1.本发明涉及细胞保存技术领域，更具体地，涉及一种宫颈细胞保存液。


背景技术：

2.巴氏涂片法和tct都是针对宫颈脱落细胞进行细胞学检查。巴氏涂片法是指通过阴道窥器刮取宫颈脱落细胞，放在显微镜下观察细胞是否异常。巴氏涂片法价格低廉，便于普查，自1941年问世以来，被广泛用于宫颈癌筛查，为降低宫颈癌发病率和死亡率做出了重要贡献。巴氏涂片法较为便宜，便于普查，但缺点是这种方法制备的标本细胞堆积在一起，不便于观察，诊断准确率较低，有一定的误诊、漏诊率。tct技术是用小刷子刷出细胞，然后刷到装有固定液的小瓶子里，经过离心、制片、染色等步骤获得较为优质的涂片，筛查率较高漏诊率比较低。目前，tct技术已经基本取代了传统巴氏涂片用于宫颈癌筛查。我国《宫颈癌诊疗规范(2018年版)》建议，我国女性应主要采用tct筛查，hpv检测可以作为tct的有效补充，二者联合有利于提高筛查效率。
3.细胞保存液是决定tct检测质量的关键试剂。采集的宫颈细胞样本中常常含有血液、黏液等成分，对有诊断意义的细胞形成遮挡，影响后续诊断。性能优良的细胞保存液需具备处理含血液、黏液样本的能力。
4.目前，市面上的细胞保存液绝对环境造成污染，且对检测人员的健康造成一定的威胁；对细胞形态固定不佳、不能很好地保留细胞核和细胞质的形态；缺少对含有黏液、血液的样本进行适当处理的能力，给后续诊断造成潜在的影响；或者含有一些不必要的成分，明显增加成本。


技术实现要素：

5.为了解决上述技术问题，本发明提供了一种，
6.本发明的宫颈细胞保存液具有以下优点：
7.1、不含有对人体有害的成分，安全环保；
8.2、对含血液、黏液的样本具有良好的处理能力；
9.3、可以使宫颈脱落细胞中的蛋白质变性，终止细胞活动，可使细胞形态保持在其取样时的状态；
10.4、可防腐杀菌，保证保存在其中的宫颈细胞不被外来微生物分解；
11.5、可使细胞保存更长的时间；
12.6、可避免产生沉淀，同时防止宫颈细胞聚集成团，影响观察；
13.7、成本低廉。
14.本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。
附图说明
15.附图用来提供对本发明技术方案的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本技术的实施例一起用于解释本发明的技术方案，并不构成对本发明技术方案的限制。
16.图1是本发明实施例1的细胞图；
17.图2是本发明实施例2的细胞图；
18.图3是本发明实施例3的细胞图；
19.图4是本发明实施例4的细胞图；
20.图5是本发明实施例5的细胞图；
21.图6是本发明对比例1的细胞图；
22.图7是本发明对比例2的细胞图；
23.图8是本发明对比例3的细胞图；
24.图9是本发明对比例4的细胞图；
25.图10是本发明对比例5的细胞图；
26.图11是本发明对比例6的细胞图；
27.图12是本发明对比例7的细胞图；
28.图13是本发明对比例8的细胞图；
29.图14是本发明对比例9的细胞图。
具体实施方式
30.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例的附图，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
31.本发明一实施例提供一种宫颈细胞保存液，包括：醇类溶液、缓冲液、酸溶液、表面活性剂、氯化钠、抗凝剂以及金属离子。
32.醇类溶液起到固定剂的作用，一方面可以使宫颈脱落细胞中的蛋白质变性，终止细胞活动，使细胞形态保持在其取样时的状态；另一方面，醇类也具有防腐杀菌的作用，可以保证保存在其中的宫颈细胞不被外来微生物分解，本技术无需额外添加防腐剂，可节省成本。
33.蛋白质二级结构主要是由氢键维持的，ph的重大改变会使蛋白质原有的分子间氢键发生变化，破坏蛋白质二级结构，导致细胞形态发生不可预知的改变。在细胞保存液中引入缓冲液，可为保存在其中的宫颈细胞提供与其生活状态相似的ph环境，起到保持细胞形态的作用。
34.细胞内具有一定的离子浓度，如果细胞所处的溶液中离子浓度过低，细胞形态会因渗透作用发生膨胀，严重时会使细胞涨破。因此细胞保存液需要有一定的离子强度，维持细胞内外渗透压平衡，氯化钠即为良好的渗透压调节剂。
