1.本发明涉及植物组织培养，属于燕麦单倍体育种技术领域，更具体的说是涉及一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基。


背景技术：

2.燕麦是禾本科燕麦属一年生草本植物，按外稃性状分为带稃型(皮燕麦)和裸粒型(裸燕麦)，俗称莜麦。燕麦是一种集营养、饲用、药用于一身的特色杂粮作物，其营养价值在各种谷物中名列前茅。但是燕麦品种资源贫乏，类型单一；通过常规的品种间杂交，难于突破原有性状，创造新的类型。杂种后代分离严重，稳定很慢，特别是带壳性状，经多年选育也难于获得纯合品系，影响了燕麦育种的开展。单倍体育种可在较短时间内得到大量纯合的个体，显著缩短了育种年限，提高了育种效率，为燕麦品种改良提供了新途径。
3.花药培养，也称雄核发育，是获得单倍体的重要方法之一；其基本过程就是通过花药接种并诱导形成愈伤组织，最后发育成一株完整植株。目前燕麦花药培养的第一个环节，燕麦花药愈伤组织的诱导率很低，严重影响燕麦花药培养效率和燕麦单倍体育种进程。
4.因此，提供一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明提供了一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基。
6.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基，以k培养基为基础培养基，添加2,4-d(2,4-二氯苯氧乙酸)、kt(激动素)、tdz(噻苯隆)、麦芽糖(maltose)和植物凝胶(agarpowder)；所述2,4-d的浓度为3-7mg/l，所述kt的浓度为0.5mg/l，所述tdz的浓度为0.2-1.0mg/l，所述麦芽糖的浓度为70g/l-110g/l，所述植物凝胶的浓度为6g/l；所述培养基ph值为5.8-6.2。
8.进一步，所述的一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基，以k培养基为基础培养基，添加2,4-d、kt、tdz、麦芽糖和植物凝胶；所述2,4-d的浓度为5mg/l，所述kt的浓度为0.5mg/l，所述tdz的浓度为0.5mg/l，所述麦芽糖的浓度为90g/l，所述植物凝胶的浓度为6g/l；所述培养基ph值为6.0。
9.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基，以k培养基为基础培养基，添加2,4-d、kt、tdz、麦芽糖和植物凝胶；可有效提高燕麦花药愈伤组织诱导率。
具体实施方式
10.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通
技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
11.实施例1
12.1)一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基，以k培养基为基础培养基，添加2,4-d、kt、tdz、麦芽糖和植物凝胶；2,4-d的浓度为5mg/l，kt的浓度为0.5mg/l，tdz的浓度为0.5mg/l，麦芽糖的浓度为90g/l，植物凝胶的浓度为6g/l；培养基ph值为6.0。其中，k培养基的成分和用量见表1。
13.表1 k培养基的成分和用量
[0014][0015][0016]
2)提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基的配制方法如下：
[0017]
将大量元素配制成10x的母液，微量元素、铁盐和有机元素配制成100x母液放入4℃冰箱备用。2,4d、kt和tdz各激素配置成1mg/ml的浓度，0.2μm的过滤器过滤灭菌，置于-20℃冰箱备用。
[0018]
用天平称取麦芽糖放入烧杯，用少量水溶解，加入各母液定容。用1mol/l的naoh调节ph值至6.0，加入植物凝胶后将三角瓶封口，置于高压灭菌锅121℃灭菌20min，然后置于超净工作台中自然冷却到50-60℃时加入激素，分装至直径为3.5cm的培养皿中，待其凝固后用铝箔纸包好放入4℃冰箱备用。
[0019]
