一种
‘
黄花’月见草组培苗去玻璃化的培养基及方法
技术领域
1.本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是涉及一种
‘
黄花’月见草组培苗去玻璃化的培养基及方法。


背景技术：

2.‘
黄花’月见草(学名：oenothera glazioviana mich.)是柳叶菜科月见草属植物，
‘
黄花’月见草源于栽培或野化于欧洲的一个杂交种，1860年由英国传布至各国园艺栽培。中国东北、华北、华东(含台湾)、西南常见栽培，并逸为野生。月见草整株可提取芳香化合物，种子榨油食用，是高档食用油，集油料、观赏、药材于一身的多功能植物。
3.植物组织培养是植物微体快繁的有效途径，但玻璃化是外植体在组织培养过程中常见的现象，属于植物组织培养三大难题之一。
‘
黄花’月见草组织培养过程中的玻璃化问题也十分严峻，亟待解决。
4.玻璃化现象是植物组织培养过程中常有的一种现象，细胞或组织呈现透明或半透明的水渍状，叶片皱缩且易碎，是一种过度水化现象。现有解决办法主要有降低6-ba浓度和增加培养固化剂(琼脂或植物凝胶)的浓度，但这些办法都不能完全杜绝玻璃化现象的发生，也不能从根本上挽救玻璃化组织。


