1.本发明涉及植物成分提取技术领域，特别是涉及一种茉莉花提取物的提取方法及其应用。


背景技术：

2.二噁英通常指具有相似结构和理化特性的一组多氯取代的平面芳烃类化合物，属氯代含氧三环芳烃类化合物，包括75种多氯代二苯并-对-二噁英(polychlorodibenzo-p-dioxins，pcdds)和135种多氯代二苯并呋喃(polychloro-dibenzofurans，pcdfs)，缩写为pcdd/fs或dioxin。研究最为充分的有毒二噁英为2位、3位、7位、8位被氯原子取代的17种同系物异构体单体(congenor)，其中，2，3，7，8-四氯二苯并-对-二噁英(2，3，7，8-tcdd)是所有已知化合物中毒性最强的二噁英单体(经口ld
50
仅为0.6μg/kg)，且还有极强的致癌性(致大鼠肝癌剂量10pg/g)和极低剂量的环境内分泌干扰作用在内的多种毒性作用。这类物质既非人为生产、又无任何用途，而是燃烧和各种工业生产的副产物。由于木材防腐和防止血吸虫使用氯酚类造成的蒸发、焚烧工业的排放、落叶剂的使用、杀虫剂的制备、纸张的漂白和汽车尾气的排放等是环境中二噁英的主要来源。
3.重要的是，环境中的二噁英可通过食物链(如饲料)富积在动物体中，由于高亲脂性，二噁英容易存在于动物脂肪和乳汁中。因此，肉、禽、蛋、鱼、乳及其制品最易受到污染。另外，在食品加工过程中，加工介质(如溶剂油、传热介质等)的异常泄露也可造成加工食品的二噁英的污染。目前，催化分解、活性炭吸附、化学处理等方式是清除二噁英的主要措施，但以上措施通常应用于工业生产。
4.茉莉花，又称为茉莉，为木樨科素馨属(jasminum)常绿灌木或藤本植物的统称。茉莉花香气优雅，清香四溢，能够提取茉莉油，是制造香精的原料，茉莉花、叶、根均可入药，茉莉花还可薰制茶叶，或蒸取汁液，可代替蔷薇露，地处江南的苏州、南京、杭州、金华等地长期以来都作为熏茶香料进行生产。茉莉花具有明显的放松效果，振奋神经系统；还能平缓咳嗽，护理和改善皮肤弹性，淡化妊娠纹和伤疤。目前，茉莉花提取物的应用主要在香料和护理方面，对于其药用价值报道较少。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种茉莉花提取物的提取方法及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。
6.为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
7.本发明提供一种茉莉花提取物的提取方法，包括以下步骤：
8.(1)采集新鲜茉莉花，清洗，紫外灭菌后，在无菌控温控湿条件下干燥，获得预处理后的茉莉花；
9.(2)将预处理后的茉莉花加入体积浓度70-85％的乙醇水溶液中，研磨成浆液，微波提取，冷冻干燥，获得粗提产物；
10.(3)将所述粗提产物在甘油水溶液中浸提，浸提结束后，离心、抽滤，浓缩得到浓缩液；
11.(4)将所述浓缩液在超声条件下继续提取，再离心，取上清液减压浓缩至干，获得茉莉花提取物粗品；
12.(5)将茉莉花提取物粗品用体积浓度10-15％的乙醇水溶液溶解，然后采用大孔吸附树脂进行吸附，吸附后，洗脱，收集流出液，浓缩干燥，获得茉莉花提取物。
13.进一步地，所述控温控湿条件具体为温度由25℃以1-2℃/h的降温速率降温至5℃，湿度由相对湿度95％以5-8％/h的速率降至10％。
14.进一步地，在步骤(1)中，所述干燥时间为24-36h。
15.茉莉花富含活性成分，其中很多活性成分不稳定，容易遭到破坏，尤其是传统的干燥和粉碎过程极易破坏茉莉花中的活性成分，造成提取产物含量低，且成分丰富程度遭到破坏。但烘干或晾干是现有技术中植物活性成分提取的必要手段，使得提取物的活性受到破坏。本发明将茉莉花对茉莉花简单清洗，不破坏其整体结构，采用控温控湿的方式对其进行干燥，使茉莉花内部水分逐渐脱除，而不破坏植物细胞结构，也不会对其中活性成分造成影响。而且，本发明采用研磨方式，也能减少对其活性成分的破坏。
16.进一步地，在步骤(2)中，所述乙酸水溶液的加入量为茉莉花质量的5-30倍，所述微波提取为200-250w条件下提取1-5min。
17.本发明利用超声加微波的方式，大幅提高了茉莉花中活性成分的提取率，同时可使茉莉花中某些原本难以提取成分顺利提取，丰富提取物中活性成分种类。
