growth restriction.j nutr biochem.2014,25(7):785-795.]。
6.在规模化猪场，为追求大的初生体重，在母猪怀孕后期都会对母猪进行攻胎，即增加怀孕母猪的喂料量和营养浓度，导致怀孕母猪吃入的蛋白质等营养物质远远超过了正常需要量。另外，母猪饲料中常常含有霉菌毒素，长期采食这种饲料会导致霉菌毒素在体内的累积，从而对母猪的心血管和胎儿的肺及泌尿器官造成损害，导致母猪对胎儿的供血不足、胎儿肺泡液和尿液形成不足，因在母猪怀孕后期，胎儿肺泡液和胎儿尿液是羊水的主要来源，肺泡液和尿液的形成不足，最终导致了羊水减少，大大地增加了母猪的产程，出现了上述所说的系列危害。
7.如何增加产前母猪体内羊水量是当前猪场生产中迫切想要解决的难题，因为分娩时充足的羊水能使母猪产道顺滑，形成的水囊对母体子宫颈和产道有软化扩张的功能，便于胎儿的顺利产出，能大大减少难产对母猪和小猪的伤害；另外，充足的羊水还能抑制细菌以减少产道感染。
8.子宫-阴道-乳房炎会降低母猪的年平均断奶仔猪数(piglets weaned/sow/year,psy)，这是因为母猪长期患子宫阴道炎易导致受精卵着床不牢固，从而出现胚胎死亡增加、胎儿宫内发育受阻或母猪返情等症状，而乳房炎则易导致哺乳母猪的奶水产量和品质下降，降低了哺乳仔猪的成活率。研究表明，母猪感染大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和链球菌后易引发母猪子宫阴道乳房炎和哺乳仔猪腹泻。
9.目前，已有利用中药饲料添加剂来缩短母猪产程的文献报道，但这些文献未涉及到中药饲料添加剂缩短母猪产程是与增加了母猪羊水有关，也未涉及中药饲料添加剂中增加母猪羊水的可能有效成分及其潜在机制。


技术实现要素：

10.针对

背景技术：
中母猪产前体内羊水量少以及年平均断奶仔猪数低的问题，本发明提供了一种提高母猪羊水量和psy的发酵复方中药添加剂及其制备方法，本发明一方面在于提供了一种发酵复方中药添加剂配方，另一方面在于提供了该发酵复方中药添加剂的发酵制备方法以及饲喂方法。
11.本发明具体是通过如下技术方案实现的：
12.一种提高母猪羊水量和psy的发酵复方中药添加剂，按质量份数包括以下组分：
13.10-65份鱼腥草，5-35份艾叶，6-60份小飞扬草，2-25份王不留行，1-30份翻白草，10-60份铁苋菜；5-25份糖，5-40份小麦，5-25份豆粕，0.02-0.10份黑曲霉，0.5-2.0份酵母菌。
14.进一步地，所述发酵复方中药添加剂按质量份数包括以下组分：
15.18-25份鱼腥草，20-25份艾叶，32-45份小飞扬草，7-12份王不留行，20-27份翻白草，35-50份铁苋菜；8-15份糖，20-30份小麦，10-20份豆粕，0.02-0.05份黑曲霉，1.0-1.8份酵母菌。
16.进一步地，中药组分与小麦、豆粕需粉碎过80目筛。
17.一种提高母猪羊水量和psy的发酵复方中药添加剂的发酵制备方法，包括如下步骤：
18.1)按配方称取各原料备用；
19.2)将糖、黑曲霉和酵母菌溶解于热水中，静置后搅拌均匀得到混合液；
20.3)将步骤2)所得混合液与剩余原料混合并搅拌均匀，恒温发酵，然后取出真空密封，最后在室温条件下放置13-17天即得发酵复方中药添加剂。
21.进一步地，步骤2)所述热水温度为40℃。
22.进一步地，步骤3)所述恒温发酵温度为43℃，时间为36小时。
23.进一步地，所述发酵复方中药添加剂应用于增加怀孕母猪产前体内羊水量以及提高母猪的psy。
24.进一步地，所述应用方法为：从母猪怀孕的第104天起，每头母猪每天补饲50克所述发酵复方中药添加剂，至母猪哺乳结束为止。
25.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
26.1.本发明发酵复方中药添加剂根据中药的药物成分及药理特性合理选择多种中药组分，其具有多种抗氧化、抗菌消炎、保护心血管、加快血液流通和增加血管通透性的药效成分，在这些药效成分的协同作用下，适度增加了妊娠母猪的羊水量，从而使产道保持更润滑，缩短母猪产程，让小猪能够更快速地从产道内排到产道外，减少了胎儿在产道内发生缺氧或窒息的几率，提高了仔猪的活力和母猪的窝产活仔猪头数，另外，还能通过改善母猪的奶水质量来提高哺乳仔猪的成活率，达到提高母猪每窝断奶仔猪头数的目的。
