一种使鸡蛋中富集磷脂酰乙醇胺型dha的饲料添加剂，其制备方法和应用
技术领域
1.本发明涉及饲料添加剂及蛋鸡饲养技术领域，具体涉及一种使鸡蛋中富集磷脂酰乙醇胺型dha的饲料添加剂，该饲料添加剂的制备方法，及其在蛋鸡饲料中的应用。


背景技术：

2.二十二碳六烯酸，简称dha，由于其在大脑中的占比巨大，以及具有促进婴幼儿大脑发育的功能，因此dha被誉为脑黄金。dha除了对人类大脑有重要作用，还对视神经的发育以及免疫力的提升有着不可或缺的作用。而在当前市场上的dha补充物中，dha的类型却不尽统一，有乙酯型、甘油三酯型、磷脂型等，而磷脂型dha中包括磷脂酰胆碱型(卵磷脂型)dha和磷脂酰乙醇胺(脑磷脂性)dha。在脑部对dha的吸收和利用上，磷脂型dha》甘油三酯型dha》乙酯型dha，而磷脂型dha中，磷脂酰乙醇胺型dha的脑部利用效果要大于磷脂酰胆碱型dha。由于鸡蛋中富含磷脂，可通过鸡群的饲养调控手段，将磷脂酰乙醇胺型dha富集于鸡蛋中，为人类创造一款便捷、高效、精准补充脑部dha的营养食品。
3.虽然现有技术中已经存在通过调控蛋鸡的喂养方式得到dha鸡蛋，然而传统的dha鸡蛋生产存在如下问题：
4.(1)磷脂酰乙醇胺型dha含量较低，由于磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)结合的dha易通过血脑屏障，达到精准补充脑部dha的目的。但由于鸡群的饲料结构等原因，鸡蛋中富集的dha大部分为磷脂酰胆碱型，导致人们食用这种鸡蛋无法达到高效补脑的目的。
5.(2)dha纯度较低，将鸡蛋中富集dha有多种方式，其中在鸡群饲粮中添加如亚麻籽(油)、鱼油等易在鸡蛋中富集dha，但同时也会造成鸡蛋中的二十碳五烯酸(epa)含量过高，而epa被婴幼儿食用后，会转化为前列腺素，对婴幼儿的身体造成一定的影响，因此，epa含量高的鸡蛋不适用于母婴。
6.(3)磷脂酰乙醇胺型dha不稳定，在传统方法生产的dha鸡蛋中，由于磷脂酰乙醇胺型dha具有极强烈的还原性，因此极易被氧化，造成磷脂酰乙醇胺型dha在鸡蛋中出现不稳定的现象，导致其含量在鸡蛋中时高时低，甚至时有时无。
7.基于上述问题，需要提供一种能够使鸡蛋中磷脂酰乙醇胺型dha含量高，且epa含量低的饲料添加剂。
8.鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

9.本发明的第一目的在于提供一种使鸡蛋中富集磷脂酰乙醇胺型dha的饲料添加剂，其能够提高鸡蛋中的磷脂酰乙醇胺型dha含量，并具有低的epa 含量。
10.本发明的第二目的在于提供上述饲料添加剂的制备方法。
11.本发明的第三目的在于提供上述饲料添加剂在蛋鸡饲料中的应用。
12.为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
13.本发明涉及一种使鸡蛋中富集磷脂酰乙醇胺型dha的饲料添加剂，以重量份数计包括以下组分：定向纯化大豆磷脂7-14份、破壁裂殖壶菌粉5-12份、酵母硒0.5-1.2份、半胱氨酸2-6份。
