1.本发明涉及雷公藤内酯甲(wilforlide a)吸入制剂在制备肺部炎症治疗药物中的用途。
背景技术：
2.肺部感染是多种呼吸道传染病的主要发病因素，并且肺部炎症可能引起严重的身体损伤。多次大规模的流行疾病中，肺部炎症引发众多死亡病例。在多国针对于呼吸道的急性感染临床急救与治疗中，迅速降低炎症反应，能有效挽救患者，留给患者足够的时间建立免疫，给予医生足够的治疗时间。
3.目前此类药物的一线用药仍然是激素类药物。此类药物一般采用口服或注射的方式进行全身给药，并且大剂量冲击疗法会带来严重的不良反应，例如有高风险的股骨头坏死的病例时有发生。在轻中度的患者中，国外也会为了抑制肺部的炎症反应从而选择采用具有免疫抑制作用的药物予以口服，但同样会进行全身大范围分布。并且此类药物的主要适应症不是针对于肺部感染的，因此用于肺部感染治疗产生毒性风险的概率远大于此类药物用于其原始的适应症。
4.具备能肺部局部给药、使用方便、不会全身分布、有效发挥抗炎作用，但是不会影响全身免疫反应的药物在对于肺部急性感染急救或治疗时能有效的克服以上药物或治疗方式的缺陷，具有很强的实用意义。
5.雷公藤作为一种常用的中药，已经有上市药物应用于临床，主要用于免疫类疾病，具有系统免疫抑制作用。有文献研究提及雷公藤内酯甲(wilforlide a，wa)是雷公藤制剂的主要有效成分之一，但同样有研究发现wa本身生物利用度极低，如果不用优化的制剂方式，wa很难进行全身吸收。正是具有此特点，wa如果进行局部给药，则极有可能仅在局部发挥作用，从而避免了全身毒性作用。
6.吸入性制剂是良好的肺部给药的剂型，经过一定的处方筛选后，工艺简单，使用方便，能迅速的到达肺部病灶，是理想肺部炎症治疗药物的载体之一。吸入制剂中，采用液滴形式的喷雾剂或固体微粒形式的粉雾剂是常用吸入制剂剂型。
7.目前，罕见将wa制成粉雾剂形成产品并用于治疗肺部炎症的报道。
技术实现要素：
8.本发明的目的在于，提供雷公藤内酯甲(缩写wa)吸入制剂在制备肺部炎症治疗药物中的用途，所述的肺部炎症尤其指肺部感染引起的炎症。
9.为了实现上述发明目的，本发明提供了一种有效成分为雷公藤内酯甲的粉雾剂，该粉雾剂包含有雷公藤内酯甲与相应的粉雾剂必须的辅料，采用粉雾剂吸入的方式进行给药，微粉粒径在1-4μm，日用量(以有效成分wa计)为1mg～200mg/60kg/人。更优选的，本发明中的粉雾剂中的日用量(以有效成分wa计)为10mg～80mg/60kg/人。
10.具体的，雷公藤内酯甲粉雾剂包含活性成分雷公藤内酯甲及药用辅料，其组分重
量比是：雷公藤内酯甲1份、药用辅料2份，药用辅料优选甘氨酸3份、乳糖1份。
11.本发明的积极效果是，由于wa口服吸收差，生物利用度低，因此产生全身不良反应的风险相对较低。同时wa具有抗炎作用，因此，本发明利用wa的以上两个特性，制作成为肺部吸入的局部给药制剂，在肺部靶向的发挥了抗炎作用，但同时不会全身分布从而避免导致全身不良反应。可应用于急性肺部感染疾病的治疗，给医生提供有效的治疗时间窗口，与激素类药物相比同时具有很高的安全性。
12.以下将结合实施例，对本发明进行较为详细的说明。下述实施例不构成对本发明的任何限制。
具体实施方式
13.以下各个实施例中使用的材料、试剂如下：
14.甘氨酸(食品级)，批号20110611，购自郑州福润德生物工程有限公司；乳糖，批号8511070614，购自美国isp；甲基强的松龙，批号nf0566，购自辉瑞制药有限公司；脂多糖，批号086m4159v，购自sigma；无水乙醇，批号9811370，购自上海振兴化工一厂；雷公藤饮片，批号20090701(产地浙江)，购自广东省药材公司中药饮片厂。
15.实施例1含有雷公藤内酯甲(wilforlide a)粉雾剂的制备
16.参考文献[阙慧卿,耿莹莹,林绥,李援朝.雷公藤化学成分的研究[j].中草药,2005(11):1624-1625.]进行雷公藤内酯甲的提取，并提取后进行微粉化为雷公藤内酯甲(wilforlidea，wa)原料。
[0017]
参考[冯立.氨曲南肺吸入粉雾剂的研制[d].重庆医科大学,2007.]文中的方法，并根据本实验中药物的特性等进行适当修改，称取雷公藤内酯甲(wilforlidea，wa)原料药2g，甘氨酸3g，乳糖1g，将wa溶于100ml无水乙醇中，磁力搅拌30min，待wa完全溶解后，分别将甘氨酸和乳糖在30ml水中磁力搅拌下溶解后，缓慢加入到wa的乙醇溶液中，溶液变澄清后用0.2μm微孔滤膜过滤后，喷雾干燥。在喷雾干燥后的微粉中加入60-70μm的喷雾干燥乳糖flowlaco作载体，改善粉雾剂的流动性(添加量为喷雾干燥后微粉重量的20％)。将载体与微粉用等量递加法混合，并过120目金属筛按一定量分装于3#明胶胶囊即得。
[0018]
喷雾干燥参考[冯立.氨曲南肺吸入粉雾剂的研制[d].重庆医科大学,2007.]参数设置如下：喷雾干燥工艺各参数范围：真空度：90％-100％；进口温度：120℃-130℃；出口温度：100℃-120℃；溶液喷雾速度4％-12％；喷嘴压缩空气流量：500-700l/h；喷嘴孔径0.5mm。
