腈/水，70∶30，UV目测。
实施例6紫杉酚的制备[2aR-[2aα，4β，4aβ，6β，9α(αR＊，βS＊)，11α，12α，12aα，12bα]]-β-(苯甲酰氨基)-α-羟基-苯丙酸，6，12b-双(乙酰氧基)-12-(苯甲酰氧基)-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氢-4，11-二羟基-4a，8，13，13-四甲基-5-氧代-7，11-亚甲基-1H-环癸并[3，4]苯并[1，2-b]氧杂环丁烷-9-基酯 于12分钟内剧烈搅拌下向上述实施例5(“化合物5”，5.0g，4.81mmol;HI为99.3%，其中包括化合物5的HI为96.0和7-TES-紫杉酚的HI为3.3)的乙醇(EtOH，100ml)和THF(80ml)的溶液于0℃(在用冰浴冷却至0℃前，将化合物5溶于EtOH/THF中)滴加预冷的(约5℃)1.5N HCl(水溶液，aq)，在滴加1.5N HCl时出现的浑浊立即消失。将所得澄清溶液于0℃搅拌15分钟并于4℃静置19.5小时，HPLC分析等分试样(3μ Phenyl BD柱;35%CH3CN/65%H2O线性梯度洗脱26分钟;100%CH3CN线性梯度洗脱7分钟;35%CH3CN/65%H2O等效洗脱7分钟)表明有紫杉酚(98.6%)、7-TES-紫杉酚(0.6%)和极性杂质(0.3%)以及其它微量杂质存在。反应混合物用乙酸乙酯(EtOAc，200ml)稀释，用冷(约5℃)NaHCO3(500ml和2×200ml)洗涤，继续洗涤直至洗液的pH为约8.5。
合并的水层用EtOAc(2×100ml)萃取，将有机层合并，用盐水(300ml)洗涤，干燥(Na2SO4，100g)，过滤并浓缩，得到白色固体状紫杉酚粗产物(4.44g;HPLC HI 97.7%)。经温热(于水浴中温热至约40～45℃)将其溶于25ml甲醇(MeOH)/异丙醇(IPA)(1∶5.8)中并用H2O(1.4ml)稀释。于室温将所得溶液于己烷气氛下(于室温密闭系统中将含有紫杉酚粗品的MeOH/IPA/H2O溶液的容器放于另一更大的含有己烷(20ml)的容器体系中)放置16小时。将白色结晶(显微镜下观测到)固体过滤，用冷(5℃)己烷(25ml)洗涤并于高真空下干燥，得到3.8g(93.0%)紫杉酚，其HPLC HI为99.0%。将母液和洗液减压浓缩，得到0.28g(7.0%)浅黄色固体(HPLC HI 80.6%)，将其放置一边以待进一步处理。
元素分析(%)C47H51NO14·1.0H2O计算值 实测值C 64.74 64.71H 6.13 6.48N 1.61 1.57KF(H2O) 2.07 1.90m.p.211-213℃[α]D-51.5(c 1，CHCl3)TLCRf＝0.22;MeOH∶AcOEt∶己烷;0.6∶4.0∶5.4;UV和PMA目测。
实施例7紫杉酚的制备于0℃，60分钟内向含有化合物5(2′-MOP-7-三乙基甲硅烷基紫杉酚，20g，19.1mmol)的乙腈(800ml)和吡啶(48ml)的溶液(在2L聚乙烯瓶中)滴加48%氢氟酸水溶液(HF)(104ml)，在滴加期间内部温度不超过5℃。不搅拌下将澄清溶液于4℃保持24小时，反应用HPLC(Waters，Nova-Pak Phenyl，3.9×150mm柱;吸收峰227nm;流速2ml/分)监测;
色谱法条件0～26分钟，35%CH3CN/65%H2O至100%CH3CN，线性梯度洗脱，26～28分钟，100%CH3CN至35%CH3CN/65%H2O，线性梯度洗脱，28～35分钟，35%CH3CN/65%H2O，等效洗脱。
