一种诱导礁膜配子大量集中排放的方法
1.技术领域：本发明属于大型经济海藻育苗过程中生殖调控技术领域，具体涉及一种诱导礁膜配子大量集中排放的方法。
2.

背景技术：
礁膜monostroma nitidum是在我国东海与南海沿岸广泛分布的经济绿藻品种，属于石莼科礁膜属的一种。藻体膜状，长可达近20cm，生长在高、中潮带礁石上。礁膜营养丰富，可鲜食或洗净晒成干品，制成绿紫菜饼或酱；礁膜性味咸寒，具有清热化痰、利水解毒、软坚散结的功效；礁膜多糖具有抗凝血，抗病毒，抗肿瘤，抗氧化以及防x-射线辐射等多种生物学功能。在利益驱使和自然因素作用下，礁膜的自然资源已受到明显影响，资源有时近于枯竭，开展人工养殖是大势所趋。
3.我国对礁膜的相关研究起步较晚，基础生物学研究始于上世纪九十年代，研究了礁膜配子体、合子生长发育与生态因子的关系，礁膜形态学观察及分子鉴定，礁膜原生质体分离及培养等；栽培实践方面的研究于本世纪初开展，探究了室内规模化人工育苗、孢子体培育装置等。目前，我国在礁膜基础生理学方面的研究仍很薄弱，有关礁膜的人工栽培及人工育苗尚处于起始与实验阶段，与礁膜育苗相关的生殖调控等基础理论与技术尚十分缺乏。
4.目前，进行礁膜人工育苗的种藻来自野生成熟的礁膜，而在自然条件下，礁膜配子体的成熟季节性较强，且成熟不同步，存在成熟与不成熟、成熟面积大小不一等混杂现象，难以满足育苗生产上对成熟种藻量的需求，在实践中往往产生过度采捞的现象。
5.

技术实现要素：
为了解决上述问题，在不破坏成熟种藻资源的基础上，提高礁膜配子体成熟量及配子排放量，满足生产上对成熟种藻量的需求，本发明提供了一种诱导礁膜配子大量集中排放的方法，具体技术方案如下：一种诱导礁膜配子大量集中排放的方法，其步骤包括：（1）将未成熟、洁净、健壮的礁膜配子体投入采苗容器，所述采苗容器装有1/2体积的培养液，每升培养液投入配子体3.75
±
0.33g，所述培养液为消毒过滤的海水中添加6.4~16mg/l磷酸二氢钾；（2）在温度20℃、光照强度80 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d的条件下静置培养，每天定时搅动水体3次，每2天更换培养液1次；（3）连续培养9~10天，礁膜配子出现大量集中排放。
6.优选的，步骤（1）所述配子体是经过预处理的，所述预处理方法为采集野生或人工培育的未成熟、健壮的礁膜配子体，用消毒的手术剪刀将其边缘不整齐部位剪除，再用软毛笔在消毒过滤海水中刷洗上、下表面6次，在消毒过滤海水中暂养24h后去水处理。
7.优选的，所述暂养的条件为在温度20℃、光照强度60 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d条件下静置培养。
8.优选的，所述去水处理是将暂养后的礁膜配子体取出放于4层消毒医用纱布和消
毒滤纸上各吸水3次，使藻体不再有水印。
9.优选的，所述消毒过滤海水为盐度28~32，经孔径为48
µ
m的筛绢布过滤后于高压蒸汽灭菌锅中消毒、冷却至室温的海水。
10.优选的，所述海水中本底亚硝态氮含量为0.012
±
0.003mg/l，无机磷含量为0.077
±
0.003mg/l。
11.优选的，步骤（1）中所述磷酸二氢钾浓度为8mg/l。
12.优选的，步骤（2）中所述更换培养液，为更换温度20℃、磷酸二氢钾浓度相同的培养液。
13.优选的，所述采苗容器为白色塑料、无色玻璃容器或内铺白色瓷砖的水泥池。
14.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明在种藻数量一定情况下，对未成熟、健壮的礁膜配子体进行修剪、刷洗与暂养，通过改进培养液的成分，配合温度、光照条件、搅拌频率和换液频率等培养条件的改进，进行数天培养，使其以》10
10
个/l培养液、》10
10
个/g藻体的级别大量集中排放配子，节省了种藻用量，提高了种藻利用率，提高了配子产率和排放量，并且易操作，成本较低，可满足大规模育苗生产的需求。
15.具体实施方式：下面结合实施例，对本发明作进一步说明，但本发明不受实施例的限制。
16.实施例1：消毒过滤海水的制备：取海水若干，要求海水本底亚硝态氮含量为0.012
±
0.003mg/l，无机磷含量为0.077
±
0.003mg/l。经孔径为48
µ
m的筛绢布过滤后于高压蒸汽灭菌锅中消毒、冷却至室温，消毒过滤后海水的盐度为28~32，备用。
17.采集野生或人工培育的未成熟、健壮的礁膜配子体，用消毒的手术剪刀将其边缘不整齐部位剪除，再用软毛笔在消毒过滤海水中刷洗上、下表面6次。在消毒过滤海水中暂养24h，暂养条件为：在温度20℃、光照强度60 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d条件下静置培养。将经过暂养后的礁膜配子体取出放于4层消毒医用纱布和消毒滤纸上各吸水3次，使藻体不再有水印，得到未成熟、洁净、健壮的礁膜配子体。
18.将上述步骤中获得的未成熟、洁净、健壮的礁膜配子体投入白色塑料、无色玻璃或内铺白色瓷砖的水泥池等采苗容器，容器中装入1/2体积的培养液，培养液为消毒过滤的海水中添加8mg/l磷酸二氢钾，每升培养液投入配子体3.75
±
0.33g；在温度20℃、光照强度80 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d条件下静置培养，每天定时搅动水体3次，每2天更换培养液1次，连续培养10天后，礁膜配子出现大量集中排放，并持续2天，配子排放密度达到（8.96
