专利名称：抗肿瘤新茯苓多糖水溶性衍生物的制作方法
茯苓中含有茯苓多糖，它的结构是每50个β(1→3)结合的葡萄糖单位中有一个β(1→6)结合的葡萄糖基支链和1～2个β(1→6)结合的葡萄糖基间隔。抗肿瘤实验表明茯苓多糖无抗肿瘤活性，将茯苓多糖中β(1→6)结合的葡萄糖单位用Smith降解方法去掉，即得到有抗肿瘤活性的新茯苓多糖。新茯苓多糖不溶于水，无法制成注射液，口服无效，影响了进一步的药理研究及临床应用。曾有专利报道将新茯苓多糖制成羧甲基、羟乙基和脲素等水溶性衍生物，但已研究了二十余年，没有进入临床应用。本专利将新茯苓多糖中葡萄糖单位的-CH2OH氧化为COOH，再与碱成盐，即制得能溶于水的具有抗肿瘤和增强免疫功能的氧化新茯苓多糖。以二甲基甲酰胺——三乙胺——氯磺酸为磺化剂将新茯苓多糖中葡萄糖单位的羟基磺化，再与碱成盐，即制得能溶于水的部分磺酰化新茯苓多糖。以二甲基亚砜——吡啶——乙酸酐为乙酰化剂将新茯苓多糖乙酰化，即制得能溶于水的部分乙酰化新茯苓多糖。部分磺酰化和部分乙酰化新茯苓多糖也具有抗肿瘤、增强免疫功能作用。
日本有文献报道Curdlan(也是β(1→3)结合的葡聚糖)的磺化和乙酰化物有抗肿瘤活性，但新茯苓多糖与Curdlan是不同的多糖，新茯苓多糖分子量为3万左右，而Curdlan分子量为9万左右。
将茯苓多糖用磷酸溶解，磷酸浓度应控制在20～70％，磷酸浓度过高，则多糖溶在其中粘度大，无法搅拌，过低不利于氧化反应进行。
茯苓多糖在二甲基甲酰胺中能均匀分散，利于磺酰化均匀进行。
茯苓多糖易溶于DMSO，所以以DMSO为溶剂进行乙酰化。
实施例1取茯苓粉20g，用1M NaOH室温搅拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反复离心、水洗和透析，将NaIO46g加入茯苓多糖的混悬液中，调PH至5，室温避光搅拌3天后，加甘油5ml，搅拌4小时，透析，透析内液调PH至7左右，加入NaBH42g，室温搅拌4小时，再加硫酸至PH为2，100℃搅拌水解2小时，离心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。将新茯苓多糖溶于30％磷酸中，加入亚硝酸钠10g，室温搅拌4小时，用NaOH调PH至7左右，离心去沉淀，将上清液离心，透析，将透析内液干燥，即得到氧化新茯苓多糖(12g)。用这种方法得到的氧化新茯苓多糖中葡萄糖醛酸含量为55％，具有抗肿瘤活性和增强免疫功能的作用。
实施例2取茯苓粉20g，用1M NaOH室温搅拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反复离心、水洗和透析，将NaIO46g加入茯苓多糖的混悬液中，调PH至5，室温避光搅拌3天后，加甘油5ml，搅拌4小时，透析，透析内液调PH至7左右，加NaBH42g，室温搅拌4小时，再加硫酸至PH为2，100℃搅拌水解2小时，离心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。将新茯苓多糖溶于60％磷酸中，加入亚硝酸钠15g，室温搅拌6小时，用NaOH调PH至7左右，离心去沉淀，将上清液透析，将透析内液干燥，即得到氧化新茯苓多糖(13g)。用这种方法得到的氧化新茯苓多糖中葡萄糖醛酸的含量为90％，具有抗肿瘤活性和增强免疫功能的作用。
实施例3取茯苓粉20g，用1M NaOH室温搅拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反复离心、水洗和透析，将NaIO46g加入茯苓多糖的混悬液中，调PH至5，室温避光搅拌3天后，加甘油5ml，搅拌4小时，透析，透析内液调PH至7左右，加NaBH42g，室温搅拌4小时，再加硫酸至PH为2，100℃搅拌水解2小时，离心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。将。新茯苓多糖溶于二甲基甲酰胺中，加入10ml三乙胺，冰浴状态下滴加氯磺酸8ml，搅拌2小时，用NaOH调PH至7左右，离心得上清液，透析，将透析内液干燥，即得到磺酰化新茯苓多糖(10g)。用这种方法得到的磺酰化新茯苓多糖的磺酰化度为0.6，具有抗肿瘤、增强免疫功能和抗爱滋病病毒作用。
实施例4取茯苓粉20g，用1M NaOH室温搅拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反复离心、水洗和透析，将NaIO46g加入茯苓多糖的混悬液中，调PH至5，室温避光搅拌3天后，加甘油5ml，搅拌4小时，透析，透析内液调PH至7左右，加NaBH42g，室温搅拌4小时，再加硫酸至PH为2，100℃搅拌水解2小时，离心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。将新茯苓多糖溶于二甲基甲酰胺中，加入20ml三乙胺，冰浴状态下滴加氯磺酸20ml，搅拌2小时，用NaOH调PH至7左右，离心得上清液，透析，将透析内液干燥，即得到磺酰化新茯苓多糖(11g)。用这种方法得到的磺酰化新茯苓多糖的磺酰化度为1.1，具有抗肿瘤、增强免疫功能和抗爱滋病病毒作用。
