专利名称：蛋白酪氨酸磷酸酯酶1b抑制剂对苯醌类化合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及对苯醌类化合物、分离方法及其用途。该类化合物可作为PTP1B抑制剂和胰岛素增敏剂，可用于治疗各种糖尿病、肥胖症及其由此引起的并发症。
背景技术：
糖尿病(diabetes mellitus)是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合症，因胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶组织细胞对胰岛素敏感性降低，引起糖、蛋白、脂肪、水、和电解质等一系列代谢紊乱。临床以高血糖为主要共同标志，久病可引起多个系统损害，病情严重和应激时可发生急性代谢紊乱如酮症酸中毒等。在糖尿病人群中发生冠心病、缺铁性或出血性脑血管病、失明、肢端坏疽等严重并发症均明显高于非糖尿病人群。因此，糖尿病及其并发症已成为严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。
目前一般将糖尿病分为两类，I型糖尿病(胰岛素依赖型糖尿病，IDDM)与II型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病，NIDDM)。糖尿病中90％以上是II型糖尿病。WHO预计，由于人口老龄化、肥胖、不健康的饮食以及缺乏运动的生活方式，到2025年，糖尿病患者的数目将由1995年的1.35亿上升为3亿。
I型糖尿病病人由于第6对染色体短臂上的HLA-D基因决定了遗传易感性，对环境因素，特别是病毒感染或化学毒性物质刺激的反应异常，直接或间接通过自身免疫反应，引起胰岛β细胞破坏，以致胰岛素不足。临床特点是起病急，多食、多尿、多饮、体重减轻等症状较明显，有发生酮症酸中毒的倾向，必须依赖胰岛素治疗维持生命。
II型糖尿病也有很强的遗传性和环境因素，并呈显著的异质性，发病机制多样而复杂，各病人间存在较大差异。总的来说可概括为胰岛素分泌的相对不足和胰岛素抵抗。对II型糖尿病人，尤其是肥胖性糖尿病患者的一系列研究证实，胰岛素抵抗是II型糖尿病发生、发展过程中的关键因素。在研究脂肪细胞和肌肉细胞内胰岛素信号传导途径的基础上，设计开发胰岛素增敏剂，以改善胰岛素抵抗状态，是目前II型糖尿病新药研究的重点，也是其主要方向之一。
II型糖尿病的特征是胰岛素敏感组织如骨骼肌、肝、脂肪组织对胰岛素作用的抵抗。虽然其具体机制尚不清楚，但胰岛素信号在其传导通路中的减弱甚至阻断必定是直接因素。胰岛素通过与其受体胞外α亚单位结合激活受体胞内β亚单位内在的酪氨酸激酶活性，导致调节结构域中关键的酪氨酸残基自身磷酸化，从而完全激活胰岛素受体酪氨酸激酶活性，胰岛素受体酪氨酸激酶再通过磷酸化其底物将信号传递下去。随着对细胞内胰岛素作用通路中可逆性酪氨酸磷酸化认识的加深，蛋白酪氨酸磷酸酯酶(PTPases)在平衡该通路中相关蛋白酪氨酸磷酸化水平中的作用越来越受到重视。PTPases可能作用于该通路中多个环节，例如将自身磷酸化活化的胰岛素受体(IR)去磷酸化，从而降低受体激酶活性；或将诸如胰岛素受体底物1(IRS-1)、胰岛素受体底物2(IRS-2)、Shc等胰岛素受体的底物中蛋白酪氨酸残基去磷酸化，从而负调控胰岛素作用受体后通路。特定PTPases和胰岛素通路中酪氨酸激酶间酶活性的不平衡可能是引起II型糖尿病胰岛素抵抗的原因。因此，通过寻找选择性作用于该通路中PTPases的抑制剂抑制其活性，加强和延长胰岛素信号，成为越来越受重视的治疗II型糖尿病的新途径。
