1.本发明涉及低聚肽技术领域，具体涉及一种海洋鱼皮胶原低聚肽的制备方法及基于其的 减肥咖啡。
背景技术：
2.胶原蛋白是生物高分子，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分 布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％-30％，某些生物体甚至高达80％以上。胶原多肽 营养价值高，保护胃黏膜，防止溃疡病。
3.海洋生物活性肽的制备方法主要有制备方法两条途径：一是利用生物活性酶将生物体内 的蛋白质进行降解，获得一些具有生理功能的生物多肽，二是从某些本身固有的一些天然肽 类物质的海洋生物中分离得到生物多肽。直接提取法制备生物活性肽，难以实现大规模工业 化生产。并且，利用这种方法提取得到的活性肽必然需要使用大量的有机溶剂，这些有机溶 剂不仅造成环境污染，而且也会带来所得的生物活性多肽类物质中有机溶剂残留的后续处理 等问题。而酶解法能在简单的条件下进行定位水解产生特定的肽片段，并且安全性较高、无 副作用且反应过程容易控制。因此，本发明采用酶解法制备海洋鱼皮胶原低聚肽。
4.现如今，肥胖病严重危害人类健康。目前全世界的减肥方法主要有六种，其中运动减肥 是首选有效的减肥方法，然而由于现代高效率快捷凑的现代生活使得人们很难抽出时间来履 行；中医减肥疗程较长，难以坚持；手术减肥有着一定的手术风险和并发症等隐患；药物减 肥其不良的副作用会破坏机体的体质健康；节食减肥会导致机体营养不良；营养配餐减肥方 法繁琐、步骤复杂难以实施。而目前大多数减肥药物都为食欲抑制剂、利尿剂、泻药等，通 过将人体中的水分和蛋白质排出达到减肥的假象，未能触及肥胖的根本，且长期服用还会对 人体机能造成损害。因此，人们迫切需要一种安全、高效、调节饮食习惯无副作用的食品。
技术实现要素：
5.本发明的一个目的在于提供一种具有减少脂肪吸收、增加免疫力、保护胃粘膜的作用的 海洋鱼皮胶原蛋白肽；本发明的另一个目的在于提供一种提取效率高的海洋鱼皮胶原低聚肽 的制备方法，获得的海洋鱼皮胶原低聚肽具有减少脂肪吸收、增加免疫力、保护胃粘膜的作 用；本发明的另一个目的在于提供一种能够提高机体免疫力、降低体脂率、保护胃粘膜的含 有上述海洋鱼皮胶原低聚肽的减肥咖啡。
6.为达到上述发明目的，采用如下技术方案。
7.一种海洋鱼皮胶原蛋白肽，其氨基酸序列如seq id no.1所示。
8.这种海洋鱼皮胶原蛋白肽序列为leu-val-arg-glu-arg，具有减少脂肪吸收、增加免疫力、 保护胃粘膜的作用。
9.优选地，海洋鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，包括如下步骤：
10.取海洋鱼皮粉分散在水中，调整ph后加入酶混合物恒温进行反应，反应结束后加热灭 活酶并进行过滤、干燥即得海洋鱼皮胶原低聚肽；从海洋鱼皮胶原低聚肽中检测并分离活性 肽段即得海洋鱼皮胶原蛋白肽。
11.优选地，从海洋鱼皮胶原低聚肽中检测并分离活性肽段获得海洋鱼皮胶原蛋白肽的方法 包括如下步骤：
12.(1)分离肽段：
13.使用反相高效液相色谱法对海洋鱼皮胶原低聚肽氨基酸进行肽段的分离，色谱条件为： c
18
反向色谱柱，流动相a为含有1％体积三氟乙酸的水，流动相b为水；收集明显的组分峰 并命名，干燥后备用；
14.(2)检测肽段：
15.对步骤(1)中收集的组分峰对应的肽段进行减少脂肪吸收能力测定，选取具有明显减少 脂肪吸收能力的一组进行序列鉴定；
16.(3)鉴定肽段：
17.使用正交加速电喷雾串联质谱仪对(2)中选择的组分峰对应的肽段进行结构鉴定。
