1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种甲基莲心碱、辣椒素、6-姜酚制备的抑制良性前列腺增生药物及应用。


背景技术：

2.良性前列腺增生是常见男性泌尿道疾病，特点为前列腺腺体与平滑肌产生增生。导致病患尿道压迫，产生尿潴留及尿道感染症状。好发于50岁以上中年男性，随着老年人口增加，其发病率逐年上升。引起良性前列腺增生与雄激素失衡有关，雄性素通过雄性素受体与干扰信号通路引起前列腺增生。
3.临床上采取手术与药物治疗前列腺增生引起的症状。药物治疗的目的是特异性松弛前列腺平滑肌和减少前列腺体积。α受体阻滞剂通过阻断交感神经兴奋引起前列腺平滑肌收缩，降低排尿障碍，但易引起低血压副作用。5α还原酶抑制剂阻断雄性素转换成二氢雄性素减少前列腺体积增生。
4.现代药理学研究中，用于前列腺方面的中药组方药物主要是利用药材的活性成分。中药组合方通过干扰信号通路，抑制前列腺细胞增生。然而该方面的研究较少，开发的治疗药物也较少。因此，本发明为了降低现有治疗良性前列腺增生存在口服药物副作用大，并减少良性前列腺增生所引起排尿障碍，从而提供一种新的治疗方案。尤其是针对慢性前列腺增生患者存在的雄性激素水平失衡等症状的改善，从而提高患者的生活质量。


技术实现要素：

5.为了解决上述技术问题，本发明提供了一种甲基莲心碱、辣椒素、6-姜酚制备的抑制良性前列腺增生药物及应用。
6.本发明的目的是提供一种辣椒素、甲基莲心碱、6-姜酚制备的抑制良性前列腺增生药物，所述抑制良性前列腺增生药物包含辣椒素、甲基莲心碱、6-姜酚中的一种或多种的组合。
7.优选的，上述药物中，当所述良性前列腺增生治疗药物为辣椒碱和甲基莲心碱的组合且作用于细胞时，辣椒碱和甲基莲心碱的摩尔比为1:1～10；优选的，辣椒碱和甲基莲心碱的摩尔比例为1:10；
8.当所述良性前列腺增生治疗药物为辣椒碱和甲基莲心碱的组合且作用于动物时，辣椒碱和甲基莲心碱的质量比例为5:1。
9.当所述良性前列腺增生治疗药物为6-姜酚和甲基莲心碱的组合且作用于细胞时，6-姜酚和甲基莲心碱的摩尔比为1:1～10；优选的，6-姜酚和甲基莲心碱的摩尔比例为1:10；
10.当所述良性前列腺增生治疗药物为6-姜酚和甲基莲心碱的组合且作用于动物时，6-姜酚和甲基莲心碱的质量比例为5:1。
11.本发明还提供了一种辣椒素、甲基莲心碱、6-姜酚在制备所述的抑制良性前列腺增生药物中的用途。
12.优选的，上述用途中，所述抑制良性前列腺增生药物用于制备人类前列上皮细胞与人正常前列腺基质细胞的抑制剂。
13.优选的，上述用途中，将所述抑制良性前列腺增生药物制成药剂学上允许的药物剂型，所述药物剂型为片剂、颗粒、粉剂、口服液或者胶囊。
14.优选的，上述用途中，抑制良性前列腺增生药物中所述辣椒素、甲基莲心碱、6-姜酚的浓度均为10～100μm。
15.优选的，上述用途中，当辣椒素、甲基莲心碱组合时，辣椒素、甲基莲心碱的浓度分别为10μm、100μm，或者分别为10μm、10μm。
16.优选的，上述用途中，当6-姜酚、甲基莲心碱组合时，6-姜酚、甲基莲心碱的浓度分别为10μm、100μm，或者分别为10μm、10μm。
17.优选的，上述用途中，所述抑制良性前列腺增生药物用于制备男性人或者雄性哺乳动物良性前列腺抗增生药物。
18.优选的，上述用途中，所述雄性哺乳动物为小鼠，且辣椒素、甲基莲心碱、6-姜酚在小鼠中的使用量分别为10mg/kg体重、2mg/kg体重、10mg/kg体重。
19.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
20.本发明通过抑制前列腺增生、抗炎、改善局部微循环来治疗前列腺疾病。所用的辣椒素为辣椒的活性成分之一，具有止痛、止痒、抗氧化、抗癌、抗增生、抗炎、抗脂质过氧化等药理作用；本发明的研究表明，辣椒素浓度100μm在48时达46％抑制前列腺上皮细胞生长，辣椒素亦对多种癌细胞呈现抗增生作用。
21.莲子心为睡莲科植物莲的成熟种子的绿色胚芽，其提取物包含莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱、荷叶碱、前荷叶碱、金丝桃甙、芸香甙等。甲基莲心碱为莲科植物莲成熟种子的绿莲子心中提取出的活性成分之一，具有抗心律失常、降血压、抗血小板聚集、抗氧化、抗发炎、抗增生药理作用；本发明的研究表明甲基莲心碱可作为5α-还原酶抑制，进而抗前列腺增生/肥大。
