专利名称：法呢基蛋白质转移酶抑制剂作为抗癌药的制作方法
ras族的致癌基因和原致癌基因编码了与控制真核细胞增殖有关的某些蛋白质。通过正常的转录和翻译过程，这些基因提供能够与效应分子相互作用以控制细胞分裂的称作ras蛋白的蛋白质。
Ras蛋白最初产生于失活状态的细胞中，而且必需经过各种翻译后的修饰才激活。部分激活过程为ras蛋白在位于C端附近的半胱氨酸残基处进行法呢基化。该法泥基化促进ras蛋白与质膜内表面的结合，就激活ras蛋白所引起的致癌基因转化而言，膜结合是关键的。见Schafer等人，Science 245，379(1989)。
通过酶ras法呢基蛋白转移酶(也称作FPT酶)催化进行ras蛋白的法呢基化。通过这种酶反应，胆固醇生物合成中间体的法呢基部分，二磷酸法呢酯通过硫醚键被连接到位于ras蛋白C端附近的半胱氨酸残基上。
在人的多种癌，包括结肠和胰腺癌中，都发现了激活的ras蛋白质。通过抑制FPT酶催化的失活ras蛋白法呢基化来干扰ras蛋白的膜定位将抑制由激活的ras蛋白所引起的细胞的增殖，并因此而产生抗癌作用。
本发明提供具有rasFPT酶抑制作用的化合物，并且此化合物可用作抗癌剂。
本发明提供具有下列通式的化合物式I其中X为CH2，CCl2或CF2，R1和R2各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4而Z为未取代的或由选自C1—C4烷基，C1—C4烷氧基，卤素，CF3，OCF3，OH，CN，NO2和NH2中的1—3个取代基取代的苯基或萘基；或可药用的阳离子，并且A为选自的基团， 和 其中R3，可为含1—9个双键的饱和或不饱和C1—C19烷基。本发明也提供具有下列通式的化合物式II其中X为CH2，CCl2或CF2，
Y为CH2或CF2，R1，R2和R3各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4而Z为未取代的或由选自C1—C4烷基，C1—C4烷氧基，卤素，CF3，OCF3，OH，CN，NO2和NH2中的1—3个取代基取代的苯基或萘基；或可药用的阳离子，并且A为选自 和 的基团，其中R4，可为含1—9个双键的饱和或不饱和C1—C19烷基。本发明的另一个具体表现是治疗遭受肿瘤疾病折磨的患者的或在遭受肿瘤疾病折磨患者中控制肿瘤生长的方法，它包括给予抗肿瘤治疗有效量的式I或II化合物。
本文使用的术语“C1—C4烷基”指1—4个碳原子的饱和直链或支链烃基。该术语的范围包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基等。术语“C1—C4烷氧基”指由带有1—4个碳原子的饱和直链或支链烃基的氧基组成的烷氧基。该术语的范围包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，异丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基等。术语“具有1—9个双键的可饱和或不饱和的C1—C19烷基”指1—19个碳原子的支链或直链烃基。该术语具体包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，戊基，己基，庚基，辛基，壬基，癸基，十一烷基，十二烷基，十三烷基，十四烷基，十五烷基，十六烷基，十七烷基，十八烷基，十九烷基，法呢基，香叶基，橙花基，3—甲基2—丁烯基等。术语“卤素”指氯，溴或碘原子。术语“pg”指保护基。术语“可药用的阳离子”指那些在给予的剂量以获得需要的作用下基本上无毒且不独立拥有明显的药理活性的阳离子。该术语范围内包括的盐为由碱金属如钠和钾；碱土金属如钙和镁；第III主族的轻金属包括铝；和有机的伯，仲和叔胺，如三乙胺，二苄胺，N，N’—二苄基乙二胺，二异丙基乙胺等形成的盐。优选钠盐。
按反应流程I中所述的方法可制备式I化合物。除另有指示外，所有的取代物定义同前。试剂和初始原料对于本领域普通技术人员来说是容易获得的。
反应流程I
R5＝R1和R2，条件是R5不为氢或可药用的阳离子Z＝H或可药用的阳离子在反应流程I中，步骤a为用结构(1)定义的磷酸盐处理结构(2)定义的醛以产生结构(3)定义的醇。例如，于近似-78℃下将一当量适当取代的膦酸酯(1)如溶于适当有机溶剂如四氢呋喃中的二氟甲基膦酸二甲酯滴加到搅拌的二异丙基氨化锂的溶液中。将混合物搅拌2分钟至2小时。将溶解在适宜有机溶剂如四氢呋喃中的适当取代的醛(2)如法呢醛[按Biller S.A and Forster，C的方法，经Swern反式氧化反式—法呢醇制备的，Tetrahedron1990，46(19)，6645]缓慢加入(1)中，同时保持反应温度低于-72℃，约2小时后，将反应物倾入适宜的水性酸如0.1N盐酸中，并用适宜的有机溶剂如乙醚萃取。用适宜的干燥剂如无水硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩。用本领域公知的技术纯化残余物。例如，通过闪式色谱法，用适宜的有机洗脱剂如40％醋酸乙酯/己烷来纯化残余物以产生1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯。
