1.本发明涉及一种中药组合物，具体涉及一种能够促进皮肤细胞增殖的中药提取物。本发明还涉及一种能够促进皮肤细胞增殖的中药制剂。


背景技术：

2.随着生活水平的提高，人们对皮肤的外观和状态有了更高的要求。随着年龄的增长，皮肤衰老是不可避免的问题。皮肤衰老主要表现为皮肤皱纹增多，干燥粗糙以及皮肤凹陷和松弛，其可能由生理性因素和环境因素引起。导致皮肤衰老的主要环境因素为光老化，如紫外线等光源照射会导致皮肤生理性衰老的加速。真皮厚度是影响皮肤衰老的关键因素，而成纤维细胞是真皮的主要组成细胞。真皮中的成纤维细胞和胶原纤维、细胞外基质等共同组成真皮成分，并维持皮肤的弹性和滋润。而皮肤衰老伴随着以真皮成纤维细胞为主的细胞结构和功能的改变，以及生长的停滞。目前已有包括维生素、信号通路调节剂等针对光老化抑制皮肤衰老的药物，但在现代中药领域美容产品的开发仍存在较大缺口。


技术实现要素：

3.本发明所要解决的技术问题是提供一种能够促进皮肤细胞增殖的中药提取物，它可以促进皮肤细胞增殖，从而抗皮肤细胞老化。
4.为解决上述技术问题，本发明能够促进皮肤细胞增殖的中药提取物的技术解决方案为，其提取方法包括以下步骤：
5.提取原料包括：4～10重量份的苦杏仁，2～10重量份的瓜蒌仁，2～10重量份的瓜蒌皮，称取所述提取原料并将其捣碎；加水量为药量的6～18倍，煎煮30～150分钟，取煎煮液；再加水量为药量的3～18倍，煎煮20～100分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；在10～100℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.00～2.00；然后加入无水乙醇，边加边搅拌，使含醇量达20～90％之间；静置6～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在20～90℃以下真空浓缩，得到所述能够促进皮肤细胞增殖的中药提取物。
6.在另一实施例中，所述加水步骤之后煎煮步骤之前，待水沸后投料。
7.在另一实施例中，所述提取方法包括以下步骤：提取原料包括：4～8重量份的苦杏仁，2～5重量份的瓜蒌仁，2～5重量份的瓜蒌皮，称取所述提取原料并将其捣碎；加水量为药量的6～12倍，煎煮30～50分钟，取煎煮液；再加水量为药量的6～15倍，煎煮20～70分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；在50～80℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.04～1.50；然后加入无水乙醇，边加边搅拌，使含醇量达50～90％之间；静置12～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在50～90℃以下真空浓缩，得到稠膏。
8.在另一实施例中，所述提取方法包括以下步骤：提取原料包括：4重量份的苦杏仁，2重量份的瓜蒌仁，2重量份的瓜蒌皮，称取所述提取原料并将其捣碎；加水量为药量的10倍，煎煮40分钟，取煎煮液；再加水量为药量的6倍，煎煮60分钟，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；在60℃下浓缩，使药液浓缩至其稠度为1.10～1.12；然后加入
无水乙醇，使含醇量达70％；静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，在60℃以下真空浓缩，得到稠膏。
9.本发明还提供一种能够促进皮肤细胞增殖的中药制剂，其技术解决方案为：
10.以所述的中药提取物作为唯一活性成分用于促进人真皮成纤维细胞增殖。
11.在另一实施例中，所述中药提取物作为唯一活性成分的使用浓度为1.56～6.25μl/ml，即所述中药提取物占所述中药制剂的体积的0.156～0.625％。
12.在另一实施例中，所述中药制剂为外用制剂。
13.在另一实施例中，所述外用制剂的间隔使用时间为11～13小时。
14.在另一实施例中，所述中药制剂还含有制备成化妆品、护肤品或外用药物可接受的辅料。
15.在另一实施例中，所述中药制剂被制成胶囊剂、颗粒剂、合剂、片剂或酊剂。
16.本发明可以达到的技术效果是：
17.本发明首次将苦杏仁与瓜蒌组合并采用特定方法进行提取，所得到的提取物对人真皮成纤维细胞具有较好的促进细胞增殖的作用，从而能够抑制人真皮成纤维细胞的衰老，实现抗皮肤老化的效果，同时还能满足安全可靠、天然无刺激的现代美容研发要求。
18.本发明在大量细胞试验的基础上，将本发明的中药提取物作为唯一活性成分，并采用特定的浓度(1.0～4.0mg/ml)，按特定的间隔时间(11～13小时)使用，能够促进人真皮成纤维细胞增殖，从而产生显著的促进皮肤细胞增殖的效果。
19.由于本发明能够促进细胞增殖，因此还能够起到帮助皮肤细胞修复的作用，用于外用药剂。
20.本发明所采用的中药苦杏仁和瓜蒌属于药食同源的天然食品，具有较高的安全性与较低的毒副作用，因此能够长期使用。
附图说明
21.本领域的技术人员应理解，以下说明仅是示意性地说明本发明的原理，所述原理可按多种方式应用，以实现许多不同的可替代实施方式。这些说明仅用于示出本发明的教导内容的一般原理，不意味着限制在此所公开的发明构思。
