1.本发明属于动物实验设备技术领域，具体涉及一种盐浓度梯度培养皿的制备工具及制备方法。


背景技术：

2.由于繁殖快、成本低，秀丽隐杆线虫成为应用最广泛的动物模型之一，对生物医学发展具有重要推动作用。秀丽隐杆线虫的各项试验以及干预方法之后，需要有相应的观测指标，检验试验趋势和结果，其中盐浓度趋化性试验是常用的行为学指标之一，因为它的客观性超过其他运动行为检测，且可以检测线虫的趋化性，所以盐浓度趋化性试验是较好的检测指标，但制作盐浓度梯度测试培养皿需要很长时间，且不能保证琼脂块尺寸的一致性，会对结果产生影响，简化化学趋向性试验的问题亟待解决。
3.化学趋向性试验，可以检测线虫的联想性学习能力，常规方法的模型建立大致分为：
4.(1)提前一天配制好不含nacl的线虫培养基，并在其培养皿背面设置直线距离为3cm的两点a和b，另外取距离a、b两点等距离3cm处一点，记为c点。在a点位置放置一块大约1cm2含有100mm nacl的琼脂块，然后将培养皿放至4℃冰箱过夜，使a点的na cl缓慢扩散开来，形成一个以a为中心的盐浓度梯度测试培养皿，即为化学趋向性介导的联想性学习模型，待用。
5.(2)盐浓度梯度测试培养皿使用前在a、b两点位置各滴加5ul 0.2mm的盐酸左旋咪唑，以作对照。
6.(3)将对照组和试验组线虫分别放至不含大肠杆菌的ngm培养基上，20℃培养箱中饥饿4h，之后用m9溶液将饥饿后的线虫清洗下来，转移到测试培养皿上c点，进行测试，于20℃条件下测试2h，观察并记录a、b两点(1厘米半径)的线虫数量。
7.(4)化学趋向性学习系数(ci)的计算：化学趋向性学习系数(ci)＝(a区域内线虫数目-b区域内线虫数目)/(a区域内线虫数目+b区域内线虫数目)。
8.常规方法中基本凭经验和感觉画出以abc三点为中心的圆，由于直尺测量会有相对的误差，且手动化圆，圆周半径尺寸的一致性不易控制，会致使误差偏大。且操作时间长，加大了实验投入。