Rt13.73，7-TES-紫杉酚Rt6.65，紫杉酚Rt4.96，10-去乙酰基-紫杉酚反应19小时后，此混合物中仍含有0.36%7-TES-紫杉酚。24小时后，反应混合物中无7-TES-紫杉酚和10-去乙酰基-紫杉酚存在(杂质指数Ⅱ<0.04%)。然后将溶液用乙酸乙酯(1L)稀释并用1N HCl(800ml×2)洗涤。合并的水层用乙酸乙酯(400ml×1)萃取，将有机层合并并用饱和碳酸氢钠水溶液(800ml×5)、盐水(300ml×1)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到17.46g(约100%)白色固体状紫杉酚粗品，上述所得紫杉酚粗品的HPLCHI为98.7%，产率未校正。
元素分析(%)
C47H51NO14·1.3H2O计算值 实测值C 64.34 64.32H 6.16 5.99N 1.60 2.00KF(H2O) 2.67 2.00m.p.207.5-212℃(w/分解)[α]D-52.5(c 1，CHCl3)TLCRf＝0.22;硅胶;MeOH∶AcOEt∶己烷;0.6∶4.0∶5.4;UV和TMA目测。
实施例8紫杉酚的制备于40分钟内剧烈搅拌下向2′-MOP-7-TES-紫杉酚(化合物5，5.0g，4.81mmol，HI99.2%(包括2′-MOP-7-TES-紫杉酚，HI 95.7%))的乙醇(EtOH，50ml)和THF(40ml)溶液于0℃(冰浴，在冷至0℃之前将2′-MOP-7-TES-紫杉酚溶于EtOH/THF)滴加预冷(约5℃)的1.5N HCl(aq.，50ml)，加入1.5N HCl时出现的浑浊立即消失。将所得澄清溶液于-2℃搅拌1小时并于4℃静置22小时，此时沉淀出约100～200mg白色固体(紫杉酚)。(20小时后进行等分试样HPLC分析(3μ Phenyl BD柱)，35%CH3CN/65%H2O-线性梯度洗脱26分钟;100%CH3CN-线性梯度洗脱7分钟，35%CH3CN/65%H2O-等效洗脱7分钟)表明此时含有紫杉酚(97.2%)、7-TES-紫杉酚(0.2%)、10-去乙酰基紫杉酚(0.7%)和其它微量杂质。)反应混合物用EtOAc(200ml)稀释并用冷(约5℃)NaHCO3(400ml和2×200ml)洗涤。(水洗液的pH值优选应为约8.5(否则，优选应继续洗涤直至pH达到8.5))。合并的水层用EtOAc(2×80ml)萃取，将有机层合并，并用盐水(200ml)洗涤，干燥(Na2SO4，100g)，过滤并浓缩，得到白色固体状紫杉酚粗品(4.2g;HI 97.9%)。经温热(水浴中温热至约30～35℃)将其溶于31mlEtOH/庚烷(6∶4)并用H2O(0.15ml)稀释。将所得均匀澄清溶液于4℃静置约20小时，将白色结晶(显微镜下观察)固体过滤，用冷(5℃)庚烷(20ml)洗涤并高真空下干燥，得到3.72g(90.6%)紫杉酚，其HI为98.6%。将母液和洗液减压浓缩，得到紫杉酚粗品(0.45g)，将其结晶(溶于EtOH/庚烷(0.5∶0.3，4.6ml)和H2O(20μl)中并于4℃静置20小时)得到第二批白色结晶(显微镜下观测)固体(0.18g;4.0%;HI 92.0%)。
元素分析(%)C47N51NO14·2.55 H2O计算值 实测值C 62.73 62.35H 6.28 6.43N 1.56 1.94H2O 5.11 4.91mp＝207-208℃旋光度[α]0＝-52.3°(c 1，CHCl3)TLCRf＝0.22;硅胶;MeOH∶EtOAc∶己烷，0.6∶4.0∶5.4;UV和PMA目测。
HPLCHI＝98.6%。
权利要求
1.下列式Ⅰ的β-内酰胺或其盐 其中R1和R2(ⅰ)两者同时为相同的烷基；(ⅱ)一起形成环烷基；(ⅲ)一起形成环烯基；或(ⅳ)一起形成杂环基；R3为烷基；R4为芳基；R5为氢、芳基羰基或烷氧羰基。
2.根据权利要求1的β-内酰胺，其在环境条件下为晶体。
3.根据权利要求1的β-内酰胺，其基本上不含有其它异构体并且其中基团-OC(R1)(R2)(OR3)和R4彼此于顺式位置上。
4.根据权利要求1的β-内酰胺，其中R1和R2两者同时为相同的未取代的低级烷基，R3为未取代的低级烷基，R4为苯基以及R5为氢、苯甲酰基或叔丁氧羰基。