±
0.36）
×
10
10
个/l，单位藻体排放配子数达到（2.93
±
0.12）
×
10
10
个/g。
19.实施例2：消毒过滤海水的制备：取海水若干，要求海水本底亚硝态氮含量为0.012
±
0.003mg/l，无机磷含量为0.077
±
0.003mg/l。经孔径为48
µ
m的筛绢布过滤后于高压蒸汽灭菌锅中消毒、冷却至室温，消毒过滤后海水的盐度为28~32，备用。
20.采集野生或人工培育的未成熟、健壮的礁膜配子体，用消毒的手术剪刀将其边缘不整齐部位剪除，再用软毛笔在消毒过滤海水中刷洗上、下表面6次。在消毒过滤海水中暂养24h，暂养条件为：在温度20℃、光照强度60 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d条件下静置培
养。将经过暂养后的礁膜配子体取出放于4层消毒医用纱布和消毒滤纸上各吸水3次，使藻体不再有水印，得到未成熟、洁净、健壮的礁膜配子体。
21.将上述步骤中获得的未成熟、洁净、健壮的礁膜配子体投入白色塑料、无色玻璃或内铺白色瓷砖的水泥池等采苗容器，容器中装入1/2体积的培养液，培养液为消毒过滤的海水中添加6.4mg/l磷酸二氢钾，每升培养液投入配子体3.75
±
0.33g；在温度20℃、光照强度80 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d条件下静置培养，每天定时搅动水体3次，每2天更换培养液1次，连续培养10天后，礁膜配子出现大量集中排放，并持续1天，配子排放密度达到(1.77
±
0.50)
×
109个/l，单位藻体排放配子数达到(7.75
±
0.98)
×
108个/g。
22.实施例3:消毒过滤海水的制备：取海水若干，要求海水本底亚硝态氮含量为0.012
±
0.003mg/l，无机磷含量为0.077
±
0.003mg/l。经孔径为48
µ
m的筛绢布过滤后于高压蒸汽灭菌锅中消毒、冷却至室温，消毒过滤后海水的盐度为28~32，备用。
23.采集野生或人工培育的未成熟、健壮的礁膜配子体，用消毒的手术剪刀将其边缘不整齐部位剪除，再用软毛笔在消毒过滤海水中刷洗上、下表面6次。在消毒过滤海水中暂养24h，暂养条件为：在温度20℃、光照强度60 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d条件下静置培养。将经过暂养后的礁膜配子体取出放于4层消毒医用纱布和消毒滤纸上各吸水3次，使藻体不再有水印，得到未成熟、洁净、健壮的礁膜配子体。
24.将上述步骤中获得的未成熟、洁净、健壮的礁膜配子体投入白色塑料、无色玻璃或内铺白色瓷砖的水泥池等采苗容器，容器中装入1/2体积的培养液，培养液为消毒过滤的海水中添加9.6mg/l磷酸二氢钾，每升培养液投入配子体3.75
±
0.33g；在温度20℃、光照强度80 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d条件下静置培养，每天定时搅动水体3次，每2天更换培养液1次，连续培养10天后，礁膜配子出现大量集中排放，并持续1天，配子排放密度达到(3.31
±
0.13)
×
109个/l，单位藻体排放配子数达到(1.40
±
0.36)
×
109个/g。
25.实施例4:消毒过滤海水的制备：取海水若干，要求海水本底亚硝态氮含量为0.012
±
0.003mg/l，无机磷含量为0.077
±
0.003mg/l。经孔径为48
µ
m的筛绢布过滤后于高压蒸汽灭菌锅中消毒、冷却至室温，消毒过滤后海水的盐度为28~32，备用。
26.采集野生或人工培育的未成熟、健壮的礁膜配子体，用消毒的手术剪刀将其边缘不整齐部位剪除，再用软毛笔在消毒过滤海水中刷洗上、下表面6次。在消毒过滤海水中暂养24h，暂养条件为：在温度20℃、光照强度60 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d条件下静置培养。将经过暂养后的礁膜配子体取出放于4层消毒医用纱布和消毒滤纸上各吸水3次，使藻体不再有水印，得到未成熟、洁净、健壮的礁膜配子体。
27.将上述步骤中获得的未成熟、洁净、健壮的礁膜配子体投入白色塑料、无色玻璃或内铺白色瓷砖的水泥池等采苗容器，容器中装入1/2体积的培养液，培养液为消毒过滤的海水中添加16mg/l磷酸二氢钾，每升培养液投入配子体3.75
±
0.33g；在温度20℃、光照强度80 μmol
·
m-2
s-1
、光周期12l：12d条件下静置培养，每天定时搅动水体3次，每2天更换培养液1次，连续培养9天后，礁膜配子出现大量集中排放，并持续1天，配子排放密度达到(5.73
±
1.12)
×
109个/l，单位藻体排放配子数达到(1.81
±
0.16)
×
109个/g。
28.表一实施例1~4的礁膜配子大量集中排放结果
从表一的数据可知，实施例1的培养条件下，配子大量集中排放持续时间最长，配子排放密度最大，单位藻体排放配子数最高，以》10
10
个/l培养液、》10
10
个/g藻体的级别大量集中排放配子。
29.以上所述，仅为本发明个别方案的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。