18.本发明还公开了一种海洋鱼皮胶原低聚肽，含有氨基酸序列如seq id no.1所示的海洋 鱼皮胶原蛋白肽。
19.本发明海洋鱼皮胶原蛋白肽具有多种有益效果，其中提高免疫力、保护胃粘膜以及降低 体重的效果最明显，可以作为药品、保健品、食品的原料，制备具有减少脂肪吸收、提高免 疫力、养胃效果的药品、保健品或食品。
20.本发明还公开了上述海洋鱼皮胶原低聚肽的制备方法，包括如下步骤：
21.取海洋鱼皮粉分散在水中，调整ph后加入酶混合物恒温进行反应，反应结束后加热灭 活酶并进行过滤、干燥即得胶原低聚肽；其中，酶混合物包括中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰 蛋白酶。
22.优选地，鱼皮粉、水、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶的重量比为： 100-500:300-1200:0.1-0.5:0.1-0.5:0.1-0.5；恒温反应的时间为3-5h。
23.优选地，制备方法中还包括添加柯里拉京和黄芩素。使用这种方法制备的低聚肽不会对 其原有的生物活性和功能造成影响，并且由蛋白酶和柯里拉京、黄芩素组成的酶混合物具有 更好的提取效率，可以提高蛋白水解度。
24.更优选地，鱼皮粉、水、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、柯里拉京和黄芩素的重 量比为：100-500:300-1200:0.1-0.5:0.1-0.5:0.1-0.5:5-25:5-25；恒温反应的时间为3-5h。
25.优选地，反应温度为20-30℃。
26.优选地，反应ph为6-7。
27.优选地，海洋鱼皮选用深海三文鱼鱼皮。
28.优选地，海洋鱼皮胶原低聚肽的制备方法，包括如下步骤：
29.按重量份计，取100-500份海洋鱼皮粉分散在300-1200份水中，调整ph至6-7后加入 0.1-0.5份中性蛋白酶、0.1-0.5份木瓜蛋白酶、0.1-0.5份胰蛋白酶，20-30℃恒温进行反应3-5h； 反应结束后加热至90℃灭活酶并进行过滤，干燥滤液即得胶原低聚肽。
30.更优选地，所使用的酶酶活性为2400-2600u/g。
31.更优选地，过滤采用的是60-80目滤网进行第一次过滤，1500-2000da的滤膜进行第二次 过滤。
32.本发明还公开了上述海洋鱼皮胶原蛋白肽在制备提高免疫力和/或降低皮下脂肪用药物 和/或保健品和/或食品中的用途。
33.本发明还公开了上述海洋鱼皮胶原低聚肽在制备提高免疫力和/或降低皮下脂肪用药物 和/或保健品和/或食品中的用途。
34.本发明还公开了一种减肥咖啡，其特征在于，包括以下(1)或(2)或(3)任一种组合 物：
35.(1)海洋鱼皮胶原低聚肽、中链甘油三酯微囊粉、咖啡粉；
36.(2)海洋鱼皮胶原蛋白肽、中链甘油三酯微囊粉、咖啡粉；
37.(3)海洋鱼皮胶原蛋白肽、海洋鱼皮胶原低聚肽、中链甘油三酯微囊粉、咖啡粉。
38.这种咖啡添加有海洋鱼皮胶原低聚肽和/或蛋白肽，因此富含营养，具有提高免疫力和养 胃的作用；配合中链甘油三酯微囊粉、咖啡粉一同使用，还具有减轻体重、减肥减脂、减少 血液中甘油三酯、调节血压、减少血压大幅波动的功能。
39.优选地，中链甘油三酯微囊粉包括椰子油、低聚异麦芽糖、酪蛋白、抗性糊精、柠檬酸 钾、单双甘油脂肪酸酯、二氧化硅。
40.中链甘油三酯微囊粉有利于人体吸收，并且具有良好的保健效果，可以减少或消除体内 炎症；与其他配料一起服用时还能增加饱腹感，减轻饥饿感，有利于减肥减脂。
41.更优选地，中链甘油三酯微囊粉中各组成成分的重量配比为椰子油40-60份、低聚异麦 芽糖8-10份、酪蛋白6-9份、抗性糊精5-7份、柠檬酸钾1-2.5份、单双甘油脂肪酸酯2-5份、 二氧化硅0.5-2份。
