1.本发明涉及抑菌领域，尤其涉及一种抑菌组合物及其应用和该抑菌组合物制成的抑菌液及制备方法。


背景技术：

2.皮肤是抵御细菌感染的良好屏障，也是极易感染细菌的器官。有研究曾对51人双手进行详细检测，一共发现了4742种细菌，且平均每只手上有150多种细菌。由于皮肤表面可接触大量细菌，因此任何皮肤损伤都容易引起感染。感染皮肤的细菌以葡萄球菌和链球菌为主，在医院、诊所、公园暴露皮肤或在水池、湖泊、海洋游泳，还可能被其他罕见细菌感染。细菌性皮肤感染可能只产生小脓疱等局部影响，也可能在几小时内扩散并累及一大片皮肤，甚至危及生命，如葡萄球菌皮肤烫伤样综合征。还有一些特殊人群的皮肤感染危险性非常高，例如：糖尿病患者，其血液循环很差，特别是手部和足部皮肤；艾滋病患者，其免疫系统被抑制。对于此类特殊人群，晒斑、搔抓或其他刺激引起的皮肤损伤均易被细菌感染。因此，皮肤表面的抑菌对于预防感染非常重要。
3.可用于皮肤表面抑菌的产品有75％医用酒精、84消毒液、过氧乙酸、来苏水、高锰酸钾等。其中，75％医用酒精会刺激皮肤，并吸收表皮水分，引起皮肤干燥而形成微小创口；高锰酸钾为紫色，色素会附着于皮肤上，其浓溶液或结晶对皮肤有腐蚀性；84消毒液含氯，有强烈的腐蚀作用，经常用手接触会使手掌大量出汗、指甲变薄、毛发脱落，并有致敏作用，其释放出的游离氯还有可能引起中毒；过氧乙酸不稳定，储存期间具有一定危险性，且其腐蚀性较强，接触皮肤可致皮肤损伤；来苏水对于皮肤会有一定的刺激和腐蚀、糜烂的作用，毒性较大。可见，现有技术中用于皮肤表面抑菌的产品对于皮肤均有不同程度的刺激性，会损伤皮肤。


技术实现要素：

4.针对目前的皮肤抑菌产品有刺激性、损伤皮肤的问题，本发明提供一种抑菌组合物、抑菌液、应用及制备方法。
5.为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下技术方案：
6.一方面，本发明实施例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数的成分：连翘提取液0.1～1份，金银花提取液0.1～1份，苯扎氯铵0.01～0.05份和聚氨丙基双胍0.03～0.05份。
7.该抑菌组合物中，苯扎氯铵和聚氨丙基双胍具有广谱且高效的杀菌能力。连翘提取液具有广谱抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、贺氏痢疾杆菌有很强的抑制作用，且对伤寒杆菌、霍乱弧菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、结核杆菌、肺炎双球菌、溶血性链球菌以及流感病毒也有抑制作用，并有抗真菌作用。金银花提取液对多种致病菌如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌等均有一定的抑制作用，对肺炎球菌、脑膜炎双球菌、绿脓杆菌、结核杆菌、志贺氏痢疾杆菌、变形链球菌等有抑
制和杀灭作用，并可抑制流感病毒、孤儿病毒、疱疹病毒、钩端螺旋体。本发明在研究中发现，将连翘提取液和金银花提取液与苯扎氯铵和聚氨丙基双胍在上述用量范围内复配，所得抑菌组合物不仅具有优异的抑菌效果，连翘提取液和金银花提取液还能够滋养并修复肌肤，促进细胞活力，维持弹性纤维、胶原纤维和蛋白多糖的正常状态，从而降低苯扎氯铵和聚氨丙基双胍对皮肤的刺激和损伤，使所得抑菌组合物温和安全，与单独使用苯扎氯铵和聚氨丙基双胍相比，该抑菌组合物刺激性显著降低，可用于手部等皮肤表面的抑菌。
8.优选地，所述抑菌组合物包括以下重量份数的成分：连翘提取液0.1～0.3份，金银花提取液0.1～0.3份，苯扎氯铵0.02～0.03份和聚氨丙基双胍0.04～0.05份。
9.优选地，所述抑菌组合物包括以下重量份数的成分：连翘提取液0.1份，金银花提取液0.1份，苯扎氯铵0.024份和聚氨丙基双胍0.04份。该配比下的抑菌组合物具有更优异的抑菌作用，且同时无刺激性。
10.可选地，所述连翘提取液的制备方法为：以15～25％v/v乙醇水溶液在25～35℃对连翘进行超声提取：先在25～35khz的频率下提取20～30min，再在50～70khz的频率下提取15～25min；提取完成后过滤，将所得滤液浓缩至1.2～1.3g/ml，得所述连翘提取液；其中，所述15～25％v/v乙醇水溶液的质量为所述连翘质量的5～8倍。
11.用上述制备方法获得的连翘提取液具有良好的抑菌效果，并且与金银花提取液合用能显著降低该抑菌组合物的刺激性。
12.可选地，所述金银花提取液的制备方法为：以45～65％v/v乙醇水溶液在45～60℃对金银花进行超声提取：先在20～35khz的频率下提取20～30min，再在55～70khz的频率下提取15～20min；提取完成后过滤，将所得滤液浓缩至1.2～1.3g/ml，得所述金银花提取液；其中，所述45～65％v/v乙醇水溶液的质量为所述金银花质量的7～10倍。
13.用上述制备方法获得的金银花提取液具有良好的抑菌以及降低该抑菌组合物刺激性的作用，与上述制备方法获得的连翘提取液合用能更进一步提高其抑菌效果，降低刺激性。