PTPases包括一大家族跨膜(受体型)和胞内(非受体型)酶，参与调控一系列重要生命过程。虽然多种PTPases在胰岛素敏感的组织中有表达，如跨膜的CD45和LAR-PTPase等；胞内的SHPTP-1、SHPTP-2、PTP1B、PTP1C等，但只有几种PTPases可能在胰岛素通路中受体或受体后环节影响正常胰岛素作用。目前的研究主要集中在LAR-PTPase、SHPTP-2和PTP1B。
PTP1B是最早被纯化和确定生物学特性的PTPase，全长大约50KD。早期研究证明能在体外有效地将胰岛素受体去磷酸化；将来源于人胎盘的PTP1B显微注射入非洲蟾蜍卵母细胞中，将减少胰岛素诱导的卵母细胞成熟及S6肽磷酸化水平。随后发现PTP1B在所有胰岛素敏感组织中高表达；用渗透休克的方法给予PTP1B抗体后，小鼠KRC-7肝细胞经胰岛素刺激时DNA合成和PI3激酶活性水平显著升高，IR自身磷酸化水平、IR激酶活性水平和IRS-1酪氨酸磷酸化水平也显著升高。最近有研究表明，PTP1B直接与激活状态的IR相互作用；在体外实验中也对IRS-1显示最高的选择性活性；大鼠成纤维细胞中PTP1B的高表达能明显降低配体诱导的IR磷酸化水平；用腺病毒介导基因转染的方法，在胰岛素靶向组织骨骼肌和肝组织的模型细胞L6肌细胞和Fao细胞中高表达PTP1B，明显抑制胰岛素诱导的IR和IRS-1的酪氨酸磷酸化，并从而显著抑制IRS-1和PI3激酶P85亚单位复合物的形成以及Akt、MAPK的磷酸化水平，而且胰岛素诱导的糖原合成也被抑制[Egawa K.et al.J.Biol.Chem.276(13)，10207-10211.]。用同样的方法在另一胰岛素靶向组织脂肪组织的模型细胞3T3-L1细胞中高表达PTP1B，同样明显抑制胰岛素诱导的IR、IRS-1和PI3激酶的酪氨酸磷酸化，P42和P44 MAPK磷酸化水平也明显降低，而Akt磷酸化水平和活性不受影响[Venable C.L.et al.J.Biol.Chem.275(24)，18318-18326.]。PTP1B的高表达对基本的、中等的及最大量胰岛素诱导的葡萄糖转运无影响，对转运的EC50胰岛素浓度无影响。这些研究证明PTP1B能够负调控胰岛素信号转导通路并主要作用于胰岛素受体。更为重要的实验证据来自PTP1B基因敲除小鼠。Elchebly等报道，运用同源重组的方法产生的PTP1B基因敲除的小鼠生长正常，有生殖力，对胰岛素敏感性显著增强，而且这一增强作用与肝脏和骨骼肌中胰岛素受体及胰岛素受体底物1磷酸化水平的增强相关[Elchebly M.，et al.Science，283，1544-1548.]。令人惊奇的是，PTP1B基因敲除的小鼠对食物诱导的体重增加和胰岛素抵抗也有抵抗作用。Klaman等运用大致相同的方法产生的PTP1B基因敲除的小鼠也得到同样的结果，而且发现PTP1B基因敲除的小鼠之所以对食物诱导的体重增加有抵抗作用，是由于脂肪细胞体积的减少，而脂肪细胞的数量并不改变。PTP1B基因敲除的小鼠基本代谢水平和总体能量消耗升高[Klaman L.D.，et al.Molecular and Cellular Biology，20(15)，5479-5489]。这些实验更加有力地证明了PTP1B在胰岛素敏感性、能量消耗和脂肪储存方面的重要作用，从而更加明确了它是治疗二型糖尿病和肥胖症的一个潜在药物作用靶点。
PTP1B选择性抑制剂的研究取得了一定的进展，但大多局限于一些肽类或类肽化合物，例如基于PTP1B去磷酸化的底物序列设计的抑制剂EEDE(F2PMP)M(Ki＝7.2nM)、Glu-F2PMP-F2PMP(IC50＝40nM)，虽然这些肽类抑制剂具有较强的抑制活性及较高的选择性，但它们是肽类磷酸化合物的事实使其很难成为药物候选化合物。最近，一系列非肽类非磷酸化合物类PTP1B抑制剂被报道，它们具有一定的选择性，更重要的是，其中一些化合物对降低ob/ob小鼠血浆中葡萄糖和胰岛素水平有显著作用。这是第一例药理学的直接证据，证明PTP1B抑制剂具有抗糖尿病活性。[Malamas，M.S.，et al.J.Med.Chem.，2000，43，1293-1310]这些无疑为我们寻找新的小分子非肽类有机化合物作为高效、高选择性PTP1B抑制剂提供了机遇。