14.加入上述组分的原理如下：鸡蛋包括蛋黄、蛋白和蛋壳，脂质主要存在于蛋黄中。在蛋黄形成的过程中，由卵母细胞不断累积白卵黄和黄卵黄，其中卵磷脂是卵黄的主要组成成分。卵磷脂中有超过75％的组成成分为磷脂酰胆碱，而磷脂酰乙醇胺的占比很低，导致在dha的富集过程中，其dha的主要存在形式为磷脂酰胆碱型dha。而磷脂酰乙醇胺型dha被誉为脑磷脂型dha，在人类大脑的沉积效率上出众，因此，获取高含量的磷脂酰乙醇胺型dha对于人类补充dha具有重要意义。本发明基于以上目的，使用的定向纯化大豆磷脂中富含磷脂酰乙醇胺大豆磷脂，破壁裂殖壶菌粉提供dha，酵母硒和半胱氨酸在鸡的体内能产生一定含量的谷胱甘肽过氧化物酶，保证磷脂酰乙醇胺和 dha充分结合，旨在稳定磷脂酰乙醇胺型dha的结构和含量，使其稳定富集于鸡蛋中。
15.优选地，所述饲料添加剂以重量份数计包括以下组分：定向纯化大豆磷脂 7-13份、破壁裂殖壶菌粉5-12份、酵母硒0.5-1.2份、半胱氨酸2-5份。
16.优选地，所述饲料添加剂以重量份数计包括以下组分：定向纯化大豆磷脂 9-12份、破壁裂殖壶菌粉7-11份、酵母硒0.6-1份、半胱氨酸2-4份。
17.优选地，所述饲料添加剂以重量份数计包括以下组分：定向纯化大豆磷脂 10-11份、破壁裂殖壶菌粉8-10份、酵母硒0.7-0.9份、半胱氨酸3-4份。
18.优选地，所述定向纯化大豆磷脂通过以下方法制备得到：向普通大豆磷脂粉中加入无水乙醇和氨水，反应结束后离心得到滤液，所述滤液冷冻干燥后得到所述定向纯化大豆磷脂。所述无水乙醇的作用为对磷脂酰乙醇胺进行纯化；所述氨水的作用为提供碱性环境，使大豆磷脂中的磷脂酰乙醇胺得到提纯。
19.优选地，所述无水乙醇、氨水与普通大豆磷脂粉的质量比为(17-20):(1-2):1，所述氨水的质量分数为20％。
20.优选地，所述反应温度为40-45℃，反应时间为45-60min。
21.在本发明的一个实施例中，所述定向纯化大豆磷脂通过以下方法制备得到：取1重量份普通大豆磷脂粉加入反应釜中，并加入17-20重量份的无水乙醇，以及1-2重量份质量浓度为20％的氨水，在45℃下搅拌反应45-60min。反应结束后以500
×
g离心15min得到滤液，将滤液在-20℃下冷冻干燥8-10h，得到富含磷脂酰乙醇胺的定向纯化大豆磷脂。
22.优选地，所述破壁裂殖壶菌粉通过以下方法制备得到：将裂殖壶菌藻种置于含有葡萄糖、酵母浸粉和苹果酸的水溶液中，进行发酵得到发酵液。其中葡萄糖的作用为提供碳源，酵母浸粉的作用为提供氮源，苹果酸的作用为提供还原剂。向所述发酵液中加入碱性蛋白酶进行菌体破壁，反应结束后离心得到固体物，烘干得到所述破壁裂殖壶菌粉。裂殖壶菌能够产生高含量的dha，但由于该菌具有细胞壁，通过破壁才能使dha充分释放，便于机体吸收。
23.优选地，所述水溶液中含有10-15％质量分数的葡萄糖、1-2％质量分数的酵母浸粉和0.5-1％质量分数的苹果酸。
24.优选地，所述发酵温度为20-25℃，发酵时间为120-150h。
25.优选地，所述碱性蛋白酶为丝氨酸蛋白酶，活性为35万-40万u/g，以发酵液质量为
100％计，碱性蛋白酶的加入量为0.1％-0.2％，破壁反应时间为2-3h。
26.在本发明的一个实施例中，所述破壁裂殖壶菌粉通过以下方法制备得到：取裂殖壶菌藻种置于含有10-15％质量分数的葡萄糖、1-2％质量分数的酵母浸粉、0.5-1％质量分数的苹果酸的水溶液中，在20-25℃下持续发酵120h得到发酵液。向发酵液中添加活性为35万-40万u/g的碱性蛋白酶0.1％-0.2％进行菌体破壁，搅拌混匀2-3h后，将得到的破壁液经500