在反应流程I中，步骤b为将醇(3)氧化成结构(5)所述的酮。例如，在约-60℃和适宜的有机溶剂如二氯甲烷中，将1当量三氟醋酸酐滴加到2当量二甲基亚砜中。完成滴加后，将反应物搅拌约2分钟。将溶解在适宜的有机溶剂如二氯甲烷中的1当量适当取代的醇(3)如1.1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯滴加到反应物中。完成滴加后，将反应物搅拌大约45分钟。然后反应冷却到-78℃，滴加过量三乙胺。反应温热到室温，搅拌约45分钟。再将反应混合物倾入水中并用适宜的有机溶剂如乙醚萃取。用适宜的干燥剂如无水硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩。用本领域公知的技术纯化残余物。例如，通过闪式色谱法，用适宜的有机洗脱剂如20％醋酸乙酯/己烷来纯化残余物以产生1，1—二氟—2—氧代、4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯。
在反应流程I中，步骤C为将结构(3)定义的醇水解成结构(4)定义的二元酸或其盐。例如，在适宜的有机溶剂如二氯甲烷中，将适当取代的醇(3)如1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯与约2当量的可力丁合并，并冷却到约0℃。将约4当量的适宜的三烷基甲硅烷基卤化物如碘化三甲基甲硅烷滴加到上述溶液中。搅拌约2小时后，用适宜的有机溶剂如乙醚稀释反应物，并用适宜的水性酸如1N盐酸中洗。再用适宜的干燥剂如无水硫酸钠干燥有机相，过滤并真空浓缩以产生二元酸粗品。用适宜的碱如0.1N氢氧化钠处理，并冷冻干燥以除去水。然后用本领域公知的技术纯化该产品。例如，通过色谱法，用适宜的固定相如CHP20P(二乙烯基苯/苯乙烯共聚物)和适宜的洗脱剂如由水到甲醇的梯度液来产生1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐。
在反应流程I中，步骤C为将结构(5)定义的酮水解为结构(6)定义的二元酸或其盐。例如，在适宜的有机溶剂如二氯甲烷中，将适当取代的酮(5)如1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯与约2当量的可力丁合并，并冷却至约0℃。将约3—4当量的适宜的三烷基甲硅烷基卤化物如溴化三甲基硅烷滴加到上述溶液中。让反应物升至室温。搅拌约5小时后，用适宜的有机溶剂如甲苯，稀释反应物。真空除去溶剂，将残余物溶解在适宜的有机溶剂如乙醚中，并用适宜的水性酸如1N盐酸冲洗。用过量的适宜碱如0.1N氢氧化钠处理，真空浓缩除去有机溶剂并冷冻干燥除去水。用本领域公知的技术纯化产品。例如，通过色谱法，用适宜的固定相如CHP20P(二乙烯基苯/苯乙烯共聚物)与适宜的洗脱剂如由水到甲醇的梯度液来纯化产品以产生1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐。
按反应流程II描述的方法来制备式II化合物。除另有表示外，所有取代物定义同前。试剂和初始原料对本领域普通技术人员而言是容易得到的。
反应流程II R5＝R1，R2和R3，条件是R5不为氢或可药用阳离子。
Z＝H或可药用的阳离子Y1＝CH2或CF2。
在反应流程II中，步骤a为用适宜的保护基如叔丁基二苯基硅醚或叔丁基二甲基硅醚，最优选的是叔丁基二苯基硅醚保护醇(3)来产生适当取代的结构(7)所述的受保护醇。
例如，按Hanessian，S.和Lavellee，P，J.can.chem.1975，53，2975所述的总的制备过程，用适宜的溶剂如二甲基甲酰胺溶解醇(3)，并用约1.1当量的氯化叔丁基二苯基硅烷和约2.2当量的咪唑处理。将反应物在室温下搅拌4—24小时。用乙醚稀释反应物，用水，半量水稀释的饱和氯化钠，饱和氯化钠洗涤，用适宜的干燥剂如无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。用本领域技术人员公知的技术纯化残余物。例如，通过闪式色谱法，用适宜的洗脱剂如醋酸乙酯/己烷来纯化残余物来产生结构(7)所述的受保护的醇。
在反应流程II中，步骤b为将受保护的醇(7)进行选择性地水解来产生结构(8)所述的适当取代的一元酸。
例如按Biller，S.A和Forster，C.Tetrahedron1990，46(19)6645所述的总的制备方法，用适宜的溶剂混合物如包含略过量的氢氧化钾的1∶1甲醇/水溶解受保护的醇(7)。将反应物在65—75℃加热1—5小时。蒸去甲醇并加入二氯甲烷。用硫酸氢钾酸化搅拌下的化合物。分层并用二氯甲烷萃取水层。合并有机萃取液，用50％盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩来产生一元酸(8)。
在反应流程II中，步骤C为用草酰氯处理一元酸(8)来形成结构(9)所述适当取代的酰基氯。
例如，在氮气环境中，用含催化量的二甲基甲酰胺的适宜的有机溶剂如苯溶解一元酸(8)。在室温下，滴加过量的草酰氯。2—4小时后，真空浓缩溶液。将残余物两次溶解在苯中并真空浓缩来产生酰基氯(9)。
在反应流程II中，步骤d为用适宜的阴离子处理酰基氯来产生结构(10)所述适当取代的膦酸酯。
例如，将溶于适宜有机溶剂如四氢呋喃中的约2.2当量适当取代的膦酸二烷基酯如甲基膦酸二甲脂的溶液冷却至约-78℃并滴加约2.1当量的丁基锂(1.6m己烷液)来进行处理。搅拌约15—30分钟后，将溶解在四氢呋喃中的1当量的酰基氯(9)滴加到上述形成的阴离子中。在-78℃下搅拌约1小时后，让反应物升至0℃并再搅拌1小时。用适宜的有机溶剂如乙醚稀释反应物，并用适宜的含水酸如10％盐酸中止反应。分层并用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤有机相。用无水硫酸镁干燥混合物，过滤并真空浓缩。用本领域技术人员公知的技术纯化残余物。例如，通过闪式色谱法，在硅胶上，用适宜的洗脱剂如甲醇/二氯甲烷来纯化残余物以产生纯化的膦酸酯(10)。