14.第二方面，本发明实施例还提供了上述抑菌组合物在制备皮肤用抑菌产品中的应用。
15.上述抑菌组合物具有优异的抑菌效果，温和安全无刺激，可制备成多种皮肤用抑菌产品，如抑菌喷雾、抑菌凝胶、抑菌湿巾等。
16.第三方面，本发明实施例还提供了一种抑菌液，包括上述抑菌组合物。该抑菌液可直接涂抹于皮肤表面，也可灌装于喷雾装置中作为用于皮肤的喷雾剂使用。
17.所述抑菌液包括以下重量份数的成分：
[0018][0019]
所述保湿剂选自丙二醇、甘油和丁二醇中的至少一种。
[0020]
所述防腐剂选自双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯、羟苯丙酯中的至少一种。在本发明实施例中，防腐剂优选采用双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯和羟苯丙酯三者合用，优选用量为双(羟甲基)咪唑烷基脲0.08～0.15份，羟苯甲酯0.05～0.2份，羟苯丙酯0.05～0.2份。
[0021]
所述杀菌剂为氯苯甘醚。
[0022]
所述增溶剂为peg-40氢化蓖麻油。
[0023]
所述抗氧剂为乙二胺四乙酸二钠盐(edta二钠)。
[0024]
以上优选的原料均为合规的化妆品常用组分，安全性高，在上述用量范围内使用不会引起皮肤明显不适。
[0025]
第四方面，本发明还提供上述抑菌液的制备方法，包括以下步骤：
[0026]
在水中加入所述保湿剂，搅拌至溶解；
[0027]
加入所述杀菌剂、苯扎氯铵和聚氨丙基双胍，搅拌分散均匀；
[0028]
加入所述连翘提取液、金银花提取液、香精、增溶剂、抗氧剂和防腐剂，混合均匀，得所述抑菌液。
[0029]
加入所述保湿剂的温度优选为75～85℃，可加速保湿剂溶解，提高生产效率。
[0030]
加入所述杀菌剂、苯扎氯铵和聚氨丙基双胍时的溶液温度优选为48～52℃，可加速溶解，并同时避免高温下生成杂质。
[0031]
加入所述连翘提取液、金银花提取液、香精和防腐剂时的溶液温度优选为43～47℃，可促进连翘提取液和金银花提取液与其他成分混合均匀。
具体实施方式
[0032]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
[0033]
以下实施例中所采用的实验方法如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
[0034]
以下实施例中所使用的连翘和金银花均符合《中国药典》(2015年版)一部正文各药材项下的有关规定。
[0035]
以下实施例中所采用的原料、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径获得。
[0036]
实施例1
[0037]
本发明实施例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0038]
连翘提取液0.1份，金银花提取液0.1份，苯扎氯铵0.024份和聚氨丙基双胍0.04份。
[0039]
其中连翘提取液的制备方法为：以20％v/v乙醇水溶液在20℃对连翘进行超声提取，先在30khz的频率下提取25min，再在60khz的频率下提取20min，该20％v/v乙醇水溶液的质量为连翘质量的7倍；提取完成后过滤，将所得滤液浓缩至1.25g/ml，即得。
[0040]
金银花提取液的制备方法为：以55％v/v乙醇水溶液在50℃对金银花进行超声提取，先在25khz的频率下提取25min，再在60khz的频率下提取18min，该55％v/v乙醇水溶液的质量为金银花质量的8倍；提取完成后过滤，将所得滤液浓缩至1.25g/ml，即得。
[0041]
实施例2
[0042]
本发明实施例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0043]
连翘提取液0.1份，金银花提取液0.1份，苯扎氯铵0.024份和聚氨丙基双胍0.04份。
[0044]
其中连翘提取液的制备方法为：以15％v/v乙醇水溶液在35℃对连翘进行超声提取，先在25khz的频率下提取30min，再在50khz的频率下提取25min，该15％v/v乙醇水溶液的质量为连翘质量的5倍；提取完成后过滤，将所得滤液浓缩至1.2g/ml，即得；
[0045]
金银花提取液的制备方法为：以45％v/v乙醇水溶液在60℃对金银花进行超声提取，先在20khz的频率下提取30min，再在55khz的频率下提取20min，该45％v/v乙醇水溶液的质量为金银花质量的7倍；提取完成后过滤，将所得滤液浓缩至1.2g/ml，即得。
[0046]
实施例3
[0047]
本发明实施例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0048]
连翘提取液0.1份，金银花提取液0.1份，苯扎氯铵0.024份和聚氨丙基双胍0.04份。
[0049]