27.2.本发明选取的中药中的植物活性成分可通过抑制胞外聚合物产生、降低细菌的黏附、破坏细菌细胞膜的完整性和通透性、抑制细菌体内酶的活性、改变细胞代谢、抑制核酸合成和增强动物机体免疫力等途径起抑菌和杀菌作用，从而提高了母猪的年平均断奶仔猪数。
附图说明
28.图1为羊水的来源与平衡示意图。
29.图2为本发明制得的发酵复方中药饲料添加剂a、b、c浓缩液抑菌圈图示。
30.图3为胎儿肺泡液和尿液形成示意图。
具体实施方式
31.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
32.1发酵复方中药饲料添加剂组方
33.实施例1
34.按重量份数称取20份鱼腥草、23份艾叶、40份小飞扬草、8份王不留行、25份翻白草、45份铁苋菜、10份白糖、26份小麦、15份豆粕、0.03份黑曲霉、1.5份酵母菌备用；其中中药组分与小麦、豆粕需粉碎过80目筛。
35.对比例1
36.按重量份数称取20份鱼腥草、15份艾叶、40份小飞扬草、25份翻白草、45份铁苋菜、18份白糖、8份小麦、8份豆粕、0.05份黑曲霉、1份酵母菌备用；其中中药组分与小麦、豆粕需粉碎过80目筛。
37.对比例2
38.按重量份数称取25份艾叶、25份小飞扬草、12份王不留行、30份翻白草、30份铁苋菜、25份白糖、10份豆粕、0.02份黑曲霉、0.7份酵母菌备用；其中中药组分与豆粕需粉碎过80目筛。
39.2复方中药饲料添加剂发酵
40.按上述实施例及对比例1、2称取的原料总重量，分别量取同等重量的水，将其加热至40℃，把白糖、黑曲酶和酵母菌溶解于热水中，静置30分钟后搅拌均匀，将得到的混合液与其他原料混合并拌匀，然后将其放入43℃的烘箱内发酵36小时，取出后分装在真空袋内并进行真空密封，在室温下放置15天得到发酵复方中药饲料添加剂a、b、c。
41.3发酵复方中药添加剂体外抑菌试验
42.3.1发酵复方中药添加剂浓缩液制备
43.打开真空包装袋，分别称取50g发酵复方中药饲料添加剂a、b、c于烧杯中，加入500ml蒸馏水浸泡1小时，用电炉加热至沸腾后用文火慢煮1小时，静置，再用8层纱布进行过滤；将滤渣倒回烧杯中并加入300ml蒸馏水，加热慢煮1小时，静置后同样用8层纱布过滤，合并两次药液，在65℃的干燥箱中将药液浓缩至25ml，使药液浓度为2g/ml，最后将药液进行高压蒸汽灭菌得到发酵复方中药饲料添加剂a、b、c浓缩液。将其放置于-20℃冰箱中保存，用于后续试验。
44.3.2菌液的培养
45.从广东省微生物菌种保藏中心以冻干菌的形式购入无乳链球菌(gdmcc 1.768)、大肠埃希氏菌(gdmcc 1.176)、金黄色葡萄球菌(gdmcc 1.174)和猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种(gdmcc 1.163)四种菌。用无菌吸管吸取0.3ml脑心浸出液(brain heart infusion，bhi)肉汤，滴入装有无乳链球菌冻干粉的冻干管中，轻轻振荡至其溶解，吸取全部悬浮液，接种于5ml的bhi肉汤中，在37℃培养箱中培养48小时。用无菌吸管分别吸取0.3ml的lennox broth(lb)肉汤，滴入装有大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种冻干粉的冻干管中，轻轻振荡至其溶解，吸取各管中的全部悬浮液，分别接种于5ml的lb肉汤中，在37℃培养箱中培养24小时。在660nm波长下测定菌液的od值，使其含菌量达到1.5
×
108cfu/ml。
46.3.3体外抑菌试验
47.采用牛津杯法进行，将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基倒入培养皿中，待其凝固后在上面均匀地涂上0.1ml的大肠杆菌菌悬液(沙门氏菌和金黄色葡萄球菌菌悬液也按此方法进行涂布)，然后在培养基上放置a、b和c共3个无菌牛津杯(7.8*6*10mm)，量取200μl发酵复方中药饲料添加剂a、b和c浓缩液分别放入对应的牛津杯中，每种菌设3个重复。将培养皿放入37℃的恒温培养箱中培养18h，取出后测量各种药液的抑菌圈直径，取其平均值。将灭菌的血平板培养基倒入培养皿中，待其凝固后在上面均匀地涂上0.1ml无乳链球菌菌悬液，其余步骤与大肠杆菌抑菌圈测定步骤相同。抑菌效果按以下标准进行判定：抑菌圈直径＞20mm为极敏感，抑菌圈直径为15-19mm为高敏感，抑菌圈直径为10-14mm为中敏感，抑菌圈直径＜10mm为低敏感，无抑菌圈则为不敏感。
