1.本发明涉及植物有效成分的提取技术领域，更具体地，涉及一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法及其应用。


背景技术：

2.红毛丹(nephelium lappaceum l.)属于无患子科(sapindaceae) 韶子属植物，是一种非常著名的热带水果，因其果皮长满红毛，又名“毛荔枝”和“红毛果”；红毛丹原产于马来半岛，现广泛分布于东南亚地区和美洲等热带地区，且在我国海南和广州等地有栽培。我国早在上个世纪中期引种红毛丹，并开始大规模推广种植，规模逐年扩大。红毛丹果皮占果实重量的45.7％，是食品工业加工的副产物，常常做丢弃处理。
3.红毛丹果皮中酚类物质含量丰富(占果皮的58.2wt％)且呈现出良好的生物活性，可开发成为食品、化妆品和药品行业中应用广泛的天然抗氧化剂。
4.老鹳草素是一种黄色结晶状化合物，属于多酚类物质，分子式为 c
41h28o27
±
5h2o，相对分子量为952.46，是红毛丹果皮提取物的主要成分之一。
5.老鹳草素所具有的生物活性如下：1、具有强烈的自由基清除能力和抑制肿瘤作用，被认为是潜在的癌症预防剂；2、具有抗病毒和抑菌作用，具有明显的hiv-1，hsv和乙型肝炎病毒抑制能力；3、具有降高血压活性，抗溃疡特性，刺激皮肤成纤维细胞和角膜成核细胞的能力以及体外抗高血糖活性。老鹳草素良好的生物活性和无刺激涩味的优良口感，使其在营养保健品，医药和化妆品行业有非常大的潜在应用价值。
6.老鹳草素在红毛丹果皮中的含量丰富，使得红毛丹果皮成为提取纯化老鹳草素的理想来源。目前，纯化老鹳草素的方法可产生相对高纯度的老鹳草素，但产量不满足需求。
7.公开号为cn107573390a的中国发明专利申请公开了一种老鹳草素粗提物的制备方法，其以无患子科韶子属红毛丹果皮为原料，以乙醇溶液为提取剂，超声辅助提取，冷冻干燥得到老鹳草素粗提物产品；然而，该方法没有对单体化合物进一步分离纯化，且所得到的粗提物中老鹳草素含量不高。
8.公开号为cn102146103a的中国发明专利申请公开了一种使用高速逆流色谱从老鹳草中分离老鹳草素的方法，其具体过程包括老鹳草素的提取、浓缩及采用高速逆流色谱分离，通过该方法可获得纯度为 91％的老鹳草素，收率可达到82％；然而，该方法所用的设备价格高昂，成本很高。
9.公开号为cn101849978a的中国发明专利申请公开了一种从中草药老鹳草活性成分的提取技术，该方法匀浆破碎高效酶解技术结合负压空化辅助提取技术，获得富含三种多酚类活性成分的老鹳草提取物，其中老鹳草素含量最高可达19.82mg/g，比热回流提取提高了30-67％；然而，该方法的提取条件苛刻，需要特殊设备且该方法没有对老鹳草素做进一步的纯化。
10.鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

11.针对现有技术所存在的不足，本发明提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法及其应用。
12.为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
13.一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，包括，
14.将红毛丹果皮粉末加入到含琥珀酸二异辛酯磺酸钠的提取溶剂中，提取后将提取液依次经浓缩和加水稀释后离心，最后将得到的上清液进行后处理，即可。
15.具体地，在上述技术方案中，红毛丹果皮粉末中老鹳草素的含量为12.5-15wt％。
16.在上述技术方案中，所述琥珀酸二异辛酯磺酸钠在提取溶剂中的添加量为0.1-5wt％。
17.在本发明的一个优选方案中，所述琥珀酸二异辛酯磺酸钠在提取溶剂中的添加量为0.1-1wt％。
18.在上述技术方案中，所述提取溶剂为醇类水溶液。
19.在本发明的一个优选方案中，所述提取溶剂为20-70wt％的乙醇水溶液。
20.在本发明的一个具体实施方式中，所述提取溶剂为30-50wt％的乙醇水溶液。
21.进一步地，在上述技术方案中，所述提取溶剂的加入量为控制其料液比为1g∶10-15ml。
22.再进一步地，在上述技术方案中，所述提取为超声波提取。
