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胸腺素α-1衍生物的制作方法

时间：2022-02-20 阅读： 作者：专利查询

专利名称：胸腺素α-1衍生物的制作方法
技术领域：
本发明提供了一种涉及胸腺素α-1的新的合成化合物。
胸腺素是胸腺分泌的多肽免疫调节物。业已证明胸腺素能诱导T细胞分化和增强免疫功能。
部分纯化的牛犊胸腺提取物称作胸腺素部分5，此种提取物含许多如称作胸腺素α-1的化合物的胸腺的肽产物。
US 4，079，127、US 4，148，788和US 4，855，407最初是从胸腺素部分5中分离出胸腺素α-1的。且进行了测序并采用化学方法合成出来了。US 4，116，951也制备出了胸腺素α-1的类似物。胸腺素α-1的顺序与小鼠、牛犊和人具有高度同源性。胸腺素α-1有28个氨基酸，业已证明胸腺素α-1具有调节免疫系统的作用。胸腺素α-1的免疫作用包括如刺激α-和γ-干扰素的产生、增加巨噬细胞游走抑制因子的产生、包括如诱导T细胞标志的表达(如白细胞介素-2受体)以及改善T细胞辅助细胞的活性。
本技术领域内仍需要其功能类似胸腺天然产物的新的合成化合物。
本发明涉及了一种(Ⅰ)式化合物。
其中X为Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu，或为其生物活性衍生物或为其片段;R1是Ac或Z，其中Ac是乙酰基团，Z是

其中的Ac和X定义同上;R2是Asn或Asp;R3是Asn或Asp;和Y是-OH或-NH2;其条件是如R1是Ac和R2是Asn，Y则为-NH2。本发明还适用于一种(Ⅰ)式化合物的新的中间体及前体。
本发明的化合物是胸腺素α-1的衍生物，是适宜于治疗对免疫系统调节物应答的各种疾病和指征的免疫系统调节物。本发明的增强免疫的化合物可用于丧失免疫和免疫抑制的患者重组免疫功能，并能用于治疗免疫缺陷疾病。
本发明的上述(1)式化合物的一个例子具体为胸腺素α-1酰胺，其中的R1是乙酰基，R2是Asn，Y是-NH2。该式的另一化合物的例子为[Asp28]一胸腺素α-1，其中的R1是乙酰基，R2是Asp，Y是-OH。本发明还适用于胸腺素α-1三聚物，其中R1为具有上述含义的Z。
本发明的化合物还包括根据上述(Ⅰ)式的化合物的新颖的中间体和前体。
中间体和前体的例子包括有如下述(Ⅱ)式组成的化合物
其中R2是Asn或Asp;并且其中X2是Val，Glu-
Val，Lys-Glu-Val，Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，或Z-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，其中Z由下列通式表示

其中 R3是Asn或Asp并且X3是Glu，Ala-Glu，Glu-Ala-Glu，Glu-Glu-Ala-Glu，Val-Glu-Glu-Ala-Glu，或X4-Val-Glu-Glu-Ala-Glu，其中 X4是Val，Glu-Val，Lys-Glu-Val，Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，;其条件是，如R2是Asn时，X2是Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，或 Z-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val.
