1.本发明属于药剂技术领域，具体涉及一种迷迭香精油纳米乳凝胶、制备方法及其应用。


背景技术：

2.迷迭香，拉丁学名(rosmarinus officinalis)，是双子叶植物纲、唇形科、迷迭香属植物灌木，喜温暖气候，原产欧洲地区和非洲北部地中海沿岸。据文献记载，迷迭香在三国魏文帝十七自西域引入我国。迷迭香是一种重要的香料，同时其精油还具有很强的抗炎和抗氧化作用。迷迭香精油(reo)是从迷迭香中提取出来的挥发性成分，主要包括单萜、倍半萜等。目前，reo主要应用于日用化工、食品和保健等领域。
3.reo是一种无色至淡黄色的挥发性液体，具有抗炎、抗氧化、抗真菌的作用，对心血管有保护作用。但是，reo有较特异的气味，对皮肤的刺激性过强；在水中的溶解度极低，几乎不溶于水，常温下存放也不稳定，挥发性较强、稳定性较弱，限制了reo产品的使用。
4.目前，为了提升精油类药物的生物利用度，改善其稳定性，通常以纳米乳作为新型载药系统，纳米乳(nanoemulsion)系由油、水、表面活性剂和助表面活性剂组成的粒径为1～100nm、具有各向同性、外观澄清透明、热力学稳定的均相分散体系。纳米乳作为新型载药系统，有着稳定性好、粒径小、易吸收、可提高难溶性药物的溶解度等优点，得到了医药、化妆品、食品等多个行业的广泛关注与研究。现有技术中将精油类药物制成纳米乳，虽然能够提升了精油类药物的生物利用度，但是在使用的过程中，纳米乳流动性强，不易黏附肌肤上。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于针对上述现有技术存在的不足，提供了一种迷迭香精油纳米乳凝胶、制备方法及其应用，该乳凝胶是通过亲水性高分子吸水溶胀而得的三维网络结构，其网络骨架使其具有良好的载药能力，可使药物分散于凝胶中缓慢稳定释放。凝胶具有保湿作用，易涂展，肤感好，在经皮给药系统中发挥着重要的作用。它具有溶胀性、触变性、粘合性，因此可加强纳米乳对皮肤的黏附。
6.本发明第一个目的是提供一种迷迭香精油纳米乳凝胶，由以下重量比的原料制成：卡波姆1～3.5wt％，甘油5～15wt％，丙二醇5.5～10.5wt％，迷迭香精油纳米乳0.5～2.0wt％，余量为水。
7.优选的，，所述迷迭香精油纳米乳由以下重量比的原料制成：表面活性剂12～18wt％，助表面活性剂12～18wt％，迷迭香精油6.9～13.8wt％，水55.2～62.1wt％。
8.更优选的，所述表面活性剂为吐温80、吐温20、聚氧乙烯蓖麻油中的一种或多种；所述助表面活性剂为1,2-丙二醇、聚乙二醇400、无水乙醇中的一种或多种。
9.更优选的，所述表面活性剂为聚氧乙烯蓖麻油，所述助表面活性剂为无水乙醇。
10.更优选的，所述迷迭香精油是按照以下步骤提取：将迷迭香粗粉分散于6～10倍的
水中，以水蒸气蒸馏法回流提取5～8h，提取温度为100～105℃，即得迷迭香精油。
11.本发明第二个目的提供一种迷迭香精油纳米乳凝胶的制备方法，包括以下步骤：
12.将卡波姆分散于水中，溶胀后，依次加入甘油、丙二醇混合均匀，再加入迷迭香精油纳米乳，及加入适量的防腐剂后，混合均匀，即得所述迷迭香精油纳米乳凝胶。
13.优选的，所述防腐剂为山梨酸钾。
14.本发明第三个目的是提供一种迷迭香精油纳米乳凝胶在抑菌抗炎中的应用。
15.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
16.本发明提供了迷迭香精油纳米乳凝胶，是一种外服用的膏药，该迷迭香精油纳米乳凝胶制剂可减小其刺激性且抗炎效果良好，在保湿性、气味及美观性等方面均得到好评，且在试验中未发现毒副作用和不良反应，达到了令人满意的效果，有广阔的应用前景和显著的经济及社会效益。
17.本发明提供的迷迭香精油纳米乳凝胶是采用了亲水性高分子吸水溶胀而得的三维网络结构，其网络骨架使其具有良好的载药能力，可使药物分散于凝胶中缓慢稳定释放。凝胶具有保湿作用，易涂展，肤感好，在经皮给药系统中发挥着重要的作用。它具有溶胀性、触变性、粘合性，因此可加强纳米乳对皮肤的黏附。
18.本发明主要利用迷迭香精油所具有的抑菌抗炎性能，通过配方的设计及调配制得纳米乳，再通过选用合理的凝胶基体及各组分，得到迷迭香精油纳米乳凝胶，该纳米乳凝胶，其具有光泽，澄明清晰，粘度适中，气味适宜的半固体，成品较均匀、黏度较好，涂展性良好、性质稳定，能够有效粘附于肌肤上，抗炎实验结果显示将迷迭香精油制备成凝胶制剂可减小其刺激性且抗炎效果良好。
19.本发明提供的迷迭香精油纳米乳具有良好的热稳定性、冷稳定性及离心稳定性，从而实现迷迭香精油纳米乳凝胶的制取。
附图说明
20.图1为本发明提供的迷迭香精油纳米乳结构示意图。