发明内容
本发明目的是提供一类从天然植物紫金牛和小连翘提取分离纯化中获得的对-苯醌类化合物作为蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTP1B抑制剂和胰岛素增敏剂，可用于制备治疗各种糖尿病、肥胖症及其并发症药物中应用。
本发明的另一目的是提供该类化合物的制备方法。
一类结构如下的对-苯醌化合物及其它的平衡异构体、盐、水合物、前药。
其中R1为H、链烃或环链烃；R2为H、链烃或环链烃或羟基或烷氧基或酯基；
R3为H、链烃或环链烃或芳香取代基或取代吲哚基；R4为H、链烃或环链烃或羟基或烷氧基或酯基。
本发明通过下列步骤实施本发明通过对天然植物紫金牛进行分离提取，采用乙醇提取、浓缩，氯仿提取，氯彷提取物以90％甲醇和石油醚分配，得石油醚提取物，上聚酰胺柱，用不同比例乙醇洗脱，分别取不同浓度乙醇洗脱液，80％乙醇洗脱液流份经硅胶shephadex LH-20和TSK HW-40F柱层柱色谱分离得化合物A1、A3、A4；70％洗脱流份经硅胶shephadex LH-20柱分离得化合物A2。其中A3、A4为新化合物。
从天然植物小连翘草经石油醚提取，提取液浓缩，再用丙酮溶解、搅拌、过滤，滤液浓缩，再经硅谷胶和MIC柱层析分离纯化分得化合物A5、A6、A7，将其进行PTPIB抑制活性测试，证明化合物浓度为10ug/ml时对酶活性的百分抑制率、抑制活性高于50％时，按常规筛选得出IC50，阳性对照组为正钒酸钠的IC50为1μM，证明分离出的化合物具有明显的PTPIB抑制活性。经化学分析证明它们的结构如下 A1R1＝CH3，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3，R3＝H，R4＝OHA2R1＝H，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3，R3＝H，R4＝OHA3R1＝CH2CH3，R2＝(CH2)7CH＝CH(CH2)3CH3，R3＝H，R4＝OHA4R1＝CH2CH3，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3，R3＝H，R4＝OHA5R1＝H，R2＝OH，R3＝CH2CH＝C(CH3)2，R4＝CH2CH＝CCH3CH2CH2CH＝C(CH3)2A6R1＝COCH(CH3)CH2CH3，R2＝OH，R3＝CH2CH＝C(CH3)2，R4＝CH2CH＝CCH3CH2CH2CH＝C(CH3)2A7R1＝COCH(CH3)CH2CH，R2＝COCH(CH3)2，R3＝CH2CH＝C(CH3)2，R4＝CH2CH＝CCH3CH2CH2CH＝C(CH3)2PTP1B抑制活性测试测试原理利用分子生物学手段在大肠杆菌系统表达人源蛋白质酪氨酸磷酸酯酶1B(hPTP1B)催化结构域，经纯化后的hPTP1B重组蛋白能水解底物pNPP的磷脂键，得到的产物在410nm处有很强的光吸收，因此可以通过直接检测410nm处光吸收的变化以观察酶的活性变化以及化合物对酶活性的抑制情况。标准的测活体系如下10mM Tris.Cl，PH7.6，10mM PNPP，2％DMSO，100nM hPTP1B。
观察指标动态测定波长为410nm处的光吸收，时间为3分钟，其动力学曲线一级反应的斜率作为酶的活性指标。
实验结果的评判与解释筛选结果是当化合物的浓度为10ug/ml时对酶活性的百分抑制率，抑制活性高于50％时，按常规筛选得出IC50，阳性对照正钒酸钠的IC50为1uM。
