专利名称：氨基糠醛的成分及使用方法
技术领域：
本发明为有关取代氨基酯化合物，以及从其中衍生类推出之此化合物之成份和制造、使用这些化合物的方法。
本研究工作部分以NIH的NIH/NIDDKD＃30-1-8410为研究基础。因为这些技术的转让，美国政府对本研究拥有权力。
胆固醇会抑制油酯膜上的酯肪酸链互相结合来防止细胞及组织分泌物的减少。(见Darnell.et al.，分子细胞生物学，科学美国书丛，纽约576-577(1986).胆固醇合成依据酵素媒介生物合成，其中限制酵素的是羟甲基戊二醯Co-A还原酶(以下称为HMG-Co-A还原酶)见Javitt美国专利号码4，427，668。此酵素在羟甲基戊二酸中催化了甲氢戊酸，一种胆固醇的先体。胆固醇的制造会因HMG-CoA还原酶的存在而降低。(见Goodman & Gilman，治疗的药学基础，第七版，Macmillan，New York841-843(1985)，以及Kandustsch及其他，“科学”201期201498(1978)。
胆固醇因其不可溶性，必需由载体来运输。最明显的载体就是低密度脂蛋白LDL。大部分细胞都制造特定承体来把LDL与细胞膜结合。因此胆固醇累积及合成能以干扰LDL结合的方式来调整。
胆固醇过度累积是很多疾病的主要病因，包括了动脉硬化，其中最严重一型为动脉粥样硬化，会使心血管壁不正常变硬，扩张。动脉硬化会导致脑血栓及梗塞，以及其它疾病如高血压、甲状腺机能不足、黄疸阻塞、糖尿病、多发性骨髓瘤及肝病等。(见，Merk手册，第十五版(1987))。虽然大家起初认为组织内胆固醇会调节本身的制造，但最近证据显示有些胆固醇前体及代谢物为限速酶HMG-CoA还原酶更有效的抑制体。这些有效抑制体被归类为“氧固醇”如25-羟基胆固醇及26-羟基胆固醇。后者为自然产生，也是HMG-CoA的抑制体。而26-氨基胆固醇也被发现为HMG-CoA还原酶更有效的抑制体。(见Javitt，美国专利号4，939，134)。
在肝及血浆胆固醇水平与HMG-CoA还原及LDL承体结合间并无可靠的关联。例如已知药物MEVINOLIN可抑制肝胆固醇的合成，却也同时增加HMG-CoA还原酶的数目。在此药出现后会较不活性，相信是去修改MEVINOLIN的立体构像。在细胞培养研究中，我们知道此药及其它药也能向上调整成纤维细胞及其它非肝细胞的LDL承体。
相反的，26-羟基胆固醇及26-氨基胆固醇被发现可抑制HMG-CoA还原酶在成纤维细胞中的活性及LDL的结合。随之降低细胞制造及累积胆固醇的速率。见Javitt及其他之“J.油脂研究”;26∶950∶954(1985)，以及Lorenzo及其他之“FEBS Letters”218∶77-80(1987);美国专利号4，939，134。
现在用来抑制胆固醇合成的药物会对肝造成冲击，造成肝LDL承体的向上调整(增加肝吸收胆固醇量来减低血清中胆固醇之水平)或抑制HMG-CoA还原来降低胆固醇的制造。
例如，26-羟基胆固醇及26-氨基胆固醇被发现可抑制HMG-CoA还原酶在成纤维细胞中的活性及LDL的结合。随之降低细胞制造及累积胆固醇的速率。见Javitt及其他之“J.油脂研究”;26950-954(1985)，以及Lorenzo及其他之“FEBS Letters”21877-80(1987);及美国专利号码4，939，134。
具代表性的药为MEVINOLIN及消胆铵(Cholesterol)。前者是HMG-CoA还原酶的变构抑制体以抑制肝胆固醇合成来达到调整的效果，增加肝LDL承体的活性使肝吸收胆固醇降低血浆胆固醇。后者增加从肝胆固醇合成胆汁酸的需要，造成LDL承体的向上调整。
像消胆胺等药并不能被小肠吸收且会与很多治疗心血管疾病的药及脂溶性维生素A，D，E，K结合。在服用消胆胺前后都必须服用这些药及维生素以免这些药及维生素的效果流失。同时，最好有另一种药可系统性的发挥效用而不会消耗同时服用的药及脂溶性维生素的效果。见Goodman and Gilman，Supra，834-847。
地奥配质(Diosgenin)，一自然植物固醇，为许多合成固醇的起始原料。除了地奥配质基本的四环结构外，还有第五环为呋喃环及第六环螺酮素醇环。所有用来制药，由地奥配质制造出的类固醇都要消除第五及第六环及缩短碳氢化合物侧链。