3)燕麦花药愈伤组织的诱导方法如下：
[0020]
选取3种燕麦品种ja3、lis和b20作为花药供体。
[0021]
在孕穗期采集幼穗后置于4℃冰箱中进行暗、冷处理7d后取出，用75％乙醇消毒，
选取小孢子为单核中晚期的小穗(小孢子时期通过醋酸杨红染色镜检来确定)，剥离出花药放在装有诱导培养基的直径为3.5cm的培养皿中，每个培养皿中放置30个花药，每个燕麦品种接种690个花药，于32℃处理5d后转移到28℃条件下进行暗培养。待愈伤组织出现一周后统计愈伤组织诱导率，结果见表2。愈伤组织诱导率＝(诱导出愈伤组织的花药数/接种的花药数)
×
100％。
[0022]
表2愈伤组织诱导率
[0023][0024]
实施例2
[0025]
一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基，以k培养基为基础培养基，添加2,4-d、kt、tdz、麦芽糖和植物凝胶；2,4-d的浓度为3mg/l，kt的浓度为0.5mg/l，tdz的浓度为1mg/l，麦芽糖的浓度为70g/l，植物凝胶的浓度为6g/l；培养基ph值为5.8。
[0026]
k培养基的成分和用量、培养基的配制方法、燕麦花药愈伤组织的诱导方法同实施例1。
[0027]
实施例3
[0028]
一种提高燕麦花药培养愈伤组织诱导率的培养基，以k培养基为基础培养基，添加2,4-d、kt、tdz、麦芽糖和植物凝胶；2,4-d的浓度为7mg/l，kt的浓度为0.5mg/l，tdz的浓度为0.2mg/l，麦芽糖的浓度为110g/l，植物凝胶的浓度为6g/l；培养基ph值为6.2。
[0029]
k培养基的成分和用量、培养基的配制方法、燕麦花药愈伤组织的诱导方法同实施例1。
[0030]
实施例2、3的诱导率与实施例1基本一致，不再赘述。
[0031]
对比例1
[0032]
一种培养基，以k培养基为基础培养基，添加2,4-d、kt、麦芽糖和植物凝胶；2,4-d的浓度为5mg/l，kt的浓度为0.5mg/l，麦芽糖的浓度为90g/l，植物凝胶的浓度为6g/l；培养基ph值为6.0。
[0033]
k培养基的成分和用量、培养基的配制方法、燕麦花药愈伤组织的诱导方法同实施例1。
[0034]
统计愈伤组织诱导率，结果见表3。
[0035]
表3愈伤组织诱导率
[0036][0037]
表3结果表明，采用本发明实施例1的诱导培养基，燕麦花药培养3个不同燕麦品种诱导率都有显著提高，诱导率提高了30.37％-62.76％。
[0038]
为了进一步验证本发明的培养基与现有技术采用的培养基诱导燕麦花药愈伤组织效果的差异，采用现有的2个燕麦花药愈伤诱导培养基配方(w14诱导培养基和c17诱导培养基，具体见对比例2、3)，配成花药愈伤组织诱导培养基，同样选取燕麦品种ja3作为花药供体诱导花药愈伤组织操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
[0039]
对比例2w14诱导培养基
[0040]
以w14培养基(成分和用量见表4)为基础培养基，附加2,4-d 5mg/l，kt 0.5mg/l，乙烯利20mg/l，l-半胱氨酸50mg/l，肌醇500mg/l，麦芽糖90g/l(固体)，植物凝胶3g/l(固体)，聚蔗糖400100g/l(液体)，ph为6.0。
[0041]
表4 w14培养基的成分和用量
[0042][0043][0044]
对比例3c17诱导培养基
[0045]
以c17培养基(成分和用量见表5)为基础培养基，附加2,4-d 5mg/l，kt 0.5mg/l，麦芽糖90g/l，植物凝胶3g/l，肌醇100mg/l，ph为6.0。
[0046]
表5 c17培养基的成分和用量
[0047][0048]
实施例1与对比例2、3的愈伤组织诱导率结果见表6。
[0049]
表6愈伤组织诱导率
[0050][0051]
从表6不同培养基的诱导效果来看，本发明实施例1的培养基对燕麦ja3花药愈伤组织诱导率为56.38％，而w14培养基和c17培养基分别只有32.32％和29.13％；表明本发明对燕麦花药愈伤组织的诱导率要显著高于其他2种诱导培养基。
[0052]
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。