在实施方案中X2包括基团Z，R3优选Asn。
可用任何适宜的方法，如固相肽合成法制备本发明的化合物，中间体和前体。
将用下面非限定的实施例来对本发明作进一步说明。
实施例1Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-NH2(胸腺素α-1酰胺)于底部装有烧结玻璃过滤器和顶部装有机械搅拌器的肽合成烧瓶中加入按照合并于这里作参考的 US4，855，407的实施例1制备的1.0g甲基二苯甲基胺树脂。用20个体积溶于氯甲烷的10%三乙胺的洗涤此树脂，将此树脂同一份新的同样的溶液一起搅拌10分钟。以溶于15ml，N，N′-二甲基甲酰胺中的1.5mmol Boc-L-天冬酰胺(0.35g)、3.0mmol1-hydroxybonsotxrasolo-水合物(0.46g)和1.5mmol N，N′-二环己基碳化二亚胺(0.309g)与中性的甲基二苯甲基胺树脂反应过夜形成Boc-L天冬酰胺基甲基二苯甲基胺树脂。为了避免对茚三酮试验有非常轻微的阳性反应，于20ml氯甲烷中，用2mmol乙酸(0.12ml)和1.5mmol N，N′-二环己基碳化二亚胺对此氨基酸树脂乙酰化1小时。
然后，按下面的步骤继续进行固相肽合成，其中，依次将一种氨基酸并入于此树脂上增长的肽链上(另有说明除外，每次洗涤用20体积溶剂或试剂。另有说明除外，所用的所有氨基酸的衍生物均为L-构型。)(1)用溶于氯甲烷的50%的三氟乙酸溶液对所说树脂进行预洗涤;
(2)于溶于氯甲烷的50%三氟乙酸溶液中搅拌30分钟;
(3)用氯甲烷洗涤三次;
(4)用溶于氯甲烷的10%三乙胺溶液预洗涤;
(5)于溶于氯甲烷的10%三乙胺中搅拌5分钟;
(6)用氯甲烷洗涤三次;
(7)与溶于氯甲烷中的各为1.5mmol的Boc-Glu(oB21)-OH和N，N′-二环己基碳化二亚胺搅拌120分钟;
(8)用溶于二氯甲烷的50%异丙醇洗涤二次;
(9)用氯甲烷洗涤三次;
(10)试验茚三酮的显色反应;如是阳性，重复步骤7-10;如阴性，则进行下一合成循环。
依次用下述Boc-氨基酸且在每一循环步骤7中一次用一种氨基酸重复合成循环;
Boc-Ala-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Val-OH，Boc-Val-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Leu-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Ile-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Val-OH，Boc-Ala-OH，Boc-Ala-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH和CH3COOH.
完成全部合成循环后，这样获得受保护的胸腺素α-1酰胺-MBHA-树脂Ac-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Ala-Ala-Val-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-Ile-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(ClZ)-Asp(OBzl)-Leu-Lys(ClZ)-Glu(OBzl)-Lys(ClZ)-Lys(Clz)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-HN-CH(Ph-CH3)-树脂，重2.7g。
把获得的此肽树脂(1.0g)与2ml苯甲醚混合，并于0℃下，在液态氟化氢中搅拌60分钟以进行去保护和裂解。去除过量的酸后，残存物用无水醚洗涤几次后，用50ml 4%乙酸铵萃取，再用25ml蒸馏水萃取，把合并的萃取液浓缩至一小体积(10-12ml)，用Sephadex G-10(2.6×85cm，0.1M HOAc洗脱)脱盐。冷冻干燥得0.37g粗胸腺素α-1酰胺。
以5.5ml/分流速，在234nm处测定，用Vydac(多孔层实心球)C18柱(2.2×25cm，10μ)。线性梯度2.5%-9.0%异丙醇(PH6的碳酸钾缓冲液洗脱对上述获得的主要部分粗肽(0.347g)进行半制备HPLC纯化。每部分肽均用HPLC进行分析检测。仅收集纯度在98%或98%以上的部分，用Sephadex G-10柱脱盐，冷冻干燥得0.0767g欲要产品胸腺素α-1酰胺。
HPLC分析表明此品是同源的，迁移比胸腺素α-1略慢。如将胸腺素α-1酰胺同胸腺素α-1混合并用HPLC进行色谱分析，此两种化合物均能很好地彼此溶解于所用的HPLC体系中。用FAB质谱对分子量进行测定表明此物质具有正确分子量MH+＝3108(计算的MW＝3107.3)。对此酸水解物(24小时和100小时)的氨基酸分析表明此肽具有所预计的氨基酸比例amino acid ratios6N HCl 110°，24小时;Asp，3.86;Thr，2.90;Ser，2.63;Glu，6.14;Ala，2.86;Val，2.23;Ile，0.96;Leu，1.03;Lys，4.12，6N HCl，110°，100小时;Asp，4.09;Thr，2.90;Ser，1.98;Glu，6.45;Ala，3.00;Val，2.95;Ile，0.98;Leu，1.04;Lys，4.11.
