一种提取双链rna的装置
技术领域
1.本实用新型涉及双链rna提取设备技术领域，尤其涉及一种提取双链rna的装置。


背景技术：

2.动植物体遭受到rna病毒入侵后，往往能够产生dsrna，有些dsrna是病毒的基因组，有些dsrna是病毒侵染过程中产生的复制中间体。如当前国内流行的水稻病毒病rdv(rice dwarf virus)、rrsv(rice ragged stunt birus)等，它们都有特异的dsrna基因组图谱。通过提取患病组织中的dsrna，可以用于鉴定动植物病毒的种类以及进一步分析其核酸遗传和变异的基础。
3.目前的dsrna提取方法有：trizol法和licl沉淀法，尽管这些常规的方法能够提取dsrna，但是其操作过程仍较为繁琐，在提取过程中要消耗较多的时间，可重复性较差；并且其提取过程中由于dna的降解会产生大量的干扰物，造成提取物中dsrna浓度较低，并影响最终产品纯度及提取回收率。
4.为解决上述问题，中国发明专利，授权公告号为cn112961851a，公开了一种生物体或组织中dsrna及提取该dsrna的方法，其主要技术点为：通过结合有机试剂处理和纤维素柱层析步骤，先对生物体或组织进行处理，促使其破碎，以释放核酸物质至液相中；再利有纤维素柱层析中填料对液相中浓度核酸物质进行可逆性吸附，通过分段洗脱，能够有效分离dsrna与其他核酸物质，尤其能够显著降低dna降解物质的干扰，提高最终产品dsrna的纯度及提取回收率。
5.对于上述现有技术，只解决了如何提高最终产品dsrna的纯度及提取回收率的技术问题，对于提取装置存在操作过程繁琐、消耗时间较多、可重复性较差的技术问题并没有提出有效的解决方案。


技术实现要素：

6.有鉴于此，有必要提供一种提取双链rna的装置，解决现有技术中提取装置存在操作过程繁琐、消耗时间较多、可重复性较差的技术问题。
7.为达到上述技术目的，本实用新型的技术方案提供一种提取双链rna的装置，包括：
8.储液器，所述储液器具有用于装载流动相的储液腔；
9.层析柱，所述层析柱具有进样口、装载层析介质的内腔和出样口，所述进样口与所述储液腔连通，所述内腔分别与所述进样口和所述出样口相连通，所述内腔的层析介质包括纤维素粉；
10.泵体，所述泵体的进液口与所述层析柱的出样口连接，以用于抽取所述储液腔中的流动相；
11.多通阀，所述多通阀具有进液口、第一出液口和第二出液口，所述进液口与所述泵体的出液口连接；
12.废液缸，所述废液缸与所述第一出液口连接；以及
13.收集器，所述收集器与所述第二出液口连接,以用于收集含有dsrna的层析液。
14.进一步的，所述储液腔具有互不连通的多个腔室，多个所述腔室分别与所述层析柱的进样口相连通。
15.进一步的，多个所述腔室分别通过管路与所述层析柱的进样口连接。
16.进一步的，所述收集器为自动部分收集器，所述自动部位收集器包括驱动机构、转盘和若干个收集管，所述驱动机构与所述转盘传动连接，以用于驱动所述转盘旋转，所述转盘上开设有若干个通孔，若干个所述通孔呈圆环状均匀设置，所述收集管插设于所述通孔内、并能够与所述第二出液口相连通。
17.进一步的，所述自动部位收集器还包括电磁阀和软管，所述电磁阀与所述软管连接，所述软管与所述第二出液口连接，所述软管管口位于所述收集管管口的正上方。
18.进一步的，所述泵体为蠕动泵。
19.进一步的，所述提取双链rna的装置还包括离心机，所述离心机具有用于安装所述收集管的旋转内腔。
20.进一步的，所述提取双链rna的装置还包括核酸分析仪，所述核酸分析仪用于分析收集管内dsrna的浓度。
21.进一步的，所述层析柱的直径为16cm，所述层析柱的长度为20cm。
22.进一步的，所述腔室的数量为3个。
23.与现有技术相比，本实用新型的有益效果包括：储液器具有用于装载流动相的储液腔；层析柱具有装载纤维素粉的内腔；泵体的进液口与所述层析柱的出样口连接，以用于抽取所述储液腔中的流动相；多通阀的第一出液口与废液缸连接，多通阀的第二出液口与收集器连接，收集器以用于收集含有dsrna的层析液。通过上述设置方式，只需将dsrna的样品液、洗脱液以及溶解液在不同的时间加入储液腔即可提高制备效率，其操作过程简单、可大量节省提取时间，可重复性较佳。