×
g离心15min得到固体物。将固体物在70-80℃下烘干6-8h，得到所述破壁裂殖壶菌粉。
27.本发明还涉及所述使鸡蛋中富集磷脂酰乙醇胺型dha的饲料添加剂的制备方法，包括将所述定向纯化大豆磷脂、破壁裂殖壶菌粉、酵母硒和半胱氨酸混合后搅拌均匀，即得到所述饲料添加剂。由于上述原料均为粉剂，容易混合均匀，不同于现有技术采用裂殖壶藻油等油性物质，降低了制备难度。
28.本发明还涉及所述使鸡蛋中富集磷脂酰乙醇胺型dha的饲料添加剂的应用，包括在蛋鸡产蛋期，在包括玉米、豆粕和预混料的基础饲料中加入所述饲料添加剂。
29.优选地，以所述基础饲料的质量为100％计，所述饲料添加剂的加入量为 0.5-1.5％。
30.优选地，由所述饲料添加剂喂养的蛋鸡生产的鸡蛋中，磷脂酰乙醇胺型 dha的含量≥50mg/100g。
31.本发明的有益效果：
32.本发明提供了一种使鸡蛋中富集磷脂酰乙醇胺型dha的饲料添加剂，其含有定向纯化大豆磷脂、破壁裂殖壶菌粉、酵母硒和半胱氨酸。其中定向纯化大豆磷脂中富含磷脂酰乙醇胺大豆磷脂，裂殖壶菌提供dha，酵母硒和半胱氨酸在鸡的体内能产生一定含量的谷胱甘肽过氧化物酶，保证磷脂酰乙醇胺和 dha充分结合，旨在稳定磷脂酰乙醇胺型dha的结构和含量，使其稳定富集于鸡蛋中。
33.本发明还提供了所述饲料添加剂的制备方法，由于定向纯化大豆磷脂、破壁裂殖壶菌粉、酵母硒和半胱氨酸均为粉剂，容易混合均匀，不同于现有技术采用裂殖壶藻油等油性物质，降低了制备难度。
34.本发明还提供了所述饲料添加剂的应用，将其在包括玉米、豆粕和预混料的基础饲料中加入所述饲料添加剂，能够生产磷脂酰乙醇胺型dha含量高， epa含量低的鸡蛋。
具体实施方式
35.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
36.制备例
37.以下裂殖壶菌藻种购自美国atcc，编号为20888。碱性蛋白酶为丝氨酸蛋白酶，购自武汉金科天成科技有限公司。大豆磷脂粉、酵母硒和半胱氨酸均购自湖南加农正和生物技术有限公司。
38.定向纯化大豆磷脂的制备方法为：取1重量份大豆磷脂粉加入反应釜中，并加入18重量份的无水乙醇，以及1.5重量份质量浓度为20％的氨水，在45℃下80转搅拌反应50min。
反应结束后以500
×
g离心15min得到滤液，将滤液在-20℃下冷冻干燥8h，得到定向纯化大豆磷脂。
39.破壁裂殖壶菌粉的制备方法为：取裂殖壶菌藻种置于含有12％质量分数的葡萄糖、1％质量分数的酵母浸粉、0.9％质量分数的苹果酸的水溶液中，在22℃下持续发酵120h得到发酵液。向发酵液中添加活性为35万-40万u/g的丝氨酸蛋白酶0.15％进行菌体破壁，搅拌混匀2h后，将得到的破壁液经500
×
g离心15min得到固体物。将固体物在750℃下烘干7h，得到所述破壁裂殖壶菌粉。
40.实施例1
41.1、实验设计
42.试验选择单因素随机区组试验设计，随机挑选600只健康的、日龄接近的 (220
±
10d)、产蛋率接近的大午金凤鸡随机分为6组，每组4个重复，每个重复25只鸡，其中：
43.(1)c1组为空白对照组，饲喂不含任何dha以及和本发明相关的添加剂的基础饲料，作为基础日粮。该基础饲料为长沙伟嘉饲料有限公司生产的常规蛋鸡饲料；