实施例2Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asp-OH([Asp28]-胸腺素α-1于肽合成烧瓶中，加入1.0g Boc-天冬氨酸β-苄酯树脂(0.5mmol/g)并采用下述步骤进行固相肽合成，其中，在每一循环中，按顺序将一种氨基酸并入于所说树脂上的正在增长的肽链上。另有说明除外，所有所用氨基酸衍生物均为L-构型(1)以溶于氯甲烷的50%三氟乙酸进行预洗涤;
(2)用溶于氯甲烷的50%三氟乙酸一道搅拌30分钟;
(3)用氯甲烷洗涤三次;
(4)用溶于氯甲烷的10%三乙胺溶液进行预洗涤;
(5)用溶于氯甲烷的10%三乙胺一道搅拌5分钟;
(6)用氯甲烷洗涤三次;
(7)同溶于氯甲烷的各为1.5mmol的Boc-Glu(OB21)-OH和N，N′-二环己基碳化二亚胺一道搅拌150分钟;
(8)用溶于氯甲烷溶液的50%异丙醇洗涤二次;
(9)用氯甲烷洗涤三次;
(10)茚三酮的显色反应试验;如为阳性重复步骤7-10;如为阴性，进行下一合成循环。
依次用下述Boc-氨基酸并在每一循环的步骤7中每次用一种氨基酸重复合成循环Boc-Ala-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Val-OH，Boc-Val-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Lys(Clz)-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Lys(Clz)-OH，Boc-Leu-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Ile-OH，Boc-Glu-(OBzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Val-OH，Boc-Ala-OH，Boc-Ala-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH和CH3COOH.
全部合成循环毕，保护的[Asp28]-胸腺α-1树脂具有结构
Ac-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Ala-Ala-Val-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-Ile-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(Clz)-Asp(OBzl)-Leu-Lys(ClZ)-Glu(OBzl)-Lys(ClZ)-Lys(ClZ)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-OCH2C6H4-树脂，重2.08g。
于2ml苯甲醚存在下，0℃下，将上述得到的受保护的部分肽树脂(1.0g)同10ml无水液态氢一起搅拌60分钟。蒸去过量的酸，残余物迅速用无水醚洗涤两次。接着把肽萃取入4%的乙酸铵(50ml)中，然后用蒸馏水(25ml)再萃取。把合并的萃取物浓缩到一小体积，尔后用Sephadex G-10柱(2.6×85cm，0.1M HOAC)进行脱盐。对肽峰洗脱液冷冻干燥得0.327g粗品。
用Hamilton PRP-1柱(2.15×25cm，粒度10μ，先3%后6%的乙腈(PH6)的磷酸钾缓冲液洗脱)对此粗品0.27g进行纯化。用HPLC进行分析，收集含所要物质的部分，用Sephadex G-10柱脱盐。冷冻主峰部分得35mg[Asp28]-胸腺素α-1。用HPLC进行分析，由于此胸腺素极性略强，酸性略高，所以正如所预计的那样，它的迁移率比胸腺素α-1的略高。经FAB质谱分析表明MH+＝3110(计算值MW＝3109.3)。对该酸水解物进行氨基酸分析表明此品具有正确的氨基酸成分;
6N HCl，110°，24小时;
Asp，4.00;Thr，3.10;Ser，2.54;Glu，5.85;Ala，2.80;Val，1.70;Ile，0.95;Leu，1.03;Lys，3.76 6N HCl，110°，100小时;Asp，4.00;Thr，3.03;Ser，2.21;Glu，6.12;Ala，2.81;Val，3.04;Ile，0.96;Leu，1.09;Lys，4.17.