技术实现要素：

5.针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种
‘
黄花’月见草组培苗去玻璃化的培养基及方法，本发明可直接用于
‘
黄花’月见草组培苗去玻璃化，效果显著。无需增加任何特殊培养成分，也不需要增加其它专用设备就可促使
‘
黄花’月见草玻璃化组培苗逆转成为正常幼苗。
6.本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：
7.一种
‘
黄花’月见草组培苗去玻璃化的培养基，以ms培养基为基础培养基，添加了植物生长调节剂(简称naa)和生物活性炭。
8.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述naa的浓度为1mg/l。
9.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：1mg/l所述naa的配制方法如下：
10.取50mg naa粉末溶于5ml 1mol/l naoh溶液，震荡完全溶解后，用蒸馏水定容至50ml，得到1mg/l naa。
11.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述培养基的配制方法包括如下步骤：
12.a1、取权利要求2所述的1mg/l naa 1000ul，与4.4g ms粉末和30g蔗糖一同溶于1l去离子水，搅拌均匀，用1mol/l naoh和1mol/l hcl调整ph至5.8，添加6g琼脂和2g生物活性炭粉末；
13.a2、121℃高温灭菌20min；
14.a3、灭菌完成后取出培养基，待培养基冷却后摇匀，无菌条件下分装培养基至灭菌
的空置的干燥组培瓶中，每个组培瓶50ml培养基，封口后常温保存。
15.一种
‘
黄花’月见草组培苗去玻璃化的方法，包括如下步骤：
16.s1、
‘
黄花’月见草玻璃化幼苗处理：
17.当正常培养的分化培养基上出现玻璃化的
‘
黄花’月见草玻璃化幼苗时，将该幼苗转移至权利要求1所述的培养基上进行组织培养，直至玻璃化组织恢复正常状态，期间若瓶内水份过多，可以更换组培瓶，操作同上；
18.s2、处理后的组培苗培养：
19.将步骤s1处理后恢复正常状态的
‘
黄花’月见组培苗在超净台内转移至伸长培养基或分化培养基上继代培养，5-8天后，原
‘
黄花’月见草玻璃化幼苗即可正常分化或伸长；
20.s3、如果经过步骤s2培养处理的去玻璃化
‘
黄花’月见草组培苗在继代培养过程中再次出现玻璃化现象，重复步骤s1和s2。
21.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在步骤s1中，培养条件为温度25℃，相对湿度为60％，光强为2500lx，光照时间为16h/d。
22.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在步骤s2中，所述分化培养基成分如下：4.4g ms，30g/l蔗糖，2mg/l 6ba，0.5mg naa，6g/l琼脂，余量为水，ph 5.8。
23.本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在步骤s2中，所述伸长培养基成分如下：4.4g ms，30g/l蔗糖，2mg/l 6ba，1mg/l 2,4-d，0.3mg naa，6g/l琼脂，余量为水，ph 5.8。
24.综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：
25.本发明针对
‘
黄花’月见草组织培养过程中产生的玻璃化组培苗能够有效去玻璃化的同时，无需增加任何特殊培养成分，也不需要增加其它专用设备，操作简便，效果显著。经过处理的
‘
黄花’月见草组培苗不仅可以有效去玻璃化恢复成正常状态，也能在原来的培养基中继续分化或伸长，最终形成完整植株。
附图说明
26.图1为本发明的玻璃化
‘
黄花’月见草组培苗处理过程状态显示图，其中：
27.a：玻璃化
‘
黄花’月见草幼苗；
28.b：去玻璃化
‘
黄花’月见草幼苗；
29.c：
‘
黄花’月见草组培生根苗。
具体实施方式
30.以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
31.本发明所用试剂耗材：
32.称量纸(上海泰坦科技股份有限公司，10
×
10cm)；
33.镊子(上海三友外科器材有限公司)；
34.ms培养基(青岛高科技工业园海博生物技术有限公司，货号hb8469-5)；
35.生物活性炭(上海泰坦科技股份有限公司，货号p1413341)；
36.naa粉末(上海泰坦科技股份有限公司，货号p1180598)；
37.琼脂(北京索莱宝科技有限公司，货号310c023)；
38.蔗糖(上海泰坦科技股份有限公司，货号p1718451)；
39.氢氧化钠naoh(国药集团化学试剂有限公司)；
40.盐酸hcl(国药集团化学试剂有限公司)；
41.ph酸度测定仪(上海仪电科学仪器股份有限公司，货号02220128)；
42.组培瓶(上海泰坦科技股份有限公司)；
43.为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。
44.在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其他方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
45.具体实施方式：
46.一种
‘
黄花’月见草组培苗去玻璃化的培养基，包括ms基本培养基+1mg/l naa+2g/l活性炭。
47.所述1mg/l naa的配制方法为：取50mg naa粉末溶于5ml 1mol/l naoh溶液，震荡完全溶解后，用蒸馏水定容至50ml，得到1mg/l naa。
48.1mol/l naoh的配制方法：40g naoh固体溶于400ml去离子水中，得到1m naoh溶液。
49.1mol/l hcl的配制方法：43ml 36％浓盐酸溶于467ml去离子水中，得到1mol/l hcl溶液。
50.所述培养基的配制方法：取1mg/l naa 1000ul，与2.37g ms粉末和30g蔗糖一同溶于1l去离子水，搅拌均匀，用1mol/l naoh和1mol/l hcl调整ph至5.8，添加6g琼脂和2g生物活性炭粉末；121℃高温灭菌20min；灭菌完成后取出培养基，待培养基冷却后摇匀，无菌条件下分装培养基至灭菌的空置的干燥组培瓶中，每个组培瓶50ml培养基，培养基凝固后，封口膜包裹组培瓶，常温黑暗保存。
51.一种
‘
黄花’月见草组培苗去玻璃化的方法，包括如下步骤：
52.s1、
‘
黄花’月见草组培苗处理：在超净工作台内将玻璃化组培苗与正常组培苗分离开来，转移至权利要求1所述的培养基上进行组织培养，直至玻璃化组织恢复正常状态，期间若瓶内水份过多，可以更换组培瓶；
53.s2、处理后的组培苗培养：将步骤s1处理后恢复正常状态的
‘
黄花’月见草组培苗在超净台内转移至分化培养基或伸长培养基上继代培养，5-8天后，即可正常分化或伸长；
54.s3、如果经过步骤s2培养处理的去玻璃化过程中再次出现玻璃化现象，重复步骤s1和s2。
55.步骤s1中，所述培养条件为温度25℃，相对湿度为60％，光强为2500lx，光照时间为16h/d。
56.步骤s2中，所述分化培养基成分为：4.4g ms+30g/l蔗糖+2mg/l 6ba+0.5mg naa+6g/l琼脂，余量为水，ph 5.8。
57.步骤s2中，所述伸长培养基成分为：4.4g ms+30g/l蔗糖+2mg/l 6ba+1mg/l 2,4-d+0.3mg naa+6g/l琼脂，余量为水，ph 5.8。
58.通过依次采用上述各个步骤才能使得玻璃化组培苗能够有效去玻璃化恢复成正
常状态，也能在原来的培养基中继续分化或伸长，最终形成完整植株。并且只有依次采用上述步骤和参数才能达到，上述参数都是申请人付出创造性劳动和经过无数次试验获得的，具有较好的经济推广前景。
59.实验证明，将玻璃化的
‘
黄花’月见草组培苗在本发明所述培养基中组织培养7天后，逆转为正常组织，并经过正常培养后可以形成完整植株。证明了该方法是真实有效的。
60.本发明的实施原理为：本发明针对
‘
黄花’月见草组织培养过程中产生的玻璃化组培苗能够有效去玻璃化的同时，无需增加任何特殊培养成分，也不需要增加其它专用设备，操作简便，效果显著。经过处理的
‘
黄花’月见草组培苗不仅可以有效去玻璃化恢复成正常状态，也能在原来的培养基中继续分化或伸长，最终形成完整植株。
61.本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。