专利名称：厚朴酚与和厚朴酚的制造方法
技术领域：
本发明涉及一种厚朴酚与和厚朴酚的制造方法，它以木兰科植物厚朴为原料来制得的，属中草药化学药物制造领域。
但是，作为中草药的厚朴是否可用作抗肿瘤药物，其机理和实践从未有人作过深入研究。另外对于厚朴的提取制造也需采用一种新的工艺方法。
研究发现，心脑血管疾病及癌症无一不和氧自由基密切相关。其他神经系统、循环系统的发病过程中，氧自由基也起着重要作用；致癌、促癌和癌形成的每一步都有氧自由基的产生和参与。在正常情况下，DNA氧化损伤是高频率的，机体每个细胞的DAN每天遭受约一万次氧自由基侵袭，造成20多种类型氧化损伤的DNA，这些损伤多具诱变性。氧化损伤的DNA及诱变部位慢慢积累，从而癌症。而抗氧化剂能有效的清除自由基，延缓机体衰老，对癌症有预防和治疗作用。
本发明对厚朴化学成分及药理活性进行了深入研究。从厚朴中分离得到两种酚类化合物厚朴酚与和厚朴酚，并对这两种化合物进行了抗癌活性研究，探讨其治疗胃癌的可行性，发现它们有很好的抑制胃癌细胞的作用。为开发一种新的抗肿瘤药物提供了可能性。
本发明的目的是通过以下手段和工艺措施来达到的。
本发明的一种厚朴酚与和厚朴酚的制造方法如下本发明以木兰科植物厚朴为原料，首先将厚朴经粉碎后所得之粉末用乙醇在室温下浸提三次，将所得浸提液进行真空减压，回收溶剂，得乙醇提取物浸膏。将该乙醇提取物加硅胶并搅拌均匀；然后在低温下烘干、研细，分批上色谱柱分离提取。以不同比例的石油醚一乙酸乙酯混合溶液梯度洗脱，将洗脱液在旋转蒸发器上真空蒸馏到十分之一；静置一段时间，结晶而得两种化合物厚朴酚与和厚朴酚。
厚朴酚的分子式为C18H18O2，白色块状晶体，mp.100～101℃；分子量为

266。
和厚朴酚的分子式为C18H18O2，为同分异构体，其结构式为

它为白色晶体，熔点84.8～85.0℃；分子量为266。
厚朴酚与和厚朴酚具有较好的抗氧化性以及对人的胃癌细胞具有较好的抑制作用。
本发明通过以下实验方法对上述效果获得了证实。一、测定厚朴酚与和厚朴酚的抗氧化活性的方法(OSI法)。
在温度为100℃，空气流量为20升/小时，将抽提物及结晶物按不同浓度分别加入含5克猪油的试管中，在氧化稳定仪上测定其OSI值，并作平行试样。(OSI值是指油脂突变酸败的时间)。其结果见表1。

表中BHT是2，6二叔丁基对甲酚。pf值为样品与空白试样的OSI值之比，即pf＝样品OSI值/空白OSI值，而空白试样的OSI值为16.05小时。
由表1可知，厚朴酚与和厚朴酚的抗氧化活性很强，和BHT基本相当。二、对人胃癌细胞BGC-823的细胞毒作用的实验将以对数生长的胃癌细胞BGC-823接种在含15％小牛血清的RPMI 1640培养液中，置37℃，5％二氧化碳、饱合湿度下的培养箱内培养，以EDTA(乙二胺四乙酸)-胰酶混合溶液消化传代，以100μL(1.0×105/mL)剂量浓度接种在96孔平板上，孵育24小时后，倾去培养液，将不同浓度厚朴酚(25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78μg/mL)、和不同浓度的和厚朴酚(100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56μg/mL)分别加入孔内，每一浓度加3孔，每孔100μL，对照组加同量培养液，孵育24小时后，弃去培养液。随后每孔加入100μL 0.2％MTT的D-Hank’s液，37℃继续孵育4h，吸去上清液，37℃温育30min并不时轻轻振荡。在酶联免疫仪490nm波长处检测各孔吸光度(A值)，按公式计算其抑瘤率。抑瘤率(％)＝[(对照组A值-实验组A值)/对照组A值]×100。
从下面的细胞毒作用实验结果的表格(表2.1，表2.2)中，数据表明厚朴酚与和厚朴酚对人胃癌细胞BGC-823有显著的生长抑制作用，MTT试验结果显示，随着药物浓度加大，抑制率也随之增高，与对照组相比均有显著性差异。说明厚朴酚与和厚朴酚对胃癌细胞BGC-823的抑制作用与药物浓度呈正相关，其IC50(半数抑制浓度)分别为3.60μg/mL和31.3μg/mL。
表2.1厚朴酚对人胃癌细胞BGC-823的细胞毒作用