附图说明
24.图1是根据本实用新型实施例所述的提取双链rna的装置的示意图；
25.图2是根据本实用新型实施例所述的自动部分收集器的结构示意图；
26.图中：1.储液器，11.储液腔，2.层析柱，3.泵体，4.多通阀，5.废液缸，6.收集器，61.转盘，62.收集管，63.软管，7.离心机，8.核酸分析仪。
具体实施方式
27.下面结合附图来具体描述本发明/实用新型的优选实施例，其中，附图构成本技术一部分，并与本发明/实用新型的实施例一起用于阐释本发明/实用新型的原理，并非用于限定本发明/实用新型的范围。
28.如图1-2所示，本实用新型提供了一种提取双链rna的装置，包括：储液器1、层析柱2、泵体3、多通阀4、废液缸5以及收集器6。
29.其中，所述储液器1具有用于装载流动相的储液腔11；
30.所述层析柱2具有进样口、装载层析介质的内腔和出样口，所述进样口与所述储液
腔11连通，所述内腔分别与所述进样口和所述出样口相连通，所述内腔的层析介质包括纤维素粉、16％乙醇和ste溶液；
31.所述泵体3的进液口与所述层析柱2的出样口连接，以用于抽取所述储液腔11中的流动相；
32.所述多通阀4具有进液口、第一出液口和第二出液口，所述进液口与所述泵体3的出液口连接；
33.所述废液缸5与所述第一出液口连接；
34.所述收集器6与所述第二出液口连接,以用于收集含有dsrna的层析液。
35.于本实施例中，流动相包括预先制备的含有dsrna的样品液、洗脱液以及溶解液，只需将dsrna的样品液、洗脱液以及溶解液在不同的时间加入储液腔11即可，以提高制备的效率；首先，在泵体3的作用下，dsrna的样品液从进样口流经层析柱2，最终流入废液缸5，层析柱2中的纤维素粉会变为褐色，同时双链rna会被吸附至层析柱2中的纤维素粉上；其次，洗脱液从进样口流经层析柱2，并最终流入废液缸5，在洗脱液的作用下，洗去dna和ssrna(单链rna)，在这个过程中，纤维素粉逐渐褪色；最后溶解液从进样口流经层析柱2，并最终流入收集器6，通过溶解液用于溶解双链rna并最终被收集器6收集。
36.需要说明的是，泵体3为蠕动泵，其优选型为上海沪西仪器厂的ddbt-301，在蠕动泵的作用下可以提高过柱的速度，并且使过柱速度保持在一个稳定的值，减少了整个提取过程的时间，同时也增加了提取dsrna的稳定性；纤维素粉为硅化微晶纤维素粉，可高效吸附dsrna。
37.进一步的，所述储液腔11具有互不连通的多个腔室，多个所述腔室分别与所述层析柱2的进样口相连通；多个所述腔室分别通过管路与所述层析柱2的进样口连接。
38.于本实施例中，对储液腔11的结构作进一步限定，其具有互不连通的多个腔室，用于分别呈装dsrna的样品液、洗脱液以及溶解液，使得实验过程可以连贯进行，具有较佳的可重复性。
39.再进一步的，如图2所示，所述收集器6为自动部分收集器，所述自动部位收集器6包括驱动机构、转盘61和若干个收集管62，所述驱动机构与所述转盘61传动连接，以用于驱动所述转盘61旋转，所述转盘61上开设有若干个通孔，若干个所述通孔呈圆环状均匀设置，所述收集管62插设于所述通孔内、并能够与所述第二出液口相连通；所述自动部位收集器6还包括电磁阀和软管63，所述电磁阀与所述软管63连接，所述软管63与所述第二出液口连接，所述软管63管口位于所述收集管62管口的正上方。
40.于本实施例中，对收集器6的结构作进一步限定，其中，电磁阀用于控制软管63的出液量，当收集管62中装入设定量的层析液时，驱动机构驱动转盘61旋转，转盘61的旋转将带动收集管62旋转，此时相邻下一个收集管62管口同样位于软管63管口的下方，并重复上述操作。
41.需要说明的是，自动部分收集器型号优选为上海沪西仪器厂的dbs-100，设定量的层析液优选为1ml，收集管62的数量优选为30管。
