专利名称：：续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及中药提取续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元的方法，经药理实验证明续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元具有新的医药用途。具体的说是续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元在制备(X-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用，也涉及该药物的药物制剂。属于医药
技术领域：
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背景技术：
：糖尿病是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合征，系因胰岛素分泌绝对或相对不足及靶组织对胰岛素敏感性降低，引起机体糖、脂肪、蛋白质、水和电解质等一系列代谢紊乱，临床以高血糖为主要共同标志。久病可引起多系统损害，病情严重或应激时可发生急性代谢紊乱如酮症酸中毒等。cx-葡萄糖苷酶抑制剂是通过竞争性抑制a-葡萄糖苷酶的活性，可阻滞双糖水解为单糖，延缓糖的吸收，使血糖平稳并缓慢的维持在一定的水平，防治餐后高血糖症，同时还可以提高糖耐量，预防和治疗肥胖症，高三酰甘油血症，用于治疗由碳水化合物紊乱而引起的疾病。文献报道主要a-葡萄糖苷酶抑制剂有多糖、生物碱、苷类、多肽、糖苷类、黄酮类、皂苷和酚类等二续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元是从川续断科植物川续断DipsacusaspercidesC.Y.ChengetT.M.Ai的干燥根中提取纯化而得。续断总苷元含量在90%以上，常春藤皂苷元含量在95%以上。信学雷等公开了从维药瘤果黑种草籽中提取的常春藤皂苷元具有蛋白酪氨酸磷酸酶的抑制作用(常春藤皂苷元及其制备方法和用途，.200710146725.1)，吴耀民等发现常春藤皂苷元及其衍生物的具有显著的抗抑郁活性(常春藤皂苷元及其衍生物用于制备抗抑郁产品的用途，200810032325.2)。赵全成等公开了常春藤皂苷元在制备抗高血脂症药物中的应用(02109763.1)。赵全成、赫玉芳、南敏伦等研究的以常春藤皂苷元为主要成分的中药5类(原二类)新药续断苷元胶囊(临床批件号2004L04347)已经进行临床研究。我们在以往研究的基础上(赵全成，常春藤皂苷元的制备方法，02109764.X)改进了工艺，制备续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元。并对a-葡萄糖苷酶的抑制作用进行了研究，药理实验表明，续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元具有很强的抑制a-葡萄糖苷酶的作用。本专利申请之前，还没有关于续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元具有a-葡萄糖苷酶的抑制剂活性的报道。本发明的特点在于续断用乙醇或甲醇提取后，加入了氧化钙或氢氧化转，合理的使用了氧化钙和氢氧化钙的碱性和钙离子的技术。并且在乙醇提取液浓縮后，通过大孔树脂柱，用含碱性的乙醇溶液洗脱，除去一些碱溶性杂质，制备的总皂苷纯度更高，从而使在制备续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元时没有利用硅胶柱层析、ODS柱层析、高效液相色谱等分离手段。整个生产过程没有利用有机试剂，具有操作简单、成本低，纯度高的特点。经此工艺制得的续断总苷元含量在90%以上，常春藤皂苷元含量在95%以上，特别适合产业化大量生产。我们通过对续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元的进一部研究证明续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元具有抑制a-葡萄糖苷酶活性。本发明完成前未发现有关续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元作为a-糖苷酶抑制剂、在预防和治疗降血糖方面应用的报道。本发明具有广泛的应用前景。常春藤皂苷元的结构式
发明内容本发明的目的之一是提供续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元具有抑制a-糖苷酶的活性。具体的说是续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元用于制备(x-糖苷酶抑制剂的药物的新用途。经动物试验证明，本发明的制剂具有显著抑制(x-糖苷酶的活性；能延缓正常小鼠餐后血糖升高、能延缓四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠餐后血糖升高；降低四氧嘧啶高血糖小鼠的血糖；降低正常小鼠血糖，促进胰岛素分泌，减少胰高血糖素含量，增加肝糖原、肌糖原含量。在本发明申请前未见续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元作为a-糖苷酶抑制剂、在制备预防和治疗降血糖药物的应用和报道。本发明目的之二是续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元是从川续断科植物川续断DipsacusaspercidesC.Y.ChengetT.M.Ai的干燥根中提取纯化而得，续断总苷元含量在90%以上，制备常春藤皂苷元含量在95%以上。本发明的目的之三是在提取续断药材后，加入氧化钙或氢氧化钙，合理的使用了氧化钙和氢氧化钙的碱性和钙离子的技术，为本发明的一个创新点。