5.根据权利要求3的β-内酰胺，其为(3R-顺式)-3-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)-4-苯基-2-氮杂环丁酮。
6.根据权利要求3的β-内酰胺，其为(3R-顺式)-1-苯甲酰基-3-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)-4-苯基-2-氮杂环丁酮。
7.根据权利要求3的β-内酰胺，其为(3R-顺式)-1-叔丁氧羰基-3-(1-甲氧基-1-甲基乙氧基)-4-苯基-2-氮杂环丁酮。
8.一种制备下列式Ⅶ的带侧链紫杉烷或其盐的方法 其中R1和R2(ⅰ)两者同时为相同的烷基;(ⅱ)一起形成环烷基;(ⅲ)一起形成环烯基;或(ⅳ)一起形成杂环基;R3为烷基;R4为芳基;R5为氢、芳基羰基或烷氧羰基;和T为紫杉烷部分(在所述部分的C-13位上直接成键连接);该方法包括在偶合剂存在下将下列式Ⅰ的β-内酰胺或其盐与下列式Ⅷ紫杉烷化合物或其盐反应 其中R1、R2、R3、R4和R5如上所定义，其中T如上所定义;并且可任意地将所述式Ⅶ化合物中基团-OC(R1)(R2)(OR3)转变成羟基，从而生成下列式Ⅸ带侧链的紫杉烷或其盐 其中R4、R5和T为上所定义。
9.根据权利要求8的方法，其中式Ⅷ紫杉烷为下列式X的紫杉烷 其中Bz为苯甲酰基;Ac为乙酰基;R7为氢、烷基羰基或羟基保护基;和R8为氢或羟基保护基。
10.根据权利要求9的方法，其中所述式X的紫杉烷为7-0-三烷基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ。
11.根据权利要求8的方法，其中所述偶合剂为碱金属甲硅烷基氨化物碱或位阻的碱金属氨化物碱。
12.根据权利要求11的方法，其中所述偶合剂具有下列式Ⅺ结构 其中R9和R10为三烷基甲硅烷基、环烷基，或与和它们成键连接的氮原子一起形成杂环基;和M为碱金属。
13.根据权利要求12的方法，其中所述偶合剂为碱金属六甲基二甲硅烷基氨化物。
14.根据权利要求13的方法，其中所述碱金属六甲基二甲硅烷基氨化物为六甲基二甲硅烷基氨化锂。
15.根据权利要求9的方法，其中还包括脱除所得带侧链紫杉烷的紫杉烷部分上的一个或多个羟基保护基。
16.根据权利要求15的方法，其中使用酸进行脱保护反应。
17.根据权利要求10的方法，其中R1和R2两者同时为相同的未取代的低级烷基，R3为未取代的低级烷基，R4为苯基，并且R5为苯甲酰基或叔丁氧羰基。
18.根据权利要求17的方法，其中制得紫杉酚。
19.根据权利要求17的方法，其中制得taxotere。
20.下列式Ⅶ的带侧链的紫杉烷或其盐 其中R1和R2(ⅰ)两者同时为相同的烷基;(ⅱ)一起形成环烷基;(ⅲ)一起形成环烯基;或(ⅳ)一起形成杂环基;R3为烷基;R4为芳基;R5为氢、芳基羰基或烷氧羰基;以及T为紫杉烷部分(在所说部分的C-13位上直接成键连接)。
21.根据权利要求20的化合物，其中R1和R2两者同时为相同的未取代的低级烷基，R3为未取代低级烷基，R4为苯基，并且R5为苯甲酰基或叔丁氧羰基。
22.根据权利要求20的化合物，其为2′-MOP-7-三乙基甲硅烷基紫杉酚。
23.一种制备在C-13位上带侧链的紫杉烷的方法，包括在碱金属甲硅烷基氨化物碱或位阻的金属氨化物碱存在下，将在C-13位上带有羟基的紫杉烷与能够形成所述侧链的β-内酰胺反应。
全文摘要
本发明涉及在制备带侧链的紫杉烷如紫杉酚和紫杉酚衍生物中可用作中间体的新的β-内酰胺。本发明还涉及偶合β-内酰胺以形成此类带侧链的紫杉烷的新的方法以及涉及新的带侧链的紫杉烷。
文档编号C07F7/08GK1097416SQ9410289
公开日1995年1月18日 申请日期1994年3月19日 优先权日1993年3月19日
发明者J·K·托塔希尔, I·D·特里富诺维奇, D·J·库塞拉, 李文森 申请人:布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司