实施例3

(胸腺素α-1三聚物)于肽合成烧瓶中加入2.0g甲基二苯甲基胺树脂(0.5mmol/g，1.0mmol)，用氯甲烷洗涤三次，接着用溶于氯甲烷的10%三乙胺洗涤一次。同溶于氯甲烷的10%三乙胺一道搅拌10分钟，用氯甲烷洗涤三次。然后把中性的此树脂同溶于氯甲烷的Boc-天冬氨酸α-苄酯和N，N′-二环己基碳化二亚胺(各为3mmol)反应75分钟形成具有Boc-Asp[HN-CH(C6H4-CH3)-树脂]-OB21结构的甲基二苯甲基胺树脂的Boc-天冬氨酸α-苄酯β-酰胺。为了去除对茚三酮实验很弱的阳性反应，用溶于氯甲烷中的4mmol乙酸和3mmol N，N′-二环己基碳化二亚胺对此Boc-氨基酸树脂作进一步处理(180分钟)。
按下面的步骤继续进行固相合成，其中，在每一循环中，把一种特定的氨基酸并入于树脂增长的肽链上。[在树脂上的肽链起初是单线性结构，直至在第28次循环并入甘氨酸残基和在第29次循环并入N2，N6-Di-Boc-赖氨酸。然后从第30次循环开始分成两个与同一赖氨酸残基相连的平行的链，此处两个单位的Boc-天冬酰胺残基同时并入两个链]。基本按上述实施例同样的办法。把20个体积的溶剂或试剂用于每一步骤(1)用溶于氯甲烷的50%三氟乙酸进行预洗涤;
(2)用溶于氯甲烷的50%三氟乙酸一道搅拌30分钟;
(3)用氯甲烷洗涤三次;
(4)用溶于氯甲烷的10%三乙胺进行预洗涤;
(5)用溶于二氯甲烷的10%三乙胺一道搅拌5分钟;
(6)用氯甲烷洗涤三次;
(7)同溶于氯甲烷的各为3mmol的Boc-Glu(OB21)-OH和N，N′-二环己基碳化二亚胺一道搅拌120分钟;
(8)用溶于氯甲烷的50%异丙醇洗涤两次;
(9)用氯甲烷洗涤三次;
(10)实验茚三酮显色反应，如为阳性，重复步骤7-10;如为阴性，进行下一合成循环。
依次使用下述Boc-氨基酸且在每一循环步骤7使用一种氨基酸来重复合成循环;Boc-Ala-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Val-OH，Boc-Val-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Leu-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Ile-OH，Boc-Glu-(OBzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Val-OH，Boc-Ala-OH，Boc-Ala-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH.
此时，从肽合成烧瓶中取出3.96g肽树脂，将Boc-Gly-OH用于一个循环而将Na-Boc-Ng-Boc-Lys(C12)-OH用于下一循环的步骤7以产生肽链组装的分叉点来让剩下的1.96g肽树脂继续合成。用Boc-Asn-OH，Boc-Glu(OBzl)，Boc-Ala-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Val-OH，Boc-Val-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Lys(Clz)-OH，Boc-Leu-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Lys(ClZ)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Ile-OH，Boc-Glu(OBzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Val-OH，Boc-Ala-OH，Boc-Ala-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，和CH3COOH.