21.图2为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳外观照片。
22.图3为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳及迷迭香精油、未加迷迭香精油的纳米乳紫外全波长扫描曲线图。
23.图4为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳的粒径及聚合物分散性指数。
24.图5为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳、迷迭香精油及空白纳米乳抑菌活性抑菌实验结果柱形。
25.图6为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳、迷迭香精油及空白纳米乳抑菌活性抑菌圈照片。
26.图7为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳、迷迭香精油及空白纳米乳细胞迁移图。
27.图8为实施例4提供的迷迭香精油纳米乳凝胶的外观照片。
28.图9为实施例4提供的迷迭香精油纳米乳凝胶、迷迭香精油及空白组皮肤刺激性实验照片。
29.图10为实施例4提供的迷迭香精油纳米乳凝胶、空白凝胶及模型组抗炎照片。
具体实施方式
30.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
31.下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明。
32.需要说明的是，下述各实施例中采用试剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到；所述实验方法中如无特殊说明，均为常规方法。
33.下述采用的卡波姆为卡波姆940；
34.下述各实施例中采用的迷迭香精油是按照以下步骤制得：
35.采用水蒸气蒸馏法提取迷迭香精油：称取迷迭香粗粉50g，置于1000ml圆底烧瓶，加入8倍量蒸馏水，以水蒸气蒸馏法回流提取5h，提取温度为105℃，即得迷迭香精油。
36.实施例1
37.一种迷迭香精油纳米乳，见图1所示，由以下重量比的原料制成：聚氧乙烯蓖麻油15.5wt％，无水乙醇15.5wt％，迷迭香精油6.9wt％，水62.1wt％。
38.上述迷迭香精油纳米乳是按照以下步骤制得：
39.将迷迭香精油与去离子水缓缓滴加于聚氧乙烯蓖麻油与无水乙醇混合溶液中，溶液经历相转变的过程，从澄清变浑浊又变澄清，即得迷迭香精油纳米乳。
40.实施例2
41.与实施例1相同，不同之处在于，迷迭香精油13.8wt％，水55.2wt％；利用吐温80代替聚氧乙烯蓖麻油，以聚乙二醇400代替无水乙醇。
42.实施例3
43.与实施例1相同，不同之处在于，利用吐温20代替聚氧乙烯蓖麻油，以1,2-丙二醇代替无水乙醇。
44.实施例4
45.一种迷迭香精油纳米乳凝胶，由以下重量比的原料制成：卡波姆1.0wt％，甘油10wt％，丙二醇8.4wt％，实施例1提供的迷迭香精油纳米乳1.0wt％，余量为水。
46.上述迷迭香精油纳米乳凝胶是按照如下方法制得：
47.称取40.0g已溶胀完全的2.5％卡波姆置250ml的烧杯中，加入60.0ml水，搅拌均匀，得ⅰ相；称取甘油12.4g、丙二醇10.4g，在磁力搅拌下加入ⅰ相中，得ⅱ相；实施例1提供的迷迭香精油纳米乳1.24g加入ⅱ相中，搅拌均匀，得ⅲ相；加0.6％的山梨酸钾水溶液3.0g，充分搅拌均匀，即得迷迭香精油纳米乳凝胶，其中1ml凝胶制剂相当于含约1％的reo纳米乳。
48.实施例5
49.与实施例4相同，不同之处在于，由以下重量比的原料制成：卡波姆1wt％，甘油5wt％，丙二醇8.4wt％，实施例1提供的迷迭香精油纳米乳1.0wt％，余量为水。
50.实施例6
51.与实施例4相同，不同之处在于，由以下重量比的原料制成：卡波姆3.5wt％，甘油15wt％，丙二醇8.4wt％，实施例1提供的迷迭香精油纳米乳1.0wt％，余量为水。
52.实施例7
53.与实施例4相同，不同之处在于，由以下重量比的原料制成：卡波姆2.5wt％，甘油5wt％，丙二醇5.5wt％，实施例1提供的迷迭香精油纳米乳0.5wt％，余量为水。
54.实施例8
55.与实施例4相同，不同之处在于，由以下重量比的原料制成：卡波姆1.5wt％，甘油12wt％，丙二醇10.5wt％，实施例1提供的迷迭香精油纳米乳2.0wt％，余量为水。
56.为了说明本发明提供的迷迭香精油纳米乳及迷迭香精油纳米乳凝胶的各项性能，则对实施例1提供的迷迭香精油纳米乳和实施例4提供的迷迭香精油纳米乳凝胶进行测试。