Julian U.S.专利号3，019，220发明皂角甘配基(sapogenins)，包括地奥配质(双甘配基)从植物中分离出来。Staba，美国专利号码3，628，287，发明了为制造与分离地奥配质的组织培养法以便皮质类固醇荷尔蒙及其衍生物进一步的合成。但Staba并无提供任何特定由地奥配质制造出之合成类固醇。Eyssen，美国专利号码3，640，848发明了德尔塔类固醇微生物降低法来制造5，6-双氢-5-β产物。Jeger美国专利号码3，723，418发明了17β羟基-雄烷产物，其方法为以三烷锡处理α，β-氧化-类固醇酮基。Pettit及Bowyer在J.Amer.CHem.Soc.25∶84-86(1960)发表了地奥配质第六环的打开以形成3β-丙酮-5-糠酸烯-26-乙二胺硫同素醇。但这些化合物并不被建议或都导用来制作药物。其它被发明的氨基化合物也未被建议用来制药。一糠醛烯化合物，未取代的26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇可能由Tschesche及其他之“植物化学”14∶435∶438(1975)中发表出;但没有任何它可用在抑制吸收，累积胆固醇的学说或建议。
根据上述叙述，一种可系统性抗胆固醇及高脂蛋白且不会造成已知抗胆固醇或清除肠内胆固醇药物所造成不良副作用的药物被强烈需求著。
本发明主要目的为提供一种克服其它发明不足的方法。
本发明另一目的为提供崭新26-氨基糠醛烯化合物而非未取代的26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇的配方及方法来抑制胆固醇在细胞与组织的合成、吸收及累积。不论在原处、活的有机体内或试管内都可发挥此功能。
本发明再一目的为提供26-氨基糠醛烯化合物的衍生物3β醇。
本发明另一目的为降低不正常高水平的血清胆固醇。
本发明另一目的为提供治疗如动脉粥样硬化等其它因过度吸收、累积、合成胆固醇而引起的疾病的配方及方法。
本发明再一目的为提供一种能调整胆固醇在哺乳动物及鸟内合成吸收、累积的配方及方法。利用施用一可有效抑制胆固醇的氨基糠醛烯及药物可接受的载体。
本发明再一目的为提供一种根据公式(Ⅰ)包括26-氨基糠醛烯的药物配制方法。
根据本发明的观念，氨基糠醛烯化合物根据公式(Ⅰ)来组合。
其中(a)R1为羟基或酮，当R1为酮时C3与C4或C4与C5间至少有一对会组成双键，当R1为羟基时，C5与C6间会组成双键;(b)R2为硫、氧或氮;及(c)R3是C1-C3醇、醛或酸、或药理可接收的酯、醚、硫酸盐、碳酸盐、乙四醇醛、环糊精化合物等。这些化合物可有效抑制动物细胞及组织对胆固醇的吸收、合成或累积。
其中R1可为羟基，R2可为氧，R5可从甲基中选择，如甲醇、甲醛、甲酸。
根据公式(Ⅰ)化合物能在取代26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇及取代及未取代26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇、26-氨基-糠醛-4-键-3β-酮、26-氨基-糠醛-4，6-双键-3β-酮。
其中26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇较好。
根据本发明另一观念，一种药物配方可被提出，包括了公式(Ⅰ)的化合物或者是药理可接受的酯、醚、硫酸盐、碳酸盐、乙四醇醛或盐及一个药物可接收的载体。
根据本发明另一观念，更进一步的药物化学配方包括了由强心甘利尿剂、抗高血压药、心绞痛药、抗凝血药及降低油脂剂中选择出的一种药物。
根据本发明更进一步的观念，在动物体内细胞组织内降低胆固醇吸收、合成、累积速率以抑制胆固醇的一种方法可使用公式(Ⅰ)的化合物来配成有效数量的药物配方。数量为0.1至3mg/Kg。3mg/Kg，每二十四小时的使用数量最好为0.15至1mg/Kg。适用此药物的为哺乳动物，且最好为人。
本发明另一优点为提供治疗人类或物动细胞及组织因胆固醇提高合成、吸收或累积而生病的方法。这个方法为使用根据公式(Ⅰ)所调配成有效数量的药物成份抑制胆固醇合成、吸收及累积以治疗动脉硬化、黄疸、糖尿病、多发性骨髓瘤及肝阻塞等疾病。
本发明有关取代及未取代26-氨基-取代糠醛烯。除此之外，本发明还包含了制造及使用这些化合物的成份及方法。这些化合物可提供动物及人体内细胞及组织抗胆固醇活动的功能。
这个发明与过去类似发胆所教导或建议的相反，自然产生的胆固醇型类固醇与合成类似物并不一定会发生抑制胆固醇合成的生物活动。同时本发明亦发现要至制造一连串有效生物类固醇并不需要除去地奥配质第五环。本发明的26-氨基糠醛烯便是如此。
因此，本发明的26-氨基糠醛烯化合物有著有效的治疗特质。
本发明的26-氨基糠醛烯化合物包括了根据公式(Ⅰ)所组成的化合物
其中(a)R1为羟基或酮。当R1为酮时C3与C4或C4与C5间有一对会组成双键。R1是羟基时C5及C6间也会组成一个双键;
