专利名称：杂环上取代的苯基-环己烷羧酸衍生物的制作方法
技术领域：
本发明是关于杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物，它们的制备方法和它们在医药方面，特别是作为降血压药物和抗动脉粥样硬化药物的应用。
已知在体内血管紧张肽原酶(一种蛋白水解酶)可以从血管紧张肽原中给出十肽血管紧张肽Ⅰ，而血管紧张肽Ⅰ本身又在肺、肾或其他组织中降解为升血压的八肽血管紧张肽Ⅱ。血管紧张肽Ⅱ的不同作用(例如血管收缩、在肾中潴留Na+、在肾上腺中释放醛甾酮以及增加交感神经系统紧张性)协同地使得血压增加。
此外，血管紧张肽Ⅱ具有促进细胞(例如心肌细胞和平滑肌细胞)生长和复制的作用，在不同的疾病情况下(例如高血压、动脉粥样硬化和心机能不全)均能以增加的速率促进细胞的生长和增殖。
除了抑制血管紧张肽原酶活性之外，对于干预血管紧张肽原酶-血管紧张肽系统(RAS)的一个可能的起始点是抑制血管紧张肽转变酶(ACE)的活性和阻断血管紧张肽Ⅱ受体。
此外，具有血管紧张肽Ⅱ拮抗作用的杂环化合物已在EP407102、EP399731、EP399732、EP324377和EP253310中公开。
本发明涉及通式Ⅰ的杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物(包括其各种立体异物体)和它们的盐 其中A代表氢或有6-10个碳原子的芳基，该芳基可以由羟基、卤素或三氟甲基任意地取代，或者由各自具有多至6个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基取代，或者A代表各自具有多至8个碳原子的直链或支链的烷基或链烯基，或者代表有3-8个碳原子的环烷基;
E代表氮原子或式-CR1基团，这里R1具有上述A的定义，并且可以选择与A相同或不同的基团;
B和D一起形成下式的基团
其中R2、R3和R4可以相同或不同，并且具有上述A的定义，它们可以选择与A相同或不同的基团，或者代表卤素;
L代表氢、卤素、硝基、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、各自具有多至6个碳原子的直链或支链的烷基、烷氧基或烷氧基羰基、氰基或羧基;
T代表下式基团 其中R5代表氢、有多至8个碳原子的直链或支链的烷基、有3-7个碳原子的环烷基或苯基，R6和R8可以相同或不同，它们代表氢或有多至6个碳原子的直链或支链的烷基，R7代表三氟甲基或有多至6个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苄基或苯基，苄基或苯基各自可以由有多至6个碳原子的直链或支链的烷基任意地取代，R9代表有6-10个碳原子的芳基，该芳基可以由多至2个相同或不同的选自以下的取代基任意地取代卤素、羟基、各自有多至6个碳原子的直链或支链烷基、烷氧基或烷氧基羰基、羧基、苯氧基和C3-C6环烷氧基，R10代表式-CH2-OR11、-CO2R12、-CO-NR13R14基团或吡啶基，其中R11代表氢或有多至8个碳原子的直链或支链的烷基，R12代表氢或有多至8个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苯基或有3-6个碳原子的环烷基，R13和R14可以相同或不同，它们代表氢、有多至8个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苯基;或者T代表由三苯基甲基或有多至4碳原子的直链或支链的烷基任意取代的四唑基。
本发明的通式Ⅰ化合物也可以它们的盐的形式存在。一般来讲，这里所提到的盐是与有机或无机的碱或酸生成的盐。
在本发明范围内，优先选用生理学上适用的盐。新的杂环上取代的苯基-环己烷羧酸和羧基衍生物的生理上适用的盐可以是本发明化合物与无机酸、羧酸或磺酸生成的盐。尤其好的盐是例如与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、苯二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、富马酸、马来酸或苯甲酸生成的盐。
生理上适用的盐也可以是有游离羧基的本发明化合物的金属盐或铵盐。它们尤其好的是例如钠盐、钾盐、镁盐或钙盐，以及与氨或有机胺(如乙胺、二或三乙胺、二或三-乙醇胺、二环己基胺、二甲氨基乙醇、精氨酸、赖氨酸或乙二胺)反应得到的铵盐。
本发明化合物可以以立体异构的像和镜像(对映异构体)形式存在，或者不以像和镜像(非对映异构体)形成存在。本发明涉及对映异构体、非对映异构体及它们相应的混合物形式。与非对映异构体一样，外消旋形式可以按已知的方法分离成立体异构体的单一组分(参见E.L.Eliel，Stereochemistry of Carbon Compounds，Mc Graw Hill，1962)。
优选的通式(Ⅰ)化合物是下述化合物及它们的盐和其立体异构体其中A代表氢或由羟基、氟、氯、溴或三氟甲基或由各自具有多至4个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基任意取代的苯基，或者A代表各自具有多至6个碳原子的直链或支链的烷基或链烯基，或者A代表环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基;
E代表氮原子或-CR1基团，其中R1同上述A的定义，并且可以选择与A相同或不同的基团;
B和D一起形成下式基团
其中R2、R3和R4可以相同或不同，并且具有上述A的定义，它们可以选择与A相同或不同的基团，或者代表氟、氯或溴;
L代表氢、氟、氯、溴、三氟甲基、羧基或各自有多至4个碳原子的直链或支链的烷基、烷氧基或烷氧基羰基;