42.更优选地，椰子油为冷榨法提取。
43.优选地，中链甘油三酯微囊粉的制备方法，包括如下步骤：
44.调制原料混合物
→
原料溶解
→
乳化
→
杀菌
→
均质
→
喷雾干燥
→
冷却
→
过筛。
45.更优选地，中链甘油三酯微囊粉的制备方法，包括如下步骤：
46.按重量份计，取40-60份椰子油加入2-5份单双甘油脂肪酸酯混匀得溶液a，取8-10份 低聚异麦芽糖、6-9份酪蛋白、5-7份抗性糊精、1-2.5份柠檬酸钾、0.5-2份二氧化硅混匀后 加入50-100份水，搅拌均匀即得溶液b；将溶液b边搅拌边缓慢加入溶液a中；之后60-70℃ 水浴10-20min；水浴后紫外杀菌1-3h并在500-1000r/min下均质处理；处理后进行喷雾干燥， 进风温度为150-180℃；干燥后冷却过1000目筛后即得中链甘油三酯微囊粉。
47.由这种方法制得的中链甘油三酯微囊粉将椰子油这种不易直接食用的油脂微胶囊化，并 且包埋效果好，十分稳定，可防止光、热、氧化及其他物质对其造成破坏，经长期储存后质 量及风味保存良好；并且可以充分发挥椰子油的保健效果，易于吸收并且具有一定消炎作用。
48.优选地，减肥咖啡的重量配比如下：中链甘油三酯微囊粉50-80份、咖啡粉20-35份、 海洋鱼皮胶原低聚肽5-10份。
49.优选地，减肥咖啡的重量配比如下：中链甘油三酯微囊粉50-80份、咖啡粉20-35份、 海洋鱼皮胶原蛋白肽5-10份。
50.优选地，减肥咖啡的重量配比如下：中链甘油三酯微囊粉50-80份、咖啡粉20-35份、 海洋鱼皮胶原低聚肽1-5份、海洋鱼皮胶原蛋白肽1-5份。
51.优选地，咖啡粉的制备方法，包括如下步骤：
52.以低温烘焙的方式将咖啡豆烘干，然后研磨成粉状，形成咖啡粉。
53.与现有技术相比，本发明的有益效果为：
54.本发明在制备海洋鱼皮胶原低聚肽的过程中使用含有柯里拉京和黄芩素的酶混合物，可 以增加蛋白质的水解度，获得分子量更小的低聚肽，使用这种低聚肽制备药品、保健品或食 品，更有利于人体吸收。此外，本发明制得的海洋鱼皮胶原低聚肽除了具有大部分胶原低聚 肽的美容和提高免疫力的作用外，还具有降低体脂率、降低血液中甘油三酯水平、保护胃粘 膜，促进胃粘膜恢复的作用；本发明制得的中链甘油三酯微囊粉粒径小，因此使用这种微囊 粉制备药品、保健品或食品，更有利于人体吸收。此外，中链甘油三酯微囊粉还具有消炎作 用，可以有效抑制炎症因子tfn-α和il-6的分泌。此外，本发明制得的减肥咖啡具有良好的 减轻体重、降低体脂率的作用。
附图说明
55.图1为反相高效液相色谱分离海洋鱼皮胶原低聚肽的结果；
56.图2为中链甘油三酯微囊粉粒径分布测定结果。
具体实施方式
57.这里将详细地对示例性实施例进行说明，以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代 表与本公开相一致的所有实施方式。相反，它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本公 开的一些方面相一致的方法的例子。
58.下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，或按照制造厂商所建议的条 件。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。其中以下试 验例中实验动物购自江苏艾菱菲生物科技有限公司。
59.实施例1
60.减肥咖啡的制备
61.1、制备海洋鱼皮胶原低聚肽