实施例5取茯苓粉20g，用1M NaOH室温搅拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反复离心、水洗和透析，将NaIO46g加入茯苓多糖的混悬液中，调PH至5，室温避光搅拌3天后，加甘油5ml，搅拌4小时，透析，透析内液调PH至7左右，加NaBH42g，室温搅拌4小时，再加硫酸至PH为2，100℃搅拌水解2小时，离心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。将新茯苓多糖溶于二甲基亚砜中，加入10ml吡啶和50ml乙酸酐，100℃回流3小时，用NaOH调PH至7左右，离心得上清液，透析，将透析内液干燥，即得到乙酰化新茯苓多糖(9g)。用这种方法得到的乙酰化新茯苓多糖乙酰化度为1.1，具有抗肿瘤和增强免疫功能作用。
实施例6取茯苓粉20g，用1M NaOH室温搅拌提取，提取液加醋酸得茯苓多糖沉淀，再反复离心、水洗和透析，将NaIO46g加入茯苓多糖的混悬液中，调PH至5，室温避光搅拌3天后，加甘油5ml，搅拌4小时，透析，透析内液调PH至7左右，加NaBH42g，室温搅拌4小时，再加硫酸至PH为2，100℃搅拌水解2小时，离心，透析得沉淀，干燥沉淀，即得到新茯苓多糖。将新茯苓多糖溶于二甲基亚砜中，加入30ml吡啶和70ml乙酸酐，100℃回流3小时，用NaOH调PH至7左右，离心得上清液，透析，将透析内液干燥，即得到乙酰化新茯苓多糖(12g)。用这种方法得到的乙酰化新茯苓多糖乙酰化度为1.5，具有抗肿瘤和增强免疫功能作用。
权利要求
1.用碱提取酸沉淀法从茯苓粉中提取茯苓多糖，再以茯苓多糖为原料利用Smith降解方法氧化去掉茯苓多糖中β(1→6)结合的葡萄糖单位，即制得了β(1→3)结合的葡聚糖(新茯苓多糖)。以磷酸—亚硝酸钠为氧化剂，将新茯苓多糖中葡萄糖单位的-CH2OH氧化为COOH，再与碱成盐，即制得能溶于水的具有抗肿瘤和增强免疫功能的氧化新茯苓多糖。以二甲基甲酰胺——三乙胺——氯磺酸为磺化剂将新茯苓多糖中葡萄糖单位的羟基磺化，再与碱成盐，即制得能溶于水的部分磺酰化新茯苓多糖。以二甲基亚砜——吡啶——乙酸酐为乙酰化剂将新茯苓多糖乙酰化，即制得能溶于水的部分乙酰化新茯苓多糖。部分磺酰化和部分乙酰化新茯苓多糖也具有抗肿瘤和增强免疫功能作用。它们的结构如下 氧化新茯苓多糖n＝40～1000的整数，R1＝CH2OH或COOH，R2＝R3＝H葡萄糖醛酸含量为10％～90％磺酰化新茯苓多糖n＝40～400的整数，R1＝CH2OH或CH2OSO3H，R2＝H或SO3H，R3＝H或SO3H磺酰化度为0.2～2.5(新茯苓多糖中所有羟基被磺酰化则磺酰化度为3)乙酰化新茯苓多糖n＝40～400的整数，R1＝CH2OH或CH2OAcR2＝H或Ac，R3＝H或Ac乙酰化度为0.2～1.5(新茯苓多糖中所有羟基被乙酰化则乙酰化度为3)
2.根据权力要求1所述的工艺，其特征在于以20～70％的磷酸为溶剂溶解茯苓多糖，以亚硝酸钠为氧化剂，室温搅拌制备氧化新茯苓多糖。
3.根据权力要求1所述的工艺，其特征在于将新茯苓多糖中10～90％的葡萄糖单位氧化为葡萄糖醛酸单位后所得的产物均具有抗肿瘤和增强免疫功能作用，并且可溶于水。
4.根据权力要求1所述的工艺，其特征在于以二甲基甲酰胺为溶剂，以三乙胺为催化剂，在低温条件下，以氯磺酸为磺化剂将新茯苓多糖磺化。
5.根据权力要求1所述的工艺，其特征在于最终产物磺酰化新茯苓多的磺酰化度为0.2～2.5，具有抗肿瘤和增强免疫功能作用。
6.根据权力要求1所述的工艺，其特征在于以二甲基亚砜为溶剂，以吡啶为催化剂，在100℃回流条件下，以乙酸酐为乙酰化剂将新茯苓多糖乙酰化。
7.根据权力要求1所述的工艺，其特征在于部分乙酰化新茯苓多糖的乙酰化度为0.2～1.5，并且所得产物均能溶于水、具有抗肿瘤和增强免疫功能作用。
全文摘要
本发明涉及一类抗肿瘤葡聚糖水溶性衍生物的制备方法。用Smith降解法去掉茯苓多糖中葡萄糖基支链后得到的新茯苓多糖具有抗肿瘤活性，新茯苓多糖为纯粹的β(1→3)结合的葡聚糖，不溶于水，无法制成注射液，口服无效。本发明采用氧化、磺酰化和乙酰化方法分别将新茯苓多糖衍生为水溶性的氧化新茯苓多糖、磺酰化新茯苓多糖和乙酰化新茯苓多糖。这些新的水溶性新茯苓多糖衍生物经动物实验证明具有抗肿瘤和增强免疫功能作用。
文档编号C07H1/00GK1124249SQ94112670
公开日1996年6月12日 申请日期1994年12月9日 优先权日1994年12月9日
发明者赵吉福, 姚新生, 陈英杰, 徐绥绪 申请人:沈阳药科大学