T代表下式基团 其中R5代表氢、有多至6个碳原子的直链或支链的烷基、环丙基、环戊基、环己基或苯基，R6和R8可以相同或不同，并且它们代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R7代表三氟甲基或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苄基或苯基，苄基和苯基各自可以由多至4个碳原子的直链或支链的烷基任意地取代，R9代表由氟、氯、溴、羟基、各自具有多至4个碳原子的直链或支链的烷基、烷氧基或烷氧基羰基、或羧基或苯氧基任意取代的苯基，R10代表式-CH2-OR11、-CO2R12、-CO-NR13R14基团或吡啶基，
其中R11代表氢或有多至6个碳原子的直链或支链的烷基，R12代表氢、有多至6个碳原子的直链或支链的烷基、苯基、环丙基、环戊基或环己基，R13和R14可以相同或不同，它们代表氢、有多至6个碳原子的直链或支链的烷基、环丙基、环戊基、环己基或苯基;或者T代表由三苯基甲基或甲基任意取代的四唑基。
特别优选的的通式(Ⅰ)化合物是下述化合物及它们的盐和其立体异构体其中A代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苯基、环丙基、环戊基或环己基;
E代表氮原子;
B和D一起形成下式基团 其中R2、R3和R4可以相同或不同，并且具有上述A的定义，它们可以选择与A相同或不同的基团，或者它们代表氟、氯或溴;
L代表氢、氟、氯、三氟甲基或甲基;
T代表下式基团
其中R5代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R6和R8可以相同或不同，并且它们代表氢或甲基，R7代表三氟甲基或甲基，乙基、苄基、对甲苯基或苯基，R9代表由氟、氯、溴、羟基、各自具有多至3个碳原子的直链或支链的烷基、烷氧基或烷氧基羰基、或羧基或苯氧基任意取代的苯基，R10代表式-CH2-OR11、-CO2R12、-CO-NR13R14的基团或吡啶基，其中R11代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R12代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R13和R14可以相同或不同，它们代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基;或者T代表由三苯基甲基或甲基任意取代的四唑基。
尤其优选的通式(Ⅰ)化合物是下述化合物及它们的盐和其立体异构体其中A代表氢、有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苯基或环丙基;
E代表氮原子;
B和D一起形成下式基团
其中R2、R3和R4可以相同或不同，并且它们代表甲基、氢、氟、氯或溴;
L代表氢、氟或氯;
T代表下式基团 其中R5代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R6和R8可以相同或不同，并且它们代表氢或甲基，R7代表三氟甲基、甲基，或对甲苯基，R9代表可由氟或氯取代的苯基，和R10代表式-CH2-OH、-CONH2的基团或吡啶基;
或者T代表由三苯基甲基任意取代的四唑基。
此外，本发明还找到了制备本发明通式(Ⅰ)化合物的方法，该方法的特征在于在惰性溶剂中，如果合适，在碱存在下，并且如果合适，在保护性气流下，首先使通式(Ⅱ)化合物与通式(Ⅲ)化合物反应，得到通式(Ⅳ)化合物，
其中L具有上述的定义，W代表一般的离去基团，如氯、溴、碘、甲苯磺酸酯基或甲磺酸酯基，最好为溴，X代表C1-C6烷氧基羰基或三苯基甲基-四唑-1-基;
其中A、B、D和E同上述的定义;
其中A、B、D、L和X同上述的定义;
并且必要时，由相应羧酸开始，在先进行水解和活化之后，再于惰性溶剂中用磺酰胺(通式Ⅴ)或胺(通式Ⅴa)使该产物酰胺化，如果合适，反应在碱和/或辅助剂(如脱水剂)存在下进行， 其中R6、R7、R8、R9和R10同上述的定义;
并且在游离的四唑类化合物的情况下，必要时，按通常的方法，用酸(最好用三氟乙酸或盐酸)于二噁烷中脱去三苯基甲基;
并且必要时，将异构体分离;并且当要制备其盐时，将其与合适的碱或酸反应。
本发明的方法可以用下述反应式举例说明
该方法合适的溶剂是在反应条件下不变化的常用的有机溶剂。优选的溶剂包括醚类如乙醚、二噁烷、四氢呋喃、乙二醇二甲醚，或烃类如苯、甲苯、二甲苯、己烷、环己烷，或矿物油，或卤代烃类如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烯、三氯乙烯或氯苯，或乙酸乙酯，三乙胺，吡啶，二甲亚砜，二甲基甲酰胺，六甲基磷酰胺，乙腈，丙酮或硝基甲烷。也可以应用上述溶剂的混合液。二甲基甲酰胺和四氢呋喃是较好的。
本发明方法可以应用的碱通常是无机碱或有机碱。优选的是碱金属氢氧化物如氢氧化钠或氢氧化钾，碱土金属氢氧化物如氢氧化钡，碱金属碳酸盐如碳酸钠或碳酸钾，碱土金属碳酸盐如碳酸钙，碱金属或碱土金属醇盐如甲醇钠或甲醇钾、乙醇钠或乙醇钾、叔丁醇钾，或有机胺(三烷基(C1-C6)胺)如三乙胺，或杂环化合物如1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)、i，8-二氮杂双环[5.4.0]+-碳-7-烯(DBU)，吡啶二甲氨基吡啶，甲基哌啶或吗淋。还可以应用碱金属例如钠或它的氢化物如氢化钠作为碱。氢化钠、碳酸钾、三乙胺、吡啶、叔丁醇钾、DBU或DABCO是较好的。
一般来讲，相对于1摩尔式(Ⅲ)化合物，应用的碱量为0.05摩尔至10摩尔，最好为1摩尔至2摩尔。
本发明的方法通常在-80℃至+100℃，最好在-30℃至+60℃进行。
本发明的方法通常在常压下进行。但是也可以在加压或减压(例如0.5-5巴)下进行。