[0019]
吸入粉雾剂粒径测定：用malvern2000，激光粒度分析仪测定微粉粒径结果，可知，喷雾干燥后的微粉，平均粒径在4μm，粒径分布在1-4μm，符合吸入粉雾剂的粒径大小要求。
[0020]
实施例2不同剂量wa粉雾剂对肺部炎症的影响
[0021]
参考[张亚平等,不同途径吸入脂多糖致大鼠急性肺炎模型的优选[j].中国实验方剂学杂志,2018,24(07):82-88.]2.2.1部分，通过雾化吸入lps的制作肺炎动物模型的方法，并进行适当调整。连续造模3天后，继续造模4天，同时在后4天造模时同时利用大鼠呼吸道定量给药器给予实施例1中的粉雾剂(剂量设置为为0mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg；剂量以有效成分wa计)；同时设置非造模正常动物组作为阴性对照；采用口服给予激素甲基强的松龙10mg/kg作为阳性对照(激素组)。各个动物组的炎症的程度与指标检测
方法参考以上文献以及[马莉等,疏风解毒胶囊对大鼠肺炎模型的抗炎机制研究[j].中草药,2018,49(19):4591-4595.]的检测方法进行。
[0022]
动物具体分组如下
[0023][0024]
实验结果表明，wa通过粉雾剂吸入不会影响全身的免疫细胞的数量，不会产生全身系统性的免疫抑制作用。
[0025]
表1外周血wbc计数及分类(x
±
s,n＝10)
[0026][0027][0028]
通过肺引起肺部炎症后，未经治疗的动物呼吸功能明显下降，但经过激素治疗或wa粉雾剂治疗后，肺功能显著得到改善，并且wa粉雾剂的改善作用不劣于激素组。
[0029]
表2肺功能检测(x
±
s,n＝10)
[0030][0031]
通过以上数据可以看出，在大鼠肺部炎症模型中，采用wa剂量为1.0mg/kg进行肺部吸入给药，即可有效的改善炎症引起的肺功能降低，同时不会影响全身的免疫反应。因
此，对大鼠而言，有效剂量范围不高于1.0mg/kg～8.0mg/kg，相当于人用剂量为10.0mg/kg～80.0mg/60kg/天。
[0032]
实施例3wa体内吸收动力学
[0033]
参考[wang z,yeung s,chen s,et al.bioavailability of wilforlide a in mice and its concentration determination using an hplc-apci-ms/ms method[j].j chromatogr b analyt technol biomed life sci,2018,1090:65-72.]的测量方法，对wa通过粉雾剂给药的系统生物利用度测量，以考察wa采用粉雾剂给药后，全身分布的程度与风险。
[0034]
分别将sd大鼠分组(每组4只)给予wa粉雾剂(以wa含量计算)吸入给药1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg；静脉注射给药1mg/kg。按照以上参考文献方法时间点进行取血，测量，计算动力学参数并以静脉注射的auc0-∞为100％计算其他各组生物利用度。
[0035]
表3不同剂量的wa粉雾剂给药后的部分药动学参数测量
[0036][0037]
通过药动学结果可以看出，wa通过粉雾剂吸入给药后，吸收进入全身循环的药物量很低，在血液中的浓度引起全身毒性反映的风险较小。
[0038]
实施例4长期给药安全性(2周)
[0039]
参考我国nmpa发布的[药物重复给药毒性研究技术指导原则]，并参考实施例2中的给药方法，并进行适当调整，初步评价上述粉雾剂的长期给药安全性。将正常sd大鼠不造模，动物分为5组：
[0040]
组1正常动物组；组2-组5分别给予含有wa粉雾剂剂量为4mg/kg、8mg/kg、20mg/kg、40mg/kg.
[0041]
连续给药4周，给药4周后停止给药，并恢复2周。
[0042]
进行动物状态观察，并进行相关检测，并参考文献[蒋玮,等.激素性股骨头坏死动物模型的建立及评价[j].中国实验动物学报,2019,27(06):799-804]中的方法，通过病理检测考察各个给药组是否对于股骨头具有不良影响。肺功能检测参考实施例2中的试验方法进行。
[0043]
经过4周给药后，按照指导原则进行相关指标检测，并评价肺功能与股骨头病理改变。结果显示，经过重复给药后，wa粉雾剂对肝功能、肾功能、血液学指标等均无明显影响。
[0044]
但在40mg/kg剂量给药时，给药四周部分动物体重下降，并且该组动物活力略微变差，肺功能也受到一定程度的影响，但均能在恢复期2周内恢复正常。但所有给药组的股骨头的病理检测均未表现出异常。
[0045]
表4不同剂量的wa粉雾剂给药后的动物体重与动物状态汇总
[0046][0047]
实验结果显示，在20mg/kg重复给药的剂量下，wa粉雾剂具有较高的安全性。并且，虽然40mg/kg剂量给药时，部分动物出现异常，但不良反应具有良好的可恢复性。
[0048]
表5不同剂量的wa粉雾剂给药后的动物肺功能与股骨头病理检测汇总
[0049]