继续进行合成。完成的受保护的胸腺素α-1三聚物树脂具有下述结构;重2.64g

腺素(α-1树脂)在2ml苯乙醚存在下，0℃度下，将上述获得的保护的胸腺素α-1三聚物树脂0.91g同10ml无水氟化氢一起搅拌60分钟。除去过量的酸后，用无水醚洗涤残余物两次。先将肽物质萃取入4%的乙酸铵中，然后用10ml蒸馏水再萃取。把合并的萃取物浓缩至约10ml，用Sephadex G-10柱(2.6×85cm，0.1M HOAC)脱盐，收集主峰值部分的洗脱物，冷冻干燥得0.35g或粗胸腺素α-1三聚物。
在5.45ml/分的流速下，以溶于磷酸钾8.5%-20%乙腈(PH6)线性梯度洗脱，用Hamilton PRP-1反相聚苯乙烯柱(2.15×250mm，10μ粒度)对所说粗品(0.34g)进行纯化后再用Sephadex G-10柱脱盐产出0.045g欲要的胸腺素α-1三聚物。HPLC分析表明，此三聚物是同源的且具有预计的氨基酸组成。6N HCl，110°，24小时;Asp，11.83;Thr，9.17;Ser，8.00;Glu，18.16;Gly，0.97;Ala，8.68;Val，6.54;Ile，3.04;Leu，3.18;Lys，12.58.6N HCl，110°，100小时;Asp，Asp，12.14;Thr，9.45;Ser，6.47;Glu，17.86;Gly，1.07;Ala，8.51;Val，8.79;Ile，2.89;Leu，3.11;Lys，13.11。
ES质谱分析表明此物具有正确的分子量9432.13(计算值MW＝9432.1)。
由于对所描述的实施方案在细节上可作许多变更，修改和变化，但其目的用以进行说明而并非用于限制本发明。
权利要求
1.具有通式(Ⅰ)R1-X-R2-Y的化合物或生物活性衍生物或其片段，其中X为Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu；R1是Ac或Z，其中的Ac是乙酰基，Z是
这里的Ac和X的含义同上；R2是Asn或Asp；R3是Asn或Asp；和Y是-OH或-NH2；其前提条件是如果R1是Ac和R2为Asn时，Y是-NH2。
2.权利要求1的化合物，其中的R1是Ac，R2是Asn和Y是-NH2。
3.权利要求1的化合物，其中的R1是Ac，R2是Asp和Y是-OH。
4.权利要求1的化合物，其中的R1是Z，R3是Asn，R2是Asp和Y是-OH。
5.权利要求1的化合物，其中的R1是Z，R3是Asn，R2是Asn，和Y是-OH。
6.一种由(Ⅱ)式组成的化合物其中R2是Asn或Asp;和其中X2是Val，Glu-ValLys-Glu-Val，Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Cer-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Glz-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，其中Z由下列通式表示
这里的R3是Asn或Asp和X3是Glu，Ala-Glu，Glu-Ala-Glu，Glu-Glu-Ala-Glu，Val-Glu-Glu-Ala-Glu，或X4-Val-Glu-Glu-Ala-Glu，其中X4是Val，Glu-Val，Lys-Glu-Val，Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，;其条件是当R2是Asn时，X2是Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，or z-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val.
7.权利要求6的化合物，其中X2是Val，Glu-Val，Lys-Glu-Val，Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val或Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val。
8.权利要求6的化合物，其中X2是Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val或Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val.
9.权利要求6的化合物，其中X2是Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，或Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val.
10.权利要求6的化合物，其中X2是Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val。
11.权利要求6的化合物，其中X2是Lys-Gly-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Glu-Val。
12.权利要求6的化合物，其中X2是Z-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，其中Z由下列通式代表
这里的R3是Asn或Asp和X3是Glu，Ala-Glu，Glu-Ala-Glu，Glu-Glu-Ala-Glu或Val-Glu-Glu-Ala-Glu。
13.权利要求12的化合物，其中的R3是Asn。
14.权利要求6的化合物，其中X2是Z-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Glu-Val，Z由下列通式表示
这里的R3是Asn或Asp和 X3是X4-Val-Glu-Glu-Ala-Glu，其中的X4是Val，Glu-Val，Lys-Glu-Val，Lys-Lys-Glu-Val，Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Lys-Glu-Val or Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val。
15.权利要求14的化合物，其中的R3是Asn。
16.权利要求6的化合物，其中X2是Z-Ser-Asp-Ala-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，其中Z由下列通式表示
此处R3是Asn或Asp和X3是X4-Val-Glu-Glu-Ala-Glu，
17.权利要求16的化合物，其中R3是Asn。
18.权利要求6的化合物，其中X2是Z-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，其中Z由下列通式表示
其中R3是Asn或Asp和X3是X4-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-，其中 X4is Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val，Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val or Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val。
19.权利要求18的化合物，其中R3是Asn。
全文摘要
本发明提供了一种其中X具有下述含义的(I)R式化合物或生物活性衍生物或其片段。
文档编号C07K14/575GK1094411SQ9311934
公开日1994年11月2日 申请日期1993年9月27日 优先权日1993年2月3日
发明者王世升 申请人:阿尔法-1生物医药品有限公司

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