1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及溴隐亭在制备治疗非洲猪瘟的产品中的应用。
背景技术：
2.非洲猪瘟(african swine fever，asf)是一种通过非洲猪瘟病毒(african swine fevervirus，asfv)感染家猪和野猪而导致的一种急性、出血性的烈性传染病。非洲猪瘟病毒归属于非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属，是目前仅有的虫媒dna病毒。非洲猪瘟病毒粒子直径约250nm，呈二十面体形态，具有多层结构，包括类核、核壳、双层内膜、衣壳和病毒通过质膜出芽时获得的包膜。非洲猪瘟病毒的ps273r蛋白酶参与切割加工非洲猪瘟病毒的多聚蛋白pp220和pp62，该酶是由非洲猪瘟病毒基因ps273r编码的一种半胱氨酸蛋白酶，依据划分情况属于sumo-1特异性蛋白酶家族，该酶分子量为31kda。ps273r蛋白酶对于这种病毒粒子的成熟非常关键，若抑制ps273r蛋白酶表达，pp220和pp62这两种多聚蛋白体的加工将会受到抑制，导致病毒将组装成不规则的二十面体粒子，表现为一个厚度不均匀的异常核壳和一个偏离中心位置的类核，从而影响病毒的感染能力，因此ps273r蛋白酶被认为是设计和开发治疗非洲猪瘟病毒产品的潜在靶点。
3.目前尚无有效的产品可以有效抑制ps273r蛋白酶。
技术实现要素：
4.有鉴于此，本发明的目的在于提供了溴隐亭在制备治疗非洲猪瘟的产品中的应用，溴隐亭可以显著抑制非洲猪瘟病毒的ps273r蛋白酶，能作为制备治疗非洲猪瘟的产品应用。
5.本发明提供了溴隐亭在制备抑制sumo-1蛋白酶家族中的酶的活性的产品中的应用。
6.优选的，所述sumo-1蛋白酶家族中的酶包括ps273r蛋白酶。
7.优选的，所述ps273r蛋白酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。
8.本发明提供了溴隐亭在制备治疗非洲猪瘟的产品中的应用。
9.本发明还提供了溴隐亭在制备抑制非洲猪瘟病毒活性的产品中的应用。
10.优选的，所述产品包括药品、疫苗、试剂或试剂盒。
11.本发明提供了溴隐亭(bromocriptine)在制备ps273r蛋白酶的抑制剂中的应用，溴隐亭可以显著抑制非洲猪瘟病毒的ps273r蛋白酶，能作为制备治疗非洲猪瘟的产品应用。
附图说明
12.图1为编码ps273r蛋白酶的cdna序列；
13.图2为利用sds-page凝胶电泳鉴定收集样品的质量的结果，其中a：ps273r蛋白酶
molecules公司。
27.下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。
28.实施例1
29.1、重组ps273r蛋白酶的诱导表达
30.在ncbi gene数据库中查询到非洲猪瘟病毒ps273r蛋白酶的序列号为22220340(图1)，然后构建重组质粒ps273r/pet-28b(+)并将其转化到大肠杆菌菌株bl-21(de3)中进行ps273r蛋白酶的原核表达。重组蛋白酶通过0.8mm的iptg诱导表达后，从大肠杆菌裂解物的可溶性组分中纯化出来。重组蛋白通过ni-ntahis bind resin镍柱进一步纯化后经rtev蛋白酶切割his标签。产物通sephadex g-50(superfine)葡聚糖凝胶过滤柱和阳离子交换柱(cytiva)分离纯化后，利用sds-page凝胶电泳鉴定收集样品的质量，结果参见图2和图3。
31.2、bromocriptine对非洲猪瘟病毒ps273r蛋白酶的抑制试验
32.ps273r蛋白酶对非洲猪瘟病毒(asfv)包装至关重要，已被视为重要的抗病毒靶点。bromocriptine(溴隐亭，分子式：c
32h40
brn5o5)的浓度梯度设置为0μm、10μm、20μm、40μm和100μm，每种浓度设置3个复孔。将bromocriptine和ps273r蛋白酶在37℃下共同孵育15min，加入底物bz
–
nle
–
gly
–
gly
–
arg
–
amc，底物浓度为100μm和200μm，该底物被ps273r切割后，在360nm的激发光下会发出荧光，利用酶标仪(biotek仪器有限公司，美国)在460nm处检测吸收光，产生荧光的结果显示为相对荧光单位(rfu)，使用graphpad prism 6软件生成酶反应曲线。结果参见图3，结果表明，bromocriptine可以抑制ps273r蛋白酶。用graphpad prism6软件作出ps273r蛋白酶被bromocriptine抑制酶活的lineweaver-burk图，结果参见图4。图4显示bromocriptine是ps273r蛋白酶的竞争性抑制剂，通过dixon方法计算出以上各蜱虫防御素的酶抑制常数，即ki值，bromocriptine对该酶的抑制常数ki为72.742
±
12.621μm。
33.尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
技术特征：
1.溴隐亭在制备抑制sumo-1蛋白酶家族中的酶的活性的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述sumo-1蛋白酶家族中的酶包括ps273r蛋白酶。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述ps273r蛋白酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。4.溴隐亭在制备治疗非洲猪瘟的产品中的应用。5.溴隐亭在制备抑制非洲猪瘟病毒活性的产品中的应用。6.根据权利要求1～5任意一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括药品、疫苗、试剂或试剂盒。
技术总结
本发明提供了溴隐亭在制备治疗非洲猪瘟的产品中的应用，属于生物医药技术领域。溴隐亭可以显著抑制非洲猪瘟病毒的pS273R蛋白酶，能作为制备治疗非洲猪瘟的产品应用。能作为制备治疗非洲猪瘟的产品应用。能作为制备治疗非洲猪瘟的产品应用。
技术研发人员：赖仞 靳林 刘洋 王菁菁
受保护的技术使用者：中国科学院昆明动物研究所
技术研发日：2021.10.29
技术公布日：2022/1/28