化合物 IC50(uM) 化合物 IC50(uM)A14.56A54.42A219.15 A612.7A33.01A716.0A415.5具体实施方式
下面结合具体实施实例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
1H-NMR用Varian MercuryAMX300型仪测定；MS用VG ZAB-HS或VG-7070型仪测定，除注明外均为EI源(70ev)；所使用的硅胶，包括200-300目和GF254为青岛海洋化工厂或烟台缘博硅胶公司生产；所使用的聚酰胺(80-100目)为浙江省台州市路桥四青生化材料厂生产；所使用的TSK HW-40F为日本TOSOH公司生产；所使用的Shephadex LH-20为E.Merck公司生产；所使用的MCI GEL CHP 20P(75-150um)为日本Mitsubishi Chemical Corporation生产。
实例1取紫金牛全草2kg，粉碎后用95％乙醇冷浸提取3次，提取液合并，减压浓缩至无醇味，加水混悬，用CHCl3萃取。CHCl3部位再以90％甲醇和石油醚分配，得到的石油醚部位上聚酰胺柱以70％、80％、90％和95％乙醇洗脱。80％乙醇洗脱流份再经硅胶、Shephadex LH-20和TSK HW-40F柱层析色谱分离，纯化得到化合物A1，A3，A4，70％洗脱部位经硅胶、Shephadex LH-20柱色谱分离，纯化得到化合物A2。
A1R1＝OCH3，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3A2R1＝OH，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3A3R1＝OCH2CH3，R2＝(CH2)7CH＝CH(CH2)3CH3A4R1＝OCH2CH3，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3其中A3，A4为新化合物，它们的解析及光谱数据如下化合物A3黄色油状物，红外光谱显示缔合羟基的伸缩振动峰(3349cm-1)，酮羰基的伸缩振动峰(1708cm-1)，双键的伸缩振动峰(1604cm-1)；1HNMR谱数据表明分子中有一个双取代烯键[δ5.32(2H，m)]，一个乙氧基[δ4.03(2H，q，J＝7.2Hz)，δ1.41(3H，t，J＝7.2Hz)]和一个长的脂肪链[δ2.41(2H，t，J＝7.5Hz)，δ1.99(4H，m)，δ1.20(18H，m，CH2)和δ0.86(3H，t，CH3)]。
13CNMR和DEPT谱也表明化合物A3分子中有一个醌环[δ182.0(s)，δ160.6(s)，δ119.4(s)，δ183.2(s)，δ151.7(s)，δ102.6(d)]，一个双取代烯键[δ130.1(d)，δ130.0(d)]，一个乙氧基[δ65.9(t)，δ14.1(q)]和一个长的脂肪边链[δ32.0～δ22.5(t)，δ13.9(q)]；EIMS(m/z)348[M]+，结合NMR数据给出分子式C21H32O4；以上的数据提示化合物A3为一个对苯醌类化合物，具有3个取代基即一个OH、一个OEt和一个13碳边链，边链上有一个双取代烯键，EI-MS中m/z182的碎片离子峰为基峰，也证实了这一点。
在A3的NOESY谱中可观察到OEt的信号[δ4.03]与醌环上的单氢信号[δ5.78]相关，从而确定OH与13碳边链取代在醌环的同侧，由此可以推断出A和B2种可能的取代模式。
根据文献(Wehrli F W，Writhlin T.In international of carbon-13 NMR spectra。Heyden，London，1978)，在取代模式A中，两个羰基之间的化学位移差值将大于10ppm，而在取代模式B中，两个羰基之间的化学位移差值比较小，约为2ppm。在化合物A3中，两个羰基之间的化学位移差值为1.2ppm，故确定化合物A3的取代模式如B所示，即OH取代在C-5，13碳边链取代在C-6，OEt取代在C-2。