(b)R2为硫、氧或氮;及(c)R3是C1-C3醇、醛或酸、或药理可接收的酯、醚、硫酸盐、碳酸盐、乙四醇醛、环糊精化合物等。这些化合物可有效抑制动物细胞及组织对胆固醇的吸收、合成或累积。
本发明的26-氨基糠醛烯化合物也可包括单体或双酯、硫酸盐、碳酸盐、乙四醇醛或其它该26-氨基糠醛烯的氟化取代物，此取代物可由已知的药理科技方法步骤根据本规格来配制。见U.S.药典，国家药典，22版(1989)及Parrott的“药学科技”(1970)。
根据本发明，C3-C5及C5-C6包含的环可为环己烷或环己烯，其中(a)R1是羟基或酮。当R1为酮时，C3及C4间或C4及C5间至少会有一对会组成双键。当R1是羟基时C5及C6间也会组成一个双键;(b)当R2是硫、氧或氮及(c)R3是C1-C3醇、醛或酸或药理化学可接受的酯、醚、硫酸盐、碳酸盐、乙四醇醛、环糊精化合物或盐会组成氨基糠醛-5-烯、氨基糠醛-4-烯及氨基醛酸-4，6-双烯。
本发明的氨基糠酸烯同时也包括3-酮及3-羟烷基-取代氨基糠醛烯，其中27-甲基群可为醇、醛或酸，也就是R3为C1-C3烷基、醇、醛或酸。除此之外，本发明的氨基糠酸烯能包括拥有取代28-甲基或28-乙基群的26-氨基糠醛烯化合物，其中R3是一个C2-C3甲基、醇、醛或酸，包括了乙基或丙基醇、醛或酸。最好R1是羟基，这样C5与C6就能像在氨基糠醛-5-烯-3-醇一样，组成一个双键。
除此之外，本发明的26-氨基糠醛烯包括了硫及氮在杂环中取代氧，其中R2最好为氧，但亦可为硫或氮。
根据公式(Ⅰ)，最佳的化合物能从烷基取代26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇、未取代或烷基取代26-氨基-糠醛-5-键-3α-醇取代或未取代氨基-糠醛-4-键-3-酮、及未取代或烷基取代26-氨基-糠醛-4，6-双键-3-酮中选择。该化合物能包括，但不被限制由26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇、26-氨基-糠醛-5-键-α-醇、26-氨基-糠醛-5-键-27，3β-双醇、26-氨基-糠醛-5-键-27，3β-双醇、26-氨基-糠醛-5-键-27-醇-3β-醇、26-氨基-糠醛-5-键-27-醇-3α-醇、26-氨基-糠醛-5-键-27-碳酸基-3β-醇、26-氨基-糠醛-5-键-27-碳酸基-3α-醇、28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇、28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-3α-醇、28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-28，3β-双醇、28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-28，3α-双醇、28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-28-乙醇-3β-醇、28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-28-乙醇-3α-醇、28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-28-碳酸基-3β-醇、
28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-28-碳酸基-3α-醇、28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇、28-甲基，26-氨基-糠醛-5-键-3α-醇、28-乙基，26-氨基-糠醛-5-键-29，3β-双醇、28-乙基，26-氨基-糠醛-5-键-29，3α-双醇、28-乙基，26-氨基-糠醛-5-键-29-乙醇-3β-醇、28-乙基，26-氨基-糠醛-5-键-29-乙醇-3α-醇、28-乙基，26-氨基-糠醛-5-键-29-碳酸基-3β-醇、28-乙基，26-氨基-糠醛-5-键-29-碳酸基-3α-醇、26-氨基-糠醛-4-键-3-酮、26-氨基-糠醛-4-键-27-醇-3-酮、26-氨基-糠醛-4-键-27-乙醇-3-酮、26-氨基-糠醛-4-键-27-碳酸基-3-酮、28-甲基-，26-氨基-糠醛-4-键-3-酮、28-甲基-，26-氨基-糠醛-4-键-28-醇-3-酮、28-甲基-，26-氨基-糠醛-4-键-28-乙醇-3-酮、28-甲基-，26-氨基-糠醛-4-键-28-碳酸基-3-酮、28-乙基-，26-氨基-糠醛-4-键-3-酮、28-乙基-，26-氨基-糠醛-4-键-29-醇-3-酮、28-乙基-，26-氨基-糠醛-4-键-29-乙醇-3-酮、28-乙基-，26-氨基-糠醛-4-键-29-碳酸基-3-酮、26-氨基-糠醛-4，6-双键-3-酮、26-氨基-糠醛-4，6-双键-27-醇-3-酮、26-氨基-糠醛-4，6-双键-27-乙醇-3-酮、