进行水解合适的碱是常用的无机碱。优选的是碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物，如氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡;碱金属碳酸盐如碳酸钠、碳酸钾或碳酸氢钠;碱金属醇盐如甲醇钠、乙醇钠、甲醇钾、乙醇钾或叔丁醇钾。尤其优先选用的是氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾。
进行水解合适的溶剂是水或进行水解常用的有机溶剂。优选的有醇如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇或丁醇;醚如四氢呋喃或二噁烷;或二甲基甲酰胺;二甲亚砜。尤其优先选用的是醇例如甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。还可以应用上述溶剂的混合物。
水解还可以用含水酸例如三氟乙酸、乙酸、盐酸、氢溴酸、甲磺酸、硫酸或高氯酸进行，优选三氟乙酸。
水解通常在0℃至+100℃，最好在+20℃至+80℃进行。
一般来讲，水解在常压下进行。但是也可以在降低的压力或升高的压力(例如0.5-5巴)下进行。
当进行水解时，相对于1摩尔酯，应用的碱量通常为1至3摩尔，最好为1至1.5摩尔。优先选用反应物的等摩尔量。
当进行上述反应时，第一步生成本发明化合物的羧酸酯，可以将该羧酸酯中间体进行分离。使该羧酸酯与常用的无机酸反应，可以得到本发明的酸。常用的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸或三氟乙酸。已知证明，在制备羧酸的情况下，不分离羧酸酯并将上述第二步水解作用后的碱性的反应混合物进行酸化是有利的。然后再按通常的方法将该酸进行分离。在碱性杂环类化合物的情况下，使羧酸酯溶液与上述的酸反应，也可以得到该杂环类化合物与无机酸生成的盐。
通式(Ⅳ)化合物的酰胺化或磺酰胺化作用通常在上述溶剂之一中进行，最好在四氢呋喃或二氯甲烷中进行。
通过活化的酰基卤阶段，酰胺化可以任意地进行，活化的酰基卤可以由合适的酸与亚硫酰氯、三氯化磷、五氯化磷、三溴化磷或草酰氯反应制得。
酰胺化通常在-20℃至+80℃(最好在-10℃至+30℃)和常压下进行。
除了上述的碱以外，该反应合适的碱较好的有三乙胺和/或二甲氨基吡啶、DBU或DABCO。
相对于1摩尔通式(Ⅳ)或(Ⅴ)化合物，应用的碱量为0.5摩尔至10摩尔，最好为1摩尔至5摩尔。
可以用于酰胺化作用的酸结合剂是碱金属碳酸盐或碱土金属碳酸盐，如碳酸钠、碳酸钾;碱金属或碱土金属氢氧化物，如氢氧化钠或氢氧化钾;或有机碱，如吡啶、三乙胺或N-甲基哌啶，或双环脒，如1，5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)或1，5-二氮杂双环+-碳-7-烯(DBU)。碳酸钾是较好的。
合适的脱水剂是碳化二亚胺，如二异丙基碳化二亚胺、二环已基碳化二亚胺或N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐;或羰基化合物，如羰基二咪唑;或1，2-噁唑化合物，如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-磺酸盐;或丙烷膦酸酐;或异丁基氯甲酸酯;或苯并三唑基氧基-三(二甲氨基)鏻六氟磷酸盐;或二苯基氨基磷酸酯;或甲磺酰氯。如果合适，可以有碱如三乙胺或N-乙基吗啉或N-甲基哌啶或二环已基碳化二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺存在。
相对于1摩尔相应的羧酸，酸结合剂和脱水剂的用量通常为0.5-3摩尔，最好为1-1.5摩尔。
大部分通式(Ⅱ)环己烷类化合物是新化合物，并且可以按下法制备首先，通过用钯/炭于上述一种溶剂(最好是甲醇)中在氢气流下进行氢化，使通式(Ⅵ)化合物转变成通式(Ⅶ)化合物 其中L同上述的定义， 其中L同上述的定义;
第二步，当T不是四唑基时，按通常的方法进行酯化;和如果T代表四唑基时，于二氯甲烷中与氯磺酰基异氰酸酯反应，得到相应的氰基化物，然后于上述一种碱(最好是N，N-二甲基甲酰胺)存在下，在氮气流中用叠氮化钠/氯化三乙基铵引入四唑基，再进一步与三苯甲基氯在上述的一种溶剂(最好是二氯甲烷)和碱(最好是三乙胺)存在下进行反应，引入三苯基甲基;并且在最后一步，如果需要于催化剂存在下进行亚甲基的溴化。
还原双键在0℃至+40℃(最好在+20℃)和1-10巴(最好在1-3巴)压力下进行。
酯化是在上述的一种溶剂(最好是甲苯和四氢呋喃)中进行，在先活化(最好通过碳酰氯)上述相应的羧酸之后，然后于0℃至+60℃(最好+10℃至35℃)和常压下与相应的醇盐进行反应。
制备氰基化合物和四唑基化合物的反应通常是在溶剂的沸点温度下和常压下进行。
引入三苯基甲到四唑基环的反应通常在0℃进行。
溴化通常在40℃至100℃(最好+60℃至90℃)和常压下进行。溴化是在上述的一种溶剂(最好用四氯化碳)中用N-溴丁二酰亚胺来完成。
溴化反应合适的起动剂(催化剂)是例如偶氮二异丁腈或过氧化二苯甲酰，最好是偶氮二异丁腈，相对于1摩尔通式(Ⅶ)化合物，应用的起动剂的量为0.01摩尔至0.1摩尔，最好是0.01摩尔至0.05摩尔。
通式(Ⅵ)化合物也是新化合物，并且可以按下法制备在上述的一种溶剂(最好是甲苯)中，在氢醌存在下，于+180℃至+230℃(最好200℃)和约20巴压力下，使通式(Ⅶ)化合物与1，3-丁二烯反应(参见Eur.J.Med.Chem.11，493(1976))
其中L同上述的定义。
通式(Ⅷ)化合物本身是已知的，或者可以按通常的方法制得。