A3的红外光谱中没有960cm-1的吸收峰，从而确定边链上的双键为顺式；查阅大量的文献后发现，在这一类简单的取代苯醌类化合物中，当边链为13碳时，双键大部分都是取代在8′位和9′位，A3的15碳边链的13CNMR谱数据与化合物ardisianone B(Fukuyama Y，Kiriyama Y，Okino J，et al..ChemPharm Bull，1993，41(3)561)的13CNMR谱数据基本一致，故确定化合物A3的双键位于边链的8′位和9′位。因此化合物A3被确定为5-hydroxy-2-ethoxy-6-[(Z)-8′-tridecenyl]-1，4-benzoquinone，为一个新化合物，命名为ardisianone C。
ardisianone Bn＝7maesaninn＝9化合物A4黄色油状物，红外光谱显示缔合羟基的伸缩振动峰(3351cm-1)，酮羰基的伸缩振动峰(1733cm-1)，双键的伸缩振动峰(1602cm-1)；由于其1HNMR谱、13CNMR谱和NOESY谱数据与A3极其相似，故最初我们怀疑A3与A4为同一个化合物，因此对这两个化合物进行GC-MS分析，发现在同样的检测条件下，化合物A3与A4的保留时间及两峰所相对应的质量数不同(A3，tR＝9.058min，348[M]+；A4，tR＝10.217min，376[M]+)，从而确定A3与A4为两个具有相似结构的化合物。
A4的GC-MS谱中，m/z372的分子离子峰，说明A4具有一个15碳边链，m/z182的碎片离子峰说明A4的取代模式与J1相同，IR谱证实边链上的双键为顺式，以上的数据表明A4也为一个对苯醌化合物，具有3个取代基即一个OH、一个OEt和一个15碳边链，边链上有一个顺式双取代烯键；查阅大量的文献后，发现这一类链烯基取代的苯醌类化合物中，当边链为15碳时，双键大部分都是位于在10′位和11′位；A4的15碳边链的13CNMR谱数据与模型化合物maesanin(Isato K et al.Tetrahedron Lett.，1983，243825)的13CNMR谱数据基本一致，故确定化合物A4的双键位于边链的10′位和11′位。因此化合物A4被确定为5-hydroxy-2-ethoxy-6-[(Z)-10′-pentadecenyl]-1，4-benzoquinone，为一个新化合物，命名为ardisianone D。
化合物A3黄色油状物，C21H32O4；UV(MeOH)λmax(logε)296(4.17)nm；EI-MS(m/z)348[M]+，182；IR(KBr)ν3349(OH)，1708(C＝O)，1604(C＝C)，1504，1392，1213；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ5.78(1H，s，H-3)，δ5.32(2H，m，-CH＝CH-)，δ4.03(2H，q，J＝7.2Hz，-OCH2CH3)，δ1.43(3H，t，J＝7.2Hz，-OCH2CH3)，δ2.41(2H，t，J＝7.5Hz，Ar-CH2-)，δ1.50(4H，m，C＝C-CH2-)，δ1.20(18H，m，CH2)，δ0.82(3H，t，CH3)；13CNMR(75.0MHz，CDCl3)C-1→C-6δ182.0(s)，δ102.6(d)，δ151.7(s)，δ183.2(s)，δ119.4(s)，δ160.6(s)，δ129.9(d，C-8′)，δ130.0(d，C-9′)，δ56.8(t，-OCH2CH3)，δ14.3(q，-OCH2CH3)，δ32.0～δ13.9(C-1′～C-7′，C-10′～C-13′)。