表2.2和厚朴酚对人胃癌细胞BGC-823的细胞毒作用

具体实施方式
实施例称取烘干磨碎的厚朴粉末500g，室温下加入乙醇1.5升，提取三次，合并提取液，在60℃及0.1MPa压力下回收溶剂，得乙醇提取物85.5g，将该20g乙醇提取物加40g硅胶拌匀，上色谱柱分离提取(硅胶400g，200-300目)，以不同比例石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，在石油醚-乙酸乙酯(9∶1)处得到厚朴酚650mg，在石油醚-乙酸乙酯(8∶2)处得和厚朴酚75.3mg。
权利要求
1.一种厚朴酚与和厚朴酚的制造方法，其特征是以木兰科植物厚朴为原料，首先将厚朴经粉碎后所得之粉末用乙醇在室温下依次浸提三次，将所得浸提液进行真空减压，回收溶剂，得乙醇提取物浸膏；将该乙醇提取物加硅胶并搅拌均匀；然后在低温下烘干、研细，分批上色谱柱分离提取；以不同比例的石油醚—乙酸乙酯混合溶液梯度洗脱，将洗脱液在旋转蒸发器上真空蒸馏到十分之一；静置一段时间，结晶而得两种化合物厚朴酚与和厚朴酚。
2.根据权利要求1所述的一种厚朴酚与和厚朴酚的制造方法，其特征在于所述的乙醇浸提液是在60℃温度和0.1MPa压力下进行真空减压，回收溶剂的。
3.根据权利要求1所述的一种厚朴酚与和厚朴酚的制造方法，其特征在于所述的色谱柱为硅胶400克、200-300目。
4.根据权利要求1所述的一种厚朴酚与和厚朴酚的制造方法，其特征在于在洗脱液的石油醚与乙酸乙酯的比例为9∶1处，得到厚朴酚，在石油醚∶乙酸乙酯＝8∶2处得和厚朴酚。
5.根据权利要求1的制造方法所制得的产品厚朴酚与和厚朴酚的用途是作为一种抑制胃癌细胞增生的药物。
全文摘要
本发明提供了一种厚朴酚与和厚朴酚的制造方法，其特征是以木兰科植物厚朴为原料，首先将厚朴经粉碎后所得之粉末用乙醇在室温下浸提三次，将所得浸提液进行真空减压，回收溶剂，得乙醇提取物；将该乙醇提取物加硅胶并搅拌均匀；然后在低温下烘干、研细，分批上色谱柱分离提取；以不同比例的石油醚—乙酸乙酯混合溶液梯度洗脱，将洗脱液在旋转蒸发器上真空蒸馏到十分之一；静置一段时间，结晶而得两种化合物厚朴酚与和厚朴酚。该物质经研究并通过实验证实具有抑制胃癌细胞的作用，可用于制造防治胃癌的药物。
文档编号C07C39/00GK1446785SQ03115690
公开日2003年10月8日 申请日期2003年3月7日 优先权日2003年3月7日
发明者翁新楚, 吴侯 申请人:上海大学