1.本发明涉及一种培养繁殖方法，特别是一种景天科拟石莲属东云系多肉植物组织培养繁殖方法，属于植物栽培技术领域。


背景技术：

2.景天科拟石莲属多肉植物，根据其叶片和株型的不同，可分为月影系、姬莲系和东云系等。相对于其他拟石莲属植物，东云系（echeveria agavoides ）多肉存在的问题如下：一是分株较少，二是2-3年的小苗基本无法分苗，三是叶插成活率极低。目前，市场上较为流行的东云系品种一般采用种子繁殖，但种子繁殖不易成活，且开花非常小，授粉困难，而且东云系种子在幼苗期的养护极为困难，稍不注意就会全株死亡，给种植户或企业带来经济损失，同时，较低的繁殖率和叶插率也使东云系多肉的价格较高，消费者难于接受，影响销量，致使种植户或企业难以获得较高的经济利益及市场前景。


技术实现要素：

3.为解决现有景天科拟石莲属东云系多肉植物采用种子繁殖带来的繁殖率低、授粉困难、幼苗期养护不易、容易死亡等问题，本发明提供一种景天科拟石莲属东云系多肉植物组织培养繁殖方法。
4.本发明通过下列技术方案完成：一种景天科拟石莲属东云系多肉植物组织培养繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：1）外植物体消毒处理：将选取的外植体移至超净工作台上，用质量浓度为75%的酒精液浸泡30s，之后用无菌水清洗3～5次，再用混合有吐温的质量浓度为0.08～0.12%的升汞溶液消毒5～8min，吐温量是每1000ml升汞溶液滴加2～3滴吐温，最后用无菌水冲洗4～5次，并用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒时的受伤部分，得无菌外植体；2）诱导培养：将步骤1）的无菌外植体接种于下列诱导培养基中：ms+0.5～1.0mg/l的6-ba+0.1～1.0mg/l的naa+20～30g/l的糖+6～8g/l的琼脂，ph值5.8～6.0，在25
±
2℃、光照强度2000-3000lx、光照时间10-12h/d，相对湿度 50-60％的条件下进行诱导培养30～45d 后，外植体基部膨大，诱导出愈伤组织并长出小芽；3）继代培养：将步骤2）长出的小芽切下，接种到下列培养基中：ms+0.1～1.0mg/l的6-ba+0.1～0.5mg/l的naa+20～30g/l的糖+6～8g/l的琼脂中，ph值5.8～6.0，在25
±
2℃、光照强度2000-3000lx、光照时间10-12h/d，相对湿度 50-60％的条件下进行继代培养1～2个月后，使丛生芽冠幅长至1.5～2cm；4）生根培养：将步骤3）的丛生芽接种到下列生根培养基中：ms+0.1～0.5mg/l的naa+20～30g/l的糖+6～8g/l的琼脂中，ph值5.8～6.0，在25
±
2℃、光照强度2000-3000lx、光照时间10-12h/d，相对湿度 50-60％的条件下进行生根培养4～6周后，得生根苗；5）炼苗与移栽：将步骤4）的生根苗移到温室中，在25
±
2℃，通风的温室中驯化1～3周，然后取出组培苗，插于基质中，在遮光度为75～85%、湿度为60～80%的环境下，养护10
～14d后，适当增加光照、降低湿度，直至得到完整植株。
5.所述步骤（1）的外植体为花箭或侧芽叶片。
6.所述步骤（5）的多菌灵为市购粉末产品。
7.所述步骤（5）的基质为下列质量比的组分：泥炭土:珍珠岩=3:1。
8.所述步骤（5）的组培苗，需切除根，仅留组培苗基部的愈伤组织块，并用50%多菌灵可湿性粉剂涂抹切口处。
9.本发明中的%均为质量百分比。