在反应流程II，步骤e为在温和条件下，将膦酸酯去掉保护来产生结构(11)所述的醇。
例如，将膦酸酯(10)的溶液溶解在适宜的有机溶剂如四氢呋喃中，并用过量适宜的氟化物离子源如氟化四—正丁基按在室温下处理。约1—24小时后，用适宜的有机溶剂如乙醚稀释反应物。用水，盐水洗涤反应物，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。按本领域技术人员公知的技术纯化残余物。例如，通过闪式色谱法，在硅胶上，用适宜的洗脱剂如甲醇/二氯甲烷来纯化残余物以产生纯化的醇(11)。
在反应流程II中，步骤f为按上文反应流程I步骤C中所述方法，可将醇(11)水解来产生结构(12)所述的化合物。
在反应流程II中，步骤g为按上文反应流程I步骤b中所述方法，可将醇(11)氧化来产生结构(13)所述的酮。
在反应流程II中，步骤f为按上文反应流程I步骤C所述方法，可将酮(13)水解来产生R5＝Z的化合物(14)。
下面的实施例显现了反应流程I和II中所述的典型的合成法。这些实施例仅是说明性的，在无论如何不限定本发明的范围。在下面实施例中使用的术语“eq”意指当量，“g”意指克，“mg”意指毫克，“mmol”意指毫克分子，“mL”意指毫升，“℃”意指摄氏度，“TLC”意指薄层色谱法，“Rf”意指保留因子而“LOD”意指干燥失重。
实施例1 制备1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯反应流程I，步骤a；合并二异丙基胺(22.24mL，0.159mol)与四氢呋喃(250mL)并冷却至-20℃。滴加正丁基锂(63.3mL，2.5N于己烷中，0.159mol)于该溶液中。搅拌30分钟并冷却至-78℃。滴加二氟甲基膦酸二甲基酯(25.8g，0.159mol)的四氢呋喃溶液(20mL)，同时保持温度低于-75℃。完成滴加后，搅拌2分钟并缓慢加入反式溶液，即上述步骤制备的反式法呢醛[按Biller，s.A；Forstar，C.Tetrahedron1990，46(19)，6645制备](14g，0.0636mol)的四氢呋喃液(10mL)，同时保持温度低于-72℃。完成滴加后，在-78℃下再搅拌2小时并将反应物倾入0.1N盐酸(500mL)中。用乙醚(2×1L)萃取反应物。合并有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过闪式色谱法[40％醋酸乙酯/己烷，Rf(50％醋酸乙酯/己烷)＝0.44]纯化残余物以产生油状的标题化合物(9.3g，39％)。
分析计算值C18H31F2O4PC，56.83；H，8.21，实测值C，56.61；H，8.48实施例2 制备1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯反应流程I，步骤b；合并三氟醋酸酐(1.30mL，0.0096mol)与二氯甲烷(20mL)并冷却至-60℃。滴加二甲基亚砜(1.30mL，0.0183mol)的二氯甲烷(2mL)溶液，同时保持温度低于-55℃。完成滴加后，搅拌2分钟，加入实施例1制备的1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯(1.60g，0.0042mol)的二氯甲烷(4mL)溶液，并搅拌45分钟。将反应物冷却到-78℃并滴加三乙胺(3.0mL，0.021mol)。让反应物升至室温并搅拌45分钟。将反应物倾入水(100mL)中。用乙醚(400mL)萃取该混合物。用无水硫酸镁干燥有机相，过滤真空浓缩。通过闪式色谱法(20％醋酸乙酯/己烷，Rf＝0.18)纯化该残余物以产生油状标题化合物(1.1g，69％)。分析计算值C18H29F2O4PC，57.13；H，7.72。实测值C，57.10；H，7.97。
实施例3 制备1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐反应流程I，步骤C；合并实施例1制备的1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基-3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯(0.378g，0.001mol)与可力丁(0.44mL，0.0033mol)和二氯甲烷(5mL)。冷却至0℃。滴加碘化三甲基硅烷(0.56mL，0.004mol)的二氯甲烷(0.5mL)溶液并搅拌2小时。加入乙醚(200mL)并用1N盐酸(3×100mL)洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，过滤并真空浓缩以产生标题化合物膦酸。用0.1N氢氧化钠(25mL)处理该残余物并冷冻干燥产生灰白色的粉末。通过色谱法，在CHP20P上(二乙烯基苯/苯乙烯共聚物)，用从水到甲醇形成的梯度洗脱液来进行纯化。冷冻干燥含产物的馏分来产生白色粉状标题标化合物(0.17g，43％)，mp287—289℃。分析计算值，C16H25F2O4PNa2C，48.48；H，6.36。实测值C，48.20；H，6.32实施例4 制备1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐反应流程I，步骤d；合并实施例2制备的1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯(1.2g，0.0032mol)与可力丁(0.85mL，0.0064mol)和二氯甲烷(5mL)。冷却至0℃。加入溴化三甲基硅烷(0.92mL，0.007mol)，升至室温并搅拌5小时。加入甲苯(20mL)并真空浓缩。加入乙醚(200mL)并用1N盐酸(3×50mL)洗涤。用0.1N氢氧化钠(64mL)处理有机相，真空浓缩除去有机溶剂并冷冻干燥除去水。按实施例3的色谱法纯化并冷冻干燥含成分的产物来产生白色粉状标题化合物(0.32g，25％)，mp247.5—249℃(分解)。分析计算值C16H23F2O4PNa2*0.8H2OC，47.02；H，6.09，LOD＝3.7，实测值C，47.05；H，6.07，LOD＝3.7。