23.在本发明的一个优选方案中，在所述超声波提取的过程中，控制超声功率、提取温度和提取时间分别为300-500w、20-45℃和7.5-60 min。
24.在本发明的一个优选方案中，所述超声波提取的次数为2-3次。
25.又进一步地，在上述技术方案中，所述红毛丹果皮粉末的粒径为过20-50目筛。
26.在本发明的一个优选方案中，所述红毛丹果皮粉末的制备方法如下：
27.将洗净的红毛丹果皮在40-50℃下干燥至恒重后，粉碎并过20-50 目筛，即得。
28.还进一步地，在上述技术方案中，所述后处理包括，
29.将上清液依次通过阴离子交换树脂柱和阳离子交换树脂柱后，将得到的过柱液依次用超滤膜超滤和纳滤膜浓缩，收集截留液并调整其乙醇浓度，最后在2-10℃的条件下结晶后过滤，并用去离子水洗涤滤饼后干燥，即得。
30.在本发明的一个优选方案中，所述阴离子交换树脂柱为d201型、 d301型和lx-22型阴离子交换树脂柱中的一种，相应地，所述阳离子交换树脂柱为d001型、d113型和001
×
8型阳离子交换树脂柱中的一种。
31.具体地，在上述技术方案中，所述上清液通过阴离子交换树脂柱和阳离子交换树脂柱的流速均为0.5-3bv/h。
32.在本发明的一个优选方案中，所述超滤膜和纳滤膜分别为截留分子量为2000-20000道尔顿的超滤膜和截留分子量为100-600道尔顿的纳滤膜。
33.具体地，在上述技术方案中，对应于1g红毛丹果皮粉末，经纳滤膜浓缩后得到的截留液的体积为0.3-0.6ml。
34.在本发明的一个优选方案中，所述截留液中乙醇的浓度调整为 10-40wt％。
35.在本发明的一个优选方案中，所述结晶的时间和次数分别为15-30 h和1-2次。
36.在本发明的一个优选方案中，所述干燥的方式为在真空度大于
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0.085mpa且温度为40-50℃下真空干燥或微波干燥。
37.具体地，在上述技术方案中，在从红毛丹果皮中提取老鹳草素的过程中，控制其环境的光照强度小于8001x。
38.本发明另一方面还提供了上述方法在提取红毛丹果皮中的老鹳草素中的应用。
39.本发明与现有技术相比，具有以下优点：
40.(1)本发明通过往提取溶剂中中加入琥珀酸二异辛酯磺酸钠，能有效增大红毛丹果皮中活性成分老鹳草素的溶出，从而提高老鹳草素的收率，且能大大减少提取溶剂的使用，降低提取产物中提取溶剂的残留量；
41.(2)本发明所提供的提取红毛丹果皮中的老鹳草素中的方法，从原料干燥到提取纯化整个流程的条件温和，能够避免高温导致热敏性强的老鹳草素在加热过程中的损失，且整个过程避免强光刺激，能有效减轻紫外线导致的老鹳草素降解，大大提高了收率；
42.(3)本发明所提供的提取红毛丹果皮中的老鹳草素中的方法，不使用易制毒试剂，且提取和纯化的条件温和，操作简单，绿色环保，成本低，适宜于工业化生产，所制得的老鹳草素产品的纯度＞98％，回收率和收率分别在95％以上和12％以上，实际应用前景广阔。
具体实施方式
43.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
44.应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
45.实施例中，如无特别说明，所用手段均为本领域常规的手段。
46.本文中所用的术语“包含”、“包括”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。
47.例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
48.此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
49.本发明实施例和对比例所用的试剂和仪器均为市售产品。
50.实施例1
51.本发明实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，具体包括以下步骤：
52.s1、洗涤干燥
53.将采集到的红毛丹果皮洗净并在50℃温度下真空干燥至恒重，粉碎过40目筛，得到红毛丹果皮粉末备用；
54.s2、提取浓缩