通式(Ⅳ)和(Ⅶ)化合物是新的化合物，并且可以用上述方法制备。
通式(Ⅲ)化合物是已知的，或者可以按通常的方法制备。
通式(Ⅴ)胺是已知的，或者可以按已知的方法制备。
本发明通式(Ⅰ)化合物具有未曾预料的有用的药理作用。
由于本发明化合物可以竞争性地抑制血管紧张肽Ⅱ与受体的结合，因此它们具有专一拮抗血管紧张肽Ⅱ的作用。本发明化合物可抑制血管收缩和血管紧张肽Ⅱ刺激醛甾酮的分泌作用。此外，本发明化合物还可以抑制平滑肌细胞的增殖作用。
因此，本发明化合物在医药上可用于治疗动脉高血压和动脉粥样硬化。还可以用于治疗冠状心脏病、心机能不全、脑功能疾病、大脑局部缺血、外周循环疾病、肾和肾上腺功能紊乱、支气管痉挛和血管因素的呼吸道疾病、钠潴留和浮肿。
抑制激动剂诱发血管收缩作用的研究用家兔、雌雄均可，猛击头后部使其昏厥后放血，在有些情况下也用戊巴比妥麻醉(静脉注射，约60-80mg/kg)，开胸活杀。取出胸主动脉，清除粘附的结缔组织，剪成若干段1.5mm宽的血管环，然后分别移入容积为10ml的器官浴内，每段血管环起始的负荷重量约3.5克，器官浴内含有Krels-Henseleit营养液，并通入含95%氧气和5%二氧化碳的混合气体，温度控制在37℃。所述营养液由下列成分组成Nacl 119 mmol/L;CaCl2.2H2O 2.5mmol/L;KH2PO41.2mmol/L;葡萄糖10mmol/L;KCl 4.8mmol/L;MgSO4.7H2O 1.4mmol/L以及NaHCO325mmol/L。
用Statham UC2传感测压器，并通过桥式放大器(ifd Müiheim或DSMAalen)，以等比例收缩法测定血管环的收缩，并用A/D转换器(System 570，Kei-thley Munich)使血管环的收缩数字化后进行评价。每小时作一次激动剂的剂量-反应曲线(DRCs)。对于每条剂量-反应曲线(DRC)，需分别用3至4个不同浓度的激动剂于器官浴内，每次加药间隔4分钟。在每次DRC测定结束用上述营养液冲洗一段时间(在每一情况下均冲洗16次，约5次/分钟)，随之休息或保温28分钟，在这段时间内血管环的收缩通常可以恢复，再次达到起始时的张力值。
在正常情况下，通常把第三条DRC的顶点值作为参照值，用于评价要检测的待测物质，在随后的DRC测定中，在保温期的起始点将待测物质以逐渐递增的剂量加入浴中。在这种情况下，每段主动脉环都被刺激一整天，并且总是用同一种激动剂。
几种激动剂及其标准浓度(每单个给药剂量的体积为100ul)
KCl22.7;32.7;42.7;52.7mmol/l去甲肾上腺素 3×10-9;3×10-8;
3×10-7;3×10-6; g/ml5-羟色胺 10-8;10-7;10-6;10-5g/mlB-HT 920 10-7;10-6;10-5; g/ml甲氧胺 10-7;10-6;10-5; g/ml血管紧张素II 3×10-9;10-8;
3×10-8;10-7g/ml为了计算IC50(待测物质引起50%抑制的浓度)，通常该抑制作用是以给予的第三个激动剂浓度(等于次最大激动剂浓度)为基准。
本发明化合物能以剂量相关的方式抑制血管紧张素Ⅱ诱发的离体兔主动脉的收缩。而由钾离子去极化作用或其他激动剂诱发的主脉收缩则不能被这些化合物抑制，或者仅在高浓度时有微弱的抑制作用。
表A在体外对离体的兔主动脉环血管收缩的抑制作用抑制血管紧张素II诱发的血管收缩的IC50(nm)实例号 IC50(nm)926030220
对用血管紧素Ⅱ灌流大白鼠的血压测定雄性Wistar大白鼠(Moellegaard，Copenhagen，Denmark)，体重300-350克，用硫喷妥麻醉(腹腔内注射，100mg/kg)。在进行气管切开术之后插入一股动脉导管用于血压测定，并插入二个股静脉导管，一个用于血管紧张素Ⅱ灌流，另一个用于给予待测物质。在给予神经节阻断剂安血定(静脉注射，5mg/kg)之后，大白鼠开始用血管紧张素Ⅱ灌流(0.3ug/kg/min)，当血压值达到稳定状态时立即给予待测物质，待测物质通过静脉内给药，或者口服，剂型为混悬液或为0.5%Tylose溶液，在待测物质作用下引起的血压改变在表中以平均值±标准误表示。
对清醒的高血压大白鼠的抗高血压活性测定用清醒的大白鼠测定本发明化合物口服抗高血压的活性，用于试验的大白鼠已用外科手术造成一单侧肾动脉狭窄。即用一内径宽度为0.18mm的银制小钳夹住右侧肾动脉，致使血管狭窄。用该方法造成的高血压动物，在手术后头六周内血浆中血管紧张肽原酶的活性增高。动物给予待测物质后，每隔一定时间应用“尾部环套法”以无血方式测定这些动物的动脉血压。待测物质置于Tylose中制成各种剂量的混悬液，用胃管经胃内给药(口服)。在临床上相关剂量下，本发明化合物可降低高血压大白鼠的动脉血压。
本发明化合物还能按与浓度相关的方式抑制放射活性的血管紧张素Ⅱ与受体的特异性结合。
本发明化合物与牛肾上腺皮质膜组分中的血管紧张素Ⅱ受体的相互作用将新鲜取得的牛肾上腺皮质(AGCs)仔细地除去腺体髓质，在蔗糖液(0.32M)中，用Ultra-Turrax(Janke & Kunkel，Staufen i.B)粉碎，制得粗的膜匀浆，再经二次离心步骤作部分纯化处理，得到肾上腺皮质膜组分。
用该牛AGC部分经纯化的膜组分和放射性血管紧张素Ⅱ在0.25ml试验体积内作受体结合试验，0.25ml体积内特定地含有下列组分;部分经纯化的AGC膜组分(50-80ug);3H标记的血管紧张素Ⅱ(3-5nM);试验缓冲液(50mm Tris，PH7.2，5mM MgCl2)以及待测物质。在室温下保温60分钟后，样品中未被结合的放射活性物用浸湿的玻璃纤维泸器(Whatman GF/C)分离出，被结合的放射活性物用冰冷却的缓冲液(50mM Tris/HCl，PH7.4，5% PEG6000)洗涤该蛋白质后，于闪烁液中用分光光度法测定，原始数据用计算机程序进行分析，给出Ki或IC50值(Ki按放射活性加以修正的IC50值;IC50值待测物质引起放射性配体特异性结合50%抑制的浓度)。