其中连翘提取液的制备方法为：以25％v/v乙醇水溶液在25℃对连翘进行超声提取，先在35khz的频率下提取20min，再在70khz的频率下提取15min，该25％v/v乙醇水溶液的质量为连翘质量的8倍；提取完成后过滤，将所得滤液浓缩至1.3g/ml，即得；
[0050]
金银花提取液的制备方法为：以65％v/v乙醇水溶液在45℃对金银花进行超声提取，先在35khz的频率下提取20min，再在70khz的频率下提取15min，该65％v/v乙醇水溶液的质量为金银花质量的10倍；提取完成后过滤，将所得滤液浓缩至1.3g/ml，即得。
[0051]
实施例4
[0052]
本发明实施例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0053]
连翘提取液0.1份，金银花提取液0.1份，苯扎氯铵0.02份和聚氨丙基双胍0.04份。
[0054]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例1。
[0055]
实施例5
[0056]
本发明实施例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0057]
连翘提取液0.3份，金银花提取液0.3份，苯扎氯铵0.02份和聚氨丙基双胍0.04份。
[0058]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例1。
[0059]
实施例6
[0060]
本发明实施例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0061]
连翘提取液0.2份，金银花提取液0.2份，苯扎氯铵0.03份和聚氨丙基双胍0.05份。
[0062]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例1。
[0063]
实施例7
[0064]
本发明实施例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0065]
连翘提取液0.1份，金银花提取液0.1份，苯扎氯铵0.01份和聚氨丙基双胍0.03份。
[0066]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例1。
[0067]
实施例8
[0068]
本发明实施例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0069]
连翘提取液1份，金银花提取液1份，苯扎氯铵0.05份和聚氨丙基双胍0.05份。
[0070]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例1。
[0071]
实施例9
[0072]
本发明实施例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液包括以下重量份数配比的成分：
[0073][0074]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例1。
[0075]
该抑菌液的制备方法为：
[0076]
向水中加入丙二醇，升温至80℃搅拌完全溶解；
[0077]
降温至50℃，加入氯苯甘醚、苯扎氯铵，聚氨丙基双胍，搅拌分散均匀；
[0078]
降温至45℃，加入连翘提取液和金银花提取液，以及香精、peg-40氢化蓖麻油、edta二钠、双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯和羟苯丙酯；
[0079]
降温至40℃，即得到抑菌液。
[0080]
实施例10
[0081]
本发明实施例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液包括以下重量份数配比的成分：
[0082]
[0083][0084]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例2。
[0085]
该抑菌液的制备方法为：
[0086]
向水中加入丙二醇和甘油，升温至75℃搅拌完全溶解；
[0087]
降温至48℃，加入氯苯甘醚、苯扎氯铵，聚氨丙基双胍，搅拌分散均匀；
[0088]
降温至43℃，加入连翘提取液和金银花提取液，以及香精、peg-40氢化蓖麻油、edta二钠、双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯和羟苯丙酯；
[0089]
降温至40℃，即得到抑菌液。
[0090]
实施例11
[0091]
本发明实施例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液包括以下重量份数配比的成分：
[0092]
[0093][0094]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例3。
[0095]
该抑菌液的制备方法为：
[0096]
向水中加入丙二醇和丁二醇，升温至85℃搅拌完全溶解；
[0097]