26-氨基-糠醛-4，6-双键-27-碳酸基-3-酮、28-甲基，26-氨基-糠醛-4，6-双键-3-酮、28-甲基-，26-氨基-糠醛-4，6-双键-28-醇-3-酮、28-甲基-，26-氨基-糠醛-4，6-双键-28-乙醇-3-酮、28-甲基-，26-氨基-糠醛-4，6-双键-28-碳酸基-3-酮、28-乙基-，26-氨基-糠醛-4，6-双键-3-酮、28-乙基-，26-氨基-糠醛-4，6-双键-29-醇-3-酮、28-乙基-，26-氨基-糠醛-4，6-双键-29-乙醇-3-酮、28-乙基-，26-氨基-糠醛-4，6-双键-29-碳酸基-3-酮及类似物，衍生物中选出。其中在C16及C22间的杂环氧被硫及氮所取代。
根据公式(Ⅰ)该化合物结构与压制HMG-CoA还原酶的氧固醇很类似，但在生物特性方面却相当不一样，例如胆固醇生物合成的抑制。该糠醛烯化合物对抑制胆固醇吸收、累积及合成方面比天然氧合或羟基类固醇更能发挥意外的效果。不管是在原处或在活的有机体内。
不像其他化合物主要影响肝内胆固醇合成来降低血浆胆固醇，本发明的26-氨基糠醛烯化合物能使细胞不会吸收、累积及合成胆固醇。同时也能单独或与其它药物一起作为医疗用以治疗与胆固醇过多的疾病。例如26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇可抑制人体肝细胞胆固醇的再合成。
本发现在类似发现中也可被证明，胆固醇侧链的硫取代比起-OH及-NH2会造成胆固醇抑制的降低。明显的，硫代族(-SH)比起羟基及氨基族较不极化。另一解释为胆固醇抑制体化合物的受体部位对质子受体要有较高的亲和性。如NH2要比OH或SH(酸)来的有亲和性。
公式(Ⅰ)的化合物能以平常的实验用已知的方法就能合成出来。
如类固醇末端碳的取代能以调配26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇步骤中降低氧化铝锂的方法来达成。根据本文所呈现之指导及学说一位普通的合成化学家即可利用可轻易取得的原料及媒介来调配出各种取代化合物。
下列为根据本发明取得化合物的代表方法地奥配质中根据公式(Ⅰ)取代或未取代26-氨基糠醛烯的合成1.26-羟基-糠醛烯-3-醇的构成AlCl3Diosgenin+LiAlH4→26-羟基-糠醛烯-3-醇2.将3-醇如醋酸盐保护a.26-羟基-糠醛烯-3-醇+三苯甲游醛氯化物(三苯甲基)→26-氧-三苯甲基-糠酸烯-3-醇b.26-氧-三苯甲基-糠醛烯-3-醇+乙酸酐→26-氧-三苯甲基-糠醛烯-3-醋酸盐c.26-氧-三苯甲基-糠醛烯-3-醋酸盐+HCL/乙醇→26-羟基-糠醛烯-3-醋酸盐3.26-氨基的构成a.26-羟基-糠酸烯-3-醋酸盐+Prosylchloride→26-甲苯磺酰-糠醛烯-3-醋酸盐DMFb.26-甲苯磺酰-糠酸烯-3-醋酸+三氢化钠-醋酸盐→26-叠氮基-糠酸烯-3-醋酸盐c.26-叠氮基-糠酸烯-3-醋酸盐+LiAlH4→26-氨基-糠酸烯-3-醋酸盐4.醋酸水解作用以形成3-醇甲醇a.26-氨基-糠醛烯-3-醋酸盐→四氘化钾26-氨基-糠醛烯-3-醇
26-氨基糠酸烯-3-酮在上述26-氨基-糠醛烯-3-醇的合成中转换出来。这种转换可用已知的方法来形成，如使用氯化铝、如26-氨基-糠醛-4-烯-3-酮或26-氨基-糠醛-4，6-双烯-3-酮。
除此之外，上述组合亦可加入额外的羟基、醛、酸(如27-，28-或29-OH，-醛或碳酸基)或被保护的烷基族(如醋酸)或未被保护的烷基族(如甲醇/KOH)，就像上述的3-醇，或亦可以已知的方法以例行的实验方法使其可选择性被保护或不被保护。如27-，28-，或29-酸取代反应能与乙醇反应形成保护群。
根据化式(Ⅰ)，其它已知之步骤亦可用来合成26-氨基糠醛烯化合物。此方法可与其它已知方法结合来制造及使用化合物。
根据公式(Ⅰ)，化合物如26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇可抑制胆固醇的吸收、累积及合成。此化合物先为LDL承体向下调整化合物，然后在成为限速酶HMG-CoA还原酶的抑制体。理论上在末端脂族碳上氨基族的生物等位取代，以及有五个碳侧链的固醇的N-26位置能增加对参与制造胆固醇生物合成途径的细胞中氧固醇载体蛋白质反应的能力。
