1.本发明属于微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种促进脂肪沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用。
背景技术：
2.目前，我国是猪肉生产和消费大国，生猪养殖在国民经济发展中具有重要基础战略地位。随着改革开放40年的发展，人们生活水平的提高，市场对猪肉需求量不断增长，对猪肉的品质也提出了更高的要求。而肌内脂肪是影响肉质和口感的重要影响因素。近年来，商品猪大多追求屠宰性能和瘦肉率，瘦肉率高达60％以上，肌内脂肪含量却小于2.5％，极大影响了猪肉品质和口感。另外，肠道微生物在脂质代谢中的作用越来越受到关注，研究发现肠道微生物参与猪肉质和脂质代谢，同时可作为潜在的靶点用于调控猪脂质代谢及肉品质。但现有技术中关于促进脂肪沉积的微生物菌剂尚未见报道。因此，亟需一种新的促进脂肪沉积的微生物菌剂，以弥补现有技术空白。
3.通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前，关于研究促进动物机体肪沉积的研究较少，且现有技术中关于促进脂肪沉积的微生物菌剂尚未见报道。
4.解决以上问题及缺陷的难度为：该菌剂利用16s rdna测序技术从宁乡猪肠道中筛选，并与血清脂质进行关联分析，筛选差异菌株进行实验。本实验难点在于16s rdna测序技术的掌握与数据分析，pearson关联分析等技术。
5.解决以上问题及缺陷的意义为：该菌剂可提高机体的脂肪含量以及血清中脂质的含量。该结果可应用于瘦肉型猪的养殖，可促进瘦肉型猪脂肪的沉积，改善肉质和口感。
技术实现要素：
6.针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种促进脂肪沉积的微生物菌剂及其分离方法。
7.本发明是这样实现的，一种促进脂肪沉积的微生物菌剂，所述促进脂肪沉积的微生物菌剂为宁乡猪粪便分离的约氏乳杆菌，保藏单位：武汉大学菌种保藏中心(cctcc)，保藏日期：2021年9月29日，保藏号：cctcc m 20211241。使用剂量为1
×
109cfu/ml。
8.本发明的另一目的在于提供一种所述的促进脂肪沉积的微生物菌剂的分离方法。取健康宁乡猪粪便0.1g，用5ml无菌pbs溶解、振荡混匀，梯度稀释至10-7
，吸取100μl梯度在10-2
～10-7
的稀释液涂布于添加0.5％l-半胱氨酸mrs平板中，置于5％二氧化碳、37℃恒温培养箱培养48h。选择稀释梯度合适的平板，挑取不同形态的单菌落，并利用扩增细菌16s rdna基因通用引物为27-fagagtttgatcctggctcag和1492r-ggttaccttgttacgactt进行菌落pcr鉴定。
9.本发明的另一目的在于提供一种所述的促进脂肪沉积的微生物菌剂在制备促进脂肪沉积组合物中的应用。
10.本发明的另一目的在于提供一种验证所述的促进脂肪沉积的微生物菌剂药效的
动物模型构建方法，所述动物模型构建方法包括：
11.(1)选取体重相近，健康状况相似的icr雄鼠30只，分为3个组：对照组，高脂组和高脂+约氏乳杆菌灌胃组，每组10只小鼠；
12.(2)约氏乳杆菌灌胃组为每日上午9：00进行，灌胃量为0.3ml/只，菌液浓度为1
×
10^9cfu/ml；
13.(3)鼠房采用12h光照和12h黑暗循环的管理方法，温度和湿度适宜，自由饮水和采食。
14.进一步，步骤(1)中，所述icr雄鼠的体重为36.5
±
0.5g。
15.结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明提供的促进脂肪沉积的微生物菌剂为约氏乳杆菌，约氏乳杆菌一定程度上可以促进脂肪在机体的沉积。实验结果表明，约氏乳杆菌未显著增加小鼠的体重，但是hfd+lj组显著增加了小鼠的皮下脂肪含量(p＜0.01)，与对照组相比，hfd+lj组显著增加了icr小鼠附睾脂肪(p＜0.01)，hfd+lj组也有增加腹部脂肪，肾周脂和总脂肪的趋势。因此，本发明继续测定了血清中脂质的含量，进一步探索约氏乳杆菌对血清脂质的影响。与对照组相比较，约氏乳杆菌组显著提高了血清重胆汁酸(p＜0.001)，胆固醇(p＜0.001)，高密度脂蛋白(p＜0.01)和低密度脂蛋白的含量((p＜0.05)，但是显著降低了甘油三酯的含量((p＜0.01)，并且有提高血清种葡萄糖含量的趋势。