降温至52℃，加入氯苯甘醚、苯扎氯铵，聚氨丙基双胍，搅拌分散均匀；
[0098]
降温至46℃，加入连翘提取液和金银花提取液，以及香精、peg-40氢化蓖麻油、edta二钠、双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯和羟苯丙酯；
[0099]
降温至40℃，即得到抑菌液。
[0100]
实施例12
[0101]
本发明实施例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液包括以下重量份数配比的成分：
[0102]
[0103][0104]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例4。
[0105]
该抑菌液的制备方法为：
[0106]
向水中加入丙二醇和甘油，升温至85℃搅拌完全溶解；
[0107]
降温至48℃，加入氯苯甘醚、苯扎氯铵，聚氨丙基双胍，搅拌分散均匀；
[0108]
降温至44℃，加入连翘提取液和金银花提取液，以及香精、peg-40氢化蓖麻油、edta二钠、双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯和羟苯丙酯；
[0109]
降温至40℃，即得到抑菌液。
[0110]
实施例13
[0111]
本发明实施例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液包括以下重量份数配比的成分：
[0112]
[0113][0114]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例5。
[0115]
该抑菌液的制备方法为：
[0116]
向水中加入丁二醇，升温至77℃搅拌完全溶解；
[0117]
降温至51℃，加入氯苯甘醚、苯扎氯铵，聚氨丙基双胍，搅拌分散均匀；
[0118]
降温至47℃，加入连翘提取液和金银花提取液，以及香精、peg-40氢化蓖麻油、edta二钠、双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯和羟苯丙酯；
[0119]
降温至40℃，即得到抑菌液。
[0120]
实施例14
[0121]
本发明实施例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液包括以下重量份数配比的成分：
[0122][0123][0124]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例6。
[0125]
该抑菌液的制备方法为：
[0126]
向水中加入甘油，升温至82℃搅拌完全溶解；
[0127]
降温至51℃，加入氯苯甘醚、苯扎氯铵，聚氨丙基双胍，搅拌分散均匀；
[0128]
降温至43℃，加入连翘提取液和金银花提取液，以及香精、peg-40氢化蓖麻油、edta二钠、双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯和羟苯丙酯；
[0129]
降温至40℃，即得到抑菌液。
[0130]
实施例15
[0131]
本发明实施例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液包括以下重量份数配比的成分：
[0132][0133]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例7。
[0134]
该抑菌液的制备方法为：
[0135]
向水中加入甘油，升温至83℃搅拌完全溶解；
[0136]
降温至49℃，加入氯苯甘醚、苯扎氯铵，聚氨丙基双胍，搅拌分散均匀；
[0137]
降温至44℃，加入连翘提取液和金银花提取液，以及香精、peg-40氢化蓖麻油、edta二钠、双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯和羟苯丙酯；
[0138]
降温至40℃，即得到抑菌液。
[0139]
实施例16
[0140]
本发明实施例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液包括以下重量份数配比的成分：
[0141][0142]
其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同实施例8。
[0143]
该抑菌液的制备方法为：
[0144]
向水中加入丁二醇，升温至78℃搅拌完全溶解；
[0145]
降温至49℃，加入氯苯甘醚、苯扎氯铵，聚氨丙基双胍，搅拌分散均匀；
[0146]
降温至46℃，加入连翘提取液和金银花提取液，以及香精、peg-40氢化蓖麻油、edta二钠、双(羟甲基)咪唑烷基脲、羟苯甲酯和羟苯丙酯；
[0147]
降温至40℃，即得到抑菌液。
[0148]
对比例1
[0149]
本对比例提供一种抑菌组合物，其成分同实施例1。
[0150]
其中连翘提取液的制备方法为：将连翘用10倍的水煎煮提取2次，每次30min；过滤，合并滤液，浓缩至1.2～1.3g/ml，即得；