18.进一步地，所述甘油水溶液的质量浓度为20-60％。
19.进一步地，在步骤(3)中，所述粗提产物与甘油水溶液的料液比为1:10-50(g：g)，所述浸提的时间为6-8h。
20.本发明还提供一种上述的茉莉花提取物的提取方法提取得到的茉莉花提取物。
21.本发明还提供一种上述的茉莉花提取物在清除二噁英中应用。
22.本发明还提供一种用于清除食品中二噁英的食品添加组合物，含有如上述的茉莉花提取物。
23.本发明公开了以下技术效果：
24.本发明涉及一种茉莉花提取物的工艺，利用该方法可从茉莉花中快速、简单地提取得到活性物质丰富的茉莉花提取物。该茉莉花提取物具有良好的抗氧化性、dpph清除效果、抗菌效果，以及良好的清除食物中二噁英的作用。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
26.图1为没食子酸标准曲线；
27.图2为芦丁标准曲线；
28.图3为抗坏血酸标准曲线。
具体实施方式
29.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
30.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
31.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
32.在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
33.关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
34.实施例1
35.一种茉莉花提取物的提取方法，包括以下步骤：
36.(1)采集生长正常的健康无病新鲜茉莉花，清水冲洗干净，紫外灯照射10s灭菌后，置于密闭无菌环境中干燥，控制温度由25℃以2℃/h的降温速率降温至5℃，湿度由相对湿度95％以5％/h的速率降至10％，总计干燥时间为36h，获得预处理后的茉莉花；
37.(2)将预处理后的茉莉花加入茉莉花质量5倍体积浓度85％的乙醇水溶液中，研磨成浆液，200w微波提取5min，冷冻干燥，获得粗提产物；
38.(3)按照料液比1:10(g：g)，将粗提产物在质量浓度为20％的甘油水溶液中浸提，常温浸提6h，浸提结束后，将浸提液离心10min，上清液抽滤后，减压浓缩至原体积的1/2，得到浓缩液；
39.(4)将浓缩液在超声600w，温度25℃条件下继续提取30min，再离心，取上清液减压浓缩至干，获得茉莉花提取物粗品；
40.(5)将茉莉花提取物粗品用体积浓度10％的乙醇水溶液溶解，然后采用大孔吸附树脂ab-8进行吸附，再用体积浓度65％的乙醇水溶液洗脱，收集流出液，浓缩干燥，获得茉莉花提取物。
41.实施例2
42.同实施例1，不同之处仅在于，甘油水溶液质量浓度为40％。
43.实施例3
44.同实施例1，不同之处仅在于，甘油水溶液质量浓度为60％。
45.实施例4
46.一种茉莉花提取物的提取方法，包括以下步骤：
47.(1)采集生长正常的健康无病新鲜茉莉花，清水冲洗干净，紫外灯照射10s灭菌后，置于密闭无菌环境中干燥，控制温度由25℃以1.5℃/h的降温速率降温至5℃，湿度由相对湿度95％以6％/h的速率降至10％，总计干燥时间为32h，获得预处理后的茉莉花；
48.(2)将预处理后的茉莉花加入茉莉花质量18倍体积浓度78％的乙醇水溶液中，研磨成浆液，230w微波提取3min，冷冻干燥，获得粗提产物；
49.(3)按照料液比1:20(g：g)，将粗提产物在质量浓度为20％的甘油水溶液中浸提，常温浸提7h，浸提结束后，将浸提液离心10min，上清液抽滤后，减压浓缩至原体积的1/2，得到浓缩液；
50.(4)将浓缩液在超声500w，温度28℃条件下继续提取25min，再离心，取上清液减压浓缩至干，获得茉莉花提取物粗品；
51.(5)将茉莉花提取物粗品用体积浓度13％的乙醇水溶液溶解，然后采用大孔吸附树脂ab-8进行吸附，再用体积浓度65％的乙醇水溶液洗脱，收集流出液，浓缩干燥，获得茉莉花提取物。
52.实施例5
53.同实施例4，不同之处仅在于，甘油水溶液质量浓度为40％。