实施例5 制备2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲酯反应流程I，步骤a；合并二异丙基胺(2.80mL，0.02mol)与四氢呋喃(40mL)并冷却至-20℃。滴加正丁基锂(8.0mL，2.5N于己烷中，0.02mol)到该溶液中，搅拌20分钟并冷却至-70℃。滴加甲基膦酸二甲基酯(2.48g，0.020mol)的四氢呋喃(20mL)溶液，同时保持温度低于-70℃。完成滴加后，搅拌1小时并缓慢加入反式溶液，即反式氢化法呢醛[按实施例1制备](2.2g，0.01mol)的四氢呋喃(4mL)溶液，同时保持温度低于-72℃。完成滴加后，在-70℃再搅拌1小时，并将反应物倾入饱和氯化铵(100mL)中。用乙醚(400mL)萃取反应物。用无水硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩。通过闪式色谱法(50％醋酸乙酯/己烷，Rf＝0.083)纯化来产生油状标题化合物(1.97g，57％)；MS(EI)M+＝344。分析计算值C18H33O4PC，62.77；H，9.66实测值C，62.75；H，9.74实施例6 制备2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲酯反应流程I，步骤b；在氮气环境下合并实施例5制备的2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯(1.03g，0.003mol)与高锰酸钡(2.30g，0.009mol)和二氯甲烷(18mL)。搅拌6天。滤去固体物并真空浓缩滤液。通过闪式色谱法(75％醋酸乙酯/己烷，Rf＝0.51)纯化该残余物来产生油状标题化合物(0.3g，30％)；MS(CI/CH4)M+H＝343分析计算值C18H31O4PC，63.13；H，9.13。实测值C，61.96；H，9.22。
实施例7 制备2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基磷酸二钠盐反应流程I，步骤C；合并2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯(0.95g，0.0027mol)与可力丁(0.73mL，0.0055mol)和二氯甲烷(7.5mL)。冷却至0℃加入溴化三甲基硅烷(1.44mL，0.011mol)并升至室温。搅拌5小时并加入甲苯(20mL)。真空浓缩并将残余物溶于乙醚(200mL)中，用1N盐酸(3×50mL)洗涤。有机相中加入0.1N氢氧化钠(54mL)，真空除去有机溶剂并冷冻干燥除去水。按实施例3的色谱法进行纯化来产生白色冻干的标题化合物(0.35g，35％)，mp＞350℃。分析计算值C16H27O4PNa2*0.6H2OC，51.78；H，7.66，LOD＝2.9。实测值C，51.48；H，7.66，LOD2.9。
实施例8 制备2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐反应流程I，步骤C；合并2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯(0.692g，0.002mol)与可力丁(0.53mL，0.004mol)和二氯甲烷(5mL)。冷却至0℃。加入溴化三甲基硅烷(1.05mL，0.008mol)并升至室温。搅拌4小时并真空浓缩。将残余物溶于乙醚(100mL)中，并用1N盐酸(3×50mL)洗涤。有机相中加入0.1N氢氧化钠(40mL)，真空除去有机溶剂并冷冻干燥除去水来产生白色粉末。按实施例3所述的色谱法进行纯化来产生白色粉状的标题化合物(0.34g，44％)，mp＞360℃。分析计算值C16H25O4PNa2.1.15H2OC，50.69；H，7.26，LOD5.5实测值C，50.54；H，7.53，LOD5.5实施例9 制备[(1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)甲基膦酸，二甲基酯]次膦酸甲酯反应流程II，步骤a；将实施例1制备的1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲基酯(1.0eq)溶于四氢呋喃中。在室温搅拌下用氯化叔丁基二苯基硅烷(1.1eq)和咪唑(2.2eq)处理。8小时后用乙醚稀释反应物，并用水，盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过闪式色谱法，在硅胶上(醋酸乙酯/己烷)进行纯化来产生受保护的醇。
反应流程II，步骤b；将上述形成的受保护的醇(1.0eq)溶解在含氢氧化钾(1.1eq)的甲醇/水1∶1液中，并将反应物在//65℃下加热1小时。蒸去甲醇并加入1当量的二氯甲烷。在搅拌下用硫酸氢钾酸化混合物。分层并用二氯甲烷萃取水层。合并有机萃取物，用50％盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩来产生一元酸。