22.生姜提取物为姜科姜属植物姜的新鲜根状茎提取物,含有姜醇、姜烯、没药烯、姜辣素等。6-姜酚为生姜提取出的活性成分之一，具有抗氧化、降血脂、消炎、抗增生药理作用。
23.本发明中，甲基莲心碱、辣椒素、6-姜酚作为5α-还原酶抑制剂，作为抑制细胞增生的药物，三者可作为药物、保健食品或食品添加剂，用于前列腺增生/肥大症状的缓解。
附图说明
24.图1为本发明人类前列腺上皮细胞接受不同浓度化合物作用24h后的5α-还原酶、psa蛋白表现。
具体实施方式
25.为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。
26.实验例1抗前列腺细胞增殖
27.本实验例的目的在于通过细胞实验验证辣椒素10μm、100μm、甲基莲心碱10μm、100μm、6-姜酚10μm、100μm具有抗前列腺细胞增生作用。所有药物以二甲基亚砜溶液溶解后加入培养基，二甲基亚砜溶液浓度低于0.1％，v/v。将人类前列腺上皮细胞株lncap与人正常前列腺基质细胞wpmy-1以适当的细胞培养液培养于96孔板，于37℃5％co2条件下孵育48h左右，待细胞在培养盘贴附生长完成后进行药物添加。lncap细胞在rpmi-1640培养基中孵育，wpmy-1细胞在dmem培养基中孵育。
28.药物添加实验分成9组：(1)对照组，仅含培养基和相应的细胞，不添加任何药物；(2)辣椒素，以培养基体积计，分别设置10μm、100μm两个终浓度药物实验；(3)甲基莲心碱组，以培养基体积计，分别设置10μm、100μm两个终浓度药物实验；(4)6-姜酚组，以培养基体积计，分别设置10μm、100μm两个终浓度药物实验；(5)高浓度甲基莲心碱联合辣椒素组，以培养基体积计，二者终浓度分别设置为100μm、10μm；(6)低浓度甲基莲心碱联合辣椒素组，以培养基体积计，二者终浓度分别设置为10μm、10μm；(7)高浓度甲基莲心碱联合6-姜酚组，以培养基体积计，二者终浓度分别设置为100μm、10μm；(8)低浓度甲基莲心碱联合6-姜酚组，以培养基体积计，二者终浓度分别设置为10μm、10μm；(9)阳性对照组非那雄胺(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，以培养基体积计，分别设置10μm、100μm两个实验。需要说明的是，上述药物添加时先配置成相当于终浓度1000倍以上浓度的原液，然后再按照终浓度计算原液添加量，并将原液加入到培养基中，避免产生溶剂毒杀细胞的现象。
29.孵育48h后，以pbs(ph7.4，磷酸二氢钾2mm、磷酸氢二钠8mm、氯化钠136mm、氯化钾2.6mm)洗涤，接着换成新的培养基，每个孔加入10μlmtt(5mg/ml)，在37℃5％co2细胞培养箱中培养4h，孵育后接着移出孔中的液体，加入100μl二甲基亚砜溶解紫色结晶。各孔液体混匀后将样品取出置于室温20min，测570nm吸光值，计算细胞活性。
30.细胞活性＝(实验组吸光值-对照组吸光值)/(对照组吸光值)
×
100％。
31.细胞活性计算结果见表1，表1中实验数据以均值
±
标准偏差表示,实验结果进行统计分析，以p《0.05为差异具有统计学上意义。表1的结果说明辣椒素、甲基莲心碱、6-姜酚及它们的组合物均对前列腺上皮细胞腺基质细胞有显着抗增生作用。
32.表1细胞活性测定值
[0033][0034]
注：*表示与对照组比较p《0.05。
[0035]
实验例2抗雄性素诱导前列腺细胞增殖
[0036]
本实验例的目的在于通过细胞实验验证辣椒素10μm、100μm、甲基莲心碱10μm、100μm、6-姜酚10μm、100μm具有抗前列腺细胞增生作用。所有药物以二甲基亚砜溶液溶解后加入培养基，二甲基亚砜溶液浓度低于0.1％，v/v。将人类前列上皮细胞株lncap与人正常前列腺基质细胞wpmy-1以适当的细胞培养液培养于96孔板，于37℃5％co2条件下孵育48h左右，待细胞在培养盘贴附生长完成后进行药物添加。lncap细胞在rpmi-1640培养基中孵育，wpmy-1细胞在dmem培养基中孵育。需要说明的是，上述药物添加时先配置成相当于终浓度1000倍以上浓度的原液，然后再按照终浓度计算原液添加量，并将原液加入到培养基中，避免产生溶剂毒杀细胞的现象。