化合物A4黄色油状物，C23H36O4；UV(MeOH)λmax(logε)223(4.06)，227(3.61)nm；EIMS(m/z)376[M]+，182；IR(KBr)ν3351(OH)，1733(C＝O)，1645，1602(C＝C)，1369，1211；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ5.78(1H，s，H-6)，δ5.30(2H，m，-CH＝CH-)，δ4.03(2H，q，J＝7.2Hz，-OCH2CH3)，δ1.48(3H，t，J＝7.2Hz，-OCH2CH3)，δ2.64(2H，t，J＝7.5Hz，Ar-CH2-)，δ1.99(4H，m，C＝C-CH2-)，δ1.20(18H，m，CH2)，δ0.85(3H，t，CH3)；13CNMR(75.0MHz，CDCl3)C-1→C-6δ182.0(s)，δ102.6(d)，δ151.7(s)，δ183.2(s)，δ119.4(s)，δ160.6(s)，δ129.9(d，C-10′)，δ130.0(d，C-11′)，δ56.8(t，-OCH2CH3)，δ14.3(q，-OCH2CH3)，δ32.0～δ14.0(C-1′～C-9′，C-10′～C-15′)。
实例2取小连翘全草4kg，粉碎后用8.0升石油醚冷浸提取3次，提取液合并，减压浓缩至无石油醚味，再溶于200毫升丙酮，搅拌、过滤。滤液浓缩后得32克棕色浸膏。再经硅胶和MCI柱层析色谱分离，纯化得到化合物A5，A6，A7。
A5R1＝R2＝OHA6R1＝2-methyl-butyryl，R2＝HA7R1＝2-methyl-butyryl，R2＝isobutyryl
化合物A5，红色油状物。高分辨HREIMS为344.1968，对应分子式为C21H28O4。UV(273，214nm)和IR(1699，1654，1625，1560cm-1)最大吸收表明该化合物含α，β-不饱和羰基。IR谱在3340cm-1和3324cm-1处给出两个羟基吸收峰。1H NMR、13C NMR(数据见表1)数据显示该化合物有一个异戊二烯基侧链(H2-17～H3-21)，一个3，7-二甲基-2，6-辛二烯基侧链(H2-7～H3-16)。13C-NMR中给出的δ180.2(C-1)、δ147.9×2(C-2和C-6，两个氧代烯碳)、δ121.7×2(C-3，C-5)及δ186.7(C-4)这些信息，说明该化合物是由两个对称烯键和两个不同羰基组成的六碳对称共轭体系，为1，4-二羰基-2，5-环己二烯体系。该化合物的结构近似对称性及NMR数据要求C-2和C-6被羟基化。那么，3，7-二甲基-2，6-辛二烯基侧链和异戊二烯基侧链分别位于C-3和C-5。综上所述，化合物A5的结构被确定为2，6-二羟基-3-(3，7-二甲基-2，6-辛二烯基)-5-异戊二烯基-1，4-二羰基-2，5-环己二烯。
化合物A6为红色油状物。HREIMS给出分子离子峰为428.2560，对应分子式C26H36O5(计算值428.2563)，不饱和度为9。该化合物的紫外光谱在273nm和214nm处有很强的吸收，与化合物A5的UV数据都相同，所以应该也存在1，4-二羰基-2，5-环己二烯骨架。在IR光谱中则给出1770、1668和1643cm-1三个很尖锐的强吸收峰，表明该化合物中有一个孤立羰基和两个共轭羰基。另外IR在3392cm-1处还给出游离羟基的吸收峰。其1H NMR给出了香叶基各质子信号(C10H17，H2-7 to H3-16)和异戊二烯基侧链各质子峰(C5H9，H2-17 to H3-21)以及甲基丁酰氧基侧链(C-2’to C-5’)以及羟基信号(δ6.77，s)。对该化合物我们进行了2D NMR分析。HMBC谱显示异戊二烯基侧链亚甲基质子(H2-17)和香叶基侧链亚甲基质子(H2-7)与位于δ149.8，δ120.8，δ185.8，δ137.7，δ145.8处的五个碳有很好的远程相关，表明香叶基侧链和异戊二烯基侧链分别连在C-3和C-5位，而羟基和甲基丁酰氧基侧链则应该连于C-2/C-6位。NOE显示甲基丁酰氧基与香叶基在同侧，由此可以确定化合物A6为6-异戊酰氧基-2-羟基-3-(3，7-二甲基-2，6-辛二烯基)-5-异戊二烯基-1，4-二羰基-2，5-环己二烯。