44.(2)c2组为定向纯化大豆磷脂缺失对照组，在c1的饲料基础上添加破壁裂殖壶菌粉0.33％+酵母硒0.03％+半胱氨酸0.22％。即以基础饲料的质量为 100重量份计，破壁裂殖壶菌粉的加入量为0.33份，酵母硒的加入量为0.03份，半胱氨酸的加入量为0.22份，下同；
45.(3)c3组为破壁裂殖壶菌粉缺失对照组，在c1的饲料基础上添加定向纯化大豆磷脂0.40％+酵母硒0.03％+半胱氨酸0.22％；
46.(4)c4组为酵母硒缺失对照组，在c1的饲料基础上添加定向纯化大豆磷脂0.40％+破壁裂殖壶菌粉0.33％+半胱氨酸0.22％；
47.(5)c5组为半胱氨酸缺失对照组，在c1的饲料基础上添加定向纯化大豆磷脂0.40％+破壁裂殖壶菌粉0.33％+酵母硒0.03％；
48.(6)t组为处理组，在c1的饲料基础上添加定向纯化大豆磷脂0.40％+ 破壁裂殖壶菌粉0.33％+酵母硒0.03％+半胱氨酸0.22％。
49.2、实验检测
50.于试验第30天每组随机挑选20枚鸡蛋进行检测。测试方法包括：将鸡蛋去壳，混匀，取2g进行ω-3不饱和脂肪酸检测。ω-3不饱和脂肪酸检测指标为α亚麻酸、二十碳五烯酸(epa)和二十二碳六烯酸(dha)，计算dha 纯度，再利用气相质谱连用检测磷脂酰乙醇胺型dha含量。
51.ω-3不饱和脂肪酸检测简介：
52.使用气相色谱仪测定，检测方法为《ny/t 2068-2011蛋与蛋制品中ω-3 多不饱和脂肪酸的测定气相色谱法》。方法简介：样品经盐酸水解，乙醚-石油醚提取脂肪，氢氧化钾甲醇皂化后，经三氟化硼-甲醇溶液甲酯化生成脂肪酸甲酯，通过气相色谱柱分离，以氢火焰离子化检测器检测，食用内标法定量各脂肪酸所在峰出现时间的峰面积，根据公式计算所得各组分含量。
53.3、测试结果
54.表1饲喂本发明饲料添加剂对鸡蛋中dha含量富集的影响
[0055][0056]
上述处理组中各组分含量如表1所示，结果表明：(1)普通的鸡蛋中dha 和磷脂酰乙醇胺型dha的含量都比较低，分别为30.15mg/100g和8.14mg/100g； (2)如c2组结果所示，当饲料中缺少定向纯化大豆磷脂后，dha含量较高，但磷脂酰胆碱型dha和磷脂酰乙醇胺型dha含量均较低，原因是饲料中缺乏合成磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺的物质；(3)如c3组结果所示，当饲料中缺少破壁裂殖壶菌粉后，鸡蛋中dha的含量大幅度下降，但磷脂酰乙醇胺型dha 的相对含量较对照组有所提升，原因是饲料中的磷脂酰乙醇胺在蛋鸡体内转化为磷脂酰乙醇胺型dha，并进入卵黄中；(4)如c4和c5组结果所示，当饲料中缺少酵母硒和半胱氨酸时，鸡蛋中dha和磷脂酰乙醇胺型dha含量虽然比对照组有较大幅度提升，但对比处理组两项指标均偏低，原因是蛋鸡体内缺少硒和半胱氨酸，体内的自由基易消耗dha，导致其含量偏低；(5)如t组结果所示，dha含量最高，同时磷脂酰乙醇胺的含量可达62.87mg/100g，而由于饲料中并没有添加磷脂酰胆碱合成的相关成分，导致鸡蛋中磷脂酰胆碱型 dha含量较小，证明了本发明能够生产高含量磷脂酰乙醇胺型dha的鸡蛋。
[0057]
实施例2
[0058]
在实施例1中t组定向纯化大豆磷脂的制作方法基础上，改变定向纯化大豆磷脂来源和/或处理方法，实验设计如下：
[0059]