62.取200g三文鱼皮粉分散在500g水中，调整ph至6.5后加入0.2g中性蛋白酶、0.1g木 瓜蛋白酶、0.5g胰蛋白酶、9g柯里拉京、10.7g黄芩素，其中酶活性为2500u/g，24℃恒温进 行反应3h；反应结束后加热至90℃灭活酶；使用80目滤网进行第一次过滤，2000da的滤膜 进行第二次过滤，冷冻干燥滤液即得胶原低聚肽。
63.2、制备椰子油
64.将成熟的椰子取出椰肉，清洗干净后切块进行冷冻干燥，取干燥后的椰肉使用压榨机进 行压榨即得椰子油。
65.3、制备中链甘油三酯微囊粉
66.取60g椰子油加入5g单双甘油脂肪酸酯混匀得溶液a，取10g低聚异麦芽糖、9g酪蛋 白、7g抗性糊精、2g柠檬酸钾、2g二氧化硅混匀后加入100g水，搅拌均匀即得溶液b；将 溶液b边搅拌边缓慢加入溶液a中；之后70℃水浴15min；水浴后紫外杀菌3h并在1000r/min 下均
质处理；处理后进行喷雾干燥，进风温度为170℃；干燥后冷却并过1000目筛后即得中 链甘油三酯微囊粉。
67.4、制备咖啡粉
68.取鲜咖啡豆在120℃下烘焙30min后使用磨豆机研磨即得咖啡粉。
69.5、制备减肥咖啡
70.取中链甘油三酯微囊粉60g、咖啡粉30g、海洋鱼皮胶原低聚肽10g混合均匀并使用紫外 线杀菌1h，装袋即得减肥咖啡。
71.实施例2
72.减肥咖啡的制备
73.本实施例与实施例1的不同之处在于，步骤1中的酶混合物中不添加柯里拉京和黄芩素。
74.实施例3
75.减肥咖啡的制备
76.本实施例与实施例1的不同之处在于，步骤3如下：
77.制备中链甘油三酯微囊粉
78.取40g椰子油加入2g单双甘油脂肪酸酯混匀得溶液a，取8g低聚异麦芽糖、6g酪蛋白、 5g抗性糊精、1g柠檬酸钾、0.5g二氧化硅混匀后加入80g水，搅拌均匀即得溶液b；将溶液 b边搅拌边缓慢加入溶液a中；之后65℃水浴20min；水浴后紫外杀菌2h并在1000r/min下 均质处理；处理后进行喷雾干燥，进风温度为170℃；干燥后冷却并过1000目筛后即得中链 甘油三酯微囊粉。
79.实施例4
80.减肥咖啡的制备
81.1、制备海洋鱼皮胶原蛋白肽
82.(1)分离肽段：
83.使用反相高效液相色谱法对实施例1中制得的海洋鱼皮胶原低聚肽氨基酸进行肽段的分 离，色谱条件为：c
18
反向色谱柱，流动相a为含有1％体积三氟乙酸的水，流动相b为水： 乙腈：三氟乙酸＝80：20：0.1(v/v/v)；梯度洗脱条件为：
84.0-10min，流动相b：0％-5％；
85.10-20min，流动相b：5％；
86.20-35min，流动相b：5％-10％；
87.35-45min，流动相b：10％-15％；
88.45-60min，流动相b：15％；
89.60-70min，流动相b：15％-75％；
90.样品质量浓度：10mg/ml；检测波长：uv 220nm；流速：0.5ml/min；进样体积：100μl。 收集主要组分峰，挥去有机溶剂后冷冻干燥。
91.测定结果如图1所示。由图可知，本发明制备的海洋鱼皮胶原低聚肽共有9个明显的组 分峰，分别收集并命名为低聚肽1-9，冷冻干燥用于后续测定。
92.(2)检测肽段：
93.对步骤(1)中收集的组分峰对应的肽段进行调节脂肪吸收能力测定，选取具有明
显减少 脂肪吸收能力的一组进行序列鉴定。通过测定各个肽段对小鼠脂肪表观消化率的影响判断肽 段的调整脂肪吸收能力强弱。
94.取55只体重为25
±
