1.本发明涉及过氧化氢制备技术领域，特别涉及一种过氧化氢酶制备方法。


背景技术：

2.过氧化氢酶是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶,约占过氧化物酶体酶总量的40％。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。过氧化氢酶也被用于食品包装，防止食物被氧化。
3.现有的过氧化氢酶在制备过程中，由于发酵不足，导致原料浪费。


技术实现要素：

4.本发明提供一种过氧化氢酶制备方法，用以解决现有过氧化氢酶发酵不充分的情况，从而实现在发酵过程中能够对发酵体进行充分发酵，进一步减少原料浪费的情况，并进一步降低生产成本。
5.本发明提供一种过氧化氢酶制备方法，包括：
6.将原始菌种在培养基上进行培养，获得含有过氧化氢酶的菌种；
7.对所述菌种进行粗酶液制备后，对所述粗酶液进行乙醇沉淀，
8.将沉淀后的粗酶液进行层析和超滤，获得过氧化氢酶制品。
9.优选的，将原始菌种在培养基上进行培养获得培养种子，根据培养种子进行接种并发酵，获得含有过氧化氢酶的菌种还包括：
10.所述培养种子通过种子培养基进行培养获得，所述种子培养基为 ph7.5的麦芽汁；所述麦芽汁的糖度为6
°
～8
°
；
11.在培养基上培养25～35小时候获得培养种子，进一步对培养种子置入发酵培养基进行发酵，获得含有过氧化氢酶的菌种。
12.优选的，所述发酵培养基包括：葡萄糖、nano3、mgso4·
7h2o、 na2hpo4、kh2po4、feso4·
7h2o；
13.将所述葡萄糖、nano3、mgso4·
7h2o、na2hpo4、kh2po4、 feso4·
7h2o混合并定容至ll。
14.优选的，所述发酵培养基为ph 7.5；
15.葡萄糖为8-12g、nano3为8～12g、mgso4·
7h2o为3～7g、na2hpo4为8-12g、kh2po4为0.8-1.2g、feso4·
7h2o为0.015～0.035g；
16.优选的，葡萄糖为8g、nano3为8g、mgso4·
7h2o为6g、na2hpo4为10g、kh2po4为0.86g、feso4·
7h2o为0.018g。
17.优选的，葡萄糖为10g、nano3为12g、mgso4·
7h2o为5g、na2hpo4为9g、kh2po4为0.98g、feso4·
7h2o为0.026g。
18.优选的，培养种子的培养包括:种子培养基置于培养瓶中，接种到培养瓶进行混匀获得悬液；
19.其中，在旋转装置上以转速300转/分钟进行混匀，发酵培养时间为10～15小时。
20.优选的，所述发酵培养还包括：将混匀后的悬液置于发酵罐中，以4％～8％的接种量进行接种培养种子，并在接种成功后对其进行混匀并发酵，
21.所述发酵时间为25～35小时。
22.本发明提供的过氧化氢酶制备方法，用以解决现有过氧化氢酶发酵不充分的情况，从而实现在发酵过程中能够对发酵体进行充分发酵，进一步减少原料浪费的情况，并进一步降低生产成本。
23.本发明制备的过氧化氢酶系列产品，采用优良菌种经液体深层发酵培养，后通过先进的提取工艺精制而成，能高效的将葡萄糖酸盐生产过程中产生的过氧化氢分解为氧气和水，可广泛应用于葡萄糖酸盐生产工艺及其他工艺环境中过氧化氢的去除；其耐温性好、活性高， ph范围5.0-7.0可保持稳定的酶活，作用温度37-45摄氏度。
24.本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在所写的说明书中所特别指出的结构来实现和获得。
25.下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
具体实施方式
26.以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
27.本发明实施例提供了一种过氧化氢酶制备方法，包括：将原始菌种在培养基上进行培养，获得含有过氧化氢酶的菌种；对所述菌种进行粗酶液制备后，对所述粗酶液进行乙醇沉淀，将沉淀后的粗酶液进行层析和超滤，获得过氧化氢酶制品。
28.将原始菌种在培养基上进行培养获得培养种子，根据培养种子进行接种并发酵，获得含有过氧化氢酶的菌种还包括：所述培养种子通过种子培养基进行培养获得，所述种子培养基为ph7.5的麦芽汁；所述麦芽汁的糖度为6
°
～8
°
；在培养基上培养25～35小时候获得培养种子，进一步对培养种子置入发酵培养基进行发酵，获得含有过氧化氢酶的菌种。
29.所述发酵培养基包括：葡萄糖、nano3、mgso4·
7h2o、na2hpo4、 kh2po4、feso4·
7h2o；将所述葡萄糖、nano3、mgso4·
7h2o、na2hpo4、 kh2po4、feso4·
7h2o混合并定容至ll。
30.所述发酵培养基为ph 7.5；葡萄糖为8-12g、nano3为8～12g、 mgso4·
7h2o为3～7g、na2hpo4为8-12g、kh2po4为0.8-1.2g、 feso4·
7h2o为0.015～0.035g；
31.其中，葡萄糖为8g、nano3为8g、mgso4·