实验证明其他氧化固醇会经由一独立于HMG-CoA还原活动外之有机体向下调整DNA合成及细胞成长。根据公式(Ⅰ)化合物如26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇可活动或在原药物施用。
根据本发明之公式(Ⅰ)，化合物可为纯化合物、或单体及二酯化衍生物及其它药物化学可接受衍生物，如单体及双醚，及特别与环糊精复合之复合物，其中2-羟丙基-β-环糊精及2-羟丙基-γ-环糊精较佳。环糊精-氨基糠醛烯复合物可以加入20-60%水溶液环糊精进入一或多个本发明之26-氨基糠醛烯来制造出来，并将混合过程持续72小时。在24小时后，该氨基糠醛烯分子已部分被环糊精分子环绕。该复合物是最大的可溶性约为5-30mg/ml的氨基糠酸烯的水溶液。浓度根据环糊精、氨基糠醛烯及溶解情况而决定。
用在该26-氨基糠醛烯的环糊精必须有足够的溶解度以便施用;维持有效抑制胆固醇的程度以便随时被调配;维持有效抑制胆固醇的活动。根据公式(Ⅰ)，可以20-60%的环葡聚糠水溶液与26-氨基糠醛烯化合物混合，让溶解持续12-72小时直到环葡聚糠分子充分与公式(Ⅰ)之化合物分子结合，此溶解必需在室温(如18-28℃)与40℃间进行。
例如，根据公式(Ⅰ)，26-氨基-糠醛烯-5-键-3β-醇可与2-羟丙基-β-环糊精在室温39℃下溶成20mg/ml45%的水溶液。环糊精可为天然或化学合成环糊精。天然环糊精包括了α-β，γ-环糊精，化学合成环糊精包括了甲基环糊精、羟乙基环糊精、2-羟丙基环糊精、葡糖基环糊精及麦糖基环糊精。其中较佳成份为2-羟丙基-β-及2-羟丙基-γ-环葡聚糖，更佳的成份为2-羟丙基-β-环葡聚糖。环葡聚糖可轻易以已知方法或经由商业途径来取得。
除此之外，环糊精、天然脂肪酸、或其它有机或无机酯能以已知的药物化学可接受取代物来制造，例如硫酸盐、碳酸盐及葡糖醛酸。酯化或醚化可在3-或26-，27-，28-及29-位置发生。芳香族羟基及/或烷基醚，如甲基、乙基或环状等位基团(如环戊基醚)亦可用在本发明中。
更进一步来说，酸盐及其它药物化学可接受取代物亦可被使用。本发明的化合物必须维持有效的单位剂量以便引起需要的抑制胆固醇效果。不管是在试管内、在原处或在活的有机体内。单位剂量的调配可以一对此学说领域熟悉的人来决定。
单位剂量的决定需依照需求的胆固醇抑制程度。适当本发明的药物化合物不但可解决因胆固醇而引起的疾病且不会造成无效的负担。
根据本发明公式(Ⅰ)，该化合物施用量最好每天0.1-3.0mg/kg。举例来说，口服剂量最好每天0.1-2mg/kg、更佳的每天服用量为0.2-0.6mg/kg、0.7-1.2mg/kg、1.3-1.8mg/kg等。口服剂量必须要比静脉注射剂量高，因为有些会因消化系统吸收而损失。肠胃外施用量应在0.1至3mg/kg间，更佳的每天施用量为0.2至0.3mg/kg、0.4g到0.7mg/kg、0.8-1.2mg/kg、1.4-1.7mg/kg、2.0-2.5mg/kg或2.6-2.9mg/kg。真皮施用最好在0.1-2.0mg/kg，更佳的施用量为0.15-0.3mg/kg、0.5-0.8mg/kg或1.0-1.5mg/kg。
各类精确施用剂量要依据公式(Ⅰ)所采的化合物为何及抑制胆固醇的程度为何、病人的体型、病人的情况、同时服用的药及它们的副作用为何等。可由熟悉的医护人员来判断决定。
本发明的药理化学配方可适用于动物、鸟类以及人类，如咬齿动物、家畜、灵长类、马、狗、猫及人。
本发明药理化学配制可为固体或液体或为注射液，与最适当的药物载体结合成颗粒、胶囊、口服液、静脉及肠胃外注射剂等。本发明最好以口服液或静脉葡萄糖溶液施用，使用传统的稀释液与赋形剂其中26-氨基糠醛烯和环糊精溶解在一起。
静脉及肠胃外施用的成份可与传统的注射液结合在一起，如杀菌无热原水、环糊精、杀菌无过氧化物乙基油酸盐、干燥乙醇或丙烯乙二醇等。传统药物佐剂如稳定剂、溶解剂与缓冲剂如环糊精、乙醇，复合形成物质如乙烯二胺四乙酸、酒石酸盐及柠檬酸盐缓冲，及高分子聚合物如聚氧化乙烯加上环糊精以调整粘度，其中2-羟丙基-β-及2-羟丙基-r-环糊精为较佳之成份。环糊精可以20-60%环糊精水溶液包含0.1-30mg/ml的稳定溶解氨基糠醛烯，该溶液在被施用时需被稀释到适当的剂量。
其它载体及稀释物包括了蛋白素及或其它血浆蛋白成份如低密度脂蛋白、高密度脂蛋白及其他与血清蛋白质结合的脂及脂蛋白。这些脂类包括磷脂酰胆碱、磷脂酰氨酸、磷脂酰乙醇胺及中性脂类如甘油三酯。脂载体也包括生育酚及视黄酸。