35.在细胞保存液中的宫颈细胞蛋白质由于前面所述的醇类溶液的作用，蛋白质失活，因此细胞膜上的离子泵失效，细胞内用于维持蛋白质结构稳定的金属离子浓度会因逐渐渗透到溶液中而降低，引起蛋白质结构不稳定，宏观上主要会导致细胞核崩解。在细胞保
存液中加入金属离子可以维持细胞核的结构，有利于宫颈细胞样本长期保存。
36.可见，醇类溶液、缓冲液、氯化钠及金属离子能够共同保持细胞的形态，避免细胞变形，影响后续的检测准确性。
37.抗凝剂可以阻止血液凝聚而产生红色沉淀，可进一步血液样本对诊断的影响。
38.表面活性剂可以促进黏液溶解，防止宫颈细胞聚集成团影响观察
39.本发明的另一实施例中，所述醇类溶液为甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或几种。
40.该些醇类价格合理，且对细胞及环境均无危害。
41.本发明的另一实施例中，所述金属离子为ca2+、cu2+、fe2+、mn2+、zn2+中的一种或多种。
42.该些金属离子价格低廉、获取容易，且能较好的维持细胞核的结构。
43.本发明的另一实施例中，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸钾、枸缘酸钠、枸缘酸钾肝素锂、肝素钠中的一种或几种。
44.该些抗凝剂的抗凝效果良好，使用后不会产生红色沉淀。
45.本发明的另一实施例中，所述缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸二氢钾-氢氧化钠、tris-盐酸、hepes、巴比妥钠-盐酸中的一种。
46.该些缓冲液易购买，价格便宜，成本低，且可使宫颈细胞保存液保持在一个较稳定的ph范围。
47.本发明的另一个实施例中，所述缓冲液的ph为6-8。
48.当ph大于8或者小于6时，所形成的宫颈细胞保存液的ph将与人体宫颈细胞的的ph相差较大，影响该细胞的稳定性。
49.本发明的另一实施例中，所述酸溶液为乙酸。
50.血液样本中影响诊断的主要是红细胞，红细胞的细胞膜较为脆弱，乙酸会使红细胞的细胞膜破裂，而不会使宫颈细胞的细胞膜破裂。破裂的红细胞的细胞膜不容易在显微镜下被观察到。乙酸的加入消除了红细胞对诊断的影响。
51.本发明的另一实施例中，所述表面活性剂为非离子表面活性剂，可防止溶液中的电解质对表面活性剂性能产生影响。
52.本发明的另一实施例中，所述表面活性剂为长链脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、聚氧乙烯烷基胺、聚氧乙烯烷基醇酰胺中的一种或多种。
53.该些非离子表面活性剂的价格优惠，且溶解黏液的效果较好，没有聚集成团的现象。
54.本发明的另一实施例中，所述保存液的ph为6-8。当保存液的ph大于8或者小于6时，与人体宫颈细胞的ph相差较大，将破坏该细胞的稳定性。
55.本发明的另一实施例中，所述醇类溶液、缓冲液、酸溶液、表面活性剂、氯化钠、乙二胺四乙酸钠以及金属离子的质量比为：20-50：1-5：0.1-1：0.01-0.5：0.1-1：0.1-1：0.01-0.1。
56.采用该种比例得到的宫颈细胞保存液其ph稳定，溶解黏液效果较好，防止红细胞沉淀，同时可更好的保持细胞形态及杀菌效果。
57.为了更清楚的对本技术的方案进行陈述，通过以下实施例进行解释。
58.实施例1
59.将乙醇400g、磷酸氢二钠21.85g、磷酸二氢钠6.09g、乙酸5g、烷基酚聚氧乙烯醚2g、氯化钠9g，乙二胺四乙酸钠2g以及氯化钙1.3g依次加入500g纯水中，待所有物质均溶解完全后，继续补充纯水至1000g得到该宫颈细胞保存液；利用氢氧化钠调节该细胞保存液的ph为7。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、细胞形态保持良好、无血液凝固产生的红色沉淀、无黏液导致的细胞聚集成团现象。
60.实施例2
61.将甲醇200g、hepes 10g、乙酸1g、长链脂肪醇聚氧乙烯醚0.1g、氯化钠1g，枸缘酸钠1g以及氯化铜0.21g依次加入300g纯水中，待所有物质均溶解完全后，继续补充纯水至1000g得到该宫颈细胞保存液；利用盐酸将该细胞保存液的ph调整为6。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、细胞形态保持良好、无血液凝固产生的红色沉淀、无宫颈细胞聚集成团现象。
62.实施例3