57.一、对实施例1提供的迷迭香精油纳米乳进行相关性能测试
58.(1)reo纳米乳的外观，见图2所示，
59.图2为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳外观照片，从图2可知，reo纳米乳的外观应为无色、澄清透明且流动性好，可产生丁达尔效应。图2(b)中通过一束光照射纳米乳，能够清楚的看到光束穿过纳米乳，进一步说明reo纳米乳的外观应为无色、澄清透明。
60.(2)紫外全波长扫描，见图3所示
61.图3为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳及迷迭香精油、未加迷迭香精油的纳米乳紫外全波长扫描曲线图，具体见迷迭香精油纳米乳及迷迭香精油、未加迷迭香精油的纳米乳使用无水乙醇作为溶剂，对reo、reo纳米乳以及空白纳米乳进行紫外全波长扫描。图3可知，200-400nm波长下空白纳米乳对reo无干扰，同时表明reo制备成reo纳米乳后变成了新的物质。
62.(3)reo纳米乳的粒径及pdi，见图4所示
63.图4为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳的粒径及聚合物分散性指数(pdi)，具体测试方法，取制备好的reo纳米乳100μl，用900μl超纯水稀释，室温平衡2min后，用马尔文激光粒度仪检测reo纳米乳粒径及pdi，重复3次。从图4可知，制备出的reo纳米乳平均粒径为18.43
±
0.5nm，pdi为0.086
±
0.03，说明其粒径符合要求，且分散均匀。
64.(4)reo纳米乳稳定性的考察
65.①
离心稳定性
66.取适量制备好的reo纳米乳置于离心管中，于10000rpm下离心15min，观察reo纳米乳外观，若仍保持澄清透明，无沉淀现象发生，则证明其离心稳定性良好。
67.②
热稳定性
68.取适量reo纳米乳，分别于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃下加热15min，观察其外观，若仍保持澄清透明，无沉淀现象发生，则证明热稳定性良好。
69.③
冷稳定性
70.取适量reo纳米乳于4℃冷藏30min，观察其外观，若仍保持澄清透明，无沉淀现象发生，则证明冷稳定性良好。
71.(5)reo及reo纳米乳的抑菌活性
72.采用琼脂扩散法测定了reo、reo纳米乳及空白纳米乳的抑菌圈直径；具体将供试细菌在营养琼脂上于37℃生长18～24h。挑取一环接种到灭菌后的培养基中，制备细菌悬浮液，将100μl的菌液涂布在固体营养琼脂培养基上。将培养基分为3个区域，在各个区域中间放置灭菌后的6mm滤纸片，分别于reo、空白纳米乳、青霉素、迷迭香水提物、迷迭香醇提物、
reo纳米乳(以reo含量计等量reo)及10％的dmso溶液中浸泡30min，迅速盖上培养皿盖。并将培养皿于37℃下孵育24h。采用十字交叉法测量抑菌圈直径，实验重复3次，取平均值。见图5所示，及表1；
73.表1为抑菌实验结果
[0074][0075]
表1为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳、迷迭香精油及空白纳米乳抑菌活性抑菌实验结果。可以看出reo及reo纳米乳对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有较为明显的抑菌效果，对表皮葡萄球菌和白色念珠菌也有一定的抑菌效果，而空白纳米乳未出现抑菌圈，说明空白纳米乳对实验结果无影响。
[0076]
图5为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳、迷迭香精油及空白纳米乳抑菌活性抑菌实验结果柱形；
[0077]
图6为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳、迷迭香精油及空白纳米乳抑菌活性抑菌圈照片，其中图6(a)为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳、迷迭香精油及空白纳米乳对金黄色葡萄球菌抑菌效果图，图6(b)为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳、迷迭香精油及空白纳米乳对大肠杆菌抑菌效果图；图6(a)和图6(b)中，1.reo纳米乳；2.reo；3空白纳米乳。
[0078]
从图5～6，及表1可知，reo及reo纳米乳对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有较为明显的抑菌效果，而空白纳米乳未出现抑菌圈，说明空白纳米乳对实验结果无影响。