48.4 uhplc-qe-ms中药非靶标代谢组学检测
49.4.1主要仪器设备
50.1290-超高效液相色谱系统(agilent，美国)、waters acquity uplc beh c18色谱柱(1.7μm,2.1mm
×
100mm)、q exactive focus四极杆串联轨道离子阱高分辨质谱系统(thermo fisher scientific，美国)。
51.4.2色谱条件
52.流动相：水(0.1％甲酸)和乙腈(0.1％甲酸)，柱温箱温度：55℃，流速：0.5ml
·
min-1
，进样量：5μl。梯度洗脱程序：0-11min，85％-25％水溶液；11-12min，25％-2％水溶液；12-14min，2％-2％水溶液；14-14.1min，2％-85％水溶液；14.1-15min，85％-85％水溶液；15-16min，85％-85％水溶液。
53.4.3质谱条件
54.离子源：电喷雾电离源；正负离子交替扫描；扫描模式为：full scan/ddms2；质量扫描范围：m/z 50-1000da；毛细管温度：400℃；喷雾电压：正离子模式4000v，负离子模式3600v；气体流速：鞘气35arb，辅助气10arb；采用低中高3种碰撞能量对母离子进行二级碎裂：15v、30v和45v；质谱分辨率：一级质谱(full scan)70000 fwhm(full width at half maximum)，二级质谱(ms/ms)17500 fwhm。
55.4.4数据处理
56.利用xcms软件对lc-qe生成的数据进行组分提取，最终获得包括保留时间、质荷比与峰面积的二维数据阵；将数据导入simca-p软件(version16.0.2,sartorius stedim data analytics ab,umea,sweden)，进行数据处理，建立模式识别，获得对分组有贡献的变量；通过hmdb和kegg compound.数据库进行谱库匹配，得到代谢物id号。选择ms2 score＞0.80的物质作为可靠的中药活性成分。
57.5发酵复方中药饲料添加剂饲喂母猪试验
58.将20头体况和胎龄相近且与配公猪相同的怀孕二元杂交(长白
×
大白)母猪平均分成两组，试验组和对照组各10头。在怀孕的第104天起，试验组母猪每头每天补饲50克发酵复方中药饲料添加剂a至母猪哺乳结束，对照组母猪不补饲发酵中药饲料添加剂。在母猪分娩时利用尿垫收集每头母猪排出的羊水并称重，记录每头母猪产仔所花费的时间、产活仔数、初生窝重、哺乳仔猪每天拉稀头数、哺乳仔猪死亡率、窝断奶仔猪数和断奶窝重。
59.6试验结果
60.6.1发酵复方中药添加剂抑菌效果试验
61.从图2和表1结果可知，3种发酵复方中药饲料添加剂浓缩液抑制大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌生长的能力为：a浓缩液＞b浓缩液＞c浓缩液。a浓缩液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好、对沙门氏菌和大肠杆菌的抑菌效果次之、对无乳链球菌的抑菌效果最差，b浓缩液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌均无抑菌效果，而c浓缩液对大肠杆菌无抑菌效果但对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌有一定的抑菌效果。
62.表1发酵复方中药浓缩液体外抑菌效果
[0063][0064]
注：同列数字肩标之间有不同大写字母则表示差异极显著(p＜0.01)，有不同小写字母则表示差异显著(p＜0.05)，有相同字母或无字母则表示差异不显著(p＞0.05)。下表同。
[0065]
6.2发酵复方中药浓缩液的主要活性成分
[0066]
发酵复方中药饲料添加剂a浓缩液中的主要活性物质见表2。
[0067]
表2发酵复方中药浓缩液的主要活性成分
[0068]
[0069][0070]
6.3母猪补饲发酵复方中药添加剂对母猪羊水和产程的影响
[0071]
表3结果表明，试验组的平均羊水量显著多于对照组(p＜0.05)，同时试验组小猪的平均产出时间也少于对照组(p＞0.05)，这说明给怀孕母猪补饲发酵复方中药饲料添加剂有助于增加羊水量和缩短小猪的产出时间。虽然试验组每头小猪的平均产出时间比对照组只少1.65分钟，但这1.65分钟对在产道内的小猪影响有时是非常大的，多呆1.6分钟可能就会导致小猪发生缺氧或窒息而死亡。