10.本发明具有下列优点及效果：采用上述方案，可提高景天科拟石莲属东云系多肉植物的繁殖成活率，其建立的组培再生体系与传统繁殖方式相比，不受季节、材料、环境的限制，并通过人工控制植物所需要的环境，全年均可生产，解决了东云系植物繁殖方式单一、速度慢、市场稀缺等问题，为其种苗产业化、市场化提供技术支持。实为一理想的繁殖方法。
附图说明
11.图1为实施例1的东云系多肉
‘
hbg’组培快繁体系的建立图；图2为实施例2的东云系多肉
‘
美国双头乌木’组培快繁体系的建立图；图3为实施例3的东云系多肉
‘
阿姆斯特壮’组培快繁体系的建立图。
12.图1中：1-a：
‘
hbg’母株；1-b：生根苗；1-c：移栽30d后的过渡苗。
13.图2中：2-a：
‘
美国双头乌木’母株；2-b：愈伤组织的诱导；2-c：生根苗；2-d：移栽30d后的过渡苗。
14.图3中：3-a：
‘
阿姆斯特壮’母株；3-b：生根苗；3-c：移栽30d后的过渡苗。
具体实施方式
15.实施例1一种景天科拟石莲属东云系多肉植物组织培养繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：1）外植物体消毒处理：将选取的选取的
‘
hbg’花箭作为外植体，移至超净工作台上，用质量浓度为75%的酒精液浸泡30s，之后用无菌水清洗3次，再用混合有吐温的质量浓度为0.08%的升汞溶液消毒5min，吐温量是每1000ml升汞溶液滴加2滴吐温，最后用无菌水冲洗4次，并用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒时的受伤部分，污染率20.5%，成活率达到50%以上，得无菌外植体；2）诱导培养：将步骤1）的无菌外植体接种于下列诱导培养基中：ms+0.5mg/l的6-ba+0.1mg/l的naa+20g/l的糖+6g/l的琼脂，ph值5.8，在25
±
2℃、光照强度3000lx、光照10h/d，相对湿度 50％的条件下进行诱导培养30d 后，外植体基部膨大，诱导出愈伤组织并长出小芽，统计诱导率达到90%以上；3）继代培养：将步骤2）长出的小芽切下，接种到下列培养基中：ms+0.1mg/l的6-ba+0.1mg/l的naa+20g/l的糖+6g/l的琼脂中，ph值5.8，在25
±
2℃、光照强度3000lx、光照10h/d，相对湿度 50％的条件下进行继代培养1个月后，丛生芽冠幅长至1.5cm；4）生根培养：将步骤3）的丛生芽接种到下列生根培养基中：ms+0.1mg/l的naa+
20g/l的糖+6g/l的琼脂中，ph值5.8，在25
±
2℃、光照强度3000lx、光照10h/d，相对湿度 50％的条件下进行生根培养4周后，得生根苗，生根率100%，根长1.5-2cm，株高1-3cm；5）炼苗与移栽：将步骤4）的生根苗移到温室中，在25
±
2℃，通风的温室中驯化1周，然后取出组培苗，切除根，仅留组培苗基部的愈伤组织块，并用50%多菌灵可湿性粉剂涂抹切口处，插于泥炭土:珍珠岩=3:1质量比的基质中，在遮光度为75%、湿度为60%的环境下，养护10d后，适当增加光照、降低湿度，直至得到
‘
hbg’完整植株，成活率达到95%以上。
16.实施例2一种景天科拟石莲属东云系多肉植物组织培养繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：1）外植物体消毒处理：将选取的
‘
美国双头乌木’花箭作为外植体，移至超净工作台上，用质量浓度为75%的酒精液浸泡30s，之后用无菌水清洗5次，再用混合有吐温的质量浓度为0.12%的升汞溶液消毒8min，吐温量是每1000ml升汞溶液滴加3滴吐温，最后用无菌水冲洗5次，并用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒时的受伤部分，得无菌外植体，污染率10.2%，成活率达到30%以上；2）诱导培养：将步骤1）的无菌外植体接种于下列诱导培养基中：ms+1.0mg/l的6-ba+1.0mg/l的naa+30g/l的糖+8g/l的琼脂，ph值6.0，在25