[0079]
(6)细胞迁移实验
[0080]
将hek-a细胞以5
×
105细胞/孔种于背面横线标记的6孔板中24h后，用无菌枪头于背面横线垂直划痕，pbs清洗3次，分别加入不含血清的培养基及reo 4μl、reo纳米乳4μl以及空白纳米乳，置于37℃，5％co2的恒温、恒湿的无菌培养箱中进行常规培养，在12h、24h观察拍照。见图7所示；
[0081]
图7为实施例1提供的迷迭香精油纳米乳、迷迭香精油及空白纳米乳细胞迁移图；其中，图7(a)空白纳米乳；图7(b)加入reo24 h；图7(c)加入reo纳米乳24h，图7(d)增值率柱形图；
[0082]
从图7可知，使用hek-a细胞(人表皮角质细胞)进行划痕实验，加入reo纳米乳4μl，
分别于12h和24h观察拍照。从图可以看出，划痕的间距变窄，说明reo纳米乳可以促进皮肤细胞的增殖。
[0083]
二、对实施例4提供的迷迭香精油纳米乳凝胶进行相关性能测试
[0084]
(1)迷迭香精油纳米乳凝胶的外观照片，见图8所示；
[0085]
从图8可以看出制得的成品为表面较平整，有光泽，澄明清晰，粘度适中，气味适宜的半固体，成品较均匀、黏度较好，涂展性良好、性质稳定。
[0086]
(2)皮肤刺激性实验
[0087]
取15只成年雄性健康小鼠，分为reo组、reo纳米乳凝胶组和空白组，分别在reo组和reo纳米乳凝胶组小鼠的左耳外侧涂抹reo和reo纳米乳，空白组不做处理，每5min观察一次小鼠耳廓状态，并拍照记录。见图9所示
[0088]
图9为实施例4提供的迷迭香精油纳米乳凝胶、迷迭香精油及空白组皮肤刺激性实验照片；其中，图9(a)空白组；图9(b)reo组；图9(c)reo纳米乳凝胶组
[0089]
从图9中可知，两组小鼠同时涂抹reo纳米乳凝胶和reo，在相同的时间点观察拍照，可以看出涂抹reo的小鼠耳廓明显红肿，说明将reo制备成reo纳米乳凝胶后对皮肤的刺激性明显减轻。
[0090]
(3)抗炎实验
[0091]
取15只成年雄性健康小鼠，分为模型组、reo纳米乳凝胶给药组和空白凝胶组，分别在小鼠的左耳外侧涂抹二甲苯。10min后在给药组小鼠左耳涂抹reo纳米乳，在模型组小鼠左耳涂抹生理盐水作为空白对照。每5min观察一次小鼠耳廓状态，并拍照记录。见图10所示；
[0092]
图10为实施例4提供的迷迭香精油纳米乳凝胶、空白凝胶及模型组抗炎照片；其中，图10(a)模型组；图10(b)空白凝胶；图10(c)reo纳米乳凝胶给药组
[0093]
从图10中可知，reo纳米乳给药组和模型组小鼠同时涂抹二甲苯，5min后实验组小鼠涂抹reo纳米乳凝胶，在相同的时间点观察拍照，可以看出reo纳米乳给药组小鼠的肿胀程度明显减轻，说明reo纳米乳有显著的抗炎作用。
[0094]
本发明采用的基质为2.0％的卡波姆940；甘油含量为10％；丙二醇含量为8.4％；reo纳米乳含量为1％，抗炎实验表明reo纳米乳凝胶有一定的抗炎作用。皮肤刺激性实验显示，将reo制备成reo纳米乳凝胶后对皮肤的刺激性明显减轻。
[0095]
综上，本发明提供了迷迭香精油纳米乳凝胶，是一种外服用的膏药，该迷迭香精油纳米乳凝胶制剂可减小其刺激性且抗炎效果良好，在保湿性、气味及美观性等方面均得到好评，且在试验中未发现毒副作用和不良反应，达到了令人满意的效果，有广阔的应用前景和显著的经济及社会效益。
[0096]
本发明提供的迷迭香精油纳米乳凝胶是采用了亲水性高分子吸水溶胀而得的三维网络结构，其网络骨架使其具有良好的载药能力，可使药物分散于凝胶中缓慢稳定释放。凝胶具有保湿作用，易涂展，肤感好，在经皮给药系统中发挥着重要的作用。它具有溶胀性、触变性、粘合性，因此可加强纳米乳对皮肤的黏附。
[0097]
本发明主要利用迷迭香精油所具有的抑菌抗炎性能，通过配方的设计及调配制得纳米乳，再通过选用合理的凝胶基体及各组分，得到迷迭香精油纳米乳凝胶，该纳米乳凝胶，其具有光泽，澄明清晰，粘度适中，气味适宜的半固体，成品较均匀、黏度较好，涂展性良
好、性质稳定，能够有效粘附于肌肤上，抗炎实验结果显示将迷迭香精油制备成凝胶制剂可减小其刺激性且抗炎效果良好。
[0098]
本发明提供的迷迭香精油纳米乳具有良好的热稳定性、冷稳定性及离心稳定性，从而实现迷迭香精油纳米乳凝胶的制取。
[0099]
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
[0100]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。