[0072]
表3补饲发酵复方中药饲料添加剂对羊水量和产程的影响
[0073][0074]
6.4母猪补饲发酵复方中药添加剂对母猪繁殖性能的影响
[0075]
表4数据显示，试验组的平均窝产活仔猪数、断奶仔猪数和哺乳仔猪成活率分别高于对照组(p＞0.05)，这说明母猪补饲发酵复方中药饲料添加剂有助于提高窝产活仔猪数和哺乳仔猪成活率，从而提高了母猪的窝断奶仔猪数。
[0076]
表4补饲发酵复方中药添加剂对母猪繁殖性能的影响
[0077][0078]
6.5母猪补饲发酵复方中药添加剂对哺乳仔猪生产性能的影响
[0079]
从表5可知，试验组仔猪的平均初生体重、平均断奶体重、平均日增重和平均腹泻率分别低于对照组，但试验组和对照组之间均无显著性差异(p＞0.05)。试验组哺乳仔猪腹泻率低于对照组，说明试验组母猪的奶水品质比对照组好。
[0080]
表5补饲发酵复方中药添加剂对哺乳仔猪生产性能的影响
[0081][0082]
7阐明某些中药成分增加羊水的机理
[0083]
减轻母猪体内的炎症、保护脏器与血管、增加血流量和膜的通透性是提高胎儿尿液和肺泡液生成量的重要途径。表2数据表明，发酵复方中药饲料添加剂中含有很多具有抗氧化、抗菌消炎、保护心血管、加快血液流通和增加血管通透性的药效成分。鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯和山柰素具有抗氧化和降低损伤的功效，这些物质能使心脏、肺、肾和血管的形态结构保持完整，最大限度地发挥其生理功能；7-羟基香豆素具有利尿作用；7,8-二羟基黄酮和鞣花酸则具有扩张血管、增加血管通透性和血流量的作用；山柰酚、咖啡酸和红景天苷对胎肺动脉血管的正常发育具有保护作用，从而保证肺部的正常供血；原儿茶醛具有保护内脏器官、促进微循环和舒张血管的功能；染料木素具有保护肾小球的作用；山柰酚则能减轻肾炎和修复肾损伤。这些药效成分能让更多的血液流到肺泡和肾小球表面的毛细血管中，从而产生更多的肺泡液和尿液(见图3)。所以，在上述药效成分的协同作用下，使得试验组妊娠母猪羊膜腔内的平均羊水量显著高于对照组。羊水量的适度增加不但能降低羊水的粘稠度，还能使产道充分保持润滑状态，让小猪能在正常情况下快速地通过产道被排到体外，缩短了产仔间隔。
[0084]
8阐明某些中药成分抗菌消炎的作用
[0085]
已有研究表明，表2中的化合物具有不同程度地抗菌消炎作用。其中，鞣花酸对金黄色葡萄球菌、沙门氏杆菌、大肠杆菌、链球菌和蜡样芽孢杆菌有较强的抑制作用；嘌呤和氨基酸在细菌体内可以通过形成核糖开关的形式来抑制细菌的生长繁殖，从而达到抑菌杀菌效果；樟脑能抑制沙门氏菌的生长并排出动物体内毒素；焦性没食子酸和去甲蟛蜞菊内酯则具有抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的功能；山柰素、没食子酸和槲皮素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、铜绿假单胞菌和链球菌具有较好的抑菌效果；没食子酸乙酯能抑制金黄色葡萄球菌的生长；圣草酚和肌醇对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌具有较好的抑制作用；二羟基黄酮、积雪草酸和异鼠李素对志贺氏痢疾杆菌、沙门氏菌、链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等微生物均具有很好的抑制或杀灭效果。这些植物源活性成分主要通过抑制胞外聚合物(eps)产生、降低细菌的黏附、破坏细菌细胞膜的完整性和通透性、抑制细菌体内酶的活性、改变细胞代谢、抑制核酸合成和增强动物机体免疫力等途径起到抑菌和杀菌作用。
[0086]
9中药原料中的药效成分
[0087]
本发明实施例1所用中药原料的主要药效成分见表6。
[0088]
表6药效成分
[0089][0090]
以上所描述的实施例仅为本发明优选实施例，并不用于限制本发明。对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种变化和更改，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。