本发明可组成口服配方，其中包括了一或更多生理相容的载体或赋形剂，可为固体或液体。如果需要的话，传统结合的成份亦可加入本配方如糖浆、刺洋槐、白明胶、山梨醇、黄氏胶或一氮伍环等。过滤物如乳糖、甘露醇、淀粉、亚磷酸氯钙等;润滑物如十八酸盐镁，高分子量聚合物如聚乙二醇，高分子量油脂酸如十八酸或硅，分解质如淀粉浆，及湿润物质如钠十二烷基硫酸盐。
口服成份可以各种形式存在，颗粒、胶囊、锭片、溶液或乳液。或在服用前需喝水或其它液体的干燥形式。亦可加入香味、甜味物或保存剂如甲基或烷基P-羟基苯甲酸盐;悬浮物质如清凉茶醇、葡糖或其它糖浆、甲基、羟甲基、羧甲基纤维素或白明胶;乳化剂如卵磷脂或脱水山梨醇等。浓缩口服化合物最好为20-60%的环糊精水溶液包含本发明之稳定氨基糠醛烯化合物0.2-30mg/ml此溶液在服用前需稀释至适量剂量。无水份配方可包含食用油如鱼肝油及蔬菜油。这些液体配方可用胶囊包起成一单位剂量。
本发明亦可以气溶胶或较膏形式来施用。
本发明药物配方也能与活性成份合并成了胶质载体，如质脂体。质脂体科技在本领域非常有名，Allison及其他在“自然252”252-254(1974)及Dancy及其他在“免疫学期刊.120”中都有叙述。
活动靶囊可做为本发明活性成份的载体。本发明另一功能为可把活性成份以持续释放的形式与一适合聚合体结合。根据公式(Ⅰ)聚合体系统，在时间依据方式下，对传送药物成份非常有用。包括了皮下储存囊植入以释放类固醇来延长时间，及皮下植入体或微滴注射如丙交酯-糖甘共聚物及聚乙酸内脂。要利用该聚合体系统，环糊精是最佳选择，因为其具有适当的溶解性及无毒性。2-羟基-β-环糊精及2-羟基-r-环糊精则为最佳的选择。
熟悉的调配者很容易就可明了本发明可与其他药物或成份结合或组成以达到降低胆固醇，治疗相关疾病如动脉硬化、高血压、甲状腺机能失调、肝阻塞等疾病。
所谓结合即为本发明可先比其他药物先服用，或者亦可先服用其它药物如心脏糖甘、抗高血压药、利尿剂、降脂药等。如何令这些药物与本发明联合使用，一个普通有经验者在学说与指导为基础的例行实验中即可了解。见Macleod及其他在“医药学原理”(1980)、Goodman及Gilman之“治疗的药学基础”(1980)、Ewy及Bressler的“心血管药物及心藏病处理”(1980)中都有详尽说明作为本发明之参考。
例一氨基糠醛烯的调配26-氨基-5-键-3β-醇可经由降低地奥配质的氢化铝锂，26-羟基族的取代及下列已知合成法之步骤来配制出来。从地奥配质中合成出26-氨基-糠醛-5-烯-3β-醇1.26-羟基-糠醛-5-烯-3β-醇的构成AlCl3Diosgenin LAH→26-羟基-糠醛-5-烯-3β-醇2.将3β-醇如醋酸盐保护a.26-羟基-糠醛-5-烯-3β-醇+三苯甲游醛氯化物(三苯甲基)→26-氧-三苯甲基-糠醛-5-烯-3β-醇b.26-氧-三苯甲基-糠醛-5-烯-3-醇+乙酸酐→26-氧-三苯甲基-糠醛-5-烯-3-醋酸盐c.26-氧-三苯甲基-糠醛-5-烯-3-醋酸盐+HCL/乙醇→26-羟基-糠醛-5-烯-3-醋酸盐
3.26-氨基的构成a.26-羟基-糠酸-5-烯-3-醋酸盐+Prosylchloride→26-甲苯磺酰-糠酸-5-烯-3-醋酸盐 DMFb.26-甲苯磺酰-糠酸-5-烯-3-醋酸盐+三氢化钠-醋酸盐→26-叠氮基-糠醛-5-烯-3-醋酸盐c.26-叠氮基-糠醛-5-烯-3-醋酸盐+LiAlH4→26-氨基-糠醛-5-烯-3-醋酸盐4.醋酸水解作用以形成3β-醇甲醇a.26-氨基-糠醛-5-烯-3-醋酸盐→KO426-氨基-糠醛-5-烯-3β醇解冻点是由Thomas-Hoover毛细管解冻点决定，且不可改变。NMR光谱在Nicolet QE-300分光计上。IR光谱则由Mattesonpolaris FT-IR仪器上取得。
26-羟基糠醛-5-烯-3β-醇是由地奥配质中降低氢化铝锂而取得，随后3β-醇的醋酸盐形成与三苯甲基反应而形成26-氧-三苯甲基-糠醛-5-烯-3β-醇，而后26-氧-三苯甲基与醋酐反应形成26-氧-三苯甲基-糠醛-5-烯-3-醋酸再与3-醋酸盐HCL/乙醇反应而形成26-羟基-糠醛-5-烯-3-醋酸盐。
26-氨基-糠醛-5-烯-3-β醇是26-羟基-糠醛-5-烯-3-醋酸盐与丙基氯反应形成26-甲苯磺酰-糠醛-5-烯-3-醋酸盐后而形成。
26-甲苯磺酰糠醛烯-5-烯-3-醋酸盐(0.66mmol)在有1.5equiv三氮化钠及1ml水的25ml的DMF中溶解。此溶液在90度与100度间加热两小时，然后冷却到室温。旋转蒸发后产生26-叠氮基胆固醇3-醋酸盐的白色粉末(产率＞80%)，随后与乙醇再结晶产出白色腊质结晶。