22.结合在本说明书中并构成本说明书的一部分的附图示出了本发明的实施方式，并且与上文的总体说明和下列附图的详细说明一起用于解释本发明的原理。
23.下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：
24.图1是本发明能够促进皮肤细胞增殖的中药提取物的提取方法的操作流程示意图；
25.图2是将本发明实施例1-5制得的中药提取物作为测试品分别以0，0.5mg/ml，1.0mg/ml，2.0mg/ml，4.0mg/ml的浓度刺激6小时，hdf-α细胞的生长情况示意图；
26.图3是将本发明实施例1-5制得的中药提取物作为测试品分别以0，0.5mg/ml，1.0mg/ml，2.0mg/ml，4.0mg/ml的浓度刺激12小时，hdf-α细胞的生长情况示意图。
具体实施方式
27.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例
的附图，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另外定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本文中使用的“第一”、“第二”以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性，而只是用来区分不同的组成部分。“包括”等类似的词语意指出现该词前面的元件、组份或者步骤涵盖出现在该词后面列举的元件、组份或者步骤及其等同，而不排除其他元件、组份或者步骤。
28.如图1所示，本发明能够促进皮肤细胞增殖的中药提取物，其提取方法包括以下步骤：
29.提取原料包括：4～10重量份的苦杏仁，2～10重量份的瓜蒌仁，2～10重量份的瓜蒌皮，称取上述提取原料并将其捣碎；
30.加水量为药量的6～18倍，煎煮30～150分钟(第一次煎煮)，取煎煮液；再加水量为药量的3～18倍，煎煮20～100分钟(第二次煎煮)，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；
31.优选地，组份煎煮时，待水沸后投料，以防止成分水解。
32.在10～100℃下测量密度，使药液浓缩至其稠度(即相对密度，下同)为1.00～2.00；然后缓慢加入无水乙醇，边加边搅拌，使含醇量达20～90％之间；静置6～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在20～90℃以下真空浓缩，得到稠膏。
33.优选地，本发明的中药提取物的提取方法包括以下步骤：
34.提取原料包括：4～8重量份的苦杏仁，2～5重量份的瓜蒌仁，2～5重量份的瓜蒌皮，称取上述提取原料并将其捣碎；
35.加水量为药量的6～12倍，煎煮30～50分钟(第一次煎煮)，取煎煮液；再加水量为药量的6～15倍，煎煮20～70分钟(第二次煎煮)，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；
36.在50～80℃下测量密度，使药液浓缩至其稠度为1.04～1.50；然后加入无水乙醇，边加边搅拌，使含醇量达50～90％之间；静置12～36小时，滤过，滤液回收乙醇，在50～90℃以下真空浓缩，得到稠膏。
37.优选地，本发明的中药提取物的提取方法包括以下步骤：
38.提取原料包括：4重量份的苦杏仁，2重量份的瓜蒌仁，2重量份的瓜蒌皮，称取上述提取原料并将其捣碎；
39.加水量为药量的10倍，煎煮40分钟(第一次煎煮)，取煎煮液；再加水量为药量的6倍，煎煮60分钟(第二次煎煮)，再次取煎煮液；合并两次煎煮液，静置，滤过，得到药液；
40.在60℃下测量密度，使药液浓缩至其稠度为1.10～1.12；然后加入无水乙醇，使含醇量达70％；静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，在60℃以下真空浓缩，得到稠膏。
41.本发明的提取方法中，滤液回收乙醇步骤之后的浓缩需在真空下进行，并且温度不得高于90℃，优选温度不得高于60℃，在此条件下所得到的中药提取物的活性成分能够保持稳定。
42.为更好地说明本发明，变化与理解本发明的技术方案，本发明的典型但非限制性
实施例如下：
43.实施例1中药提取物的制备：
44.称取苦杏仁2.5kg(10份)，瓜蒌仁2.5kg(10份)，瓜蒌皮2.5kg(10份)捣碎后加水量6倍，煎煮120分钟，再加水18倍，煎煮20分钟，滤过，在20℃下测量密度，使浓缩至其稠度为1.90，后加入无水乙醇，使含醇量达50％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，在50℃下真空浓缩至稠膏。
45.实施例2中药提取物的制备：
46.称取苦杏仁5kg(10份)，瓜蒌仁1.25kg(2.5份)，瓜蒌皮1.25kg(2.5份)捣碎后加水量10倍，煎煮40分钟，再加水8倍，煎煮60分钟，滤过，在60℃下测量密度，使浓缩至其稠度为1.05～1.18，后加入无水乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，在60℃下真空浓缩至稠膏。
47.实施例3中药提取物的制备：
