专利名称：牛膝糖肽的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种从牛膝中提取牛膝糖肽的方法。
牛膝(Achyranthes bidentata Blume)具有增强机体免疫功能的作用，一般用于中药方剂中，用水煎服。然而，水煎中药除了煎煮麻烦这一通病外，最主要的是牛膝中溶于水部分的成份复杂，除了有效成份牛膝糖肽外，还有相当一部分其它成份也溶于水中，从而达不到少量高效的目的。经研究发现，牛膝中蛋白肽和糖等成份结合的糖肽具有免疫活性，且水溶性好，易为人体充分吸收。牛膝糖肽的糖含量高且含有多种氨基酸，可以调节机体功能，促进新陈代谢，提高机体免疫力，延缓细胞衰老。牛膝糖肽无毒副作用，对冠心病、高血压有显著的疗效，且可加速手术后创口的愈合及各种癌症术后化疗后的康复，特别还对白血球下降者有显著的升白功效，但目前尚无一种简单易行的方法从牛膝中分离提取得到蛋白、肽和糖结合的糖肽。
本发明的目的是提供一种从牛膝中提取糖肽的独特的方法。
本发明的目的是通过下列构思来实现的牛膝用水浸泡，分离得到浸泡上清液，向内加入与水混溶的有机溶剂进行沉淀，分离得到沉淀物，即为牛膝糖肽。
在所述的提取方法中，浸泡用水的用量相对于1份(重量)牛膝而言，为1-2份(重量)，所述的浸泡用水可选自由洁净的自来水，离子交换水和蒸馏水所组成的组。浸泡时间视不同季节的室温高低而定，较好的时间为8-24小时。
其中所述的有机溶剂以醇类、丙酮或其混合溶剂为佳，其用量相对于1份(重量)的浸泡上清液而言，为2-6份(重量)，较好的是用4.5倍丙酮进行沉淀。优选的沉淀时间为4-10小时。
进一步地说，若市售牛膝中杂质太多，应先拣去杂质，用水淘洗干净，所得的干净湿牛膝再进行提取。
下面将结合具体实施例对本发明作详细的阐述。
实施例1市售的牛膝切片，拣去杂质，并用水淘洗干净。称取1000克干净湿牛膝，加入1000克洁净自来水浸泡12小时。过滤弃去滤渣，向滤液中加入4.5倍的丙酮，静置5小时，用虹吸管吸去上清液，对下层浆液进一步进行离心分离，得到棕色浆状沉淀的牛膝糖肽粗制品。
粗产品的牛膝糖肽浆液经透析或重结晶纯化后得精制品牛膝糖肽浆液，放入冷冻机中进行干燥而得淡黄色的牛膝糖肽粉末。得率12%。
实施例2称取经实施例1所述处理过的干净湿牛膝500克，加入1000克蒸馏水浸泡8小时。离心分离弃去沉淀物，向上清液中加入5倍量(体积)的乙醇，放置3小时。然后倒出上清液。下层浆液再离心，所得的棕色浆状沉淀即为牛膝糖肽浆液。
用实施例1所述的方法进行纯化和干燥后可得到牛膝糖肽粉。得率10%急毒性(LD50)试验取昆明种小鼠，(体重18-22克)60天，其中雌雄各半。一天禁食后，取实施例1的样品以20g/kg的剂量给小鼠灌胃给药。给药后小鼠的活动和摄水及进食物无异常，连续观察7天，无小鼠死亡。结论本发明的牛膝糖肽以20g/kg给药对小鼠无急性毒性。
药物免疫药理试验以实施例1和2制得的牛膝糖肽粉，在25mg/kg剂量下，给小鼠连续口服4天，对T细胞和B细胞有明显的促进增殖作用。临床试验将实施例1和2制得的牛膝肽粉，按常规方法制成牛膝糖肽胶囊。
抽样选取原发性高血压、高脂血症、冠心病、病毒性心肌炎、脑血管意外、慢性胃炎、消化性溃疡以及肿瘤等病例，总病例数115例，其中男性68例，女性47例，服用方法牛膝糖肽3＃，每日3次，疗程为2-3周。
结果全数病例服用牛膝糖肽胶囊后，胸闷、心悸、气促、头晕、纳呆、腹痛以及骨胳疼痛均有不同程度缓解，其中着重观察了40例。在40例中，以冠心病、高血压、恶性肿瘤等病例症状改善较为显著。一般在服后3-4天即见效。用药前后复查血常规、尿常规、肝功能、肾功能等，均未见异常。
全数病例在服药期间基本上未发现有副作用。
含量测定用高效液相色谱(HPLC)测量实施例1和2的样品，其中糖的含量分别为98.715、98.235;在氨基酸自动分析仪上测得有多种氨基酸。
用本发明的方法来提取牛膝糖肽，具有生产设备简单，成本低，工艺先进，得率高的特点。所提取的产品是一种新的增强人体免疫功能的促进剂，易为人体所吸收，是一种全天然新型的机体调节型的高效新药和保健品。
权利要求
1.一种提取牛膝糖肽的方法，其特征在于ⅰ)用水浸泡牛膝；ⅱ)分离得到上清液，向内加入与水混溶的有机溶剂进行沉淀；ⅲ)分离得到沉淀物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于ⅰ)中浸泡用水的用量相对于1份(重量)牛膝而言为1-2份(重量)水。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的浸泡用水系选自由洁净自来水、离子交换水和或蒸馏水组成的组。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于ⅰ)步骤的浸泡时间为8-24小时。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于ⅱ)步骤中沉淀时间为4-10小时。
6.根据权利要求1所述的方式，其特征在于其中所述的与水混溶的有机溶剂选自由醇类、丙酮和其混合物所组成的组。
全文摘要
本发明涉及一种牛膝糖肽的提取方法，其特征在于用水浸泡牛膝，分离得到上清液，向内加入与水相混溶的有机溶剂沉淀，分离得到沉淀物。本方法具有工艺独特、简单、先进，得率高，成本低廉的优点，所提取的产品是一种全新的机体调节型高效新药和保健品。
文档编号C07K9/00GK1088214SQ9310963
公开日1994年6月22日 申请日期1993年8月20日 优先权日1993年8月20日
发明者王思清, 胡月华 申请人:上海化城生化科技有限公司