技术实现要素：

9.有鉴于此，本发明旨在提出一种盐浓度梯度培养皿的制备工具，该制备工具能有效地统一含高浓度nacl的琼脂块的切割尺寸；并准确标记盐圈、对照圈及生物圈的位置，大大减少了试验误差；且构造简单，造价便宜，操作便捷。
10.本发明的另一目的在于提供一种盐浓度梯度培养皿的制备方法。
11.为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
12.一种盐浓度梯度培养皿的制备工具，包括由支撑结构支撑固定的四个圈体，分别
为第一圈体、第二圈体、第三圈体和第四圈体，四个所述圈体的轴线平行，且底面齐平；
13.所述第一圈体位于第二圈体内，且与第二圈体的轴线重合；所述第二圈体与第三圈体的直径相同；所述第二圈体、第三圈体和第四圈体的轴心连线为等边三角形。
14.进一步地，所述第二圈体的直径为第一圈体的两倍；所述第四圈体的直径小于所述第二圈体的直径。
15.进一步地，所述支撑结构为若干支撑杆，若干所述支撑杆分别与四个所述圈体固定连接，若干所述支撑杆连接固定。
16.进一步地，每个圈体上均固定连接有两个支撑杆；每个圈体上固定连接的两个支撑杆均与该圈体在轴线方向上呈切线位置关系。
17.进一步地，若干所述支撑杆呈三角叉状于四个所述圈体的上方连接固定；若干所述支撑杆的端部交汇于一点。
18.进一步地，所述第四圈体的底边上设有刃部；所述刃部的窄边厚度大于1mm。
19.一种使用上述制备工具的盐浓度梯度培养皿的制备方法，包括如下步骤：
20.步骤一、将四个圈体放置于实验培养皿的背面，使用记号笔沿着圈体的内圈或外圈画圆，第一圈体标记为a，第三圈体标记为b，第四圈体标记为c；
21.步骤二、将第四圈体沿其轴向插入含高浓度nacl的ngm培养皿内，稍用力将第四圈体压进琼脂培养基，上提第四圈体，含高浓度nacl的琼脂块被第四圈体带出含高浓度nacl的ngm培养皿；
22.步骤三、将第四圈体内的琼脂块转移至实验培养皿内，用镊子轻轻将琼脂块推下放置在a圈位置，然后将培养皿放至冰箱过夜后即可使用。
23.相对于现有技术，本发明所述的盐浓度梯度培养皿的制备工具及制备方法具有以下有益效果：
24.(1)本发明所述的一种盐浓度梯度培养皿的制备工具及制备方法，能有效地统一含高浓度nacl的琼脂块的切割尺寸。
25.(2)本发明所述的一种盐浓度梯度培养皿的制备工具及制备方法，能够准确标记盐圈、对照圈及生物圈的位置，大大减少了试验误差。
26.(3)本发明所述的一种盐浓度梯度培养皿的制备工具及制备方法，构造简单，造价便宜，操作便捷。
27.上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，而且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举本发明的具体实施方式。
附图说明
28.构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
29.图1为本发明所述的盐浓度梯度培养皿的制备工具整体结构示意图；
30.图2为本发明所述的盐浓度梯度培养皿的制备工具侧视结构示意图；
31.图3为本发明所述的盐浓度梯度培养皿的制备方法的步骤一示意图；
32.图4为本发明所述的盐浓度梯度培养皿的制备方法的步骤二示意图；
33.图5为本发明所述的盐浓度梯度培养皿的制备方法的步骤三示意图。
34.附图标记说明：
35.1-第一圈体；2-第二圈体；3-第三圈体；4-第四圈体；41-刃部；5-支撑杆；10-实验培养皿；20-含高浓度nacl的ngm培养皿。
具体实施方式
36.除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
37.下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。
38.如图1-图2所示，本发明提供了一种盐浓度梯度培养皿的制备工具，该工具包括由支撑结构支撑固定的四个圈体，分别为第一圈体1、第二圈体2、第三圈体3和第四圈体4，四个圈体的轴线平行，且底面齐平；其中，第一圈体1位于第二圈体2内，且与第二圈体2的轴线重合；第二圈体2与第三圈体3的直径相同；第二圈体2、第三圈体3和第四圈体4的轴心连线为等边三角形。
39.本发明提供的盐浓度梯度培养皿的制备工具，通过第四圈体4切割高浓度nacl的琼脂块，能有效地统一含高浓度nacl的琼脂块的切割尺寸；能够准确标记盐圈、对照圈及生物圈的位置，大大减少了试验误差；且构造简单，造价便宜，操作便捷。本发明提供的盐浓度梯度培养皿的制备方法，使用上述制备工具制备盐浓度梯度培养皿，可大大提高制备盐浓度梯度培养皿的速度及制备精度。
40.具体的，本实施例中，第二圈体2的直径为第一圈体1的两倍；第四圈体4的直径小于第二圈体2的直径；更优选的，第四圈体4与第一圈体1的直径相同；实际使用中，第一圈体1与第四圈体4的直径均设定为1cm，第二圈体2和第三圈体3的直径均设定为2cm。也可针对不同大小的试验培养皿10设计加工不同尺寸的制备工具。
41.进一步地，本实施例中，支撑结构为若干支撑杆5，若干支撑杆5分别与四个圈体固定连接，若干支撑杆5连接固定；同时，为了保证连接的稳定性，每个圈体上均固定连接有两个支撑杆5。
42.进一步地，每个圈体上固定连接的两个支撑杆5均与该圈体在轴线方向上呈切线位置关系；同时，若干支撑杆5呈三角叉状于四个圈体的上方连接固定；若干支撑杆5的端部交汇于一点。该设计的目的在于降低支撑杆5对圈体轴向空间的遮挡，便于操作者沿圈体的内沿标记画圈，当然，操作者也可根据需要沿圈体的外沿标记画圈。
43.进一步地，本实施例中，第四圈体4的底边上设有刃部41，以使其能够在圈体较厚时降低切割琼脂块时的难度；同时，为了避免操作者清洗时受伤，该刃部41的窄边厚度大于1mm。
44.如图3-图5所示，一种使用上述制备工具的盐浓度梯度培养皿的制备方法，包括如下步骤：
45.步骤一、将四个圈体放置于实验培养皿10的背面，使用记号笔沿着圈体的内圈或外圈画圆，第一圈体1标记为a，第三圈体3标记为b，第四圈体4标记为c；
46.步骤二、将第四圈体4沿其轴向插入含高浓度nacl的ngm培养皿20内，稍用力将第
四圈体4压进琼脂培养基，上提第四圈体4，含高浓度nacl的琼脂块被第四圈体4带出含高浓度nacl的ngm培养皿20；
47.步骤三、将第四圈体4内的琼脂块转移至实验培养皿10内，用镊子轻轻将琼脂块推下放置在a圈位置，然后将培养皿放至冰箱过夜后即可使用。
48.使用时，将试验生物放于c圈范围内，观察试验生物的运动趋势。
49.以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。