并且在乙醇提取液浓縮后，通过大孔树脂柱，用含碱的乙醇溶液洗脱，制备的总皂苷纯度更高，从而使在制备续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元时没有利用硅胶柱层析、ODS柱层析、高效液相色谱等分离手段。整个生产过程仅用乙醇或甲醇，没有使用其它有机试剂，操作简单、纯度高的特点。本发明的目的之四是提供续断总苷元及单一成分常泰藤皂苷元的药物制剂。主要是口服制剂，主要选自片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸剂，口服制剂中的任何一种。本发明目的之五是提供药物优选含有1%—99°/。的续断总垂元及单一成分常春藤皂苷元和99%_1%的药用赋形剂或其它可组方的药物。本发明药物中的其它配伍的药物，指的是以有效剂量的续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元为一定的药物原料，再配伍其它允许合用的中药或化学药品。续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元及其药物制剂可以抑制a-糖苷酶的活性、具有在在制备预防和治疗高血糖症药物中的用途。这些药理作用，通过以下药效学试验例得到证实。1、续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对a-糖苷酶的抑制剂作用1.1标准反应体系67mmol/LpH为6.8磷酸钾缓冲液150ul，lmg/ml谷胱甘肽溶液50W，O.lmg/mla-葡萄糖苷酶溶液lOOpl，37。C保温10min,20mmol/LPNPG溶液100ul，37。C反应20min后加入0.2mol/LNa2CO3溶液400ul终止反应，测定400nm处光吸收值。样品对酶活性的抑制率计算公式抑制率(％)=(A对照-A样品)/A对照xl00°/o1.2拜糖平对oi-葡萄糖苷酶活性的影响取研磨后的拜糖平配制成50mg/ml的原溶液，并以此稀释成25，12.5，6.25,lmg/ml不同浓度。将100ul拜糖平加入到酶反应体系中，先与酶在37"C保温10min,，再加底物反应20min，用Na2C03溶液终止反应，测定400nm处光吸收值。1.3续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对a-葡萄糖苷酶活性的影响续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元用二甲基亚砜溶解，然后用缓冲液稀释至1.0，0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03125,0.01mg/ml，二甲基亚砜于反应体系中终含量<1%。将100ul续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元加入到反应体系中，测定续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对oi-葡萄糖苷酶的抑制作用。实验结果见表l。'表1续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对a-葡萄糖苷酶的抑制作用组别_药物浓度(ng/W)抑制率(％)常春藤皂苷元0.013.65常春藤皂苷元0.0312520.08常春藤皂苷元0.062540.01常春藤皂苷元0.12566.53常春藤皂苷元0.2586.74常春藤皂苷元0.594.669<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结果表明，拜糖平对oc-葡萄糖苷酶活性的抑制作用具有良好的量效关系。续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元在浓度为1.0，0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03125，0.01mg/ml浓度下，对01-葡萄糖#酶的抑制作用存在良好的量效关系，续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对a-葡萄糖苷酶活性的抑制作用是阳性药拜糖平的50倍以上，对ot-葡萄糖苷酶表现出非常强的抑制作用。2、续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对正常小鼠糖耐量实验取小鼠50只，每组10只，随机分成5组，按表2分组。阴性对照组灌生理盐水，阳性对照为拜糖平灌胃50mg/kg，按照表2给药，连续给药7天，末次给药前禁食8h，给药1小时后淀粉'5g/kg灌胃，测定给淀粉后0.5h，lh，2h，3h的血糖值。眼眶静脉窦采血。用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。结果见表2。表2、续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对正常小鼠糖耐量实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>续断总苻元304.39±1.446.0肚1.36*6.78士1.22*6.64±1.28*6.42±2.11*续断总苷元154.49±1.386.66士1.42*7.55±1.68*7.0S±2.04*.6.99±1.98*拜糖平_^_4.02±0.956.0U1.36*6.64士1.64*6.36±1.83*6.0U1.87**与阴性对照组比较，*P<0.01;结果表明，续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元能抑制正常小鼠餐后血糖升高。3、续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠耐糖量实验'取雄性小鼠50只，每组10只，禁食14h后，腹腔注射2%四氧嘧啶30mg/kg生理盐水溶液，注射72h后，眼眶静脉窦采血。