表B实例号9Ki＝47nM实例30Ki＝19nM本发明化合物对平滑肌细胞增殖的抑制作用为了测定本发明化合物抑制细胞增殖的作用，以膜移植技术(R.Ross，J.Cell.Biol.50，172，1971)，用从大白鼠主动脉得到的平滑肌细胞进行试验。将此细胞接种在适当的培养皿内，通常用96孔培养板，在培养基199和5%CO2中于37℃培养2-3天，培养基199含有下列成分7.5%FCS和7.59%NCS;2mML-谷氨酰胺以及15mMHEPES，PH7.4。然后用抽出血清的方法使细胞同步化生长2-3天，接着再用血清或其他生长因子刺激生长。同时加入试验化合物。16-20小时后加入1μci3H标记的胸苷，再过4小时后，测定上述化合物在细胞的TCA可沉淀的DNA中的结合。为测定其IC50值，需计算该活性化合物的浓度，将该活性化合物作系列稀释，化合物抑制由10%FCS所产生的胸苷结合的半数最大抑制浓度为IC50值。
表C实例号 IC50(nM)164101722172526294313按已知的方法，用惰性的，无毒的、药学上适用的赋形剂或溶剂，可以将新的有效化合物制成常用的制剂，例如片剂、包衣片剂、小丸剂、颗粒剂、气雾剂、糖浆剂、乳剂、混悬液剂和溶液剂。在上述情况下，各种制剂中治疗上有效化合物的浓度为约0.5-90%(占总混合物的重量)，即该量足以达到所示的剂量范围。
按下法可配制组合物，例如将溶剂和/或赋形剂加到有效化合物中并混合，如果需要，可以应用乳化剂和/或分散剂，如果是例如用水作为稀释剂的情况，那么可以有选择地应用有机溶剂作为辅助溶剂。
可以按常用的方式给药，口服或非肠道给药较好，尤其好的是经舌给药和静脉注射。
在非肠道给药的情况下可以应用有效化合物的溶液，该溶液可用合适的液体赋形剂进行配制。
一般来讲，已经证明，为了得到有效的结果，在静脉注射给药的情况下剂量为0.001-1毫克/公斤体重是有益的，最好为0.01-0.5毫克/公斤体重;在口服给药的情况下，剂量为0.01-20毫克/公斤体重是有效的，最好为0.1-10毫克/公斤体重。
尽管如此，往往还需要根据下述情况改变上述的剂量，例如患者的体重、给药途径、各个药物的性质、配制的方式、给药的时间和间隔等。因此，在一些情况下用少于上述最低剂量就可足以解决问题，而在另一些情况下必须要超过上述剂量的上限。在施用较大剂量的情况下，一天是将该剂量分成几个单次剂量施用是合适的。
混合洗脱剂A＝二氯甲烷∶甲醇＝10∶1B＝石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1C＝石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1D＝二氯甲烷∶甲醇＝10∶1E＝乙酸乙酯∶二氯甲烷＝1∶1F＝二氯甲烷∶乙醇＝20∶1G＝石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2H＝二氯甲烷∶甲醇∶浓氨水＝200∶20∶1
起始化合物实施例Ⅰ反式-6-(4-甲苯基)-环己-3-烯-1-甲酸 外消旋体于约200℃和约20巴压力下，按已知方法(Eur.J.Med.Chem.11，493(1976)将275克(1.695摩尔)3-E-(4-甲苯基)丙烯酸(可以在市场上购到)与580ml1，3-丁二烯(冷凝后的形式量取)和另外的3克氢醌在480ml甲苯中反应22小时。粗制的混合物用甲苯稀释，用0.5M氢氧化钠水溶液萃取。水相再用1M盐酸酸化并用乙醚萃取。醚溶液用硫酸钠干燥，蒸发，残余物再溶于甲苯中，与5克活性炭煮沸15分钟后，趁热用抽滤滤除炭，将溶剂蒸发至约120-160ml;于0-4℃结晶出124克(573毫摩尔)产物。滤液再稍经浓缩，冷却，以便产生另外的结晶。重复该过程中其得到42克(194毫摩尔)产物。
Rf＝0.39(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)实施例Ⅱ反式-2-(4-甲苯基)-环己烷-1-甲酸
外消旋体将155克(717毫摩尔)实施例Ⅰ化合物溶于1L甲醇中，并于20℃和约1巴氢气压下，用10克10%钯/炭进行催化反应。总共反应16小时后，滤除催化剂，最后真空蒸发溶剂。
产量153克(701毫摩尔)。
Rf＝0.38(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)实施例Ⅲ反式-2-(4-甲苯基)-环己烷-1-甲酸叔丁基酯 外消旋体方法A将45.8克(184毫摩尔)实施例Ⅱ化合物溶于600ml甲苯中，并与49.5ml(387毫摩尔)草酰氯在回流下反应。2小时后蒸发溶剂和过量的试剂;为此如果需要必须将粗制的酰氯反复溶于甲苯中，并再次在旋转蒸发器上浓缩。得到的产物溶于500ml四氢呋喃中，并与24.8克(221毫摩尔)叔丁醇钾一起于0℃搅拌，再于20℃搅抖20小时。然后加入水和乙醚，将混合物萃取数次，有机相用硫酸钠干燥并蒸发，残余物径硅胶的层析纯化(Merck，石油醚∶乙酸乙酯＝20∶1)。
产量39.6克(130毫摩尔)Rf＝0.47(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)。
方法B将20.0克(91.6毫摩尔)实施例Ⅱ化合物悬浮于7ml浓硫酸和100ml乙醚中，于-30℃与80ml(713毫摩尔)异丁烯反应(压力装置)。混合物在密闭容器中加热至20℃并反应20小时。然后再将其冷至-30℃，打开压力装置，反应混合物于20℃在300ml3M氢氧化钠溶液/400ml乙醚中搅拌。水相用乙醚反萃取，有机溶液用硫酸钠干燥并蒸发。