63.将异丙醇500g、磷酸二氢钾36g、氢氧化钠14g、乙酸10g、脂肪酸聚氧乙烯酯5g、氯化钠10g，肝素钠10g以及氯化锌2.1g依次加入380g纯水中，待所有物质均溶解完全后，继续补充纯水至1000g得到该宫颈细胞保存液；利用氢氧化钠调整该细胞保存液的ph为8。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、细胞形态保持良好、无血液凝固产生的红色沉淀、无黏液导致的细胞聚集成团现象。
64.实施例4
65.将甲醇100g、乙醇100g、异丙醇100g、巴比妥钠-盐酸30g、乙酸6g、聚氧乙烯烷基醇酰胺1g、聚氧乙烯烷基胺2g、氯化钠6g，肝素锂3g、乙二胺四乙酸钾2g以及氯化锰1.8g依次加入420g纯水中，待所有物质均溶解完全后，继续补充纯水至1000g得到该宫颈细胞保存液；利用氢氧化钠调整该细胞保存液的ph为7。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、细胞形态保持良好、无血液凝固产生的红色沉淀、无黏液导致的细胞聚集成团现象。
66.实施例5
67.将甲醇120g、乙醇230g、tris-盐酸18g、巴比妥钠-盐酸14g、乙酸7g、聚氧乙烯烷基醇酰胺1g、聚氧乙烯烷基醇酰胺7g，肝素锂3g、乙二胺四乙酸钠2g以及氯化亚铁0.9g依次加入420g纯水中，待所有物质均溶解完全后，继续补充纯水至1000g得到该宫颈细胞保存液；利用氢氧化钠调整该细胞保存液的ph为7。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、细胞形态保持良好、无血液凝固产生的红色沉淀、无黏液导致的细胞聚集成团现象。
68.对比例1
69.不加入氯化钙，其他与实施例1相同。该细胞保存液的抗菌性良好，无微生物生长、无血液凝固产生的红色沉淀、无黏液导致的细胞聚集成团现象，但细胞核形态异常，有些细胞的细胞核丢失。
70.对比例2
71.不加入烷基酚聚氧乙烯醚，其他与实施例1相同。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、细胞形态保持良好、无血液凝固产生的红色沉淀，但存在黏液导致的细胞聚集成团现象。(图5)
72.对比例3
73.不加入氯化钠，其他与实施例1相同。。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、
无血液凝固产生的红色沉淀、无黏液导致的细胞聚集成团现象，但细胞形态不佳，细胞吸水膨胀导致细胞破裂。
74.对比例4
75.不加入乙二胺四乙酸钠，其他与实施例1相同。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、细胞形态保持良好、无宫颈细胞聚集成团现象，但有大量血液凝固产生的红色沉淀。
76.对比例5
77.将乙醇400g、磷酸氢二钠21.85g、磷酸二氢钠6.09g、乙酸5g、吐温-2002g、氯化钠9g、乙二胺四乙酸钠2g以及氯化钙25g依次加入500g纯水中，待所有物质均溶解完全后，继续补充纯水至1000g得到该宫颈细胞保存液；利用氢氧化钠调节细胞保存液的ph为7。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、无血液凝固产生的红色沉淀，但存在黏液导致的细胞聚集成团现象，且细胞形态不佳，部分细胞膜损坏，导致细胞边界不清。
78.对比例6
79.不利用氢氧化钠对该细胞液的ph进行调节，利用ph试纸对其进行检测得到ph为5，其他与实施例1相同。该细胞保存液抗菌性良好，无微生物生长、细胞形态不佳。
80.对比例7
81.金属离子添加的为氯化镁，其他与实施例1相同。该细胞保存液细胞形态异常，有少量细胞的细胞核丢失。
82.对比例8
83.将实施例的乙酸替换为盐酸，其他与实施例1相同。该细胞保存液细胞膜破裂严重。
84.对比例9
85.不加入乙酸，其他与实施例1相同。该细胞保存液存在大量红细胞，影响诊断。
86.虽然本发明所揭露的实施方式如上，但所述的内容仅为便于理解本发明而采用的实施方式，并非用以限定本发明。任何本发明所属领域内的技术人员，在不脱离本发明所揭露的精神和范围的前提下，可以在实施的形式及细节上进行任何的修改与变化，但本发明的专利保护范围，仍须以所附的权利要求书所界定的范围为准。