化合物A7为黄色油状物，高分辨确定分子式为C30H42O6。其UV吸收峰和化合物A5，A6相同，所以该化合物也应该和前面几个化合物有着相同的骨架，即1，4-二羰基-2，5-环己二烯。其IR还显示该化合物中有两个孤立羰基峰(1772cm-1，1737cm-1)和两个共轭羰基(1684cm-1，1664cm-1)。化合物A7的1H NMR和13C NMR与化合物A6都很相似，显示该化合物也有香叶基侧链(C10H17，H2-7 to H3-16)、异戊二烯基侧链(C5H9，H2-17 to H3-21)的结构片断，同时NMR也给出了异丁酰氧基团和异戊酰氧基信号，NOE显示甲基丁酰氧基与香叶基在同侧。由此可以确定化合物A7为2-异丁酰氧基-6-异戊酰氧基-3-异戊二烯基-5-香叶基-1，4-二羰基-2，5-环己二烯(A7)
表1.化合物A5，A6，A7的NMR(CDCl3)数据.
位置 A5 A6 A7δH(ppm，Hz) δCδH(ppm，Hz) δCδH(ppm，Hz) δC1 180.2177.5174.12 147.9149.8147.83 121.7120.8136.14 186.7185.8185.55 121.7137.7136.16 147.9145.8147.87 3.13，m22.3 3.16，m22.4 3.04，m 23.48 5.02，m119.6 4.99，m119.44.95，m 118.39 137.3137.4138.410 1.94，m39.6 1.97，m39.8 1.85，m 39.711 2.01，m26.5 2.04，m26.6 1.89，m 26.612 5.08，m124.1 5.05，m124.34.98，m 124.013131.3131.5131.714 1.79，s25.6 1.66，s25.7 1.60，s 25.815 1.59，s17.6 1.58，s17.7 1.51，s 17.716 1.51，s16.1 1.70，s16.2 1.60，s 16.417 3.13，m22.3 3.13，m23.5 3.04，m 23.418 5.08，m119.4 5.12，s118.64.95，m 118.519133.8134.71.60，s 134.720 1.66，s25.6 1.66，s25.7 1.51，s 25.721 1.63，s17.7 1.73，s18.0 18.01 173.72.77，m 173.92 2.66，m41.0 1.24，d，6.334.03 1.82，m26.7 1.24，d，6.318.94 1.04，t，6.5 11.6 18.95 1.31，d，7.0 16.6 2.58，m 173.56 1.80，m；1.55，m41.07 0.95，t，7.426.58 1.22，d，6.211.69 16.6OH 6.77，s化合物A5红色油状，UV(甲醇)λmax(logε)214(3.91)，273(4.04)nm；IR(film)νmax3340，3324，1699，1654，1625，1560cm-1；1H NMR and13C NMR数据见表1；EIMS m/z(rel.Int)344[M]+(27)，301(24)，261(67)，204(100)，HREIMS m/z 344.1968(calcd.for C21H28O4，344.1988)。
