1.本发明涉及一种植物提取技术领域，特别涉及一种番泻苷提取方法。


背景技术：

2.番泻叶(folium sennae)是常用泻下导滞药之一，为豆科植物狭叶番泻叶(cassia angustifolia vahl)或尖叶番泻叶(c.acutifolia delile)的干燥叶。番泻叶中的主要活性成分为蒽醌类衍生物。近几年的研究发现，蒽醌类衍生物中的二蒽酮类衍生物番泻苷a、b、c、d的泻下作用及刺激性较其他含蒽醌类的泻药更强，且口服用药毒性很小，临床常用于急性便秘。二蒽酮类化合物是由二分子蒽酮c-c相互连接而成的，其中番泻苷a与b、番泻苷c与d互为立体异构体。番泻苷对肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌有抑制作用。此外，番泻苷还有胰岛素增敏和α-葡萄糖淀粉酶抑制的作用。在临床上含番泻苷的药品主要用于治疗便秘和清肠，包括老年性便秘、产褥期便秘、青年功能性便秘、术后及热病所致的便秘、胸腰椎骨折腹胀便秘等各种便秘。
3.关于番泻苷的纯化技术，现有技术之一采用大孔树脂纯化番泻苷，其工艺为番泻叶加20倍量沸水，80℃保温浸泡2次，每次45min，滤液冷却至室温，调ph至3，离心。离心液上dm-301树脂柱，纯水洗至molish反应呈阴性，先后以0.5mol/l碳酸氢钠水溶液及纯水洗脱。自色带即将流出时开始接收，盐酸中和接收液，上另一dm-301树脂柱，水洗，50％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩成流浸膏，60℃减压干燥，粉碎得棕褐色粉末，番泻苷含量达50％，番泻总苷含量达50％以上。操作程序复杂且沸水提取容易造成番泻苷降解。现有技术中以番泻苷a含量为指标，研究提取番泻叶中二蒽酮的工艺条件，最佳提取工艺为：番泻叶中粉以3倍量50％乙醇浸泡12h，用6倍量50％乙醇以600ml/h kg的流速渗漉提取，得提取液。将提取液浓缩，上x-5大孔树脂柱，先以10倍树脂量水洗，再以7.5倍30％乙醇洗，收集洗脱液，浓缩至干，得提取物。进一步将提取液酸化，正丁醇萃取，得到总番泻苷含量47.2％的产物，产率为2.93％。使用有机溶剂正丁醇和乙醇，成本较高且不环保。专利文件cn105254689 a公开了一种番泻苷a
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b盐化合物及其制备方法和用途，以番泻叶为原料，经过提取-过滤-酸化-精滤-提取-精制-化合物成盐-析出纯化得到高纯度有效成分番泻苷a
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b盐化合物，纯度达到80～90％之间。步骤较为繁琐，且最后一步纯化过程中使用丙酮、甲醇等毒性较强的有机溶剂。此外，番泻苷稳定性差，遇热遇光易分解转变成单蒽酮类成分，并且运用常规的萃取及大孔吸附层析等方法难以高效率的提取该成分。


技术实现要素：

4.发明目的：本发明提供了一种番泻苷提取方法，采用离子交换层析进行番泻苷的分离纯化，可以将番泻苷a和番泻苷b从番泻叶提取液中分离出来，并且回收率高达90％以上，除杂效果明显，为后期高纯度的番泻苷的分离纯化提供了方便。
5.技术方案：本发明提供一种番泻苷提取方法，所述的番泻苷为番泻苷a/b化合物(番泻苷a和b互为立体异构体)，具有以下结构：
[0006][0007]
本发明所述的番泻苷的提取方法包括以下步骤：包括以下步骤：
[0008]
(1)药材初提：将番泻叶浸泡所得的提取液调节ph为2.5-5.5，过滤留上清液，将得到的上清液中加入氯化钠调节电导率，并且调节上清液的ph为4.0-10.0，得到上样液；上样液的电导率低于平衡液的导电率2-5ms/cm；
[0009]
(2)上样：离子交换层析柱预先用平衡液平衡，再将步骤(1)中的上样液上样层析柱；所述的平衡液为0.02-0.2mol/l的醋酸盐、甘氨酸、碳酸氢钠或磷酸盐缓冲液，所述的平衡液中含0.0001-0.3mol/l nacl，ph为3.5-10.0；