产量23.3克(84.9毫摩尔)实施例Ⅳ反式-2-(4-溴甲基苯基)-环己烷-1-甲酸叔丁基酯 外消旋体将11.70克(42.6毫摩尔)实施例Ⅲ化合物与7.59克(42.6毫摩尔)N-溴丁二酰亚胺和1.4克偶氮二异丁腈在100ml四氯化碳中回流反应。反应4小时后，将混合物冷却，用抽滤法滤除得到的丁二酰亚胺沉淀，蒸发滤液。
产量14.2克(40.2毫摩尔)。
Rf＝0.48(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)实施例Ⅴ6-环丙基-咪唑并[2，3-b]吡啶 将3.27克(30毫摩尔)2，3-二氨基吡啶(Aldrich)和2.72克(30毫摩尔)环丙烷甲酸(Aldrich)与30ml甲苯基磷酸在120℃搅拌3小时。混合物倒入冰-水中，用氢氧化钠调至pH＝6-7，并用碳酸钠碱化至pH＝8-9。用乙酸乙酯萃取数次后，合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，最后在高真空下蒸发。粗产物进行层析(硅胶60，Merck，二氯甲烷至二氯甲烷∶甲醇(50∶1))产量3.01克(19毫摩尔)。
Rf＝0.38(乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1)实施例Ⅵ反式-2-(4-甲苯基)-环己烷-1-腈 外消旋体将100.0克(458.0毫摩尔)实施例Ⅱ化合物与84.3克(595.5毫摩尔)氯磺酰异氰酸酯的100ml二氯甲烷溶液在1L二氯甲烷中于沸腾下反应1小时。然后向冷却的反应混合物中滴加72ml(938.9毫摩尔)N，N-二甲基甲酰胺，随后将其搅拌18小时。反应混合物倒入350克冰中，冰融化后分离两相，水相用二氯甲烷萃取。有机相用碳酸钾干燥并蒸发，蒸馏残余物。得到57.8克(290.2毫摩尔)产物。
沸点122-131℃(0.2毫巴)。
Rf＝0.81(二氯甲烷)。
实施例Ⅶ5-[反式-2-(4-甲苯基)-环己-1-基]四唑 外消旋体在氮气和煮沸加热下，将15.34克(69.6毫摩尔)实施例Ⅵ化合物与22.6克(348毫摩尔)叠氮化钠和47.9克(348毫摩尔)三乙基氯化铵在230ml无水N，N-二基甲酰胺中反应。20小时后，将混合物倒入经冷却后的乙醚和1M硫酸中，有机相用1M硫酸洗涤，然后用浓度为10%的氢氧化钠溶液萃取。水相于0℃用1M盐酸调节至PH1.5，用抽滤法滤出得到的沉淀，用水洗涤并在高真空下用五氧化二磷和氢氧化钠干燥。
产量11.2克(46.2毫摩尔)Rf＝0.23(二氯甲烷∶甲醇-20∶1)。
实施例Ⅷ5-[反式-2-(4-甲苯基)-环己-1-基]-2-三苯基甲基四唑
外消旋体于0℃将11.0克(45.7毫摩尔)实例Ⅶ化合物与13.4克(48.2毫摩尔)三苯基甲基氯和7.57ml(54.6毫摩尔)三乙胺在170ml二氯甲烷中反应。混合物再搅拌约20小时，同时温热至室温，然后用乙醚和柠檬酸水溶液萃取。有机相用硫酸钠干燥并蒸发。
产量22.1克(45.5毫摩尔)Rf＝0.67(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)。
实施例Ⅸ5-[反式-2-(4-溴甲基苯基)-环己-1-基]-2-三苯基甲基-四唑 外消旋体将22.1克(45.5毫摩尔)实施例Ⅷ化合物与8.1克(45.5毫摩尔)N-溴丁二酰亚胺和0.3克偶氮二异丁腈于300ml四氯化碳中回流反应。反应3小时后，使混合物冷却至室温，然后再冷却至0℃，用抽滤法滤出沉淀。滤液经蒸发得到粗品(26.2克)，该精品未经进一步处理进行下一步反应
Rf＝0.47(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)。
制备实施例制备实施例1反式-2-｛4-[(6-环丙基-咪唑并[2，3-b]-吡啶)-7-基-甲基]-苯基｝-环己烷-1-甲酸叔丁酯 外消旋体于0℃将0.90克(5.7毫摩尔)实施例Ⅴ化合物与0.17克(5.7毫摩尔)氢化钠(浓度为80%，置于石蜡中使其稳定)在15ml二甲基甲酰胺中的反应。氢气的放出完成后，混合物再搅抖20分钟，然后于0℃滴加2.00克(5.7毫摩尔)实施例Ⅳ化合物的20ml二甲基甲酰胺溶液。混合物再搅拌20小时，同时温热至20℃，加入水后用乙醚萃取数次。有机相用硫酸钠干燥并蒸发，残余物经硅胶60层析纯化(Merck，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)。
产量0.4克(0.9毫摩尔)。
Rf＝0.60(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2)。
按制备实施例1类似的方法制备了表1所示的化合物。
表1

制备实施例10反式-2-｛4-[(6-环丙基-咪唑并[2，3-b]-吡啶)-7-基-甲基]-苯基｝-环己烷-1-甲酸 外消旋体于20℃将0.39克(0.9毫摩尔)制备实例1化合物与10ml浓盐酸在10ml二噁烷中反应。18小时后，混合物用2M氢氧化钠溶液调至PH13，并用乙醚振摇1次。分离两相后，水溶液在真空下除去残余的有机溶剂，并于0℃用浓盐酸调节至PH5。在此过程析出的沉淀用抽滤法滤出，用水洗涤并用氢氧化钠和五氧化二磷在高真空下干燥。
产量0.28克(0.7毫摩尔)。
Rf＝0.08(二氯甲烷∶甲醇＝10∶19)按制备实施例10类似的方法制备了表2所示的化合物。

制备实施例16和17反式-2-｛4-[(6-环丙基-咪唑并[2，3-b]-吡啶)-7-基-甲基]苯基｝-N-[(S)-苯基甘氨醇]-环己烷-1-甲酰胺 于-30℃将0.12克(0.32毫摩尔)制备实施例10化合物与89.6ul(6.5毫摩尔)三乙胺和26.6ul(0.35毫摩尔)甲磺酰氯在4ml四氢呋喃中反应。30分钟后，加入52.6毫克(0..38毫摩尔)(S)-苯基甘氨醇和39毫克(0.32毫摩尔)4-(N，N-二甲氨基)吡啶的3ml四氢呋喃溶液，混合物再搅拌9小时，同时温热至20℃。然后将其倒入碳酸氢钠水溶液中并用乙醚萃取数次。醚萃取液用硫酸钠干燥并蒸发，残余物经硅胶60层析纯化(Merck，二氯甲烷∶甲醇＝50∶1)。