7h2o为6g、na2hpo4为10g、kh2po4为0.86g、feso4·
7h2o为0.018g。
32.或者，葡萄糖为10g、nano3为12g、mgso4·
7h2o为5g、na2hpo4为9g、kh2po4为0.98g、feso4·
7h2o为0.026g。
33.培养种子的培养包括:种子培养基置于培养瓶中，接种到培养瓶进行混匀获得悬液；其中，在旋转装置上以转速300转/分钟进行混匀，发酵培养时间为10～15小时。
34.所述发酵培养还包括：将混匀后的悬液置于发酵罐中，以4％～8％的接种量进行
接种培养种子，并在接种成功后对其进行混匀并发酵，所述发酵时间为25～35小时。
35.本发明提供的过氧化氢酶制备方法，用以解决现有过氧化氢酶发酵不充分的情况，从而实现在发酵过程中能够对发酵体进行充分发酵，进一步减少原料浪费的情况，并进一步降低生产成本。
36.本发明制备的过氧化氢酶系列产品，采用优良菌种经液体深层发酵培养，后通过先进的提取工艺精制而成，能高效的将葡萄糖酸盐生产过程中产生的过氧化氢分解为氧气和水，可广泛应用于葡萄糖酸盐生产工艺及其他工艺环境中过氧化氢的去除；其耐温性好、活性高， ph范围5.0-7.0可保持稳定的酶活，作用温度37-45摄氏度。
37.实验例1
38.本发明实验例提供了一种过氧化氢酶制备方法，包括：将原始菌种在培养基上进行培养，获得含有过氧化氢酶的菌种；对所述菌种进行粗酶液制备后，对所述粗酶液进行乙醇沉淀，将沉淀后的粗酶液进行层析和超滤，获得过氧化氢酶制品。
39.将原始菌种在培养基上进行培养获得培养种子，根据培养种子进行接种并发酵，获得含有过氧化氢酶的菌种还包括：所述培养种子通过种子培养基进行培养获得，所述种子培养基为ph7.5的麦芽汁；所述麦芽汁的糖度为6
°
；在培养基上培养25小时候获得培养种子，进一步对培养种子置入发酵培养基进行发酵，获得含有过氧化氢酶的菌种。所述发酵培养基包括：葡萄糖、nano3、mgso4·
7h2o、na2hpo4、 kh2po4、feso4·
7h2o；将所述葡萄糖、nano3、mgso4·
7h2o、na2hpo4、 kh2po4、feso4·
7h2o混合并定容至ll。所述发酵培养基为ph 7.5；葡萄糖为8g、nano3为8g、mgso4·
7h2o为6g、na2hpo4为10g、 kh2po4为0.86g、feso4·
7h2o为0.018g。培养种子的培养包括:种子培养基置于培养瓶中，接种到培养瓶进行混匀获得悬液；其中，在旋转装置上以转速300转/分钟进行混匀，发酵培养时间为10小时，所述发酵培养还包括：将混匀后的悬液置于发酵罐中，以6％的接种量进行接种培养种子，并在接种成功后对其进行混匀并发酵，所述发酵时间为30小时。
40.获得发酵液，利用发酵液进行多级发酵，获得酶液体；对所述酶液体进行层析和超滤，获得过氧化氢酶制品。
41.该实验例中，采用分光光度法在37℃实验环境下，取酶液体10ml、 500ml缓冲液，其中，所述缓冲液为10％的kh2po
4-na2hpo4溶液；其测得的酶活值约为1682(103u/g dcw)。
42.实验例2
43.本发明实验例提供了一种过氧化氢酶制备方法，包括：将原始菌种在培养基上进行培养，获得含有过氧化氢酶的菌种；对所述菌种进行粗酶液制备后，对所述粗酶液进行乙醇沉淀，将沉淀后的粗酶液进行层析和超滤，获得过氧化氢酶制品。将原始菌种在培养基上进行培养获得培养种子，根据培养种子进行接种并发酵，获得含有过氧化氢酶的菌种还包括：所述培养种子通过种子培养基进行培养获得，所述种子培养基为ph7.5的麦芽汁；所述麦芽汁的糖度为7
°
；在培养基上培养28小时候获得培养种子，进一步对培养种子置入发酵培养基进行发酵，获得含有过氧化氢酶的菌种。所述发酵培养基包括：葡萄糖、nano3、mgso4·
7h2o、na2hpo4、kh2po4、feso4·
7h2o；将所述葡萄糖、nano3、mgso4·
7h2o、na2hpo4、kh2po4、feso4·
7h2o 混合并定容至ll。所述发酵培养基为ph 7.5；葡萄糖为10g、nano3为12g、mgso4·
7h2o为5g、na2hpo4为9g、kh2po4为0.98g、feso4·
7h2o 为0.026g。培养种子的培养包括:种子培养基置于培养瓶中，接种到培养瓶进行混匀获得悬液；其中，在旋转装置上
以转速300转/分钟进行混匀，发酵培养时间为12小时，
44.所述发酵培养还包括：将混匀后的悬液置于发酵罐中，以4％的接种量进行接种培养种子，并在接种成功后对其进行混匀并发酵，所述发酵时间为35小时。
45.获得发酵液，利用发酵液进行多级发酵，获得酶液体；对所述酶液体进行层析和超滤，获得过氧化氢酶制品。
46.该实验例中，采用分光光度法在37℃实验环境下，取酶液体10ml、 500ml缓冲液，其中，所述缓冲液为10％的kh2po
4-na2hpo4溶液；其测得的酶活值约为1858(103u/g dcw)。
47.以上实验例可以看出，实验例2中的酶活含量较高。
48.显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。