[0151]
金银花提取液的制备方法同实施例1。
[0152]
对比例2
[0153]
本对比例提供一种抑菌组合物，其成分同实施例1。
[0154]
其中连翘提取液的制备方法为：将连翘用7倍的55％v/v乙醇水溶液加热回流提取2次，每次30min；过滤，合并滤液，浓缩至1.25g/ml，即得；
[0155]
金银花提取液的制备方法同实施例1。
[0156]
对比例3
[0157]
本对比例提供一种抑菌组合物，其成分同实施例1。
[0158]
其中连翘提取液的制备方法为：将连翘用7倍的20％v/v乙醇水溶液超声提取45min，超声频率为45hz；过滤，将滤液浓缩至1.25g/ml，即得；
[0159]
金银花提取液的制备方法同实施例1。
[0160]
对比例4
[0161]
本对比例提供一种抑菌组合物，其成分同实施例1。
[0162]
其中连翘提取液的制备方法同实施例1；
[0163]
金银花提取液的制备方法为：将金银花用10倍的水煎煮提取2次，每次30min；过滤，合并滤液，浓缩至1.2～1.3g/ml，即得。
[0164]
对比例5
[0165]
本对比例提供一种抑菌组合物，其成分同实施例1。
[0166]
其中连翘提取液的制备方法同实施例1；
[0167]
金银花提取液的制备方法为：将金银花用7倍的57％v/v乙醇水溶液加热回流提取2次，每次30min；过滤，合并滤液，浓缩至1.25g/ml，即得。
[0168]
对比例6
[0169]
本对比例提供一种抑菌组合物，其成分同实施例1。
[0170]
其中连翘提取液的制备方法同实施例1；
[0171]
金银花提取液的制备方法为：将金银花用8倍的55％v/v乙醇水溶液超声提取45min，超声频率为45hz；过滤，将滤液浓缩至1.25g/ml，即得。
[0172]
对比例7
[0173]
本对比例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0174]
黄连提取液0.1份，金银花提取液0.1份，苯扎氯铵0.024份和聚氨丙基双胍0.04份。
[0175]
其中金银花提取液的制备方法同实施例1；
[0176]
黄连提取液的制备方法为：以20％v/v乙醇水溶液在20℃对黄连进行超声提取，先在30khz提取25min，再在60khz的频率下提取20min；该20％v/v乙醇水溶液的质量为黄连质量的7倍；提取完成后过滤，将所得滤液浓缩至1.25g/ml，即得。
[0177]
对比例8
[0178]
本对比例提供一种抑菌组合物，包括以下重量份数配比的成分：
[0179]
连翘提取液0.1份，黄连提取液0.1份，苯扎氯铵0.024份和聚氨丙基双胍0.04份。
[0180]
其中连翘提取液的制备方法同实施例1，黄连提取液的制备方法同对比例7。
[0181]
对比例9
[0182]
本对比例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液的成分配比和制备方法同实施例9，其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同对比例1。
[0183]
对比例10
[0184]
本对比例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液的成分配比和制备方法同实施例9，其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同对比例2。
[0185]
对比例11
[0186]
本对比例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液的成分配比和制备方法同实施例9，其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同对比例3。
[0187]
对比例12
[0188]
本对比例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液的成分配比和制备方法同实施例9，其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同对比例4。
[0189]
对比例13
[0190]
本对比例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液的成分配比和制备方法同实施例9，其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同对比例5。
[0191]
对比例14
[0192]
本对比例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液的成分配比和制备方法同实施例9，其中连翘提取液和金银花提取液的制备方法同对比例6。
[0193]
对比例15
[0194]