反应流程II，步骤C；在氮气中，将上述形成的一元酸(1.0eq)溶于无水苯中并加入催化量的二甲基甲酰胺。在室温下，滴加草酰氯(3∶0eq)处理溶液并搅拌4小时。真空浓缩反应物，加入1当量上述苯，真空浓缩并再次重复该过程来产生酰氯。
反应流程II，步骤d；将甲基膦酸二甲酯(2.2eq)溶于无水四氢呋喃中并冷却至-78℃。溶液中滴加丁基锂(2.1eq于1.6M己烷溶液中)。完成滴加后，搅拌反应物30分钟。将上述形成的酰氯(1.0eq)溶于无水四氢呋喃中并滴加到阴离子中。完成滴加后，在-78℃下搅拌反应物1小时，升到0℃再搅拌1小时。用乙醚稀释反应物并用10％盐酸中止反应。分层并用水、饱和碳酸氢钠、盐水洗涤有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过闪式色谱法，在硅胶上(甲醇/二氯甲烷)纯化残余物来产生甲基次膦酸二甲基膦酸酯(methyl phosphinate dimethyl phosphonate)。
反应流程II，步骤e；将上述形成的甲基次膦酸二甲基膦酸酯(1.0eq)溶于四氢呋喃中并加入氟化四丁基铵(1M四氢呋喃溶液中含2.0eq)。在室温下，搅拌反应物20小时并用乙醚稀释。用水、盐水洗涤有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过闪式色谱法，在硅胶上(甲醇/二氯甲烷)纯化残留物来产生标题化合物。
实施例10 制备[(1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基甲基膦酸二钠盐]次膦酸钠盐反应流程II，步骤f；合并实施例9制备的甲基次膦酸二甲基膦酸酯(1eq)与可力丁(3.3eq)和二氯甲烷。冷却至0℃并滴加碘化三甲基硅烷(4eq)的二氯甲烷溶液。将反应物搅拌2小时。加乙醚并用1N盐酸洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，过滤并真空浓缩来产生标题化合物三元酸。用过量的0.1N氢氧化钠处理残余物并冷冻干燥。通过色谱法，在CHP20P上(二乙烯苯/苯乙烯共聚物)，用水到甲醇的梯度液洗脱来进行纯化。冷冻干燥含产物的馏分来产生标题化合物。
实施例11 制备[(1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，711—十三碳三烯基)甲基膦的二甲基酯]次膦酸甲酯。
反应流程II，步骤g；合并三氟醋酸酐(1.0eq)与二氯甲烷并冷却到-60℃。滴加二甲基亚砜(2.0eq)的二氯甲烷溶液，同时保持温度低于-55℃。完成滴加后，搅拌2分钟。加入实施例9制备的甲基次磷酸二甲基膦酸酯(1eq)的二氯甲烷溶液并搅拌45分钟。将反应物冷却至-78℃并滴加三乙胺(3eq)。让反应物升至室温并搅拌45分钟。将反应物倾入水中。用乙醚萃取该混合物。用无水硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩。通过闪式色谱法(醋酸乙酯/己烷)纯化残留物来产生标题化合物。
实施例12 制备[(1，1—二氟—2—氧代—4，8，1 2—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)甲基膦酸二钠盐]次膦酸钠盐反应流程II，步骤f；合并实施例11制备的甲基次膦酸二甲基膦酸酯(1.0eq)与可力丁(2.0eq)和二氯甲烷。冷却到0℃并加入溴化三甲基硅烷(2.1eq)。温热至室温并搅拌5小时。加入甲苯并真空浓缩。加入乙醚并用1N盐酸洗涤。用过量的氢氧化钠处理有机相，真空浓缩除去有机溶剂并冷冻干燥除去水。按实施例10的色谱法进行纯化，并冷冻干燥含产物的流分得标题化合物。
实施例13 制备[(1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)二氟甲基膦酸二甲酯]次膦酸甲酯。
反应流程II，步骤d；在-78℃温度下，将二氟甲基膦酸二甲基酯的无水四氢呋喃液加到二异丙基酰胺锂(1.05eq)中。加完后，将反应物搅拌30分钟。用无水四氢呋喃溶解酰氯(1.0eq)[实施例9经步骤C形成的]并滴加到阴离子中。加完后，在-78℃下搅拌反应物1小时，温热至0℃并再搅拌1小时。用乙醚稀释反应物并用10％盐酸中止反应。分层并用水、饱和碳酸氢钠、盐水洗涤有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。经闪式色谱法在硅胶(甲醇/二氯甲烷)上纯化残留物以产生二氟甲基次膦酸二甲基膦酸酯。
反应流程II，步骤e，将以上形成的二氟甲基次膦酸二甲基膦酸酯(1.0eq)溶于四氢呋喃中并加入氟化四丁铵(2.0eq)的1M的四氢呋喃溶液)。室温下将反应物搅拌20小时并用乙醚稀释。用水、盐水洗涤有机相，无水硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。经闪式色谱法在硅胶上(甲醇/二氯甲烷)纯化残留物以产生标题化合物。