产量60毫克(0.12毫摩尔)/Rf＝0.63(A)非对映体A(制备实施例16);
40毫克(0.08毫摩尔)/Rf＝0.59(A)非对映体B(制备实施例17);
按制备实施例16和17类似的方法制备了表3所示的化合物。



制备实施例36反式-2-｛4-[(6-环丙基-咪唑并[2，3-b]-吡啶)-7-基甲基]苯基｝-N-(4-甲苯基磺酰基)环己烷-1-甲酰胺 外消旋体于-20℃将120毫克(0.32毫摩尔)制备实施例10化合物与26.6ul(0.35毫摩尔)甲磺酰氯和194ul(1.4毫摩尔)三乙胺在4ml四氢呋喃中反应。2小时后向反应混合物中加入66.0毫克(0.39毫摩尔)4-甲磺酰胺和155毫克(1.28毫摩尔)4-(N，N-二乙氨基吡啶，混合物再搅拌20小时，将其倒入碳酸氢钠水溶液中并且乙醚萃取。有机相用硫酸钠干燥并蒸发。残余物经层析纯化(硅胶60，Merck，二氯甲烷∶甲醇＝50∶1)得到34毫克(0.06毫摩尔)产物。
Rf＝0.45(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶8)。
制备实施例375-[反式-2-(2-环丙基-咪唑并[2，3-b]-吡啶)-1-基-甲基苯基)-环己-1-基]四唑 外消旋体于20℃将0.64克(1.0毫摩尔)实施例Ⅸ化合称与3ml水和3ml三氟乙酸在7ml四氢呋喃中反应。2小时后混合物用乙醚稀释，并用氢氧化钠水溶液(PH＝13)萃取。碱性水相同1M盐酸调节至PH4.5，按此法获得沉淀用抽滤法滤出，用水洗涤并用氢氧化钠和五氧化二磷在真空下干燥。
产量0.27克(0.7毫摩尔)。
RF＝0.35(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)。
按制备实施例37类似的方法制备了表4所示的化合物。
表4
权利要求
1.式Ⅰ的杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物及它们的盐和各种立体异构体 其中A代表氢或有6-10个碳原子的芳基，该芳基可以由羟基、卤素或三氟甲基任意地取代，或者由各自具有多至6个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基取代，或者A代表各自具有多至8个碳原子的直链或支链的烷基或链烯基，或者代表有3-8个碳原子的环烷基；E代表氮原子或式-CR1基团，这里R1具有上述A的定义，并且可以选择与A相同或不同的基团；B和D一起形成下式的基团 其中R2、R3和R4可以相同或不同，并且具有上述A的定义，它们可以选择与A相同或不同的基团，或者代表卤素；L代表氢、卤素、硝基、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、各自具有多至6个碳原子的直链或支链的烷基、烷氧基或烷氧基羰基、氰基或羧基；T代表下式基团 其中R5代表氢、有多至8个碳原子的直链或支链的烷基、有3-7个碳原子的环烷基或苯基，R6和R8可以相同或不同，它们代表氢或有多至6个碳原子的直链或支链的烷基，R7代表三氟甲基或有多至6个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苄基或苯基，苄基或苯基各自可以由有多至6个碳原子的直链或支链的烷基任意地取代，R9代表有6-10个碳原子的芳基，该芳基可以由多至2个相同或不同的选自以下的取代基任意地取代卤素、羟基、各自有多至6个碳原子的直链或支链烷基、烷氧基或烷氧基羰基、羧基、苯氧基和C3-C6环烷氧基，R10代表式-CH2-OR11、-CO2R12、-CO-NR13R14基团或吡啶基，其中R11代表氢或有多至8个碳原子的直链或支链的烷基，R12代表氢或有多至8个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苯基或有3-6个碳原子的环烷基，R13和R14可以相同或不同，它们代表氢、有多至8个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苯基；或者T代表由三苯基甲基或有多至4碳原子的直链或支链的烷基任意取代的四唑基。
2.权利要求1所述的杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物及它们的盐和各种立体异构体其中A代表氢或由羟基、氟、氯、溴或三氟甲基或由各自具有多至4个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基任意取代的苯基，或者A代表各自具有多至6个碳原子的直链或支链的烷基或链烯基，或者A代表环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基;E代表氮原子或-CR1基团，其中R1同上述A的定义，并且可以选择与A相同或不同的基团;B和D一起形成下式基团 其中R2、R3和R4可以相同或不同，并且具有上述A的定义，它们可以选择与A相同或不同的基团，或者代表氟、氯或溴;L代表氢、氟、氯、溴、三氟甲基、羧基或各自有多至4个碳原子的直链或支链的烷基、烷氧基或烷氧基羰基;T代表下式基团 其中R5代表氢、有多至6个碳原子的直链或支链的烷基、环丙基、环戊基、环己基或苯基，R6和R8可以相同或不同，并且它们代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R7代表三氟甲基或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苄基或苯基，苄基和苯基各自可以由多至4个碳原子的直链或支链的烷基任意地取代，R9代表由氟、氯、溴、羟基、各自具有多至4个碳原子的直链或支链的烷基、烷氧基或烷氧基羰基、或羧基或苯氧基任意取代的苯基，R10代表式-CH2-OR11、-CO2R12、-CO-NR13R14基团或吡啶基，其中R11代表氢或有多至6个碳原子的直链或支链的烷基，R12代表氢、有多至6个碳原子的直链或支链的烷基、苯基、环丙基、环戊基或环己基，R13和R14可以相同或不同，它们代表氢、有多至6个碳原子的直链或支链的烷基、环丙基、环戊基、环己基或苯基;或者T代表由三苯基甲基或甲基任意取代的四唑基。