[0037]
药物添加实验分成14组：(1)对照组，仅含培养基和相应的细胞，不添加任何药物；(2)睾固酮组，以培养基体积计，药物终浓度设置为1μm；(3)睾固酮联合低浓度辣椒素组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置为1μm、10μm；(4)睾固酮联合高浓度辣椒素组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置1μm、100μm；(5)睾固酮联合低浓度甲基莲心碱组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置为1μm、10μm；(6)睾固酮联合高浓度甲基莲心碱组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置为1μm、100μm；(7)睾固酮联合低浓度6-姜酚组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置为1μm、10μm；(8)睾固酮联合高浓度6-姜酚组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置为1μm、100μm；(9)睾固酮联合高浓度甲基莲心碱及辣椒素组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置为1μm、100μm、10μm；(10)睾固酮联合低浓度甲基莲心碱联合辣椒素组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置为1μm、10μm、10μm；(11)睾固酮联合高浓度甲基莲心碱及6-姜酚组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置1μm、100μm、10μm；(12)睾固酮联合低浓度甲基莲心碱及6-姜酚组，以培养基体积计，药物终浓度分别设置为1μm、10μm、10μm；(13)阳性对照组：睾固酮联合低浓度非那雄胺(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)组，以培养基体积计，药物分别设置为1μm、10μm；(14)阳性对照组：睾固酮联合高浓度非那雄胺(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)组，以培养基体积计，药物分别设置为1μm、100
μm。需要说明的是，上述药物添加时先配置成相当于终浓度1000倍以上浓度的原液，然后再加入到培养基中，避免产生溶剂毒杀细胞的现象。
[0038]
孵育48h后，以pbs(ph7.4，磷酸二氢钾2mm、磷酸氢二钠8mm、氯化钠136mm、氯化钾2.6mm)洗涤，接着换成新的培养基，每个孔加入10μlmtt(5mg/ml)，在37℃5％co2细胞培养箱中培养4h，孵育后接着移出孔中的液体，加入100μl二甲基亚砜溶解紫色结晶。各孔液体混匀后将样品取出置于室温20min，测570nm吸光值，计算细胞活性。
[0039]
细胞活性＝(实验组吸光值-对照组吸光值)/(对照组吸光值)
×
100％。
[0040]
细胞活性计算结果见表2，表2中实验数据以均值
±
标准偏差表示,实验结果用进行统计分析，以p《0.05为差异具有统计学上意义。表2的结果说明辣椒素、甲基莲心碱、6-姜酚及它们的组合物均对前列腺上皮细胞腺基质细胞有显着抗增生作用。
[0041]
表2细胞活性测定值
[0042][0043]
注：*表示与对照组比较p《0.05。#表示与睾固酮组比较p《0.05。
[0044]
实验例3抗雄性素诱导前列腺上皮细胞5α-还原酶、psa蛋白表现
[0045]
在良性前列腺增生过程中，5α-还原酶将睾酮转换成活性更强的二氢睾酮，若有效降低5α-还原酶表达可以抑制前列腺细胞增生。按照实施例1的实验方法将辣椒素(10μm、100μm)、甲基莲心碱(10μm、100μm)、6-姜酚(10μm、100μm)、甲基莲心碱(100μm)分别联合6-姜酚(100μm)与辣椒素(100μm)作用于lncap细胞，24h后提取细胞蛋白质，检测细胞内5α-还原酶、psa蛋白蛋表达量，评估化合物透过调控两蛋白表达抑制雄性素诱导前列腺细胞增生效果。