54.实施例6
55.同实施例4，不同之处仅在于，甘油水溶液质量浓度为60％。
56.实施例7
57.一种茉莉花提取物的提取方法，包括以下步骤：
58.(1)采集生长正常的健康无病新鲜茉莉花，清水冲洗干净，紫外灯照射10s灭菌后，置于密闭无菌环境中干燥，控制温度由25℃以1℃/h的降温速率降温至5℃，湿度由相对湿度95％以8％/h的速率降至10％，总计干燥时间为24h，获得预处理后的茉莉花；
59.(2)将预处理后的茉莉花加入茉莉花质量30倍体积浓度70％的乙醇水溶液中，研磨成浆液，250w微波提取1min，冷冻干燥，获得粗提产物；
60.(3)按照料液比1:50(g：g)，将粗提产物在质量浓度为20％的甘油水溶液中浸提，常温浸提8h，浸提结束后，将浸提液离心10min，上清液抽滤后，减压浓缩至原体积的1/2，得到浓缩液；
61.(4)将浓缩液在超声400w，温度30℃条件下继续提取20min，再离心，取上清液减压浓缩至干，获得茉莉花提取物粗品；
62.(5)将茉莉花提取物粗品用体积浓度15％的乙醇水溶液溶解，然后采用大孔吸附树脂ab-8进行吸附，再用体积浓度65％的乙醇水溶液洗脱，收集流出液，浓缩干燥，获得茉莉花提取物。
63.实施例8
64.同实施例7，不同之处仅在于，甘油水溶液质量浓度为40％。
65.实施例9
66.同实施例7，不同之处仅在于，甘油水溶液质量浓度为60％。
67.对比例1
68.同实施例5，不同之处仅在于，甘油水溶液质量浓度为80％。
69.对比例2
70.同实施例5，不同之处仅在于，甘油水溶液质量浓度为15％。
71.对比例3
72.同实施例5，不同之处仅在于，步骤(1)中，干燥方式为阴凉处晾干32h。
73.对比例4
74.同实施例5，不同之处仅在于，步骤(1)中，干燥方式为密闭无菌环境中干燥，控制温度为5℃，湿度为10％，总计干燥时间为32h。
75.对比例5
76.同实施例5，不同之处仅在于，步骤(1)中，干燥方式为40℃低温烘干，烘干至与实施例4的干燥方式含水量相同。
77.对比例6
78.同实施例5，不同之处仅在于，步骤(2)中，提取过程不进行微波处理。
79.对比例7
80.同实施例5，不同之处仅在于，步骤(4)中，提取过程不进行超声处理。
81.试验例1提取物总酚含量
82.1.没食子酸标准曲线的制备
83.对照品没食子酸配成0.1mg/ml的标准溶液，准确量取上述标准液0.00ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml和1.20ml至10.0ml具塞试管中，加入1.00ml的福林酚显色剂，混匀，再加入5.0ml浓度为1mol/l碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至刻度，混合均匀，在室温、避光条件下放置1h，测定760nm处的吸光度值，以没食子酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，其没食子酸标准曲线如图1。
84.2.提取物中总酚的测定
85.准确移取1.00ml待测干花甘油提取物至10.0ml试管中，按上述方法测定吸光度值，根据吸光度值在没食子酸标准曲线中得出相应的值，样品总酚含量以没食子酸的相对量表示(mg gae/100g)，测定结果如表1。
86.试验例2提取物总酮含量
87.1.制备芦丁标准曲线
88.对照品芦丁用甲醇配成0.1mg/ml的标准溶液，精准吸取标准溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，均置于10ml刻度试管中，加入0.3ml 5％亚硝酸钠，摇匀后静置6min，再加入0.3ml 10％硝酸铝，摇匀后静置6min，加入4ml 4％氢氧化钠溶液，蒸馏水定容，摇匀后静置15min，在510nm处分别测量吸光值，以芦丁浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，其芦丁标准曲线如图2。
89.2.测定提取物总黄酮含量
90.取1.0ml提取物溶液，置于10ml刻度试管中，按上述方法测定吸光度值。根据吸光度值在芦丁标准曲线中得出相应的值，样品总黄酮含量以芦丁的相对含量表示(mg cae/100g)，测定结果如表1。