3.权利要求1所述的杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物及它们的盐和各种立体异构体其中A代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苯基、环丙基、环戊基或环己基;E代表氮原子;B和D一起形成下式基团 其中R2、R3和R4可以相同或不同，并且具有上述A的定义，它们可以选择与A相同或不同的基团，或者它们代表氟、氯或溴;L代表氢、氟、氯、三氟甲基或甲基;T代表下式基团 其中R5代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R6和R8可以相同或不同，并且它们代表氢或甲基，R7代表三氟甲基或甲基，乙基、苄基、对甲苯基或苯基，R9代表由氟、氯、溴、羟基、各自具有多至3个碳原子的直链或支链的烷基、烷氧基或烷氧基羰基、或羧基或苯氧基任意取代的苯基，R10代表式-CH2-OR11、-CO2R12、-CO-NR13R14的基团或吡啶基，其中R11代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R12代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R13和R14可以相同或不同，它们代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基;或者T代表由三苯基甲基或甲基任意取代的四唑基。
4.权利要求1所述的杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物及它们的盐和各种立体异构体其中A代表氢、有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，或代表苯基或环丙基;E代表氮原子;B和D一起形成下式基团 其中R2、R3和R4可以相同或不同，并且它们代表甲基、氢、氟、氯或溴;L代表氢、氟或氯;T代表下式基团 其中R5代表氢或有多至4个碳原子的直链或支链的烷基，R6和R8可以相同或不同，并且它们代表氢或甲基，R7代表三氟甲基、甲基，或对甲苯基，R9代表可由氟或氯取代的苯基，和R10代表式-CH2-OH、CONH2的基团或吡啶基;或者T代表由三苯基甲基任意取代的四唑基。
5.权利要求1-4中任一权所述的用于治疗疾病的杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物。
6.制备权利要求1-4中任一权所述的杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物的方法，该方法的特征在于在惰性溶剂中，如果合适，在碱存在下，并且如果合适，在保护性气流下，首先使通式(Ⅱ)化合物与通式(Ⅲ)化合物反应，得到通式(Ⅳ)化合物， 其中L具有上述的定义，W代表一般的离去基团，如氯、溴、碘、甲苯磺酸酯基或甲磺酸酯基，最好为溴，X代表C1-C6烷氧基羰基或三苯基甲基-四唑-1-基; 其中A、B、D和E同上述的定义; 其中A、B、D、L和X同上述的定义;并且必要时，由相应羧酸开始，在先进行水解和活化之后，再于惰性溶剂中用磺酰胺(通式Ⅴ)或胺(通式Ⅴa)使该产物酰胺化，如果合适，反应在碱和/或辅助剂(如脱水剂)存在下进行， 其中R6、R7、R8、R9和R10同上述的定义;并且在游离的四唑类化合物的情况下，必要时，按通常的方法，用酸(最好用三氟乙酸或盐酸)于二噁烷中脱去三苯基甲基;并且必要时，将异构体分离;并且当要制备其盐时，将其与合适的碱或酸反应。
7.含有至少一种权利要求1-4中任一权项所述的杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物或其盐的药物。
8.权利要求7所述的治疗动脉高血压和动脉粥样硬化的药物。
9.权利要求1-4中任一权项所述的杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物用于制备药物的用途。
10.制备权利要求7所述的药物的方法，其特征在于将杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物或其盐转变成合适的给药形式，必要时，可以用合适的辅助剂和赋形剂。
全文摘要
通过合适的杂环化合物与环己烷苄基卤反应制备杂环上取代的苯基-环己烷-羧酸衍生物。本发明化合物可以用作治疗动脉高血压和动脉粥样硬化药物的有效成分。
文档编号C07D471/04GK1108257SQ9410155
公开日1995年9月13日 申请日期1994年2月15日 优先权日1993年2月15日
发明者U·E·米勒, P·费, W·胡布什, M·米勒-格里曼, J·德雷塞尔, R·汉科, T·克雷默, M·博克, S·卡茨达, S·沃尔费尔, A·克诺尔, J-P·施塔什, S·蔡斯 申请人:拜尔公司