2g的spf级小鼠适应性饲养1周后随机分为11组，每组5只；1-10 组饲喂高脂饲料，饲料配方为：基础饲料79.8％，牛胆盐0.2％，猪油10％、蛋黄粉10％，11 组饲喂基础饲料，自由采食，记录小鼠每日的采食量。连续饲喂30d后，1-9组每天灌入30mg/kg 的1-9的肽段，将肽段分散在3ml蒸馏水中灌入；10、11组灌入3ml蒸馏水；灌胃持续4 周，期间不改变各组小鼠饮食；四周后连续收集每组小鼠72h的粪便，每只小鼠的粪便取1g 用于检测；将粪便烘干至恒重后记录重量，使用索氏抽提法提取粪便后的脂肪，提取完毕后 记录粪便重量，两次称重的差值即为粪便中脂肪含量，计算脂肪表观消化率并取平均值记录。
95.脂肪表观消化率％＝(饲料中猪油含量-粪便中脂肪含量)/饲料中猪油含量
×
100％
96.测定结果如表1所示。
97.表1小鼠脂肪表观消化率
98.组别脂肪表观消化率(％)179.2277.6377.1478.5577.9678.3779.1871.3978.81078.41176.2
99.由表1可知，除第8组外，各组肽段对小鼠脂肪表观消化率的影响不明显，而服用8组 肽段的小鼠脂肪表观消化率明显降低，说明8组肽段减少了小鼠对摄入脂肪的消化吸收，有 利于减肥减脂。因此选择8进行鉴定。
100.(3)鉴定肽段：
101.使用正交加速电喷雾串联质谱仪对低聚肽8进行结构鉴定。质谱条件为：
102.离子化方式：纳升电喷雾正离子；雾化气体：n2；碰撞气体：ar；源温：80℃；锥孔电 压：50v；tof加速电压：9.1kv；mcp检测器电压：2150v；毛细管电压：800v；ms和ms/ms 的质量准确度：0.1u。
103.经测定，低聚肽8的序列如seq id no.1所示。
104.2、制备椰子油
105.同实施例1。
106.3、制备中链甘油三酯微囊粉
107.同实施例1。
108.4、制备咖啡粉
109.同实施例1。
110.5、制备减肥咖啡
111.取中链甘油三酯微囊粉60g、咖啡粉30g、海洋鱼皮胶原蛋白肽10g混合均匀并使用紫外 线杀菌1h，装袋即得减肥咖啡。
112.实施例5
113.减肥咖啡的制备
114.本实施例与实施例1的不同之处在于，步骤5中使用本实施例中制得的海洋鱼皮胶原蛋 白肽5g和实施例1中制得的海洋鱼皮胶原低聚肽5g代替海洋鱼皮胶原低聚肽10g。
115.(1)海洋鱼皮胶原蛋白肽的制备
116.取200g三文鱼皮粉分散在500g水中，调整ph至6.5后加入0.2g中性蛋白酶、0.1g木 瓜蛋白酶、0.5g胰蛋白酶，其中酶活性为2500u/g，24℃恒温进行反应3h；反应结束后加热 至90℃灭活酶；使用80目滤网进行第一次过滤，2000da的滤膜进行第二次过滤，冷冻干燥 滤液即得胶原低聚肽。
117.(2)分离肽段：
118.使用反相高效液相色谱法对步骤(1)中制得的海洋鱼皮胶原低聚肽氨基酸进行肽段的分 离，色谱条件为：c
18
反向色谱柱，流动相a为含有1％体积三氟乙酸的水，流动相b为水： 乙腈：三氟乙酸＝80：20：0.1(v/v/v)；梯度洗脱条件为：
119.0-10min，流动相b：0％-5％；
120.10-20min，流动相b：5％；
121.20-35min，流动相b：5％-10％；
122.35-45min，流动相b：10％-15％；
123.45-60min，流动相b：15％；
124.60-70min，流动相b：15％-75％；
125.样品质量浓度：10mg/ml；检测波长：uv 220nm；流速：0.5ml/min；进样体积：100μl。 收集主要组分峰，挥去有机溶剂后冷冻干燥。
126.经测定共有9个明显的组分峰，分别收集并命名为低聚肽1-9，按照实施例4中(2)检 测肽段检测低聚肽1-9对小鼠脂肪表观消化率的影响，其中服用低聚肽8的小鼠脂肪表观消 化率最低，选择8进行肽段鉴定，其序列如seq id no.1所示。因此，冷冻干燥后取第8组 用于制备减肥咖啡。
127.对比例1
128.减肥咖啡的制备