[0010]
(3)洗脱：上样结束后先用平衡液冲洗3-5倍柱体积，再用3-5倍柱体积洗脱液冲洗柱子；所述的洗脱液为0.02-0.2mol/l的醋酸盐、甘氨酸、碳酸氢钠或磷酸盐缓冲液，所述洗脱液中含0.3-1.5mol/l nacl，ph为3.5-10.0；
[0011]
(4)将步骤(3)中得到的洗脱液进行减压干燥，得到番泻苷a/b化合物的粉末状提取物。
[0012]
作为一种优选地实施例，步骤(1)中，调节提取液的ph为3.0-5.5，调节ph所用的酸为盐酸、醋酸和磷酸。
[0013]
作为一种优选地实施例，，步骤(3)中，所述的洗脱液为0.02mol/l磷酸盐缓冲液以及1.2mol/l nacl溶液，ph值为7.0。
[0014]
作为一种优选地实施例，步骤(2)中，所述的离子交换层析柱的配基为二乙胺乙基和三甲胺基烷基季铵基的阴离子交换层析填料，填料主体构架为丙烯酸系或苯乙烯系中的任意一种。
[0015]
作为一种优选地实施例，所述离子交换树脂的型号为a313型、a313fc型、d620型、d630型、d640型、a351型或a451型。
[0016]
作为一种优选地实施例，步骤(1)中，所述的提取液通过以下方法制备：在番泻叶药材中加入5-10倍碳酸氢钠溶液搅拌浸泡60-120min后过滤，得提取液。
[0017]
作为一种优选地实施例，步骤(1)中，所述的上样液的电导率为0.5ms/cm-29ms/cm；步骤(2)中，所述的平衡液的电导率为1-30ms/cm。
[0018]
作为一种优选地实施例，步骤(3)中，所述的洗脱液的电导率为30-108ms/cm。
[0019]
作为一种优选地实施例，步骤(4)中，所述的减压干燥为在温度为55-85℃、真空度
为-0.05-0.1mpa条件下减压干燥。
[0020]
作为一种优选地实施例，所述的平衡液中含0.0001-0.3mol/l nacl；所述的洗脱液中含0.3-1.5mol/l nacl。
[0021]
除非另有说明，本发明中“％”为质量百分比。
[0022]
有益效果：(1)本发明在现有技术基础之上，提供一种简易、高效、易于放大的分离方法，采用离子交换层析进行番泻苷的分离纯化，将番泻苷a和番泻苷b从番泻叶提取液中分离出来，首次解决了大孔吸附树脂有机溶剂洗脱，成本高的难题，氯化钠盐特征性的洗脱出番泻苷a/b，收率高于90％；(2)本发明解决了现有技术中番泻苷a/b与番泻叶中其他蒽醌类杂质理化性质相似，无法运用常规的有机溶剂萃取方法将番泻苷a/b特征性的纯化出来的难题，同时解决了大孔吸附树脂进行有机溶剂洗脱收率较低且成本高，分辨率低，使用效果较差的问题，本发明的离子交换层析操作简单，成本低，分离效果好，高效液相(hplc)图谱显示纯度可达65％以上，为后期高纯度的番泻苷的分离纯化提供了方便，易于工业化生产；(3)本发明的提取方法工艺稳定，利于工业化、规模化生产。本发明经过多次重复实验验证，离子交换层析可以很好的特征性的将番泻苷a/b分离纯化出来，易于放大生产。
附图说明
[0023]
图1为实施例1中阴离子交换柱洗脱液的hplc图谱；
[0024]
图2为实施例4中大孔吸附层析柱洗脱液的hplc图谱。
具体实施方式
[0025]
实施例1：(1)药材提取：取100g番泻叶药材(其中番泻苷a+番泻苷b含量为1.25％)加入8倍(g/ml)0.1％碳酸氢钠溶液搅拌提取60min后过滤，得提取液(提取液取样检测)，加入6mol/l hcl调节ph至3.0，去除杂质，过滤留上清，加入氯化钠调节电率导至20ms/cm，加入5mol/l naoh调节ph至3.5，得到上样液(调酸上样液取样检测)；
[0026]
(2)上样：预先装a451型(zg a451型，杭州争光树脂有限公司)大孔弱碱性阴离子交换层析柱300ml，以线性速度60cm/h，用5倍柱体积的平衡液平衡，平衡液为0.02mol/l甘氨酸缓冲液，其中含有0.2mol/l nacl，ph为3.5，电导率为23ms/cm，再将步骤(1)中的上样液以线性速度60cm/h上样层析柱。
[0027]