实施例14 制备[(1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)二氟甲基膦酸二钠盐]次膦酸，钠盐反应流程II，步骤f；合并二氟甲基次膦酸二甲基膦酸酯(1eq)(由实施例17制备的)与可力丁(4.0eq)和二氯甲烷。冷却至0℃并滴加溴化三甲基硅烷溶液(5eq)。将反应物搅拌5小时。室温下加入乙醚并用1N盐酸洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，过滤并真空浓缩来产生三酸标题化合物。用过量0.1N氢氧化钠处理并冷冻干燥。经色谱法，在CHP20P(二乙烯苯/苯乙烯共聚物)用从水到甲醇梯度液洗脱来进行纯化。冷冻干燥含产物的流分来产生标题化合物。
实施例15 制备[(1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)二氟甲基膦酸二甲酯]次膦酸甲酯反应流程II，步骤g；合并三氟醋酸酐(1.0eq)和二氯甲烷并冷却至-60℃。滴加二甲基亚砜(2.0eq)的二氯甲烷溶液，同时保持温度低于-55℃。加完后，搅拌2分钟。加入实施例17制备的二氟甲基次膦酸二甲基膦酸酯(1eq)的二氯甲烷液并搅拌45分钟。将反应物冷却到-78℃并滴加三乙胺(3eq)。使反应物温热到室温并搅拌45分钟。将反应物倾入水中。用乙醚提取该混合物。用无水硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩。用闪式色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化残留物来产生标题化合物。
实施例16 制备[(1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)二氟甲基膦酸二钠盐]次膦酸钠盐。
反应流程II，步骤f；合并二氟甲基次膦酸二甲基膦酸酯(1.0eq)(实施例19制备的)与可力丁(2.0eq)和二氯甲烷。冷却到0℃并加入溴化三甲基硅烷(2.1eq)。温热至室温并搅拌5小时。加入甲苯并真空浓缩。加入乙醚并用1N盐酸洗涤。用过量的1N氢氧化钠处理有机相，真空浓缩除去有机溶剂并冷冻干燥除去水。按实施例10的色谱法进行纯化并冷冻干燥含产物的流分来产生标题化合物。
再一方面，本发明提供一种治疗遭受肿瘤疾病患者的方法，它包括给予抗肿瘤治疗有效量的式I或II化合物。本文所使用的术语“肿瘤疾病”是指不正常的状态或疾病，其特征是快速增殖生长细胞或肿瘤。用式I或II的化合物治疗会特别有用的肿瘤疾病包括白血病如，但不局限于，急性成淋巴细胞的、慢性淋巴细胞的、急性myloboastic和慢性mylocytic；癌，如，但不局限于子宫颈、食管、胃、小肠、胰腺、结肠和肺部的那些癌；肉瘤，如，但不局限于Oesteroma骨肉瘤、lepoma、脂肉瘤、血管瘤和血管肉瘤；黑瘤，包括不含黑色素的和含黑色素的；和混合型的肿瘤如，但不局限于癌肉瘤、淋巴组织型、滤泡网状组织(folicularretic-ulum)、细胞肉瘤和何杰金病。
在本文中，术语“患者”是指热血动物，如人，它遭受特定肿瘤疾病。
抗肿瘤治疗有效量的式I或II化合物是指一次或多次给予患者而有效地控制肿瘤生长或与未进行此治疗相比延长了患者生存能力的量。在本文中，肿瘤的“控制生长”是指减慢、干扰、阻止或停止其生长和转移且不是必须表明肿瘤全部消除。
在本文中，术语“治疗有效量”是指式I或II化合物抗肿瘤治疗有效的量。通过本领域技术人员使用已知的技术进行辅助诊断并通过观察在类似情况下所获得的结果可容易地确定治疗有效量。在治疗有效量或剂量的确定中，辅助诊断师要考虑多种因素，包括但不局限于哺乳动物的种类；其体型大小、年龄及总的健康情况；所包含的具体疾病；疾病的程度或复杂性或严重性；患者个体的反应；所给予的特定化合物；给药的方式；所给制剂的生物利用度特点；所选择的剂量规程；共同使用的药物；和其它相关情况。
式I或II化合物的治疗有效量期望在每天每公斤体重约0.1毫克(mg/kg/天)到约100mg/kg/天的范围内。优选剂量期望在约0.5到25mg/kg/天的范围内。
为了对遭受以上所述疾病的患者进行治疗，可以任何形式或方式给予式I或II的化合物，所述形式或方式使化合物产生有效量的生物利用度，包括口服和非肠道途径。例如，可通过口服、皮下、肌内、静脉、透皮、鼻内、直肠等给予式I或II的化合物。通常口服给药是优选的。依据所选择化合物的具体特点、所治疗的疾病、疾病的程度，及其它相关情况，制备剂型领域的技术人员可容易地选择合适的给药形式和方式。
可单独或以与可药用载体或赋形剂组合的药物组合物的形式给予化合物，其配比和性质取决于所选择化合物的稳定性和化学特性、所选择的给药途径及常规的药剂惯例。为了稳定性、便于结晶、增加溶解性等目的，可将本发明的化合物(其本身是有效的)以其与可药用酸加合成盐的形式来配制和给药。
另一方面，本发明提供含有与一种或多种惰性载体混合或结合形式的式I或II的化合物的组合物。这些组合物作为如测定标准、整装运输的方便方式或作为药物组合物都是有用的。式I或II化合物可测定的量是指通过公知的且适于本领域技术人员使用的常规方法和技术可容易测量的量。式I或II的化合物的可测定量通常在组合物重量的约0.001％到75％的范围内。惰性载体可以是不降解或不与式I或II化合物产生共轭反应的任何材料。合适的惰性载体的例子为水；水性缓冲剂，如常用于高效液相色谱(HPLC)分析的那些；有机溶剂，如乙腈、乙酸乙酯、己烷等；和药用可接受的载体或赋形剂。
尤其是，本发明提供含有与一种或多种可药用载体或赋形剂混合或结合形式的治疗有效量的式I或II化合物。
以药学领域公知的方式制备药物组合物。载体或赋形剂可以是能用作活性组分的辅剂或介质的固体、半固体或液体材料。适当的载体或赋形剂是本技术内公知的。该药物组合物可适于口服或非肠道使用并可以片剂、胶囊、栓剂、溶液、混悬剂等形式给予患者。