55.称取干燥后的红毛丹果皮粉末1000g，加入到15l含0.5wt％琥珀酸二异辛酯磺酸钠的乙醇水溶液(40wt％)提取溶剂中，混匀后在30℃和400w的超声功率下重复提前2次，每次10min，将超声后的混合溶液过滤后合并得到提取液，随后通过减压浓缩回收提取液中的乙醇直至无醇味，并加入2倍体积的去离子水稀释后离心去除不溶物，取上清液；
56.s3、离子交换
57.将步骤s2所得的上清液依次上d201型阴离子交换树脂柱和d001 型阳离子交换树脂柱，上柱的流速均为1bv/h，柱内残留液用1bv纯水赶出，收集流出液和水赶液并合并；
58.s4、超滤
59.将步骤s3中所得流出液和水赶液过截留分子量为5000道尔顿的超滤膜，收集滤液得到超滤液；
60.s5、浓缩结晶
61.将超滤液用截留分子量为400道尔顿的纳滤膜浓缩至500ml，收集截留液并调整截留液中的乙醇含量至10wt％，在4℃的低温条件下结晶20h，过滤得到滤饼并用3倍体积(约1000ml)冷的去离子水对滤饼进行洗涤，得到目标成分老鹳草素；
62.s6、干燥
63.对抽滤洗涤后的滤饼在真空度-0.090mpa，在温度为40℃的条件下进行真空干燥，得到老鹳草素，并置于低温避光处保存。
64.具体地，上述包括步骤s1-s6在内的提取过程均在非强光照射(光照强度小于800lx)环境下进行。
65.实施例2
66.本发明实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，具体包括以下步骤：
67.s1、洗涤干燥
68.将采集到的红毛丹果皮洗净并在40℃温度下真空干燥至恒重，粉碎过50目筛，得到红毛丹果皮粉末备用；
69.s2、提取浓缩
70.称取干燥后的红毛丹果皮粉末5000g，加入到60l含0.4wt％琥珀酸二异辛酯磺酸钠的乙醇水溶液(45wt％)提取溶剂中，混匀后在 45℃和350w的超声功率下重复提前2次，每次8min，将超声后的混合溶液过滤后合并得到提取液，随后通过减压浓缩回收提取液中的乙醇直至无醇味，并加入2.5倍体积的去离子水稀释后离心去除不溶物，取上清液；
71.s3、离子交换
72.将步骤s2所得的上清液依次上d301型阴离子交换树脂柱和d113 型阳离子交换树脂柱，上柱的流速均为1.5bv/h，柱内残留液用1bv 纯水赶出，收集流出液和水赶液并合并；
73.s4、超滤
74.将步骤s3中所得流出液和水赶液过截留分子量为4000道尔顿的超滤膜，收集滤液得到超滤液；
75.s5、浓缩结晶
76.将超滤液用截留分子量为500道尔顿的纳滤膜浓缩至3000ml，收集截留液并调整截留液中的乙醇含量至15wt％，在4℃的低温条件下结晶18h，过滤得到滤饼并用3倍体积冷的去离子水对滤饼进行洗涤，得到目标成分老鹳草素；
77.s6、干燥
78.对抽滤洗涤后的滤饼在真空度-0.090mpa，在温度为45℃的条件下进行真空干燥，得到老鹳草素，并置于低温避光处保存。
79.具体地，上述包括步骤s1-s6在内的提取过程均在非强光照射(光照强度小于
8001x)环境下进行。
80.实施例3
81.本发明实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，具体包括以下步骤：
82.s1、洗涤干燥
83.将采集到的红毛丹果皮洗净并在45℃温度下真空干燥至恒重，粉碎过40目筛，得到红毛丹果皮粉末备用；
84.s2、提取浓缩
85.称取干燥后的红毛丹果皮粉末10000g，加入到120l含0.6wt％琥珀酸二异辛酯磺酸钠的乙醇水溶液(40wt％)提取溶剂中，混匀后在30℃和500w的超声功率下重复提前2次，每次10min，将超声后的混合溶液过滤后合并得到提取液，随后通过减压浓缩回收提取液中的乙醇直至无醇味，并加入1.8倍体积的去离子水稀释后离心去除不溶物，取上清液；
86.s3、离子交换
87.将步骤s2所得的上清液依次上lx-22型阴离子交换树脂柱和001
ꢀ×
8型阳离子交换树脂柱，上柱的流速均为1.2bv/h，柱内残留液用1bv纯水赶出，收集流出液和水赶液并合并；
88.s4、超滤
89.将步骤s3中所得流出液和水赶液过截留分子量为5000道尔顿的超滤膜，收集滤液得到超滤液；
90.s5、浓缩结晶
91.将超滤液用截留分子量为400道尔顿的纳滤膜浓缩至5000ml，收集截留液并调整截留液中的乙醇含量至10wt％，在4℃的低温条件下结晶25h，过滤得到滤饼并用3倍体积冷的去离子水对滤饼进行洗涤，得到目标成分老鹳草素；