129.本对比例与实施例1的不同之处在于，仅含有实施例1中制得的海洋鱼皮胶原低聚肽。
130.对比例2
131.减肥咖啡的制备
132.本对比例与实施例1的不同之处在于，仅含有实施例1中制得的中链甘油三酯微囊粉。
133.对比例3
134.减肥咖啡的制备
135.本对比例与实施例1的不同之处在于，仅含有实施例1中制得的咖啡粉。
136.对比例4
137.减肥咖啡的制备
138.本对比例与实施例1的不同之处在于，不含有咖啡粉。
139.对比例5
140.减肥咖啡的制备
141.本对比例与实施例1的不同之处在于，不含有中链甘油三酯微囊粉。
142.对比例6
143.减肥咖啡的制备
144.本对比例与实施例1的不同之处在于，不含有海洋鱼皮胶原低聚肽。
145.试验例1
146.海洋鱼皮胶原低聚肽性能测定
147.一、海洋鱼皮胶原低聚肽的相对分子质量分布
148.使用高效凝胶过滤色谱法对实施例1中制得的海洋鱼皮胶原低聚肽的分子质量分布进行 测定。测定条件为：
149.色谱柱7.8
×
300mm，5μm；流动相乙腈：水：三氟乙酸＝45：55：0.1(v/v/v)，流速1ml/min。 其中标准品分别为细胞色素c(分子量为12400da)、抑肽酶(分子量为6512da)、杆菌肽(分 子量为1450da)、甘氨酸-甘氨酸-色氨酸-精氨酸(分子量为451da)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(分 子量为189da)。
150.测定结果如表2所示。(2000da的滤膜进行第二次过滤，将由2～10个氨基酸构成的称为 低聚肽，最大的氨基酸分子量为201.213)
151.表2海洋鱼皮胶原低聚肽相对分子质量分布
[0152][0153]
由表2可知，本发明实施例1-2制备方法制备的海洋鱼皮胶原低聚肽大多为180-500da， 分子量较小，说明所得低聚肽质量良好。此外，实施例1制备方法制备的海洋鱼皮胶原低聚 肽在180-500da的占比远高于实施例2，这可能是由于柯里拉京和黄芩素的加入能够增加海 洋鱼皮胶原蛋白水解程度，得到分子量更小的肽段。
[0154]
二、海洋鱼皮胶原低聚肽氨基酸组成
[0155]
根据gb/t5009.124-2016《食品中氨基酸的测定》中记载的方法对实施例1中制得的海洋 鱼皮胶原低聚肽氨基酸组成进行测定，测定结果如表3所示。
的去氧胆酸钠2ml灌胃一次，每3d使用50％酒精2ml灌胃一次，连续进行8周；5组正常 饲喂，使用蒸馏水进行灌胃；8周后，1-3组按照100mg/kg给与实施例1-2中步骤1制得的 海洋鱼皮胶原低聚肽粉，分散在3ml蒸馏水中进行灌胃，3、4组使用蒸馏水进行灌胃，连续 进行4周；4周后最后一次给药后禁食不禁水12h，处死小鼠并测量小鼠胃粘膜损伤面积，采 用网格计算损伤面积百分比并记录平均值，测定结果如表4所示。
[0174]
表4大鼠胃粘膜损伤面积
[0175][0176][0177]
由表4可知，服用实施例1-2中制得的海洋鱼皮胶原低聚肽的小鼠胃粘膜损伤面积远小 于不服用的小鼠，并且损伤面积接近正常饲喂的小鼠，说明本发明制得的海洋鱼皮胶原低聚 肽具有保护胃粘膜，促进胃粘膜恢复的作用。此外，还可以看出实施例1中制得的海洋鱼皮 胶原低聚肽对胃粘膜的恢复效果优于实施例2，这可能是由于柯里拉京和黄芩素的加入能够 增加海洋鱼皮胶原蛋白水解程度，得到分子量更小的肽段，更有利于胃的吸收，从而起到更 好的保护胃粘膜的效果。
[0178]
试验例2
[0179]
中链甘油三酯微囊粉粒径分布测定
[0180]
采用激光粒子散射仪测定实施例1中喷雾干燥前混合液中的中链甘油三酯微囊粉粒径分 布。测定结果如图2所示。
[0181]