本发明的化合物例如可与惰性稀释剂或与食用载体一起口服给药。他们可包含在胶囊中或压成片剂。为了口服治疗给药，化合物可与赋形剂混合并可使用片剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬液、糖浆、糯米纸囊剂、咀嚼胶剂等的形式。这些制剂应当至少含有4％的本发明化合物(活性组分)但可根据具体的剂型来变化，通常在制剂重量的4％到约70％之间。组合物中本发明化合物量会获得合适的剂量。本发明优选的组合物和制剂被制备成含有5.0—300毫克本发明化合物的口服剂量单位形式。
片剂、丸剂、胶囊、锭剂等也可含有一种或多种下列辅剂粘合剂如微晶纤维素、西黄耆胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如褐藻酸、Primogel，玉米淀粉等；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotex；glidants如胶体二氧化硅；且可加入甜味剂如蔗糖或糖精或香味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙子香味剂。当剂量单位形式为胶囊时，除含有上述类型的材料外，它还可含有液体载体如聚乙二烯或脂肪油。其它剂量单位形式可含有其它改善剂量单位物理形式的各种材料，如包衣材料。因此，片剂或丸剂可用糖、紫胶或其它肠溶性包衣材料。糖浆除含有本发明化合物外还可含有蔗糖甜味剂和某些防腐剂、染料和色素和香味剂。制备这些组合物中所使用的材料应当是药用纯的且在所使用的量下是无毒的。
为了非肠道治疗给药，本发明的化合物可混合成溶液或悬浮液。这些制剂应当至少含有0.1％的本发明的化合物，但可在制剂重量的0.1％和约50％之间变化。这些组合物中存在的本发明化合物的量将会获得合适的剂量。将本发明优选的组合物和制剂制备成含有5.0到100毫克本发明化合物的非肠道剂量单位。
溶液或混悬液也可包括一种或多种下列辅剂灭菌稀释剂如注射用水、盐水、混合油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、构橼酸盐或磷酸盐和张力调节剂如氯化钠或葡萄糖。非肠道制剂可包含在安瓿、玻璃或塑料制造的可随意使用的注射器或多剂量小瓶中。
作为拥有特定用途的任何基团的相关结构化合物，某些基团和构型在其最终使用中是优选的式I或II化合物。
关于取代基X，X为CF2的式I或II化合物通常是优选的。关于取代基R1和R2，R1和R2为Na的式I或II化合物通常是优选的。关于取代基A，A为1—氧代一法尼基的式I或II化合物通常是优选的。
以下列出式I或II的同族化合物，他们是本发明特别优选的具体化合物1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲酯；1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲酯；1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐；1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐；2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲酯；2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲酯；2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐；2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐；[(1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)甲基膦酸，二甲酯]次膦酸甲酯及相应酸的钠盐；[(1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)二氟甲基膦酸二甲酯]次膦酸甲酯和相应酸的钠盐；[(1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)二氟甲基膦酸二甲酯]次膦酸甲酯和相应酸的钠盐；[(1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)甲基膦酸二甲酯]次膦酸甲酯和相应酸的钠盐；[(2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)甲基膦酸二甲酯]次膦酸甲酯和相应酸的钠盐；[(2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)二氟甲基膦酸二甲酯]次膦酸甲酯和相应酸的钠盐；[(2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)二氟甲基膦酸二甲酯]次膦酸甲酯和相应酸的钠盐；[(2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基)甲基膦酸二甲酯]次膦酸甲酯和相应酸的钠盐。
权利要求
1.一种下式化合物 其中X为CCl2或CF2，R1和R2各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4且Z为未取代或具有1—3个选自C1-C4烷基、C1—C4烷氧基、卤素、CF3、OCF3、OH、CN、NO2和NH2的取代基取代的苯基或萘基；或可药用阳离子，和A为选自下面的基团 和 其中R3为含1—9双键的可饱和或不饱和的C1—C19烷基。