92.s6、干燥
93.将抽滤洗涤后的滤饼在真空度-0.090mpa，在温度为45℃的条件下进行真空干燥，得到老鹳草素，并置于低温避光处保存。
94.具体地，上述包括步骤s1-s6在内的提取过程均在非强光照射(光照强度小于8001x)环境下进行。
95.对比例1
96.本对比实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，其具体步骤与实施例1相同，区别仅在于，在步骤s2中，提取溶剂为不含琥珀酸二异辛酯磺酸钠的乙醇水溶液(40wt％)。
97.对比例2
98.本对比实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，其具体步骤与实施例1相同，区别仅在于，在步骤s2中，提取溶剂为不含琥珀酸二异辛酯磺酸钠的乙醇水溶液(75wt％)。
99.对比例3
100.本对比实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，其具体步骤与实施例1相同，区别仅在于，在步骤s2中，提取溶剂为含0.5wt％吐温60的乙醇水溶液
(40wt％)。
101.对比例4
102.本对比实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，其具体步骤与实施例1相同，区别仅在于，在步骤s2中，提取溶剂为含0.5wt％十二烷基硫酸钠的乙醇水溶液(40wt％)。
103.对比例5
104.本对比实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，其具体步骤与实施例1相同，区别仅在于，在步骤s2中，提取溶剂为含0.5wt％斯盘20的乙醇水溶液(40wt％)。
105.对比例6
106.本对比实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，其具体步骤与实施例2相同，区别仅在于，在步骤s2中，将红毛丹果皮粉末加入到提取溶剂中混匀后在90℃下加热回流提取90min，再将混合溶液过滤后合并得到提取液。
107.对比例7
108.本对比实施例提供了一种从红毛丹果皮中提取老鹳草素的方法，其具体步骤与实施例2相同，区别仅在于，在步骤s6中，将抽滤洗涤后的滤饼在80℃烘箱烘干，得到老鹳草素，并置于低温避光处保存。
109.称取上述各实施例和对比例中所制得的老鹳草素产品的重量。
110.采用hplc法检测上述各实施例和对比例中所制得的老鹳草素产品的纯度。
111.hplc法中的检测条件参照刘宇、杨艳芳和吴和珍等发表的“rp-hplc法测定鹅不食草中短叶老鹳草素的含量”一文，其中，色谱柱为kromasil c18柱(46mm
×
250mm，7μm)，流动相为甲醇和水的混合物(体积比为55：45)，流速为1ml/min，检测波长为220nm，进样量为20μl，柱温为25℃。
112.具体检测结果如下表1所示。
113.表1各实施例和对比例所制得的老鹳草素产品的重量和纯度
[0114][0115]
对比分析表1的结果，可以看出：
[0116]
(1)本发明实施例通过往提取溶剂中中加入表面活性剂琥珀酸二异辛酯磺酸钠，能有效增大红毛丹果皮中活性成分老鹳草素的溶出，从而提高老鹳草素的收率，且能大大减少提取溶剂的使用，降低提取产物中提取溶剂的残留量；
[0117]
(2)本发明实施例所提供的提取红毛丹果皮中的老鹳草素中的方法，从原料干燥到提取纯化整个流程的条件温和，能够避免高温导致热敏性强的老鹳草素在加热过程中的损失，且整个过程避免强光刺激，能有效减轻紫外线导致的老鹳草素降解，大大提高了收率；
[0118]
(3)本发明实施例所提供的提取红毛丹果皮中的老鹳草素中的方法，不使用易制毒试剂，提取和纯化的条件温和，操作简单，绿色环保，成本低，适宜于工业化生产，所制得的老鹳草素产品的纯度＞98％，回收率和收率分别在95％以上和12％以上，实际应用前景广阔。
[0119]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。
[0120]
应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。