a1组：定向纯化大豆磷脂制备过程中未加入乙醇；
[0060]
a2组：定向纯化大豆磷脂制备过程中未加入氨水；
[0061]
a3组：制备过程同t组，定向纯化大豆磷脂制备过程中加入乙醇和氨水；
[0062]
a4组：将原料替换为新鲜大豆油脚，采用乙醇提取；
[0063]
a5组：将原料替换为新鲜大豆油脚，采用氨水提取；
[0064]
a6组：将原料替换为新鲜大豆油脚，采用乙醇和氨水提取；
[0065]
采用气相质谱检测各组大豆磷脂中磷脂酰乙醇胺的含量，结果见表2：
[0066]
表2不同处理方式获得的大豆磷脂各成分的含量比例
[0067][0068]
由上述结果可知a3为本发明的定向纯化大豆磷脂的方法，其中磷脂酰乙醇胺的获得率和含量最高。如制备过程不加氨水，磷脂酰乙醇胺的含量降低。将大豆磷脂粉更换为新
鲜大豆油脚后，虽然能够提纯出磷脂酰乙醇胺，但其含量较低。由此证明本发明的定向纯化大豆磷脂能够提供较高的磷脂酰乙醇胺。
[0069]
实施例3
[0070]
在实施例1中t组基础上，改变破壁裂殖壶菌粉来源，实验设计如下：
[0071]
b1组：未加入碱性蛋白酶进行菌体破壁，得到裂殖壶菌粉，基础饲料和其它组分来源和加入量同t组；
[0072]
b2组：使用裂殖壶菌油，添加比例为基础饲料重量的0.16％，基础饲料和其它组分来源和加入量同t组；
[0073]
t组：实施例1中的t组，加入破壁裂殖壶菌粉。
[0074]
按照实施例1的实验设计进行鸡群饲喂和取样，并检测鸡蛋中dha及磷脂酰乙醇胺dha含量，结果如表3所示：
[0075]
表3改变破壁裂殖壶菌粉来源后dha富集情况
[0076][0077]
由上述数据可知，未破壁的裂殖壶菌粉严重影响的dha的产量，导致鸡蛋中dha含量偏低；而使用裂殖壶菌油的分组，虽然dha含量有所升高，但由于可能缺少菌体产生的益生源类的物质，导致鸡蛋中磷脂酰乙醇胺的富集效果并不理想。由此证明，本发明中的破壁裂殖壶菌粉为鸡蛋中富集磷脂酰乙醇胺的较优成分。
[0078]
实施例4
[0079]
在实施例1中t组基础上，改变各原料加入量，实验设计如下：
[0080]
d1组：按饲料重量比例添加：定向纯化大豆磷脂0.40％、破壁裂殖壶菌粉 0.36％、酵母硒0.04％、半胱氨酸0.20％，基础饲料来源和加入量同t组。
[0081]
d2组：按饲料重量比例添加：定向纯化大豆磷脂0.46％、破壁裂殖壶菌粉 0.37％、酵母硒0.03％、半胱氨酸0.14％，基础饲料来源和加入量同t组。
[0082]
d3组：按饲料重量比例添加：定向纯化大豆磷脂0.44％、破壁裂殖壶菌粉 0.38％、酵母硒0.04％、半胱氨酸0.16％，基础饲料来源和加入量同t组。
[0083]
按上述原料添加比例饲喂蛋鸡，按实施例1的方法取样和检测，鸡蛋中dha 的富集含量如表4：
[0084]
表4改变各原料添加量鸡蛋中dha富集情况
[0085][0086]
如上表所示，各组鸡蛋中均能够富集磷脂酰乙醇胺型dha，且随着各原料比例增加，其含量有所提升。证明本发明能够使鸡蛋中磷脂酰乙醇胺型dha≥50mg/100g。
[0087]
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何
熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。