±
2℃、光照强度2000lx、光照12h/d，相对湿度 50％的条件下进行诱导培养45d 后，外植体基部膨大，诱导出愈伤组织并长出小芽，统计诱导率达到83%以上；3）继代培养：将步骤2）长出的小芽切下，接种到下列培养基中：ms+1.0mg/l的6-ba+0.5mg/l的naa+30g/l的糖+8g/l的琼脂中，ph值6.0，在25
±
2℃、光照强度2000lx、光照12h/d，相对湿度 50％的条件下进行继代培养2个月后，丛生芽冠幅长至2cm；4）生根培养：将步骤3）的丛生芽接种到下列生根培养基中：ms+0.5mg/l的naa+30g/l的糖+8g/l的琼脂中，ph值6.0，在25
±
2℃、光照强度2000lx、光照12h/d，相对湿度 50％的条件下进行生根培养6周后，得生根苗，生根率100%，株高3cm；5）炼苗与移栽：将步骤4）的生根苗移到温室中，在25
±
2℃，通风的温室中驯化1～3周，然后取出组培苗，切除根，仅留组培苗基部的愈伤组织块，并用50%多菌灵可湿性粉剂涂抹切口处，栽植于泥炭土:珍珠岩=3:1质量比的基质中，在遮光度为85%、湿度为80%的环境下，养护14d后，适当增加光照、降低湿度，直至得到
‘
美国双头乌木’完整植株，成活率达到73%以上。
17.实施例3一种景天科拟石莲属东云系多肉植物组织培养繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：1）外植物体消毒处理：将选取的
‘
阿姆斯特壮’侧芽叶片作为外植体，移至超净工作台上，用质量浓度为75%的酒精液浸泡30s，之后用无菌水清洗4次，再用混合有吐温的质量浓度为0.10%的升汞溶液消毒6min，吐温量是每1000ml升汞溶液滴加2滴吐温，最后用无菌水冲洗4次，并用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒时的受伤部分，得无菌外植体，污染率5.0%，成活率达到20%以上；2）诱导培养：将步骤1）的无菌外植体接种于下列诱导培养基中：ms+0.7mg/l的6-ba+0.5mg/l的naa+25g/l的糖+7g/l的琼脂，ph值5.9，在25
±
2℃、光照强度2500lx、光照时
间11h/d，相对湿度 55％的条件下进行诱导培养38d 后，外植体基部膨大，诱导出愈伤组织并长出小芽，诱导率达到62%以上；3）继代培养：将步骤2）长出的小芽切下，接种到下列培养基中：ms+0.5mg/l的6-ba+0.3mg/l的naa+25g/l的糖+7g/l的琼脂中，ph值5.9，在25
±
2℃、光照强度2500lx、光照时间11h/d，相对湿度 55％的条件下进行继代培养1个月后，使丛生芽冠幅长至1.8cm；4）生根培养：将步骤3）的丛生芽接种到下列生根培养基中：ms+0.3mg/l的naa+25g/l的糖+7g/l的琼脂中，ph值5.9，在25
±
2℃、光照强度2500lx、光照时间11h/d，相对湿度 55％的条件下进行生根培养5周后，得生根苗，生根率100%，株高2.5-3cm；5）炼苗与移栽：将步骤4）的生根苗移到温室中，在25
±
2℃，通风的温室中驯化2周，然后取出组培苗，切除根，仅留组培苗基部的愈伤组织块，并用50%多菌灵可湿性粉剂涂抹切口处，插于泥炭土:珍珠岩=3:1质量比的基质中，在遮光度为80%、湿度为70%的环境下，养护12d后，适当增加光照、降低湿度，直至得到
‘
阿姆斯特壮’完整植株，成活率达到75%以上。