(3)洗脱：上样结束后先用平衡液以线性速度60cm/h冲洗4倍柱体积(上冲t取样检测)，再用5倍柱体积洗脱液以线性速度40cm/h冲洗柱子(洗脱液取样检测)，洗脱液为0.02mol/l甘氨酸缓冲液，其中含有1.0mol/l nacl，ph为3.5，电导率为93ms/cm。收集洗脱液，在温度为60℃、真空度为-0.08mpa条件下减压干燥，得到番泻苷a/b化合物的粉末状提取物，得到的提取物的hplc检测图谱见图1。
[0028]
(4)将上述样品取样，检测含量，数据如下：
[0029][0030]
实施例2：(1)药材提取：取100g番泻叶药材(其中番泻苷a+番泻苷b含量为1.23％)加入10倍(g/ml)0.25％碳酸氢钠溶液搅拌提取90min后过滤，得提取液(取样检测)，加入6mol/l hcl调节ph至4.5，过滤留上清，加入氯化钠调节电导率至15ms/cm，加入5mol/l naoh调节ph至7.0，得到上样液(调酸上样液取样检测)；
[0031]
(2)上样：预先装a351型(zg a351型，杭州争光树脂有限公司)大孔弱碱性阴离子交换层析柱300ml，以线性速度60cm/h，用5倍柱体积平衡液平衡，平衡液为0.02mol/l磷酸盐缓冲液，其中含有0.15mol/l nacl，ph为7.0，电导率为18ms/cm，再将步骤(1)中的上样液以线性速度60cm/h上样层析柱。
[0032]
(3)洗脱：上样结束后先用平衡液以线性速度60cm/h冲洗4倍柱体积(上冲t取样检测)，再用5倍柱体积洗脱液以线性速度40cm/h冲洗柱子，洗脱液为0.02mol/l磷酸盐缓冲液，其中含有1.2mol/l nacl，ph为7.0，电导率为108ms/cm。收集洗脱液，在温度为70℃、真空度为-0.08mpa条件下减压干燥，得到番泻苷a/b化合物的粉末状提取物。
[0033]
(4)将上述样品取样，检测含量，数据如下：
[0034][0035]
实施例3：(1)药材提取：取1000g番泻叶药材(其中番泻苷a+番泻苷b含量为1.15％)加入10倍(g/ml)0.25％碳酸氢钠溶液搅拌提取120min后过滤，得提取液(提取液取样检测)，加入6mol/l hcl调节ph至5.5，过滤留上清，加入氯化钠调节电导率至7ms/cm，加入5mol/l naoh调节ph至10.0，得到上样液(调酸上样液取样检测)；
[0036]
(2)上样：预先装a313型(zg a313型，杭州争光树脂有限公司)大孔弱碱性阴离子交换层析柱1500ml，用平衡液以线性速度60cm/h平衡5倍柱体积，平衡液为0.2mol/l碳酸氢钠缓冲液，其中含有0.1mol/l nacl，ph为10.0，电导率为11ms/cm，再将步骤(1)中的上样液以线性速度60cm/h上样层析柱。
[0037]
(3)洗脱：上样结束后先用平衡液以线性速度60cm/h冲洗4倍柱体积(上冲t取样检测)，再用5倍柱体积洗脱液以线性速度40cm/h冲洗柱子(洗脱液取样检测)，洗脱液为
0.2mol/l碳酸氢钠缓冲液，含0.8mol/l nacl，ph为10.0，电导率为70ms/cm。收集洗脱液，在温度为80℃、真空度为-0.08mpa条件下减压干燥，得到番泻苷a/b化合物的粉末状提取物。
[0038]
(4)将上述样品取样，检测含量，数据如下：
[0039][0040]
实施例4：(1)药材提取：取100g番泻叶药材(其中番泻苷a+番泻苷b含量为1.23％)加入10倍(g/ml)0.25％碳酸氢钠溶液搅拌提取90min后过滤，得提取液(取样检测)，加入6mol/l hcl调节ph至3.5，过滤留上清(调酸上清液取样检测)；
[0041]
(2)上样：预先装d101型吸附层析柱300ml，以线性速度60cm/h，将步骤(1)中的上样液上样层析柱。
[0042]
(3)洗脱：上样结束后先用水以线性速度60cm/h冲洗4倍柱体积(上冲t取样检测)，再用5倍柱体积洗脱液以线性速度40cm/h冲洗柱子，洗脱液为50％乙醇溶液。收集洗脱液，在温度为55℃、真空度为-0.08mpa条件下减压干燥，得到番泻苷a/b化合物的粉末状提取物，得到的提取物的检测结果见图2。