化合物A6红色油状(25mg)，UV(甲醇)λmax(logε)214(4.02)，273(4.01)nm；IR(film)νmax3392，，1770，1668，1643cm-1；1H NMR and13C NMR数据见表1；EIMS m/z(rel.Int)428[M]+(9)，344(87)，329(43)，275(48)，261(100)，HREIMS m/z 428.2560(calcd.for C26H36O5，428.2563)。
化合物A7红色油状(18mg)，UV(甲醇)λmax(logε)214(3.08)，273(4.01)nm；IR(film)νmax1772，1737，1684，1664，cm-1；1H NMR and13C NMR数据见表1；EIMS m/z(rel.Int)498[M]+(15)，415(62)，344(96)，331(100)，261(94)；HREIMS m/z 498.2978(calcd.for C30H42O6，498.2981)。
权利要求
1.一类结构如下的对-苯醌化合物及其它的平衡异构体、盐、水合物、前药 其中R1为H、链烃或环链烃；R2为H、链烃或环链烃或羟基或烷氧基或酯基；R3为H、链烃或环链烃或芳香取代基或取代吲哚基；R4为H、链烃或环链烃或羟基或烷氧基或酯基。
2.如权利要求1所述的对苯醌类化合物其特征在于当R3为-H、R4为-OH时，R1为-CH2CH3，R2为-(CH2)7CH＝CH(CH2)3CH3
3.如权利要求1所述的对苯醌类化合物其特征在于当R3为-H、R4为-OH时R1为-CH2CH3，R2为-(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3
4.如权利要求1所述的对苯醌类化合物其特征在于当R3为-CH2-CH＝C(CH3)2、R4为-CH2-CH＝C(CH3)-CH2CH＝C(CH3)2时R1为-H，R2为-OH。
5.如权利要求1所述的对苯醌类化合物其特征在于当R3为-CH2-CH＝C(CH3)2、R48为-CH2-CH＝C(CH3)-CH2CH＝C(CH3)2时R1为-CO-CH(CH3)-CH2CH3，R2为-OH。
6.如权利要求1所述的对苯醌类化合物其特征在于当R3为-CH2-CH＝C(CH3)2、R4为-CH2-CH＝C(CH3)-CH2CH＝C(CH3)2时R1为-CO-CH(CH3)-CH2CH3，R2为-OCOCH(CH3)2。
7.如权利要求1所述的对苯醌类化合物的制备方法，其特征在于通过植物紫金牛全草经粉碎后，用乙醇和石油醚提取，提取液浓缩，加水混悬，用氯仿提取。氯仿提取物以90％甲醇和石油醚分配，得到的石油醚提取物，该提取物上聚酰胺柱，用不同比例的乙醇洗脱。取80％乙醇洗脱液的流份减压浓缩，再将浓缩液经硅胶、Shephadex LH-20和TSK HW-40柱层析色谱分离，分别得到化合物A1，A3，A4，70％洗脱流份经硅胶Shephadex LH-20柱色谱分离，分得到化合物A2。
8.如权利要求1所述的对苯醌类化合物的制备方法，其特征在于通过植物小连翘全草，经粉碎后，用石油醚提取、浓缩，浓缩物溶于丙酮，搅拌、过滤。滤液浓缩。再经硅胶和MCI柱层析色谱分离，得化合物A5，A6，A7。
9.如权利要求1所述的对苯醌类化合物具有抑制PTPIB活性在制备治疗糖尿病或肥胖症药物中应用。
10.如权利要求1所述的对苯醌类化合物作为胰岛素增敏剂。
全文摘要
本发明涉及从植物紫金牛和小连翘中进行提取、分离获得结构如下的一类对－苯醌化合物。其中R
文档编号C07C50/00GK1521157SQ0311541
公开日2004年8月18日 申请日期2003年2月14日 优先权日2003年2月14日
发明者胡立宏, 李佳, 叶其壮, 李延芳, 安天英, 胡梁言 申请人:中国科学院上海药物研究所