[0046]
图1为前列腺上皮细胞接受不同浓度化合物作用24h后的5α-还原酶、psa蛋白表现的蛋白水平表达图。β-actin是内参。图1结果显示甲基莲心碱(10、100μm)、6-姜酚(10、100μm)、辣椒素(10、100μm)具有抑制前列腺5α-还原酶作用，借此降低psa表达，展现抗增生效
果。
[0047]
实施例4良性前列腺增生之动物实验
[0048]
动物和试剂准备：本实验例购买42只健康雄性小鼠，其周龄皆约为6-7个周，体重介于20-30g之间，购买后隔离饲养1周。饲养雄性小鼠之环境设定为23
±
1℃且为12h/12h日夜循环，这些雄性小鼠皆能自行饮食及喝水。
[0049]
另一方面，准备浓度10mg/kg的非那雄胺试剂(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，非那雄胺试剂配制时，溶剂采用玉米油物。玉米油为药用辅料采购自西安悦来医药科技有限公司。
[0050]
分组：小鼠随机分为7组，每组6只，(1)载体组，以0.2ml玉米油作为添加物；(2)模型组，即下述方法构建得到的模型小鼠；(3)辣椒素组，添加药物为10mg/kg辣椒素；(4)甲基莲心碱组，添加药物为2mg/kg甲基莲心碱；(5)6-姜酚组，添加药物为10mg/kg 6-姜酚；(6)复合组，添加药物为辣椒素10mg/kg+甲基莲心碱2mg/kg；或者为甲基莲心碱2mg/kg+6-姜酚10mg/kg的组合；(7)阳性对照组，添加药物为非那雄胺10mg/kg。
[0051]
注，上述分组中的“mg/kg”是指每千克体重小鼠的添加量。
[0052]
试验性实验：小鼠的肌肉内注射浓度7.5mg/kg的丙酸睾丸素溶液(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，每天注射一次，每次150μl丙酸睾丸素溶液，使用喂食器口服给药持续两周，使其患有良性前列腺增生，得到模型小鼠。处死小鼠后，从心脏取血液样本。在分析样本前，将血液凝固后使用3000g离心10min，以得到血清，血清在-20℃下保存。使用前列腺特异性抗原试剂盒(晶美elsia试剂盒)检测血清中的前列腺特异性抗原含量。小鼠取下前列腺，且将邻近的血管及结缔组织清除。经过假手术的控制组也是经由上述相同的方式取下其前列腺。前列腺指数的计算方式为前列腺的总重占整体体重的比重，为：前列腺指数＝(前列腺总重/整体体重)
×
100％，结果参见表3-4。通过表3及表4数据得知，丙酸睾丸素促进前列腺湿重、前列腺指数及psa显着增加，此证明前列腺增生。甲基莲心碱(2mg/kg)、6-姜酚(10mg/kg)、辣椒素(10mg/kg)单药或两药联合使用有效减少促进前列腺湿重、前列腺指数及psa，结果表明甲基莲心碱、6-姜酚、辣椒素具备抗前列腺增生作用。
[0053]
表3甲基莲心碱、6-姜酚、辣椒素单药及联合用药对小鼠血清psa影响
[0054]
组别psa(ng/ml)载体组1978.10
±
293.705#模型组：丙酸睾丸素7.5mg/kg2642.42
±
107.14*甲基莲心碱2mg/kg2332.88
±
38.01*#辣椒素10mg/kg2412.22
±
119.77*#6-姜酚10mg/kg2318.27
±
268.58*#甲基莲心碱2mg/kg+6-姜酚10mg/kg2059
±
123.66#甲基莲心碱2mg/kg+辣椒10mg/kg1983.5
±
53.51#非那雄胺10mg/kg2342.99
±
219.98*#
[0055]
注：*表示与载体组比较p《0.05，#表示与模型组比较p《0.05。
[0056]
表4甲基莲心碱、6-姜酚、辣椒素单药及联合用药对小鼠前列腺湿重影响
[0057][0058][0059]
注：*表示与载体组比较p《0.05，#表示与丙酸睾丸素组比较p《0.05。
[0060]
需要说明的是，本发明中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，由于采用的步骤方法与实施例相同，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
[0061]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。