由图2可知，中链甘油三酯微囊粉大多分布在10μm附近，其中分布在5-15μm的约占 84.61％，说明中链甘油三酯微囊粉颗粒大小分布比较均匀，较为集中。
[0182]
试验例3
[0183]
一、减肥咖啡对肥胖小鼠体重和血液中甘油三酯的影响
[0184]
取65只体重为25
±
2g的spf级小鼠适应性饲养1周后随机分为13组，每组5只；1-12 组饲喂高脂饲料，饲料配方为：基础饲料79.8％，牛胆盐0.2％，猪油10％、蛋黄粉10％，13 组饲喂基础饲料。连续饲喂30d后进行灌胃，1-3组灌入实施例1-3制得的减肥咖啡，灌入量 为100mg/kg，分散在3ml蒸馏水中灌入；4、5组灌入实施例4、5制得的减肥咖啡，灌入量 为100mg/kg，分散在3ml蒸馏水中灌入；6-11组灌入对比例1-6制得的减肥咖啡，灌入量为 100mg/kg，分散在3ml蒸馏水中灌入；12、13组灌入蒸馏水3ml。连续灌胃30d后禁食不 禁水12h，测定每组小鼠体重和血液中甘油三酯，血液中甘油三酯采用小鼠甘油三酯(tg) elisa试剂盒(购自上海研启生物科技有限公司)按照说明书操作步骤进行检测，取平均值 记录。测定结果如表5所示。
[0185]
表5小鼠体重和血液中甘油三酯测定结果
[0186][0187][0188]
由表5可知，对比1-3组和12、13组的检测结果可知，实施例1-3制得的减肥咖啡具有 良好的减重和降低甘油三酯的功能，使肥胖小鼠的体重和血液中甘油三酯含量达到正常小鼠 的水平；对比4、5组和1-3组的检测结果可知，仅含有海洋鱼皮胶原蛋白肽的减肥咖啡减重 效果较差，可以推断海洋鱼皮胶原低聚肽的减重作用来自其所含有的其他肽段；对比6-11组 和12、13组的检测结果可知，海洋鱼皮胶原低聚肽、中链甘油三酯微囊粉以及咖啡在单独使 用或是两两组合使用时均具有一定的减重和降低血液中甘油三酯含量的作用，但效果不及三 者共同使用。
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二、减肥咖啡对人体脂率的影响
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选取9名无心血管疾病，缺乏体育锻炼经历的成年受试者，随机分为3组，第一组服用 实施例1制得的减肥咖啡，第二组服用实施例4制得的减肥咖啡，第三组服用实施例5制得 的减肥咖啡；在不改变原有饮食习惯的条件下，每天服用两次减肥咖啡，每次服用8g，持续 4个月，期间不进行运动，测量并记录受试者体重、bmi、体脂率的变化。测量结果记录如表 6所示。
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表6受试者体重、bmi、体脂率的变化
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由表6可知，9名受试者的体重、bmi指数和体脂率均下降，说明本发明制得的减肥咖 啡具有减轻体重和体脂率的作用，其中第一组的受试者无论男女，减重量都远大于其他两组 组，而第二组的减重量较其他两组较少，说明减肥咖啡中添加海洋鱼皮胶原低聚肽的效果好 于仅添加海洋鱼皮胶原蛋白肽。
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以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说， 本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、 改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。