附图说明
16.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
17.图1是本发明实施例提供的促进脂肪沉积的微生物菌剂的验证方法流程图。
18.图2是本发明实施例提供的约氏乳杆菌促进小鼠脂肪的沉积结果示意图。
19.图3是本发明实施例提供的约氏乳杆菌促进血清脂质增加结果示意图。
具体实施方式
20.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
21.针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种促进脂肪沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用，下面结合附图对本发明作详细的描述。
22.本发明提供一种促进脂肪沉积的微生物菌剂，所述促进脂肪沉积的微生物菌剂为宁乡猪粪便分离的约氏乳杆菌，保藏号：cctcc m 20211241。
23.所述约氏乳杆菌使用剂量为1
×
109cfu/ml。
24.如图1所示，本发明实施例提供的促进脂肪沉积的微生物菌剂的验证方法包括以下步骤：
25.s101，选取体重为36.5
±
0.5g，健康状况相似的icr雄鼠30只，分为3个组：对照组
cont，高脂组hfd和高脂+约氏乳杆菌灌胃组hfd+lj，每组10只小鼠；
26.s102，约氏乳杆菌灌胃组为每日上午9：00进行，灌胃量为0.3ml/只，菌液浓度为1
×
10^9cfu/ml；
27.s103，鼠房采用12h光照和12h黑暗循环的管理方法，温度和湿度适宜，自由饮水和采食。
28.本发明还提供一种所述的促进脂肪沉积的微生物菌剂的分离方法。取健康宁乡猪粪便0.1g，用5ml无菌pbs溶解、振荡混匀，梯度稀释至10-7
，吸取100μl梯度在10-2
～10-7
的稀释液涂布于添加0.5％l-半胱氨酸mrs平板中，置于5％二氧化碳、37℃恒温培养箱培养48h。选择稀释梯度合适的平板，挑取不同形态的单菌落，并利用扩增细菌16s rdna基因通用引物为27-fagagtttgatcctggctcag和1492r-ggttaccttgttacgactt进行菌落pcr鉴定。
29.下面结合实施例对本发明作进一步描述。
30.本发明发现了一种能促进积体脂肪沉积的微生物菌剂-约氏乳杆菌。
31.1、材料和方法
32.本试验选取体重相近(36.5
±
0.5g)，健康状况相似的icr雄鼠30只，分为3个组：对照组(cont)，高脂组(hfd和高脂+约氏乳杆菌灌胃组(hfd+lj)，每组10只小鼠。约氏乳杆菌灌胃组为每日上午9：00进行，灌胃量为0.3ml/只，菌液浓度为1
×
10^9cfu/ml。鼠房采用12h光照和12h黑暗循环的管理方法，温度和湿度适宜，自由饮水和采食。
33.2、结果
34.由图2可知，约氏乳杆菌未显著增加小鼠的体重，但是hfd+lj组显著增加了小鼠的皮下脂肪含量(p＜0.01)，与对照组相比，hfd+lj组显著增加了icr小鼠附睾脂肪(p＜0.01)，hfd+lj组也有增加腹部脂肪，肾周脂和总脂肪的趋势。因此，本发明继续测定了血清重脂质的含量，进一步探索约氏乳杆菌对血清脂质的影响。
35.由图3可知，与对照组相比较，约氏乳杆菌组显著提高了血清重胆汁酸(p＜0.001)，胆固醇(p＜0.001)，高密度脂蛋白(p＜0.01)和低密度脂蛋白的含量((p＜0.05)，但是显著降低了甘油三酯的含量((p＜0.01)，并且有提高血清种葡萄糖含量的趋势。
36.3、结论
37.约氏乳杆菌一定程度上可以促进脂肪在机体的沉积。
38.以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。