本对比例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液的成分配比以实施例9为基础，将连翘提取液更换为黄连提取液，其余成分不变，制备方法同实施例9。黄连提取液和金银花提取液的制备方法同对比例7。
[0195]
对比例16
[0196]
本对比例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液的成分配比以实施例9为基础，将金银花提取液更换为黄连提取液，其余成分不变，制备方法同实施例9。黄连提取液和连翘提取液的制备方法同对比例8。
[0197]
对比例17
[0198]
本对比例提供一种用于皮肤表面的抑菌液及其制备方法，该抑菌液的成分配比以实施例9为基础，去掉连翘提取液和金银花提取液，其余成分不变，制备方法同实施例9。
[0199]
试验例1
[0200]
本试验例对上述实施例1～8和对比例1～8制备所得抑菌组合物进行了抑菌效果考察。
[0201]
下述实验中所采用的营养琼脂培养基的成分配比为：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000ml；
[0202]
沙氏培养基的成分为：蛋白胨10g、琼脂20g、葡萄糖40g，蒸馏水1l。
[0203]
试验菌株：金黄色葡萄球菌(atcc6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(atcc10231)。
[0204]
1、实验方法
[0205]
将试验菌第5代的营养琼脂培养基斜面培养物(24h)用5ml 0.03mol/l磷酸盐缓冲液(以下简称pbs)洗下菌苔，用上述pbs稀释，制成浓度为5
×
104cfu/ml的菌悬液。
[0206]
以实施例1～8和对比例1～8制备所得抑菌组合物样品作为被试样液，取被试样液(5ml)和对照样液(与被试样液成分相同，但不含连翘提取液、金银花提取液、苯扎氯铵和聚氨丙基双胍，且经灭菌处理)各4管。
[0207]
分别在每个被试样液和对照样液内滴加100μl上述菌悬液，均匀混合，开始计时，作用2min、5min、10min、20min，用无菌镊分别将混合后的样液(0.5ml)投入含5ml pbs的试管内，充分混匀，分别吸取0.5ml，置于两个平皿，用凉至40～50℃的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(酵母菌)15ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃
±
2℃培养48h(细菌)或72h(酵母菌)，作活菌菌落计数。
[0208]
试验重复3次，按下式计算抑菌率：
[0209]
x＝(a-b)/a
×
100％；
[0210]
式中：x为抑菌率，a为对照样液平均菌落数；b为被试样液平均菌落数。
[0211]
2、实验结果
[0212]
记录各抑菌组合物在不同作用时间下的抑菌率平均值，结果见表1～3。
[0213]
表1对金黄色葡萄球菌的抑菌数据
[0214][0215]
表2对大肠杆菌的抑菌数据
[0216]
[0217][0218]
表3对白色念珠菌的抑菌数据
[0219][0220]
由表1～表3试验结果可见，本发明实施例1～8所得抑菌组合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的抑菌率在20min时均＞99.9％，且优于各对比例所得的抑菌组合物。
[0221]
试验例2
[0222]
本试验例考察了上述实施例9～16以及对比例9～17制备所得用于皮肤表面的抑菌液的刺激性。
[0223]
1、实验方法
[0224]
采用皮肤完好的新西兰家兔51只，雌性，体重2.0～2.5kg，以普通级家兔维持饲料喂养，温度20～26℃，相对湿度40％～70％。
[0225]
根据《消毒技术规范》(2002年版)2.3.3.3.1对实施例9～16以及对比例9～17制备所得抑菌液分别进行一次完整皮肤刺激性试验(各样品以3只家兔进行试验)：实验前约24小时，将白兔背部脊柱两侧毛剔除，不得损伤皮肤，去毛范围左、右各约3cm
×
3cm，取受试液原样0.5ml涂抹于皮肤上，然后用两层纱布和一层玻璃纸覆盖，并用胶布固定，另一侧皮肤涂抹0.5ml蒸馏水做空白对照，敷贴时间为4小时，用温水冲洗1min以去除受试物，分别于去除受试物后1小时、24小时、48小时观察皮肤局部反应，并根据表4进行皮肤刺激反应评分。结果见表5和表6。
[0226]
表4皮肤刺激反应评分标准
[0227][0228]
表5实施例9～16所得抑菌液的试验结果
[0229][0230]
表6对比例9～17所得抑菌液的试验结果
[0231]
[0232][0233]
由表5和表6的结果可见，实施例9～16所得抑菌液对白兔皮肤刺激强度均为无刺激性，对比例9～17所得抑菌液对白兔皮肤有刺激性。
[0234]
由试验例1和试验例2的实验结果可见，本发明实施例提供的抑菌组合物具有更有效的抑菌效果，且以该抑菌组合物制成的用于皮肤表面的抑菌液对皮肤无刺激。
[0235]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。