在乙醚中把26-叠氮基糠醛-5-烯3-醋酸盐(100mg)中减少氢化铝锂(20mg，527mmol)会产出26-氨基糠醛-5-烯-3β-醇粉末，并经色层谱处理精制。
(三氯甲烷/乙醇/29%(W/V NH4OH，93∶7∶1))(m.p.149-152度)26-氨基糠醛-5-烯-3β-醇的精制是利用毛细孔气液色层分析法进行，使用Shimadzu 14-a，装配50米WCOT硅融合cp-sil-5-CB。其流动载体氦速率为1.5哩/分钟，起始温度为265℃，然后以每分钟1℃升至285°最后得到纯度高达96.4%的26-氨基糠醛-5-烯-3β-醇，整个洗提时间为23.742分钟例二以氨基糠醛烯来抑制胆固醇HepG2细胞是由宾州Wistar机构Barbara Knowles博士处得来，并可经商业途径取得。HepG2单细胞在T-75用后即弃Nunc烧瓶中包含10ml DMEM(Dulbecco′s Eagle′s Minium Essential Medium with Earl′s salts，pH7.4)加上10%(v/v)胎牛血清(FBS)及人类血浆，2%(v/v)非必需及必需氨基酸，1%(v/v)DMEM维生素，1%L-戊氨二酸(292ug/ml)，1%青霉素(100U/ml)-链霉素(100ug/ml)的培养基上培养。其环境为37℃，5%二氧化碳及95%空气的潮湿环境。培养基三至四天固定会被更换，细胞每七天就会传代一次(1∶3)。以上培养基成份主要由Gibco化学公司供应，亦可由其它商业来源如SIGMA及ALDRICH轻易取得。
实验用HepG2细胞融合了曾用Dulbecco PBS液清洗过的现成细胞层，与0.05-0.02%胰蛋白酶-EDTA离解，再用脱氧核糖核酸酶处理，再在同一条件中去核(3.0x10〈6〉)。实验用DMEM包含了25%(v/v)的D20，9%(v/v)去脂FBS，及1%的热失活FBS、青霉素-链霉素、必要及非必要氨基酸、L-戊氨二酸及20mM的HEPES肝瘤细胞被培养在包含25%D20及1%FBS的培养基以便在容许承体中介胆固醇的条件下重新决定胆固醇的合成。根据Easterman与Javitt及其它J.Lipid Res.26∶950-954(1985)，准备各种细胞的培养碟，26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇在氮中离解，每碟培养碟中都加入氮-二甲酰胺(DMF，每碟9ul，0.3%)。
所有胆固醇合成都会使用到D20作为15%的成长培养基。在此培养中，培养碟被置于冰上。培养基被移开，单层细胞体细胞被洗涤。该单层细胞体可用特弗龙店帚刮下，并与1ml的0.1N NaOH溶解。细胞有关放射性物可用下列分析法鉴定出。
胆固醇化验在96小时的培养后，培养基被移走，细胞以Dulbecco PBS来洗涤，并得到胰蛋白酵素/0.02%EDTA。此蛋白酵素的活性会被等量的大豆胰蛋白酵素抑制体消除，并将产生的细胞悬浮体500g施以离心作用五分钟。
游离胆固醇然后就可在Perkin-Elmer毛孔气液色层分离图中以g.l.c数量化。剩余的提炼物会被干燥以及以2%的乙醇KOH在80℃下皂化一小时。类固醇因此被再精炼出来，在甲硅烷基胆固醇酯被算出当作测定所有及游离胆固醇的差异后，所有的胆固醇就可被测出。
胆固醇实验结果显示在下列表中，表Ⅰ及表Ⅱ显示在HepG2细胞中抑制胆固醇合成的结果。
表Ⅰ26-氨基-糠醛烯对HepG2细胞培养中胆固醇合成的效果T-75烧瓶 全部细胞 氘化胆固醇胆固醇 蛋白质 比例 % 总计ug mg ug/mg ug控制(3) 84 2.65 31.7 40 34
糠醛-5-烯-3β,26-双醇(2) 84 2.75 30.5 37 3126-氨基-糠醛-5-烯-3β-醇(2) 74 2.73 27.1 34 2526-氨基胆固醇(2) 76 2.84 26.7 34 26()烧瓶数细胞以高密度培养;DMEM 450mg/dl葡萄糖加上10%6去脂FBS及包含总胆固醇＝200ug/5ml的人类血浆;实验时间七天;四天换一次培养基;总计10ml。
培养基包括15%的一氧化二氘;以便所有胆固醇合成都氘化。所有成份都分解在2-羟丙基-β-环糊精，最后浓缩为1uM的培养基。
表二抑制胆固醇合成的百分比糠醛-5-烯-3β,26-双醇 (34-31)×100/34=8.8%26-氨基-糠醛-5-烯-3β-醇 (34-25)×100/34=26.5%26-氨基胆固醇 (34-26)×100/34=24.0%这些数据显示26-氨基糠醛烯成份可为胆固醇合成有效的抑制体，它们可减低人体HepG2细胞的胆固醇重新合成。因此26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇似乎是胆固醇重新合成的最佳抑制物。