48.称取苦杏仁1.25kg(5份)，瓜蒌仁2.5kg(10份)，瓜蒌皮2.5kg(10份)捣碎后加水量12倍，煎煮70分钟，再加水3倍，煎煮70分钟，滤过，在30℃下测量密度，使浓缩至其稠度为1.20，后加入无水乙醇，使含醇量达30％，静置6小时，滤过，滤液回收乙醇，在30℃下真空浓缩至稠膏。
49.实施例4中药提取物的制备：
50.称取苦杏仁5kg(10份)，瓜蒌仁2.5kg(5份)，瓜蒌皮2.5kg(5份)捣碎后加水量18倍，煎煮150分钟，再加水4倍，煎煮100分钟，滤过，在70℃下测量密度，使浓缩至其稠度为1.40，后加入无水乙醇，使含醇量达70％，静置26小时，滤过，滤液回收乙醇，在70℃下真空浓缩至稠膏。
51.实施例5中药提取物的制备：
52.称取苦杏仁4kg(4份)，瓜蒌仁2kg(2份)，瓜蒌皮2kg(2份)捣碎后加水量10倍，煎煮40分钟，再加水6倍，煎煮60分钟，滤过，在60℃下测量密度，使浓缩至其稠度为1.10～1.12，后加入无水乙醇，使含醇量达70％，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，在60℃下真空浓缩至稠膏。
53.对比例6中药提取物的制备：
54.称取苦杏仁2kg，瓜蒌仁1kg，瓜蒌皮0.5kg捣碎后加水量5倍，煎煮20分钟，再加水20倍，煎煮120分钟，滤过，在60℃下测量密度，使浓缩至其稠度为0.90，后加入无水乙醇，使含醇量达95％，静置5小时，滤过，滤液回收乙醇，在90℃下真空浓缩至稠膏。
55.对比例7中药提取物的制备：
56.称取苦杏仁1kg，瓜蒌仁1kg，瓜蒌皮5kg捣碎后加水量20倍，煎煮200分钟，再加水2倍，煎煮15分钟，滤过，在60℃下测量密度，使浓缩至其稠度为2.10，后加入无水乙醇，使含醇量达15％，静置5小时，滤过，滤液回收乙醇，在90℃下真空浓缩至稠膏。
57.试验例：促进人真皮成纤维细胞(hdf-α)的增殖试验研究
58.材料及方法
59.采用美国molecular公司的spectramax190型酶标仪；德国leica公司的leica dmi1型显微镜；二甲基亚砜(dmso，批号bcbz1685，sigma默克公司，swizerland瑞士)；96孔板(nest biotech无锡耐思生物科技有限公司，中国)
60.(1)细胞培养
61.将hdf-α细胞置于含有10％fbs(胎牛血清)和1％ps的dmem培养基中，在37℃、5％co2(二氧化碳)培养箱培养，待细胞进入对数生长期，进行下一步实验。
62.(2)细胞铺板并分组给药
63.将hdf-α细胞以7000个/孔接种于96孔板中，采用dmem培养基，每孔100μl，每个浓度组设置3个复孔，放置于37℃，0.5％co2培养箱中过夜；
64.分别给予hdf-α以培养基或含不同浓度(0，0.5mg/ml，1.0mg/ml，2.0mg/ml，4.0mg/ml)的本发明实施例1-5制得的中药提取物的培养基刺激6或12小时；
65.具体地，将中药提取物以0，0.5mg/ml，1.0mg/ml，2.0mg/ml，4.0mg/ml的浓度加入到dmem培养基中，以上述不同浓度给予细胞进行刺激；
66.每孔加入mtt(细胞增殖检测)试剂10μl并混匀，在培养箱中孵育4h，最后通过酶标仪于波长570nm测定吸光度，并取3个复孔的平均值，计算细胞存活率。
67.(3)统计
68.所有统计均在数据处理与图形软件graphpad prism 9.0中完成，符合正态分布的数据使用均数
±
标准差(x
±
s)表示，方差齐性的多组间比较采用单因素方差分析，组间两两等多重比较采用lsd-t检验；统计意义如下：ns，无统计学意义；*，p《0.05，有统计学差异；**，p《0.01，有显著统计学差异；***，p《0.001，有极其显著的统计学差异；p值即概率，反映某一事件发生的可能性大小。
69.从图2中可以看出，本发明的中药提取物对hdf-α细胞刺激6小时，其促进细胞增殖的作用并不明显；仅0.5mg/ml浓度略有效果；
70.从图3中可以看出，本发明的中药提取物对hdf-α细胞刺激12小时，对hdf-α细胞具有明显的促进细胞增殖的作用；因此，本发明作为外用制剂适用于早晚使用；
71.其中，中药提取物浓度在1.0～4.0mg/ml，特别是2.0mg/ml时，效果尤为明显。
72.经过细胞实验表明，本发明的中药提取物对人真皮成纤维细胞具有较强的促增殖能力，因此能延缓细胞衰老。
73.经过细胞实验表明，本发明的中药提取物在低浓度下未发现有明显的毒副作用或细胞杀伤作用。
74.本发明可以在化妆品、护肤品或外用药物中应用。
75.当采用对比例6和对比例7所制得的中药提取物时，未测定到上述明显对人真皮成纤维细胞具有促增殖能力的结果。
76.以上所达仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
77.显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变形，而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改属于本发明权利要求及其同等技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变形在内。