取血前禁食10h，测定空腹血糖，用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。血糖高于ll.lmmol/1的为糖尿病模型小鼠。模型按照表3分组。模型对照组灌生理盐水，阳性对照为灌胃拜糖平50mg/kg,按照表3给药，连续给药10天，末次给药前禁食6h，给药1小时后淀粉5g/kg灌胃，测定给淀粉后0.5h，lh，2h的血糖值。结果见表3。表3、续断总苷元及单-一成分常春藤皂苷元对高血糖小鼠糖耐量实验结果组别剂量/mg/kgOh;mmo1/10.5hAnmo1/1lh/mmo1/12h/mmo1/1模型对照，21.26±1.4829.32±1.4834.12±2.4933.66±1.87常春藤皂苷元6021.34±1.5423.47±2.14"23.88±3.24**25.15±3.55**常舂藤皂苷元302L98土1.4524.61±2.04*26.52±1.94**27.86±3.22*.常春藤皂苷元1520.84±2.1626.64±2.48*30.57±1.67*'30.15±3.58*续断总苷元6020.26±1.0923.98±1.67**24.28土2.26**26.77土2.99**续断总苷元3020.68±1.3325.68±2.08*27.15±1.48**29.04±2.28*续断总苷元1521.08±1邻26.94±1.54*32,12±1.22*32.88±2.09拜糖平5021.34±].9422.52±3.58**22.92±1.84**27.05±1.54**与模型对照组比较，*P<0.05;**P<0.0I结果表明，续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元能延缓四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠餐后血糖升高。4、续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠血糖值实验取雄性小鼠50只，每组10只，禁食14h后，腹腔注射2%四氧11嘧腔30mg/kg生理盐水溶液，注射72h后，眼眶静脉窦采血。取血前禁食10h，测定空腹血糖，用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。血糖高于ll.lmmol/1的为糖尿病模型小鼠。模型按照表4分组。模型对照组灌生理盐水，阳性对照为灌胃拜糖平50mg/kg，按照表4给药，连续给药10天，末次给药后禁食10h，眼眶静脉窦采血，离心取血清，按葡萄糖氧化酶法测定血糖水平，结果见表4。表4、续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠血糖值实验结果组别剂量/mg/kg动物数/只血糖值/mmo1/1模型对照1022.44±2.08常春藤皂苷元601012.77±0.%**常春藤皂苷元301016息2.94*常春藤皂苷元151018.87±2.64*续断总苷元601013.25±1.09**续断总苷元301018.04±2.21*续断总苷元151019.35±1.68*拜糖平501013.35±1.86***与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01;结果表明，续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元高、中、te剂量组均能显著降低四氧嘧啶高血糖小鼠的血糖。5、续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对正常小鼠血糖、血清胰岛素、胰高血糖素、肝糖原、肌糖原影响取小鼠40只，按照表5分组，每组10只，给药，每天1次，连续14天，末次给药后2h，眼眶静脉取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖，用放射免疫法测定血清胰岛素、胰高血糖素，并取肝脏、膈肌用改良的蒽酮法测定肝糖原、肌糖原，结果见表5。表5续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元对正常小鼠血糖、血清胰岛素、胰高血糖素、肝糖原、肌糖原影响结果_组别ii胰岛素胰高血糖素肝糖原肌糖原/mg/kg/mmol/1/mU/1/pg/1/mg/1/mg/112<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>结果表明，续断总苷元及单r成分常春藤皂苷元能降低正常小鼠血糖，促进胰岛素分泌，减少胰高血糖素含量，增加肝糖原、肌糖原含量。本发明是通过如下的实验施例得以实现的，但本发明不受实施例的任何限制。^MMl续断总苷元及常春藤皂苷元的制备取续断药材lkg，用8倍量75%乙醇回流提取3次。每次3小时，合并三次提取液，加入30g氧化钙，搅拌，放置过夜，滤过，滤液用稀盐酸酸调PH为6—7，加入200g活性炭，搅拌，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水至2000ml，通过已处理好的大孔树脂柱，先用含PH值为12的20%乙醇洗3倍柱体积，再水洗至中性，最后用70%乙醇洗脱，收集70%洗脱液，并减压浓縮至干；用2N盐酸的40Q/o乙醇的12倍量水解3小时。滤过，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性；再用95%乙醇加热至沸，加50g的药用活性炭，趁热滤.过，滤液减压浓縮回收、干燥，得续断总苷元，含量为92.8%。取续断总苷元，用90%乙醇加热溶解，重结晶3次，得常春藤皂苷元，含量为96.5%。^MMi续断总苷元及常春藤皂苷元的制备取续断药材lkg，用6倍量60%乙醇回流提取3次。每次2小时，合并三次提取液，加入20g氧化钙，搅拌，放置过夜，滤过，滤液用稀盐酸酸调PH为6—7，加入100g活性炭，搅拌，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水至2000ml，通过已处理好的大孔树脂柱，先用含PH值为13的30%乙醇洗4倍柱体积，再水洗至中性，最后用60%乙醇洗脱，收集60%洗脱液，并减压浓縮至干；用2N盐酸的含45M乙醇溶液10倍量水解3小时。