例三氨基糠醛烯的药物施用-药物成份包含26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇为稳定的水溶液，在45%2-羟丙基-β-环糊精水溶液中最大溶解性为20mg/ml。26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇，如例一般的被加入杀菌过浓度5%2-羟丙基-β-环糊精水溶液中以便获得最后20mg/ml的浓缩物。在施用前，浓缩物必须适当的去脂。本发明的氨基糠醛烯化合物最高可施用45mg/kg都不会有毒。
在心藏手术后，该20mg/ml化合物可加入1ml至1L的5%葡萄糖静脉注射液内，在二十四小时间静脉注入病体内(如1mg每小时，0.25-0.3mg/kg每天)。根据本发明，施用26-氨基糠醛烯化合物可抑制胆固醇吸收、合成、累积，因此本发明之药物可防止心血管在堆积胆固醇。
所有本文中摘用之参考，包括期刊文章、要点、出版品或相关之美国或外国专利或其他参考资料在本文章为参考之用，包括所有数据、表格数字等。任何已知方法、步骤都非为本发明之发现。
下列叙述将是本发明应用前人已知、被确认之学说、实验、观念所做出之最新具体发现。本文中之科学术语及措辞是为了叙述本发明的科学术语及措辞是为了叙述本发明知观念但不应被限定，那些出现在本发明的科学术语及措辞应由本领域熟练之士根据本文出现之学说及指导来传译。
权利要求
1.通式(Ⅰ)的糠醛化合物，它们不同于未取代26-氨基糠醛-5-键-3β-醇，
式(Ⅰ)中(a)R1是羟基或酮，当R1为酮时，C3、C4间或C4、C5间至少会有一对会组成双键；R1是羟基时C5及C6间也会组成一个双键；(b)R2是硫、氧或氮(c)R3是C1-C3醇、醛或酸或药理化学可接受的酯、醚、硫酸盐、碳酸盐、乙四醇醛、环糊精化合物或盐。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1为羟基。
3.根据权利要求2的化合物，其中R2为氧。
4.根据权利要求3的化合物，其中R5可由甲基、甲醇、甲醛及甲酸中选择出。
5.根据权利要求1的化合物，本发明化合物可由未取代26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇、取代或未取代26-氨基-糠醛-5-键-3α-醇取代或未取代26-氨基-糠醛-4-键-酮及取代或未取代26-氨基-糠醛-4，6-双键-3-酮中选出。
6.烷基取代26-氨基-糠醛-5-键-3β-醇。
7.一可降低胆固醇之药物配方，包含了权利要求1的化合物及药品可接受的载体。
8.根据权利要求7的药物配方，包括了一种从心配糖、抗甲状腺机能不足药、利尿药、抗高血压药、抗绞痛药、抗凝血药及降脂剂选择出的一种药物。
9.根据权利要求7的药物配方，包括了一与上述化合物结合的环糊精。
10.根据权利要求7的药物配方，其中该环糊精可由天然或化学环糊精中选出。
11.根据权利要求10所述之药物配方，其中化学改良环糊精可从甲基环糊精、羟乙基环糊精、2-羟丙基环糊精、葡糖基环糊精及麦糖基环糊精中选出。
12.根据权利要求11所述之药物配方，其中2-羟丙基环糊精是由2-羟丙基-β-环糊精及2-羟丙基-γ-环葡聚糖中选出。
13.一种可降低动物细胞及组织内胆固醇合成、累积速率的方法，包括了施用可有效抑制胆固醇数量的权利要求1所述之化合物或未取代26-氨基糠醛-5-键-3β-醇。
14.根据权利要求13的方法，其中药物的施用量为每天0.1到3.0mg/kg。
15.根据权利要求14的方法，其中药物的施用量亦可为每天0.15到1mg/kg。
16.根据权利要求13的方法，其中动物可为哺乳动物或鸟。
17.根据权利要求16的方法，其中哺乳动物为一个人。
18.一种治疗因胆固醇过度吸收、合成、累积而发病的病人之方法，包括了向其施用可有效抑制胆固醇吸收、合成、累积的权利要求7所述的药物配方。
19.根据权利要求18的方法，其中之疾病包括了动脉硬化、动脉粥样硬化、高血压、甲状腺机能不足、黄疸病、肾脏病、糖尿病、胰脏病、多发性骨髓瘤、肝阻塞等。
20.根据权利要求18的方法，其中药物配方包括了未取代26氨基糠醛-5-键-3β-醇。
全文摘要
26-氨基糠醛烯的制造配方及使用方法可根据式(I)形成。其中(a)R
文档编号C07J71/00GK1087091SQ9311671
公开日1994年5月25日 申请日期1993年8月21日 优先权日1992年8月21日
发明者N·B·杰维特 申请人:纽约大学