2.一种下式化合物 其中X为CH2，CCl2或CF2，Y为CH2或CF2，R1、R2和R3各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4且Z为未取代或1—3个选自C1—C4烷基、C1—C4烷氧基、卤素、CF3、OCF3、OH、CN、NO2和NH2的取代基取代的苯基或萘基；或可药的阳离子，和A为选自下面的基团 和 其中R4为含1—9双键的可饱和或不饱和的C1—C19烷基。
3.权利要求2的化合物，其中X为CF2。
4.权利要求3的化合物，其中R1和R2为可药用的阳离子。
5.权利要求4的化合物，其中A为基团
6.权利要求4的化合物，其中A为基团
7.权利要求1的化合物，其中X为CF2。
8.权利要求7的化合物，其中R1和R2为可药用的阳离子。
9.权利要求8的化合物，其中A为基团
10.权利要求9的化合物，其中A的基团
11.权利要求1的化合物，它是1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲酯。
12.权利要求1的化合物，它是1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二甲酯。
13.权利要求1的化合物，它是1，1—二氟—2—羟基—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐。
14.权利要求1的化合物，它是1，1—二氟—2—氧代—4，8，12—三甲基—3，7，11—十三碳三烯基膦酸二钠盐。
15.一种治疗癌症病人的方法，其包括给药病人抗癌治疗有效量的权利要求1或2的化合物。
16.一种治疗病毒感染病人的方法，其包括给药病人抗病毒治疗有效量的权利要求1或2的化合物。
17.一种控制癌症病人体内肿瘤生长的方法，其包括给药病人抗癌治疗有效量的权利要求1或2的化合物。
18.一种控制病毒感染病人体内感染病毒的方法，其包括给药病人抗病毒治疗有效量的权利要求1或2的化合物。
19.一种药物组合物，它含有治疗有效量的与一种或多种可药用载体或赋形剂混合或结合形式的下式化合物 其中X为CCl2或CF2，R1和R2各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4且Z为未取代或1到3个选自C1—C4烷基、C1—C4烷氧基、卤素、CF3、OCF3、OH、CN、NO2和NH2的取代基取代的苯基或萘基；或可药用阳离子，和A为选自下面的基团 和 其中R3为含1—9个双键的饱和或不饱和C1—C19烷基。
20.一种药物组合物，它含有治疗有效量的与一种或多种可药用载体或赋形剂混合或结合形式的下式化合物 其中X是CH2，CCl2或CF2，Y是CH2或CF2，R1、R2和R3各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4且Z为未取代或1—3个选自C1—C4烷基、C1—C4烷氧、卤素、CF3、OCF3、OH、CN、NO2和NH2的取代基取代的苯基或萘基；或可药用的阳离子，和A为选自下面的基团 和 其中R4为含1—9个双键的饱和或不饱和C1—C19烷基。
21.下式化合物制备治疗遭受肿瘤疾病患者的药物的用途 其中X为CCl2或CF2，R1和R2各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4且Z为未取代或1—3个选自C1—C4烷基、C1—C4烷氧基、卤原子、CF3、OCF3、OH、CN、NO2和NH2的取代基取代的苯基或萘基；或可药用阳离子，和A为选自下面的基团 和 其中R3为含1—9个双键的饱和或不饱和C1—C19烷基。
22.下式化合物制备治疗遭受肿瘤疾病患者的药物的用途 其中X为，CH2，CCl2或CF2，Y为CH2或CF2，R1、R2和R3各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4且Z为未取代或1—3个选自C1—C4烷基、C1—C4烷氧基、卤原子、CF3、OCF3、OH、CN、NO2和NH2的取代基取代的苯基或萘基；或可药用阳离子，且A为选自下面的基团 和 其中R4为含1—9个双键的饱和或不饱和C1—C19烷基。
23.下列化合物制备遭受病毒感染患者的药物的用途 其中X为CCl2或CF2，R1和R2各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4且Z为未取代或1—3个选自C1—C4烷基、C1—C4烷氧基、卤原子、CF3、OCF3、OH、CN、NO2和NH2的取代基取代的苯基或萘基；或可药用的阳离子，和A为选自下面的基团 其中R3为含1—9个双键的饱和或不饱和C1—C19烷基。
24.下列化合物制备治疗遭受病毒感染患者的药物的用途 其中X为CH2，CCl2或CF2，Y为CH2或CF2，R1、R2和R3各自独立地为H；C1—C4烷基；(CH2)n-Z，其中n为整数0，1，2，3或4且Z为未取代或1—3个选自C1—C4烷基、C1—C4烷氧基、卤原子、CF3、OCF3、OH、CN、NO2和NH2的取代基取代的苯基或萘基；或可药用的阳离子，和A为选自下面的基团 和 其中R4为含1—9个双键的饱和或不饱和C1—C19烷基。
全文摘要
本发明涉及某些法呢基蛋白质转移酶的抑制剂，它作为抗肿瘤剂是有用的。
文档编号C07F9/38GK1118166SQ94191274
公开日1996年3月6日 申请日期1994年1月24日 优先权日1993年2月23日
发明者D·M·斯特莫里克 申请人:默里尔多药物公司