91.试验例3提取物总抗氧化性能
92.1.制备标准曲线
93.取0.1ml不同浓度的抗坏血酸标准溶液0％、1％、2％、3％、4％、5％于具塞试管中，分别加入5ml混合溶液(内含0.6mol/l硫酸、28mmol/l磷酸钠、4mmol/l钼酸铵)中，加塞，95
℃水浴加热90min，取出流水冷却至室温，测定695nm波长处吸光度值，绘制标准曲线，其抗坏血酸标准曲线如图3。
94.2.提取物总抗氧化性能测定
95.取0.1ml提取物样品溶液于10ml试管中，按上述方法测定吸光度值，在抗坏血酸标准曲线上查得1mg样品相当于vc的量，即：xmgvc/mg样品。结果如表1。
96.试验例4dpph自由基清除
97.吸取0.1ml提取物溶液加入3.9ml 1
×
10-4
mol/l的dpph溶液。从加入dpph溶液开始计时，室温下避光放置90min后，测定517nm波长处吸光度，记为a1。另取0.1ml蒸馏水代替提取物溶液同上操作，吸光度记为a0。按下式计算清除率，结果如表1：
[0098][0099]
表1提取物的总酚含量、总酮含量、总抗氧化性能和dpph自由基清除率结果
[0100][0101]
试验例5提取物抑菌效果
[0102]
1.菌株的活化
[0103]
于超净工作台中从菌种平板中分别用接种环将大肠杆菌、金黄葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌和黑曲霉(如表2)挑取一环划线在固体培养基平板上，做好标记，于37℃生化培养箱中倒置培养14h(黑曲霉培养3天)。
[0104]
表2试验所用菌种
[0105]
菌种名称菌株编号大肠杆菌bncc185254金黄色葡萄球菌bncc186335蜡样芽孢杆菌bncc103930枯草芽孢杆菌bncc109047酵母菌bncc157508黑曲霉bncc186380
[0106]
2.种子液制备
[0107]
从上述活化的大肠杆菌、金黄葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌平板上挑取两环菌落接种到50ml液体培养基中，标记，置于37℃恒温培养箱中，转速180r/min震荡培养14h-16h，直至其在分光光度计620nm波长下吸光度达到0.8，停止培养。
[0108]
将活化好的黑曲霉平板用无菌水清洗，收集菌液，用注射器吸取菌液并用针头过滤器过滤菌液，取适量滤液滴于血球计数板上并置于光学显微镜下数菌液孢子数。
[0109]
每毫升细胞数＝每小格细胞平均数
×4×
106×
稀释倍数
[0110]
以孢子数10
5-107的菌液作为种子液。
[0111]
3.样品抑菌效果检测
[0112]
滤纸用打孔器打成0.6cm直径的圆片，装在培养皿中密封灭菌。无菌条件下，用无菌镊子把滤纸圆片放入样品溶液中浸泡30分钟，备用。
[0113]
在无菌操作下，在每300ml已灭菌的并冷却至55℃的培养基中加入1ml种子菌液，充分摇匀后，倒入无菌的培养皿中，待培养基冷却凝固后，将浸泡样品的滤纸片放在凝固好的测试菌平板中，每个样品做两个平行。静置20分钟后平放37℃恒温培养箱中培养16h后，测量抑菌圈大小。同理处理黑曲霉的抑菌效果。结果见表3(单位：cm)。
[0114]
表3茉莉花提取物对细菌、真菌和霉菌的抑制作用(单位：cm)
[0115]
[0116][0117]
试验例6茉莉花提取物对二噁英的清除作用
[0118]
将实施例1-9和对比例1-7制备的茉莉花提取物和vc用50％乙醇配制成溶液，浓度50mg/l。取经检测不含二噁英的新鲜牛奶，配制1l牛奶含有10μg二噁英的含二噁英牛奶，作为样品。取10ml样品中分别加入上述溶液2ml，对照组加入2ml蒸馏水，3min后，hplc分析样品中二噁英浓度，用下式计算二噁英清除率，结果见表4。
[0119]
清除率％＝((y-x)/y)*100％
[0120]
其中，x为加入茉莉花提取物的样品中二噁英浓度，y为不加茉莉花提取物的对照样品中二噁英浓度。
[0121]
表4茉莉花提取物对二噁英的清除作用
[0122]
[0123][0124]
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。