滤过，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性；再用卯％乙醇加热至沸，加75g的药用活性炭，趁热滤过，滤液减压浓縮回收、干燥，得续断总苷元，含量为91.4%。取续断总苷元，再用95%乙醇加热溶解，重结晶3次，得常春藤皂苷元，含量为97.3%。实施例3(胶囊剂)常春藤皂苷元或续断总苷元原料100g，药用微粉硅胶适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，装入1号胶囊，制成1000粒，即得。每次1粒、每日2次。实施例4(片剂)常春藤皂苷元或续断总苷元原料100g，药用微粉硅胶适量，微晶纤维素、交联聚维酮适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，干燥，加入润滑剂适量，压片，制成1000片，即得。每次1片。每日.2次'。实施例5(滴丸剂)称取30g聚乙二醇4000，在水浴上熔化，加常春藤皂苷元或续:断总苷元原料10g，搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在80—9(TC下滴入冷却过的液体石蜡中，滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，制成1000粒，即得。每次10粒。每日2次。实施例6(颗粒剂)常春藤皂苷元或续断总苷元原料100g，甘露醇、羧甲基纤维素钠、甜菊苷适量，混合均匀，用适量乙醇制粒，干燥、整粒、分装，制成500袋，即得。每次0.5袋。每日2次。权利要求1、续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用。2、根据权利要求1所述的应用其特征在于续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元是从川续断科植物川续断DipsacusaspercidesC.Y.ChengetT.M.Ai的干燥根中提取纯化而得。续断总苷元含量在90%以上，单一成分常春藤皂苷元含量在95%以上。3、根据权利要求1所述的续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元制备方法为取续断药材，用50_95%乙醇或甲醇回流提取2—3次。合并三次提取液，加入药材重量0.1—5.0%氧化钙或氢氧化钙，搅拌，放置，滤过，滤液用稀酸调PH为6—7，加入药液体积的0.3-3.0%活性炭，搅拌，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水至药材重量的2.5倍，通过已处理好的大孔树脂柱，先用含ra值为8_14的5-30%乙醇或甲醇洗3倍柱体积，再水^fe至中性，最后用50—90%乙醇或甲醇洗脱，收集50—90%乙醇或甲醇洗脱液，并减压浓縮至干；用l一4N盐酸或硫酸的30—5(f/()的乙醇或甲醇液10—15倍量水解l一4小时。滤过，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性；再用60—95%乙醇或甲醇加热至沸，加入药液体积的1一5%的药用活性炭，趁热滤过，滤液减压浓縮回收、干燥，得续断总苷元。取续断总苷元，再用60—95%乙醇或甲醇加热溶解，重结晶2—3次，得常春藤皂苷元。4、根据权利要求3所述的续断总苷元或单一成分常春藤皂苷元的生产工艺其特征在于提取药材乙醇或甲醇用量为5—10倍量；提取时间为1一3小时；调PH为6—7的稀酸为盐酸或硫酸；调ra值为8—14的碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾、碳酸钾溶液。5、根据权利要求3所述的应用其特征在于所选用的大孔树脂为DIOI、D201、AB-8等。6、根据权利要求1所述的应用其特征在于可以制备a-葡萄糖苷酶抑制剂的药物是指含有有效治疗剂量的续断总苷元或单一成分常春藤皂苷元及一种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或用续断总苷元或单一成分常春藤皂苷元组方的其它药物制成的制剂。7、根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于优选含有1%—99%的续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元和99%—1%的药用赋形剂或其它可组方的药物。'8、根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于所说的药物是口服制剂的剂型。9、根据权利要求7所述的药物制剂，其特征在于所说的口服制剂选自于片剂、丸剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的任何一种。10、权利要求7所述的药用赋形剂包括填充剂、崩解剂等，填充剂选自淀粉、乳糖、微晶纤维素、糊精、磷酸钙等；崩解剂选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联聚维酮；也可选加黏合剂、润湿剂和润滑剂。全文摘要本发明公开了续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的新用途，在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中可以是续断总苷元及常春藤皂苷元单一成分，也可以是含续断总苷元及单一成分常春藤皂苷元的组合物；可制备片剂、胶囊剂，颗粒剂以及注射剂与混悬剂。文档编号C07J63/00GK101564405SQ20091006701公开日2009年10月28日申请日期2009年5月26日优先权日2009年5月26日发明者南敏伦,赫玉芳,赵全成,赵文杰,马吉胜申请人:赵全成