42.更进一步的，所述提取双链rna的装置还包括离心机7，所述离心机7具有用于安装所述收集管62的旋转内腔；所述提取双链rna的装置还包括核酸分析仪8，所述核酸分析仪8用于分析收集管62内dsrna的浓度。
43.于本实施例中，通过离心机7进一步提取dsrna，其中离心机7和核酸分析仪8依次设置于自动部分收集器的后方，具体为，在自动部分收集器的收集管62呈装完含有dsrna层析液时，并将30支收集管62置于冰箱-20℃层中冷冻90min以上，完成冷冻后，并将收集管62置于离心机7中离心10min，接着弃收集管62上清液，用预冷的75％乙醇洗涤沉淀，然后再离心1min，再接着用移液枪吸干上清液(注意不要吸起沉淀)，真空干燥3min；并加入50μl depc水溶解沉淀，-20℃保存，至此dsrna便提取完成，通过核酸分析仪8分析收集管62内dsrna的浓度。
44.本实用新型的具体工作流程：
45.(1)制备dsrna的样品液、洗脱液、溶解液以及配置层析柱2中的填充剂，将dsrna的样品液、洗脱液、溶解液分别转移至储液腔11的三个腔室中，将填充剂填充至层析柱2中；
46.其中dsrna的样品液的制备为：取1-10g含有dsrna的菌体或组织放入研钵，加入适量液氮用研磨锤将菌体或组织研磨至粉末状或沙子状，保持粉末状的时间内尽快将其转移至50ml离心管中；
47.向含有磨碎菌体或组织的50ml离心管中加入等体积(v/m)的2
×
ste溶液(0.5m tris-hcl，1m nacl，10m edta)，然后再加入等体积苯酚-氯仿-异戊醇溶剂(苯酚：氯仿：异戊醇＝25:24:1)，最后加入适量10％sds溶液(约100μl-800μl)；
48.将离心管放置于摇床上混匀振荡10min；
49.振荡完后，将离心管取出，离心15分钟(9000rpm/min)；
50.离心后取上清液，配置成含16％乙醇的溶液，完成dsrna的样品液的制备。
51.洗脱液的成分为：含16％乙醇的1
×
ste溶液。
52.溶解液的成分为：1
×
ste溶液。
53.(2)通过管道将层析柱2的进样口与储液腔11的三个腔室分别连通，通过管道再将层析柱2的出样口与蠕动泵的进液口连接，接着通过管道将蠕动泵的的出液口与多通阀4的进液口连接，并将多通阀4的第一出液口和第二出液口分别与废液缸5和自动部分收集器连接；
54.其中，第二出液口与软管63相连，并通过电磁阀控制软管63的出液量，当收集管62中装入设定量的层析液时，驱动机构驱动转盘61旋转，转盘61的旋转将带动收集管62旋转，此时相邻下一个收集管62管口同样位于软管63管口的下方，并重复上述操作得到30支呈装dsrna层析液的收集管62。
55.(3)通过离心机7进一步提取dsrna，其中离心机7和核酸分析仪8依次设置于自动部分收集器的后方；
56.具体为，在自动部分收集器的收集管62呈装完含有dsrna层析液时，并将30支收集管62置于冰箱-20℃层中冷冻90min以上，完成冷冻后，并将收集管62置于离心机7中离心10min，12000rpm/min；接着弃收集管62上清液，用预冷的75％乙醇洗涤沉淀，然后再离心1min，12000rpm/min；再接着用移液枪吸干上清液(注意不要吸起沉淀)，真空干燥3min；并加入50μl depc水溶解沉淀，-20℃保存，至此dsrna便提取完成；通过核酸分析仪8分析收集管62内dsrna的浓度。
57.整个工作流程结束，且本说明书中未作详细描述的内容均属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
58.以上所述，仅为本发明/实用新型较佳的具体实施方式，但本发明/实用新型的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明/实用新型揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明/实用新型的保护范围之内。